| Titre : |
Adaptation du kit Innovance® VWF:Ac (Siemens) sur STAR-MAX (Stago) |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Sevgi Yoldas, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche |
| Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médiacale |
| Année de publication : |
2021 |
| Note générale : |
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| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
CHU Charleroi maladie Willebrand dosage fonctionnel VWF:Ac diagnostic biologique protocole Stago et GRAF validation méthode |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Résumé : |
La maladie de Von Willebrand est la maladie héréditaire hémorragique la plus fréquente de l’hémostase primaire avec une prévalence de l’ordre de 1 %. Elle est due soit à une anomalie qualitative (type 2) ou quantitative (type 1 ou type 3) du VWF. Le diagnostic de la maladie de Von Willebrand reste complexe du fait de la très grande hétérogénéité clinique et biologique. La détermination de l’activité de liaison au GP1b reste un point important dans le diagnostic de la maladie. Pendant de longues années, le VWF:Rco c’est-à-dire la liaison du VWF au GP1b plaquettaire en présence de ristocétine a été utilisé. Cependant, cette méthode présente de nombreux désavantages : défaut de reproductibilité, sensibilité, polymorphisme du domaine A1 ne répondant pas à la ristocétine. Tous ces défauts ont conduit à l’apparition de nouveaux tests sur le marché, notamment le coffret Innovance® VWF:Ac de la firme Siemens. Dans cette méthode, une GP1b possédant deux mutations-de-gains se lie spontanément au VWF en
absence de ristocétine. Elle offre même une meilleure reproductibilité et une limite de détection plus basse d’après l’insert. Le laboratoire du CHU de Charleroi utilise l’Innovance® sur l’automate BCS-XP de la firme Siemens pour la détermination de l’activité du VWF (méthode de référence). Mais, cet automate n’est utilisé qu'une fois par semaine et donc est incompatible avec des dosages en urgence. De plus, effectuer un dosage en urgence sur BCS-XP coûte cher, c’est un appareil avec un système d’allumage spécifique qui nécessite la reconstitution de contrôles coûteux. La société Diagnostica Stago et GRAF L. ont proposé deux protocoles différents pour adapter ce dosage sur STAR-MAX, l’automate de routine d’hémostase. L’objectif de ce travail est d’adapter le coffret Innovance sur STAR-MAX selon les deux méthodes, effectuer une
validation en évaluant différents critères (répétabilité, reproductibilité, calibration, courbe dose-réponse, sensibilité, stabilité et les interférences liées à l’hémoglobine) et enfin, de comparer à la méthode de référence pour savoir si les deux méthodes offrent des résultats similaires et peuvent être échangées sans altération du diagnostic du patient. La méthode de GRAF a rapidement été abandonnée due à une mauvaise réponse. Malgré que des résultats satisfaisants ont été obtenus pour la plupart des critères dans méthode de Stago, elle n’a pas été mise au point dû à un défaut de sensibilité. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements...........................................................................................................................1
Table des matières......................................................................................................................2
Contexte général ........................................................................................................................1
1. L’hémostase ...................................................................................................................1
1.1 L’hémostase primaire ...................................................................................................1
1.2 La coagulation ..............................................................................................................1
1.3 La fibrinolyse................................................................................................................2
1.4 La régulation de l’hémostase........................................................................................2
1.5 Troubles de l’hémostase ...............................................................................................3
2. Le facteur Von Willebrand ............................................................................................3
2.1 Biosynthèse : du gène à la protéine ..............................................................................4
2.2 Les domaines fonctionnels du VWF ............................................................................5
2.3 ADAMTS13 .................................................................................................................6
2.4 Rôles physiologiques....................................................................................................7
2.4.1 Hémostase primaire : adhésion et agrégation plaquettaire ...................................7
2.4.2 Coagulation : transport et protection du FVIII .....................................................7
2.4.3 Participation à la thrombopoïèse...........................................................................7
2.5 Les valeurs normales et les variations physiologiques .................................................8
3. La maladie de Von Willebrand ......................................................................................9
3.1 Classification ................................................................................................................9
3.1.1 Maladie de Von Willebrand de type 1 ..................................................................9
3.1.2 Maladie de Von Willebrand de type 2 ................................................................10
3.1.3 Maladie de Von Willebrand de type 3 ................................................................11
3.2 Diagnostic biologique de la maladie de Von Willebrand...........................................12
3.2.2 Diagnostic difficile..............................................................................................12
3.2.3 Diagnostic différentiel ........................................................................................12
3.2.4 Différents tests réalisés dans un laboratoire médical ..........................................13
A. Test de routine................................................................................................13
B. Test spécifique réalisé lors d’une suspicion de la maladie de Willebrand.....13
C. Tests discriminatifs et spécialisés ..................................................................16
3.3 Traitement...................................................................................................................19
3.3.1 La DDAVP.....................................................................................................19
3.3.2 Les concentrés du VWF .................................................................................19
Objectif et stratégie ..................................................................................................................20
Matériels et méthode................................................................................................................21
1. Réactifs ........................................................................................................................21
1.1 Le coffret Innovance® VWF Ac ................................................................................21
1.2 Autres réactifs, contrôles et calibrateurs.....................................................................23
2. Matériels et appareils ...................................................................................................23
2.1 Matériels .....................................................................................................................23
2.2 Appareils.....................................................................................................................24
2.2.1 STAR®-Max.......................................................................................................24
2.2.2 BCS-XP® ...........................................................................................................25
3. Échantillons..................................................................................................................26
4. Mise au point de la méthode ........................................................................................27
4.1 Le facteur de dilution de l’automate...........................................................................27
4.2 Les volumes des réactifs 1, 2 et 3...............................................................................28
4.3 Le volume d’échantillon.............................................................................................28
Validation de la méthode .........................................................................................................30
