Centre de Documentation Campus Montignies
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Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
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Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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Étude de l’impact des étapes pré analytiques et analytiques sur l’agrégation, les caractéristiques et la numération plaquettaire. / Sultan Kasikci
Titre : Étude de l’impact des étapes pré analytiques et analytiques sur l’agrégation, les caractéristiques et la numération plaquettaire. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Sultan Kasikci, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU Dinant Godinne Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études aborde l’impact des étapes pré-analytiques et analytiques telles que le type d’anticoagulant, l’homogénéisation du prélèvement, le délai et le diluant sur l’agrégation plaquettaire, les caractéristiques plaquettaires (volume plaquettaire moyen, fraction immature des plaquettes) et sur la numération plaquettaire.
Depuis peu, une nouvelle alternative a été mise au point pour mesurer l’agrégation plaquettaire. Elle vise à substituer le tube hirudine par le tube citrate à condition d’utiliser le chlorure de calcium en échange du chlorure de sodium afin d’obtenir une agrégation plaquettaire identique entre le sang récolté sur tube hirudine et le sang récolté sur tube citrate en utilisant toujours les mêmes inducteurs. Afin de vérifier l’impact du calcium sur l’agrégation plaquettaire, une autre série d’agrégation plaquettaire sera réalisée à partir de sang récolté sur tube citrate dilué au chlorure de sodium.
En parallèle, le Sysmex XN 9000 a effectué la numération plaquettaire par impédance, fluorescence et par méthode optique ainsi que le MPV et l’IPF sur tubes citrate, hirudine et EDTA. De plus, des frottis ont été tirés et colorés avec ces mêmes tubes afin de justifier les éventuelles variations de la numération plaquettaire.
La numération plaquettaire, les paramètres caractérisant les plaquettes, l’agrégation, ainsi que les frottis de sang seront effectués au cours des délais suivants : 5, 30, 60, 120 et 180 minutes.
Afin de mener à bien cette étude, vingt personnes ont fait don de leur sang.
Cette étude a démontré qu’il était préférable de réaliser les agrégations plaquettaires sur tube hirudine dilué au NaCl entre 30 et 120 minutes avec le Multiplate et que la numération plaquettaire au Sysmex doit s’effectuer sur EDTA entre 5 et 120 minutes. De plus, la fraction immature plaquettaire peut être mesurée sur EDTA entre 5 et 180 minutes ou sur citrate entre 30 et 180 minutes. Finalement, il est préférable de mesurer le volume plaquettaire moyen sur citrate entre 30 et 180 minutes sachant que cette variable est moins stable que l’IPF.
En conclusion, les étapes pré-analytiques et analytiques telles que le type d’anticoagulant, l’homogénéisation du prélèvement, le délai et le diluant doivent être standardisés car ils influencent l’agrégation plaquettaire, les caractéristiques (volume plaquettaire moyen et fraction immature des plaquettes) et la numération plaquettaire.Note de contenu : Présentation du lieu de stage ................................................................................................................... 5
Introduction générale ............................................................................................................................... 6
1. Contexte théorique .............................................................................................................................. 7
1.1 L’hémostase ................................................................................................................................... 7
1.2 L’hémostase primaire .................................................................................................................... 7
1.2.1 La paroi vasculaire ...................................................................................................................... 7
1.2.2 Le facteur Von Willebrand .......................................................................................................... 8
1.3 Les plaquettes................................................................................................................................ 8
1.3.1 L’origine plaquettaire ............................................................................................................. 8
1.3.2 La structure plaquettaire ....................................................................................................... 8
1.3.3 Les fonctions plaquettaires .................................................................................................. 10
1.4 Les étapes menant à l’agrégation plaquettaire .......................................................................... 10
1.4.1 L’adhésion plaquettaire ............................................................................................................ 10
1.4.2 L’activation plaquettaire ........................................................................................................... 11
1.4.3 L’agrégation plaquettaire ......................................................................................................... 12
1.4.3.1 L’adénosine diphosphate ................................................................................................... 12
1.4.3.2 Le collagène ....................................................................................................................... 13
1.4.3.3 Le peptide activant le récepteur de la thrombine ............................................................. 13
1.4.3.4 Les valeurs de référence .................................................................................................... 14
1.5 Application clinique de l’agrégation plaquettaire ....................................................................... 14
1.5.1 L’intérêt clinique de l’étude de la fonction plaquettaire ......................................................... 14
1.5.2 Les tests d’agrégation plaquettaire .......................................................................................... 15
1.5.3 Le système Multiplate .............................................................................................................. 16
1.5.3.1 Principe du Multiplate ....................................................................................................... 16
1.5.3.2 Appareillage du Multiplate ................................................................................................ 17
1.6 La numération et les caractéristiques plaquettaires avec le Sysmex XN 9000 ........................... 18
1.6.1 La numération plaquettaire par impédancemétrie .................................................................. 19
1.6.2 La numération plaquettaire par méthode optique .................................................................. 19
1.6.3 La numération plaquettaire par fluorescence .......................................................................... 21
1.6.4 La mesure des caractéristiques plaquettaires avec le Sysmex XN 9000 .................................. 22
1.6.4.1 Le volume plaquettaire moyen .......................................................................................... 22
1.6.4.2 La fraction immature plaquettaire .................................................................................... 23
1.7 Le frottis sanguin ......................................................................................................................... 24
1.8 L’impact des étapes pré-analytiques et analytiques ....................................................................... 24
1.8.1 Avant le prélèvement ............................................................................................................... 25
1.8.1.1 Le choix des anticoagulants ............................................................................................... 25
1.8.2 Pendant le prélèvement ........................................................................................................... 27
1.8.3 Après le prélèvement ............................................................................................................... 27
2. Objectifs et stratégie ......................................................................................................................... 28
2.1 Les objectifs ..................................................................................................................................... 28
2.2 La stratégie ....................................................................................................................................... 28
3. Matériel et méthode.......................................................................................................................... 29
3.1 Matériel ....................................................................................................................................... 29
3.1.1 Matériel pour le comptage des agrégats plaquettaires au microscope .................................. 29
3.1.2 Matériel pour l’agrégation plaquettaire ................................................................................... 29
3.1.3 Matériel pour la numération plaquettaire au Sysmex XN9000 ............................................... 30
3.1.4 Matériel pour la réalisation des frottis sanguins ...................................................................... 30
3.2 Méthode ...................................................................................................................................... 30
4. Résultats et discussions ..................................................................................................................... 34
4.1 Résultats de l’agrégation plaquettaire ............................................................................................ 34
4.2 Discussion concernant l’agrégation plaquettaire ............................................................................ 38
4.3 Résultats de la numération plaquettaire ......................................................................................... 40
4.4 Discussion concernant la numération plaquettaire ........................................................................ 45
4.5 Résultats du pourcentage d’agrégats plaquettaires ....................................................................... 47
4.6 Discussion concernant le pourcentage d’agrégats plaquettaires ................................................... 48
4.7 Résultats des caractéristiques plaquettaires ................................................................................... 49
4.8 Discussion concernant les caractéristiques plaquettaires .............................................................. 52
5. Conclusion générale........................................................................................................................... 54
Liste des figures ....................................................................................................................................... 55
Liste des tableaux .................................................................................................................................... 56
Abréviations ............................................................................................................................................ 57
Bibliographie ........................................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................................... 61Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79992 Étude de l’impact des étapes pré analytiques et analytiques sur l’agrégation, les caractéristiques et la numération plaquettaire. [TFE / Mémoire] / Sultan Kasikci, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU Dinant Godinne Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études aborde l’impact des étapes pré-analytiques et analytiques telles que le type d’anticoagulant, l’homogénéisation du prélèvement, le délai et le diluant sur l’agrégation plaquettaire, les caractéristiques plaquettaires (volume plaquettaire moyen, fraction immature des plaquettes) et sur la numération plaquettaire.