1. La fidélité .....................................................................................................................30
1.1 La répétabilité ........................................................................................................31
1.2 La reproductibilité .................................................................................................31
2. La calibration ...............................................................................................................32
3. La courbe dose-réponse ...............................................................................................32
3.1 La sensibilité...............................................................................................................33
4. La stabilité....................................................................................................................34
4.1 La stabilité des QC-Routine Stago .............................................................................34
4.2 La stabilité du réactif 1 ...............................................................................................34
5. La corrélation ...............................................................................................................36
5.1 Passing-Bablok ...........................................................................................................36
5.2 Bland-Altman .............................................................................................................36
6. Les interférences ..........................................................................................................37
Résultats...................................................................................................................................39
1. Évaluation de la répétabilité.........................................................................................39
2. Évaluation de la reproductibilité..................................................................................41
3. La calibration ...............................................................................................................43
4. La courbe dose-réponse ...............................................................................................44
4.1 La sensibilité...............................................................................................................45
5. La stabilité....................................................................................................................46
5.1 Du réactif 1 .................................................................................................................46
5.2 Des QC-routine...........................................................................................................49
6. La corrélation ...............................................................................................................50
7. Les interférences liées à l’Hb.......................................................................................52
Discussion ................................................................................................................................53
Comparaison des automates.....................................................................................................54
1. Nombre de tests............................................................................................................54
2. Prix...............................................................................................................................54
Conclusion ...............................................................................................................................56
Liste des figures .........................................................................................................................1
Liste des tables...........................................................................................................................2
Liste des abréviations.................................................................................................................4
Bibliographie..............................................................................................................................5
Annexes......................................................................................................................................9
Résumé.....................................................................................................................................16
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Adaptation du kit Innovance® VWF:Ac (Siemens) sur STAR-MAX (Stago) [TFE / Mémoire] / Sevgi Yoldas, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médiacale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
CHU Charleroi maladie Willebrand dosage fonctionnel VWF:Ac diagnostic biologique protocole Stago et GRAF validation méthode |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Résumé : |
La maladie de Von Willebrand est la maladie héréditaire hémorragique la plus fréquente de l’hémostase primaire avec une prévalence de l’ordre de 1 %. Elle est due soit à une anomalie qualitative (type 2) ou quantitative (type 1 ou type 3) du VWF. Le diagnostic de la maladie de Von Willebrand reste complexe du fait de la très grande hétérogénéité clinique et biologique. La détermination de l’activité de liaison au GP1b reste un point important dans le diagnostic de la maladie. Pendant de longues années, le VWF:Rco c’est-à-dire la liaison du VWF au GP1b plaquettaire en présence de ristocétine a été utilisé. Cependant, cette méthode présente de nombreux désavantages : défaut de reproductibilité, sensibilité, polymorphisme du domaine A1 ne répondant pas à la ristocétine. Tous ces défauts ont conduit à l’apparition de nouveaux tests sur le marché, notamment le coffret Innovance® VWF:Ac de la firme Siemens. Dans cette méthode, une GP1b possédant deux mutations-de-gains se lie spontanément au VWF en
absence de ristocétine. Elle offre même une meilleure reproductibilité et une limite de détection plus basse d’après l’insert. Le laboratoire du CHU de Charleroi utilise l’Innovance® sur l’automate BCS-XP de la firme Siemens pour la détermination de l’activité du VWF (méthode de référence). Mais, cet automate n’est utilisé qu'une fois par semaine et donc est incompatible avec des dosages en urgence. De plus, effectuer un dosage en urgence sur BCS-XP coûte cher, c’est un appareil avec un système d’allumage spécifique qui nécessite la reconstitution de contrôles coûteux. La société Diagnostica Stago et GRAF L. ont proposé deux protocoles différents pour adapter ce dosage sur STAR-MAX, l’automate de routine d’hémostase. L’objectif de ce travail est d’adapter le coffret Innovance sur STAR-MAX selon les deux méthodes, effectuer une
validation en évaluant différents critères (répétabilité, reproductibilité, calibration, courbe dose-réponse, sensibilité, stabilité et les interférences liées à l’hémoglobine) et enfin, de comparer à la méthode de référence pour savoir si les deux méthodes offrent des résultats similaires et peuvent être échangées sans altération du diagnostic du patient. La méthode de GRAF a rapidement été abandonnée due à une mauvaise réponse. Malgré que des résultats satisfaisants ont été obtenus pour la plupart des critères dans méthode de Stago, elle n’a pas été mise au point dû à un défaut de sensibilité. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements...........................................................................................................................1
Table des matières......................................................................................................................2
Contexte général ........................................................................................................................1
1. L’hémostase ...................................................................................................................1
1.1 L’hémostase primaire ...................................................................................................1
1.2 La coagulation ..............................................................................................................1
1.3 La fibrinolyse................................................................................................................2
1.4 La régulation de l’hémostase........................................................................................2
1.5 Troubles de l’hémostase ...............................................................................................3
2. Le facteur Von Willebrand ............................................................................................3
2.1 Biosynthèse : du gène à la protéine ..............................................................................4
2.2 Les domaines fonctionnels du VWF ............................................................................5