Depuis peu, une nouvelle alternative a été mise au point pour mesurer l’agrégation plaquettaire. Elle vise à substituer le tube hirudine par le tube citrate à condition d’utiliser le chlorure de calcium en échange du chlorure de sodium afin d’obtenir une agrégation plaquettaire identique entre le sang récolté sur tube hirudine et le sang récolté sur tube citrate en utilisant toujours les mêmes inducteurs. Afin de vérifier l’impact du calcium sur l’agrégation plaquettaire, une autre série d’agrégation plaquettaire sera réalisée à partir de sang récolté sur tube citrate dilué au chlorure de sodium.
En parallèle, le Sysmex XN 9000 a effectué la numération plaquettaire par impédance, fluorescence et par méthode optique ainsi que le MPV et l’IPF sur tubes citrate, hirudine et EDTA. De plus, des frottis ont été tirés et colorés avec ces mêmes tubes afin de justifier les éventuelles variations de la numération plaquettaire.
La numération plaquettaire, les paramètres caractérisant les plaquettes, l’agrégation, ainsi que les frottis de sang seront effectués au cours des délais suivants : 5, 30, 60, 120 et 180 minutes.
Afin de mener à bien cette étude, vingt personnes ont fait don de leur sang.
Cette étude a démontré qu’il était préférable de réaliser les agrégations plaquettaires sur tube hirudine dilué au NaCl entre 30 et 120 minutes avec le Multiplate et que la numération plaquettaire au Sysmex doit s’effectuer sur EDTA entre 5 et 120 minutes. De plus, la fraction immature plaquettaire peut être mesurée sur EDTA entre 5 et 180 minutes ou sur citrate entre 30 et 180 minutes. Finalement, il est préférable de mesurer le volume plaquettaire moyen sur citrate entre 30 et 180 minutes sachant que cette variable est moins stable que l’IPF.
En conclusion, les étapes pré-analytiques et analytiques telles que le type d’anticoagulant, l’homogénéisation du prélèvement, le délai et le diluant doivent être standardisés car ils influencent l’agrégation plaquettaire, les caractéristiques (volume plaquettaire moyen et fraction immature des plaquettes) et la numération plaquettaire.Note de contenu : Présentation du lieu de stage ................................................................................................................... 5
Introduction générale ............................................................................................................................... 6
1. Contexte théorique .............................................................................................................................. 7
1.1 L’hémostase ................................................................................................................................... 7
1.2 L’hémostase primaire .................................................................................................................... 7
1.2.1 La paroi vasculaire ...................................................................................................................... 7
1.2.2 Le facteur Von Willebrand .......................................................................................................... 8
1.3 Les plaquettes................................................................................................................................ 8
1.3.1 L’origine plaquettaire ............................................................................................................. 8
1.3.2 La structure plaquettaire ....................................................................................................... 8
1.3.3 Les fonctions plaquettaires .................................................................................................. 10
1.4 Les étapes menant à l’agrégation plaquettaire .......................................................................... 10
1.4.1 L’adhésion plaquettaire ............................................................................................................ 10
1.4.2 L’activation plaquettaire ........................................................................................................... 11
1.4.3 L’agrégation plaquettaire ......................................................................................................... 12
1.4.3.1 L’adénosine diphosphate ................................................................................................... 12
1.4.3.2 Le collagène ....................................................................................................................... 13
1.4.3.3 Le peptide activant le récepteur de la thrombine ............................................................. 13
1.4.3.4 Les valeurs de référence .................................................................................................... 14
1.5 Application clinique de l’agrégation plaquettaire ....................................................................... 14
1.5.1 L’intérêt clinique de l’étude de la fonction plaquettaire ......................................................... 14
1.5.2 Les tests d’agrégation plaquettaire .......................................................................................... 15
1.5.3 Le système Multiplate .............................................................................................................. 16
1.5.3.1 Principe du Multiplate ....................................................................................................... 16
1.5.3.2 Appareillage du Multiplate ................................................................................................ 17
1.6 La numération et les caractéristiques plaquettaires avec le Sysmex XN 9000 ........................... 18
1.6.1 La numération plaquettaire par impédancemétrie .................................................................. 19
1.6.2 La numération plaquettaire par méthode optique .................................................................. 19
1.6.3 La numération plaquettaire par fluorescence .......................................................................... 21
1.6.4 La mesure des caractéristiques plaquettaires avec le Sysmex XN 9000 .................................. 22
1.6.4.1 Le volume plaquettaire moyen .......................................................................................... 22
1.6.4.2 La fraction immature plaquettaire .................................................................................... 23
1.7 Le frottis sanguin ......................................................................................................................... 24
1.8 L’impact des étapes pré-analytiques et analytiques ....................................................................... 24
1.8.1 Avant le prélèvement ............................................................................................................... 25
1.8.1.1 Le choix des anticoagulants ............................................................................................... 25
1.8.2 Pendant le prélèvement ........................................................................................................... 27
1.8.3 Après le prélèvement ............................................................................................................... 27
2. Objectifs et stratégie ......................................................................................................................... 28
2.1 Les objectifs ..................................................................................................................................... 28
2.2 La stratégie ....................................................................................................................................... 28
3. Matériel et méthode.......................................................................................................................... 29
3.1 Matériel ....................................................................................................................................... 29
3.1.1 Matériel pour le comptage des agrégats plaquettaires au microscope .................................. 29
3.1.2 Matériel pour l’agrégation plaquettaire ................................................................................... 29
3.1.3 Matériel pour la numération plaquettaire au Sysmex XN9000 ............................................... 30
3.1.4 Matériel pour la réalisation des frottis sanguins ...................................................................... 30
3.2 Méthode ...................................................................................................................................... 30
4. Résultats et discussions ..................................................................................................................... 34
4.1 Résultats de l’agrégation plaquettaire ............................................................................................ 34
4.2 Discussion concernant l’agrégation plaquettaire ............................................................................ 38
4.3 Résultats de la numération plaquettaire ......................................................................................... 40
4.4 Discussion concernant la numération plaquettaire ........................................................................ 45
4.5 Résultats du pourcentage d’agrégats plaquettaires ....................................................................... 47
4.6 Discussion concernant le pourcentage d’agrégats plaquettaires ................................................... 48
4.7 Résultats des caractéristiques plaquettaires ................................................................................... 49
4.8 Discussion concernant les caractéristiques plaquettaires .............................................................. 52
5. Conclusion générale........................................................................................................................... 54
Liste des figures ....................................................................................................................................... 55
Liste des tableaux .................................................................................................................................... 56
Abréviations ............................................................................................................................................ 57
Bibliographie ........................................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................................... 61Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79992 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Etude des modes de conservations de frottis sanguins pour la biobanque / Morgane EMMERECHTS
Titre : Etude des modes de conservations de frottis sanguins pour la biobanque Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Morgane EMMERECHTS, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : erythrocytes CHU UCL Namur Mont Godinne leucocytes granulocytes lymphocytes monocytes thrombocytes immunophénotypage sang anticorps cytométrie en flux Mau-Grünwald Giemsa myéloperoxydase double estérase congélation coloration coenzymatique immunomarquage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu du stage .................................................................................................. 13
Introduction .............................................................................................................................. 15
Partie théorique ....................................................................................................................... 17
1. Les acides nucléiques ....................................................................................................... 17
2. Le gène ............................................................................................................................. 18
3. Du proto-oncogène à l’oncogène ..................................................................................... 20
4. Les mutations ................................................................................................................... 20
5. Le gène Jak2 ..................................................................................................................... 23
6. Syndrome myéloprolifératif ............................................................................................. 23
7. Les cyclines ....................................................................................................................... 25
8. Myélome multiple ............................................................................................................ 26
9. Droplet Digital PCR ........................................................................................................... 27
9. a. Point de départ en pré-PCR : .................................................................................... 28
9. b. Étape 1 : création des gouttelettes grâce au générateur de gouttelettes : ............. 29
9. c. Étape 2 : amplification par PCR : .............................................................................. 30
9. d. Étape 3 : lecture des gouttelettes grâce au lecteur automatique : ......................... 32
9. e. Étape 4 : analyse des résultats par le logiciel QuantaSoft : ..................................... 33
Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 37
Partie pratique.......................................................................................................................... 37
1. Dossier de validation ........................................................................................................ 37
2. Dossier de validation pour la recherche de la mutation V617F sur le gène Jak2 par ddPCR ................................................................................................................................... 38
2. a. Manipulation pour les différents paramètres .......................................................... 38