2.3 ADAMTS13 .................................................................................................................6
2.4 Rôles physiologiques....................................................................................................7
2.4.1 Hémostase primaire : adhésion et agrégation plaquettaire ...................................7
2.4.2 Coagulation : transport et protection du FVIII .....................................................7
2.4.3 Participation à la thrombopoïèse...........................................................................7
2.5 Les valeurs normales et les variations physiologiques .................................................8
3. La maladie de Von Willebrand ......................................................................................9
3.1 Classification ................................................................................................................9
3.1.1 Maladie de Von Willebrand de type 1 ..................................................................9
3.1.2 Maladie de Von Willebrand de type 2 ................................................................10
3.1.3 Maladie de Von Willebrand de type 3 ................................................................11
3.2 Diagnostic biologique de la maladie de Von Willebrand...........................................12
3.2.2 Diagnostic difficile..............................................................................................12
3.2.3 Diagnostic différentiel ........................................................................................12
3.2.4 Différents tests réalisés dans un laboratoire médical ..........................................13
A. Test de routine................................................................................................13
B. Test spécifique réalisé lors d’une suspicion de la maladie de Willebrand.....13
C. Tests discriminatifs et spécialisés ..................................................................16
3.3 Traitement...................................................................................................................19
3.3.1 La DDAVP.....................................................................................................19
3.3.2 Les concentrés du VWF .................................................................................19
Objectif et stratégie ..................................................................................................................20
Matériels et méthode................................................................................................................21
1. Réactifs ........................................................................................................................21
1.1 Le coffret Innovance® VWF Ac ................................................................................21
1.2 Autres réactifs, contrôles et calibrateurs.....................................................................23
2. Matériels et appareils ...................................................................................................23
2.1 Matériels .....................................................................................................................23
2.2 Appareils.....................................................................................................................24
2.2.1 STAR®-Max.......................................................................................................24
2.2.2 BCS-XP® ...........................................................................................................25
3. Échantillons..................................................................................................................26
4. Mise au point de la méthode ........................................................................................27
4.1 Le facteur de dilution de l’automate...........................................................................27
4.2 Les volumes des réactifs 1, 2 et 3...............................................................................28
4.3 Le volume d’échantillon.............................................................................................28
Validation de la méthode .........................................................................................................30
1. La fidélité .....................................................................................................................30
1.1 La répétabilité ........................................................................................................31
1.2 La reproductibilité .................................................................................................31
2. La calibration ...............................................................................................................32
3. La courbe dose-réponse ...............................................................................................32
3.1 La sensibilité...............................................................................................................33
4. La stabilité....................................................................................................................34
4.1 La stabilité des QC-Routine Stago .............................................................................34
4.2 La stabilité du réactif 1 ...............................................................................................34
5. La corrélation ...............................................................................................................36
5.1 Passing-Bablok ...........................................................................................................36
5.2 Bland-Altman .............................................................................................................36
6. Les interférences ..........................................................................................................37
Résultats...................................................................................................................................39
1. Évaluation de la répétabilité.........................................................................................39
2. Évaluation de la reproductibilité..................................................................................41
3. La calibration ...............................................................................................................43
4. La courbe dose-réponse ...............................................................................................44
4.1 La sensibilité...............................................................................................................45
5. La stabilité....................................................................................................................46
5.1 Du réactif 1 .................................................................................................................46
5.2 Des QC-routine...........................................................................................................49
6. La corrélation ...............................................................................................................50
7. Les interférences liées à l’Hb.......................................................................................52
Discussion ................................................................................................................................53
Comparaison des automates.....................................................................................................54
1. Nombre de tests............................................................................................................54
2. Prix...............................................................................................................................54
Conclusion ...............................................................................................................................56
Liste des figures .........................................................................................................................1
Liste des tables...........................................................................................................................2
Liste des abréviations.................................................................................................................4
Bibliographie..............................................................................................................................5
Annexes......................................................................................................................................9
Résumé.....................................................................................................................................16
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