Matériel et méthode .................................................................................................... 38
Mode opératoire ......................................................................................................... 38
10
2. b. Détermination du seuil en ddPCR pour la mutation V617F du gène Jak2 ............... 41
Mise en pratique : Analyse d’une série d’échantillons négatifs et un positif .............. 41
2. c. Répétabilité ............................................................................................................... 43
Mise en pratique : échantillon répété .......................................................................... 43
2. d. Reproductibilité ........................................................................................................ 44
Mise en pratique 1 : jours différents ............................................................................ 44
Mise en pratique 2 : générateur de gouttelettes différents ........................................ 45
2. e. Robustesse ................................................................................................................ 46
Mise en pratique 1 : volumes différents ...................................................................... 46
Mise en pratique 2 : concentrations en ADN différentes ............................................ 48
Mise en pratique 3 : différents volumes avant émulsions ........................................... 49
Mise en pratique 4 : volumes après émulsions différents ........................................... 51
2. f. Sensibilité .................................................................................................................. 52
Mise en pratique : pourcentages différents ................................................................ 52
2. g. Limite de détection ................................................................................................... 53
Mise en pratique : à 0.5% ............................................................................................. 53
2. h. Linéarité .................................................................................................................... 54
Mise en pratique : proportionnalité de concentrations .............................................. 54
2. i. Comparaison de deux méthodes d’analyse : le pyroséquençage et la ddPCR ......... 56
Mode opératoire ......................................................................................................... 57
Mise en pratique 1 : JAK2 de 9.6 à 0.9% ...................................................................... 59
Mise en pratique 2 : vrais ou faux positifs ? ................................................................ 61
3. Dossier de validation pour la recherche de la surexpression en cycline D1 par ddPCR .. 63
3. a. Manipulation pour les différents paramètres .......................................................... 63
Matériel et méthode .................................................................................................... 63
Mode opératoire .......................................................................................................... 63
11
3. b. Linéarité .................................................................................................................... 64
Mise en pratique : dilutions de plasmides en CD1, CD3 et CD1/CD3 .......................... 64
3. c. Spécificité .................................................................................................................. 65
Mise en pratique : dilutions des plasmides en CD1 et CD3 avec des sondes non spécifiques .................................................................................................................... 65
3. d. Établissement d’un seuil de sensibilité .................................................................... 66
Mise en pratique : échantillons négatifs ...................................................................... 66
3. e. Série d’échantillons négatifs et positifs .................................................................... 70
Mise en pratique : comparaison qPCR avec ddPCR ..................................................... 70
3. f. Répétabilité ............................................................................................................... 71
Mise en pratique : positif fort, positif faible, négatif fort et négatif faible ................. 71
3. g. Reproductibilité ........................................................................................................ 72
Mise en pratique : K562 ............................................................................................... 72
Conclusion ................................................................................................................................ 73
Bibliographie ............................................................................................................................ 75
Annexes .................................................................................................................................... 77Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65672 Etude des modes de conservations de frottis sanguins pour la biobanque [TFE / Mémoire] / Morgane EMMERECHTS, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : erythrocytes CHU UCL Namur Mont Godinne leucocytes granulocytes lymphocytes monocytes thrombocytes immunophénotypage sang anticorps cytométrie en flux Mau-Grünwald Giemsa myéloperoxydase double estérase congélation coloration coenzymatique immunomarquage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu du stage .................................................................................................. 13
Introduction .............................................................................................................................. 15
Partie théorique ....................................................................................................................... 17
1. Les acides nucléiques ....................................................................................................... 17
2. Le gène ............................................................................................................................. 18
3. Du proto-oncogène à l’oncogène ..................................................................................... 20
4. Les mutations ................................................................................................................... 20
5. Le gène Jak2 ..................................................................................................................... 23
6. Syndrome myéloprolifératif ............................................................................................. 23
7. Les cyclines ....................................................................................................................... 25
8. Myélome multiple ............................................................................................................ 26
9. Droplet Digital PCR ........................................................................................................... 27
9. a. Point de départ en pré-PCR : .................................................................................... 28
9. b. Étape 1 : création des gouttelettes grâce au générateur de gouttelettes : ............. 29
9. c. Étape 2 : amplification par PCR : .............................................................................. 30
9. d. Étape 3 : lecture des gouttelettes grâce au lecteur automatique : ......................... 32
9. e. Étape 4 : analyse des résultats par le logiciel QuantaSoft : ..................................... 33
Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 37
Partie pratique.......................................................................................................................... 37
1. Dossier de validation ........................................................................................................ 37
2. Dossier de validation pour la recherche de la mutation V617F sur le gène Jak2 par ddPCR ................................................................................................................................... 38
2. a. Manipulation pour les différents paramètres .......................................................... 38
Matériel et méthode .................................................................................................... 38
Mode opératoire ......................................................................................................... 38
10
2. b. Détermination du seuil en ddPCR pour la mutation V617F du gène Jak2 ............... 41
Mise en pratique : Analyse d’une série d’échantillons négatifs et un positif .............. 41
2. c. Répétabilité ............................................................................................................... 43
Mise en pratique : échantillon répété .......................................................................... 43
2. d. Reproductibilité ........................................................................................................ 44
Mise en pratique 1 : jours différents ............................................................................ 44
Mise en pratique 2 : générateur de gouttelettes différents ........................................ 45
2. e. Robustesse ................................................................................................................ 46
Mise en pratique 1 : volumes différents ...................................................................... 46
Mise en pratique 2 : concentrations en ADN différentes ............................................ 48
Mise en pratique 3 : différents volumes avant émulsions ........................................... 49
Mise en pratique 4 : volumes après émulsions différents ........................................... 51
2. f. Sensibilité .................................................................................................................. 52
Mise en pratique : pourcentages différents ................................................................ 52
2. g. Limite de détection ................................................................................................... 53
Mise en pratique : à 0.5% ............................................................................................. 53
2. h. Linéarité .................................................................................................................... 54
Mise en pratique : proportionnalité de concentrations .............................................. 54
2. i. Comparaison de deux méthodes d’analyse : le pyroséquençage et la ddPCR ......... 56
Mode opératoire ......................................................................................................... 57
Mise en pratique 1 : JAK2 de 9.6 à 0.9% ...................................................................... 59
Mise en pratique 2 : vrais ou faux positifs ? ................................................................ 61
3. Dossier de validation pour la recherche de la surexpression en cycline D1 par ddPCR .. 63
3. a. Manipulation pour les différents paramètres .......................................................... 63
Matériel et méthode .................................................................................................... 63
Mode opératoire .......................................................................................................... 63
11
3. b. Linéarité .................................................................................................................... 64
Mise en pratique : dilutions de plasmides en CD1, CD3 et CD1/CD3 .......................... 64
3. c. Spécificité .................................................................................................................. 65
Mise en pratique : dilutions des plasmides en CD1 et CD3 avec des sondes non spécifiques .................................................................................................................... 65
3. d. Établissement d’un seuil de sensibilité .................................................................... 66
Mise en pratique : échantillons négatifs ...................................................................... 66
3. e. Série d’échantillons négatifs et positifs .................................................................... 70
Mise en pratique : comparaison qPCR avec ddPCR ..................................................... 70
3. f. Répétabilité ............................................................................................................... 71
Mise en pratique : positif fort, positif faible, négatif fort et négatif faible ................. 71
3. g. Reproductibilité ........................................................................................................ 72
Mise en pratique : K562 ............................................................................................... 72
Conclusion ................................................................................................................................ 73
Bibliographie ............................................................................................................................ 75
Annexes .................................................................................................................................... 77Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65672 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse / Quentin Dhesse
Titre : Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU UCL Namur Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100363 Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse [TFE / Mémoire] / Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : CHU UCL Namur Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100363 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire