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Etude de stabilité d’un mélange de morphine, kétamine et lorazépam utilisé en soins palliatifs / Laura Defrene
Titre : Etude de stabilité d’un mélange de morphine, kétamine et lorazépam utilisé en soins palliatifs Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Laura Defrene, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’étude s’intéresse à l’étude de stabilité physique et chimique d’un mélange composé de morphine, kétamine et lorazépam. Ce mélange est administré dans le cadre de soins palliatifs dont le but est de soulager des personnes souffrant de maladies douloureuses et incurables.
A ce jour, le mélange est reconstitué par le personnel infirmier au moment de l’injection. Néanmoins, la préparation centralisée du mélange par la pharmacie de l’hôpital comporterait de nombreux avantages tels qu’une production en lots, un gain de temps pour les infirmiers, une meilleure qualité du produit et une diminution des erreurs d’imprécision. Pour ce faire, il est nécessaire de connaitre les conditions de stockage du mélange et donc d’évaluer sa stabilité physique et chimique. Dans le cadre de ce projet, la stabilité est étudiée à 5±3°C pendant une durée d’un mois et ceci à 2 concentrations différentes couramment utilisées.
La stabilité physique est étudiée via différents tests effectués périodiquement tout au long du mois. Une mesure du pH et d’absorbances sont effectuées ainsi que différents contrôles visuels permettant de voir l’apparition d’éventuels cristaux ou impuretés. Ces différents tests ont permis de conclure que le mélange de basses concentrations était physiquement stable pendant 7 jours tandis que celui de hautes concentrations ne l’était que pendant 4 jours.
L’évaluation de la stabilité chimique consiste en l’analyse de l’évolution des concentrations des 3 composés au cours du temps. Pour cela, une méthode de dosage des 3 molécules d’intérêts a été mise au point puis validée. Une diminution maximale de 10% par rapport à la concentration initiale est tolérée afin de considérer le mélange stable. Une régression linéaire avec un intervalle de confiance à 95% a permis de conclure que le mélange de basses concentrations était chimiquement stable durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations n’était stable qu’un seul jour.
L’ensemble des résultats obtenus indique que le mélange de basses concentrations peut être stocké à 5±3°C durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations ne peut pas être stocké.Note de contenu : Présentation du lieu de stage
Introduction ................................................................................................................................... 10
Partie théorique
1. Présentation du mélange ........................................................................................................ 11 Constituants du mélange et rôle clinique ........................................................................ 11
La morphine .................................................................................................................... 11
La kétamine .................................................................................................................... 12
Le lorazépam .................................................................................................................. 13
2. Préparation centralisée .......................................................................................................... 14
3. Dosage du mélange ............................................................................................................... 14 L’UHPLC ....................................................................................................................... 14
Appareillage .................................................................................................................... 16
3.2.1. Gestionnaire de solvant quaternaire ........................................................................ 16
3.2.2. Gestionnaire des échantillons .................................................................................. 17
3.2.3. Four de la colonne ................................................................................................... 17
3.2.4. Détecteur ................................................................................................................. 18
4. Développement de la méthode chromatographique .............................................................. 20 Colonne ........................................................................................................................... 20
Phase mobile ................................................................................................................... 21
Températures de travail .................................................................................................. 21
Débit ............................................................................................................................... 21
Longueurs d’ondes utilisées ........................................................................................... 22
Concentration en analytes ............................................................................................... 22
5. Validation de la méthode ....................................................................................................... 22 Droite de calibration ....................................................................................................... 22
Linéarité .......................................................................................................................... 23
Reproductibilité .............................................................................................................. 23
Limite de détection et de quantification ......................................................................... 23
Dégradation forcée ......................................................................................................... 24
6. Tests de stabilité .................................................................................................................... 24 Stabilité physique ........................................................................................................... 24
Stabilité chimique ........................................................................................................... 25
7. Objectif .................................................................................................................................. 25
Partie pratique
1. Matériel ................................................................................................................................. 27
1.1. Produits pharmaceutiques ............................................................................................... 27
1.2. Stabilité physique ........................................................................................................... 27
1.2.1. Mesure de l’absorbance ........................................................................................... 27
1.2.2. Mesure du pH .......................................................................................................... 27
1.2.3. Contrôle visuel sur fond blanc et sur fond noir ....................................................... 27
1.2.4. Observation au microscope ..................................................................................... 28
1.3. Stabilité chimique ........................................................................................................... 28
2. Méthode ................................................................................................................................. 28
2.1. Méthode chromatographique .......................................................................................... 28
2.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 29
2.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 29
2.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 30
2.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 31
2.2.4. Limite de quantification et de détection .................................................................. 31
2.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 32
2.3. Tests de stabilité ............................................................................................................. 34
2.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 34
2.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 35
3. Résultats ................................................................................................................................ 35
3.1. Développement de la méthode ....................................................................................... 35
3.1.1. Colonne ................................................................................................................... 35
3.1.2. Phase mobile ........................................................................................................... 36
3.1.3. Température de travail ............................................................................................ 36
3.1.4. Débit et temps d’analyse ......................................................................................... 37
3.1.5. Longueurs d’ondes de travail .................................................................................. 37
3.1.6. Concentration en analytes et volume injecté ........................................................... 37
3.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 37
3.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 37
3.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 39
3.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 39
3.2.4. Limite de détection et de quantification .................................................................. 40
3.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 40
3.3. Tests de stabilités ............................................................................................................ 41
3.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 41
3.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 45
Conclusion ..................................................................................................................................... 48
Table des figures ........................................................................................................................... 49
Table des tableaux ......................................................................................................................... 50
Bibliographie ................................................................................................................................. 51
Table des annexes .......................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79987 Etude de stabilité d’un mélange de morphine, kétamine et lorazépam utilisé en soins palliatifs [TFE / Mémoire] / Laura Defrene, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’étude s’intéresse à l’étude de stabilité physique et chimique d’un mélange composé de morphine, kétamine et lorazépam. Ce mélange est administré dans le cadre de soins palliatifs dont le but est de soulager des personnes souffrant de maladies douloureuses et incurables.
A ce jour, le mélange est reconstitué par le personnel infirmier au moment de l’injection. Néanmoins, la préparation centralisée du mélange par la pharmacie de l’hôpital comporterait de nombreux avantages tels qu’une production en lots, un gain de temps pour les infirmiers, une meilleure qualité du produit et une diminution des erreurs d’imprécision. Pour ce faire, il est nécessaire de connaitre les conditions de stockage du mélange et donc d’évaluer sa stabilité physique et chimique. Dans le cadre de ce projet, la stabilité est étudiée à 5±3°C pendant une durée d’un mois et ceci à 2 concentrations différentes couramment utilisées.
La stabilité physique est étudiée via différents tests effectués périodiquement tout au long du mois. Une mesure du pH et d’absorbances sont effectuées ainsi que différents contrôles visuels permettant de voir l’apparition d’éventuels cristaux ou impuretés. Ces différents tests ont permis de conclure que le mélange de basses concentrations était physiquement stable pendant 7 jours tandis que celui de hautes concentrations ne l’était que pendant 4 jours.
L’évaluation de la stabilité chimique consiste en l’analyse de l’évolution des concentrations des 3 composés au cours du temps. Pour cela, une méthode de dosage des 3 molécules d’intérêts a été mise au point puis validée. Une diminution maximale de 10% par rapport à la concentration initiale est tolérée afin de considérer le mélange stable. Une régression linéaire avec un intervalle de confiance à 95% a permis de conclure que le mélange de basses concentrations était chimiquement stable durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations n’était stable qu’un seul jour.
L’ensemble des résultats obtenus indique que le mélange de basses concentrations peut être stocké à 5±3°C durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations ne peut pas être stocké.Note de contenu : Présentation du lieu de stage
Introduction ................................................................................................................................... 10
Partie théorique
1. Présentation du mélange ........................................................................................................ 11 Constituants du mélange et rôle clinique ........................................................................ 11
La morphine .................................................................................................................... 11
La kétamine .................................................................................................................... 12
Le lorazépam .................................................................................................................. 13
2. Préparation centralisée .......................................................................................................... 14
3. Dosage du mélange ............................................................................................................... 14 L’UHPLC ....................................................................................................................... 14
Appareillage .................................................................................................................... 16
3.2.1. Gestionnaire de solvant quaternaire ........................................................................ 16
3.2.2. Gestionnaire des échantillons .................................................................................. 17
3.2.3. Four de la colonne ................................................................................................... 17
3.2.4. Détecteur ................................................................................................................. 18
4. Développement de la méthode chromatographique .............................................................. 20 Colonne ........................................................................................................................... 20
Phase mobile ................................................................................................................... 21
Températures de travail .................................................................................................. 21
Débit ............................................................................................................................... 21
Longueurs d’ondes utilisées ........................................................................................... 22
Concentration en analytes ............................................................................................... 22
5. Validation de la méthode ....................................................................................................... 22 Droite de calibration ....................................................................................................... 22
Linéarité .......................................................................................................................... 23
Reproductibilité .............................................................................................................. 23
Limite de détection et de quantification ......................................................................... 23
Dégradation forcée ......................................................................................................... 24
6. Tests de stabilité .................................................................................................................... 24 Stabilité physique ........................................................................................................... 24
Stabilité chimique ........................................................................................................... 25
7. Objectif .................................................................................................................................. 25
Partie pratique
1. Matériel ................................................................................................................................. 27
1.1. Produits pharmaceutiques ............................................................................................... 27
1.2. Stabilité physique ........................................................................................................... 27
1.2.1. Mesure de l’absorbance ........................................................................................... 27
1.2.2. Mesure du pH .......................................................................................................... 27
1.2.3. Contrôle visuel sur fond blanc et sur fond noir ....................................................... 27
1.2.4. Observation au microscope ..................................................................................... 28
1.3. Stabilité chimique ........................................................................................................... 28
2. Méthode ................................................................................................................................. 28
2.1. Méthode chromatographique .......................................................................................... 28
2.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 29
2.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 29
2.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 30
2.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 31
2.2.4. Limite de quantification et de détection .................................................................. 31
2.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 32
2.3. Tests de stabilité ............................................................................................................. 34
2.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 34
2.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 35
3. Résultats ................................................................................................................................ 35
3.1. Développement de la méthode ....................................................................................... 35
3.1.1. Colonne ................................................................................................................... 35
3.1.2. Phase mobile ........................................................................................................... 36
3.1.3. Température de travail ............................................................................................ 36
3.1.4. Débit et temps d’analyse ......................................................................................... 37
3.1.5. Longueurs d’ondes de travail .................................................................................. 37
3.1.6. Concentration en analytes et volume injecté ........................................................... 37
3.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 37
3.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 37
3.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 39
3.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 39
3.2.4. Limite de détection et de quantification .................................................................. 40
3.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 40
3.3. Tests de stabilités ............................................................................................................ 41
3.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 41
3.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 45
Conclusion ..................................................................................................................................... 48
Table des figures ........................................................................................................................... 49
Table des tableaux ......................................................................................................................... 50
Bibliographie ................................................................................................................................. 51
Table des annexes .......................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79987 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation des performances du MBT STAR-Carba IVD kit pour la détection de l'activité des carbapénèmases chez les entérobactéries et les non-fermentants / Corentin Bombecke
Titre : Evaluation des performances du MBT STAR-Carba IVD kit pour la détection de l'activité des carbapénèmases chez les entérobactéries et les non-fermentants Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Corentin Bombecke, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’utilisation intempestive des antibiotiques a progressivement mené à l’émergence de résistances bactériennes. Parmi ces résistances, la production de carbapénèmases constitue actuellement un enjeu majeur de santé publique. Ces β-lactamases limitent considérablement les options thérapeutiques et leur diffusion mondiale suscite de vives inquiétudes quant au contrôle des infections nosocomiales et des traitements antibiotiques.
Dès lors, il est urgent de mettre en place des méthodes rapides et efficaces permettant la détection des souches productrices de carbapénèmases.
Ce travail de fin d’étude aborde l’évaluation des performances d’un test phénotypique, le MBT STAR-Carba IVD Kit (Bruker Daltonics), basé sur le principe MALDI-TOF. Parallèlement, un autre test, le β-Carba Test (Bio-Rad) a également été évalué. Afin d’y parvenir, les analyses se sont portées sur un recueil prospectif de 118 souches d’entérobactéries et non-fermentants. Chaque souche a d’abord été identifiée par spectrométrie de masse et ensuite soumise à une expertise dans le but de statuer son niveau de sensibilité aux antibiotiques. Pour cela, différents tests phénotypiques et génotypiques ont été utilisés afin d’établir un statut référentiel. Une fois que leur statut de référence a été défini quant à la production -ou non- de carbapénèmases, l’interprétation et la comparaison des performances du MBT STAR-Carba IVD Assay et du β-Carba Test fut possible. Il est apparu que sur les 118 souches, 52 étaient productrices de carbapénèmases et 66 non-productrices de ces enzymes.
Les performances se sont avérées excellentes pour le MBT STAR-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 95%) ainsi que pour le β-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 100%). Une comparaison globale des deux méthodes a par la suite été menée dans l’objectif de déterminer l’intérêt plausible d’une implantation du MBT STAR-Carba au sein d’un laboratoire de routine.
Le bilan de cette étude comparative a permis de constater que la praticabilité technique du MBT STAR-Carba s’avère peu convaincante et qu’une mise en place en laboratoire de routine semble peu compatible avec la demande actuelle.
Un développement futur de cette méthode permettant d’identifier directement le type de carbapénèmase produite par la bactérie serait néanmoins une plus-value conséquente.Note de contenu : Table des matières
Liste des abréviations ................................................................................................................. 5
Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11
Introduction .............................................................................................................................. 13
1. Contexte général .............................................................................................................. 15
1.1 Les antibiotiques ........................................................................................................ 15
1.1.1 Les antibiotiques inhibant la synthèse protéique .............................................. 16
1.1.2 Les antibiotiques qui agissent sur les acides nucléiques et leurs précurseurs .. 17
1.1.3 Antibiotiques agissant sur la synthèse de la paroi bactérienne ........................ 19
1.2 Résistance aux antibiotiques ..................................................................................... 23
1.2.1 La diminution de la perméabilité membranaire ................................................ 23
1.2.2 Les pompes à efflux ............................................................................................ 24
1.2.3 Modification de la cible des antibiotiques ......................................................... 24
1.2.4 Inactivation enzymatique de l'antibiotique ....................................................... 24
1.3 Les β-lactamases ........................................................................................................ 25
1.3.1 La classe A........................................................................................................... 26
1.3.2 La classe C : les céphalosporinases .................................................................... 27
1.3.3 La classe D : les oxacillinases .............................................................................. 28
1.4 Les carbapénèmases .................................................................................................. 28
1.4.1 Carbapénèmases de classe A ............................................................................. 29
1.4.2 Carbapénèmases de classe B ............................................................................. 29
1.4.3 Les carbapénèmases de classe D ....................................................................... 30
1.5 Epidémiologie des différentes carbapénèmases ...................................................... 30
1.6 Méthodes de détection des carbapénèmases en laboratoire .................................. 33
1.6.1 Méthodes phénotypiques .................................................................................. 34
1.6.2 Tests génotypiques ............................................................................................. 37
2. Objectifs et Stratégie ........................................................................................................ 39
2.1 Objectifs ..................................................................................................................... 39
2.2 Stratégie ..................................................................................................................... 39
3. Matériel et Méthodes ...................................................................................................... 41
3.1 Matériel ..................................................................................................................... 41
3.2 Méthodes ................................................................................................................... 42
3.2.1 Souches bactériennes ........................................................................................ 42
3.2.2 Identifications bactériennes ............................................................................... 42
3.2.3 Sensibilité aux antibiotiques .............................................................................. 43
3.2.4 Tests complémentaires destinés à la détection des bactéries productrices de carbapénèmases. ............................................................................................................. 44
3.2.5 Recherche de mécanismes de résistance par méthodes génotypiques ............ 46
3.2.6 Protocole du MBT STAR-Carba IVD Assay .......................................................... 47
4. Résultats et discussion ..................................................................................................... 53
4.1 Résultats .................................................................................................................... 53
4.1.1 Résultats du MBT STAR-Carba et du β-Carba par rapport à la référence .......... 53
4.1.2 Performances du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................................. 55
4.1.3 Evaluation de la reproductibilité du test MBT STAR-Carba ............................... 56
4.2 Discussion .................................................................................................................. 56
4.2.1 Discordances entre les résultats des tests et la référence ................................ 56
4.2.2 Comparaison des performances du MBT STAR-Carba et β-Carba ..................... 57
4.2.3 Limitations de l’étude......................................................................................... 58
4.2.4 Problèmes rencontrés ........................................................................................ 58
4.2.5 Comparaison des caractéristiques générales du MBT STAR-Carba et β-Carba . 61
4.2.6 Appréciation qualitative du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................ 63
Conclusion ................................................................................................................................ 65
Liste des figures et des tableaux .............................................................................................. 67
Bibliographie ............................................................................................................................ 68
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79794 Evaluation des performances du MBT STAR-Carba IVD kit pour la détection de l'activité des carbapénèmases chez les entérobactéries et les non-fermentants [TFE / Mémoire] / Corentin Bombecke, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’utilisation intempestive des antibiotiques a progressivement mené à l’émergence de résistances bactériennes. Parmi ces résistances, la production de carbapénèmases constitue actuellement un enjeu majeur de santé publique. Ces β-lactamases limitent considérablement les options thérapeutiques et leur diffusion mondiale suscite de vives inquiétudes quant au contrôle des infections nosocomiales et des traitements antibiotiques.
Dès lors, il est urgent de mettre en place des méthodes rapides et efficaces permettant la détection des souches productrices de carbapénèmases.
Ce travail de fin d’étude aborde l’évaluation des performances d’un test phénotypique, le MBT STAR-Carba IVD Kit (Bruker Daltonics), basé sur le principe MALDI-TOF. Parallèlement, un autre test, le β-Carba Test (Bio-Rad) a également été évalué. Afin d’y parvenir, les analyses se sont portées sur un recueil prospectif de 118 souches d’entérobactéries et non-fermentants. Chaque souche a d’abord été identifiée par spectrométrie de masse et ensuite soumise à une expertise dans le but de statuer son niveau de sensibilité aux antibiotiques. Pour cela, différents tests phénotypiques et génotypiques ont été utilisés afin d’établir un statut référentiel. Une fois que leur statut de référence a été défini quant à la production -ou non- de carbapénèmases, l’interprétation et la comparaison des performances du MBT STAR-Carba IVD Assay et du β-Carba Test fut possible. Il est apparu que sur les 118 souches, 52 étaient productrices de carbapénèmases et 66 non-productrices de ces enzymes.
Les performances se sont avérées excellentes pour le MBT STAR-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 95%) ainsi que pour le β-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 100%). Une comparaison globale des deux méthodes a par la suite été menée dans l’objectif de déterminer l’intérêt plausible d’une implantation du MBT STAR-Carba au sein d’un laboratoire de routine.
Le bilan de cette étude comparative a permis de constater que la praticabilité technique du MBT STAR-Carba s’avère peu convaincante et qu’une mise en place en laboratoire de routine semble peu compatible avec la demande actuelle.
Un développement futur de cette méthode permettant d’identifier directement le type de carbapénèmase produite par la bactérie serait néanmoins une plus-value conséquente.Note de contenu : Table des matières
Liste des abréviations ................................................................................................................. 5
Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11
Introduction .............................................................................................................................. 13
1. Contexte général .............................................................................................................. 15
1.1 Les antibiotiques ........................................................................................................ 15
1.1.1 Les antibiotiques inhibant la synthèse protéique .............................................. 16
1.1.2 Les antibiotiques qui agissent sur les acides nucléiques et leurs précurseurs .. 17
1.1.3 Antibiotiques agissant sur la synthèse de la paroi bactérienne ........................ 19
1.2 Résistance aux antibiotiques ..................................................................................... 23
1.2.1 La diminution de la perméabilité membranaire ................................................ 23
1.2.2 Les pompes à efflux ............................................................................................ 24
1.2.3 Modification de la cible des antibiotiques ......................................................... 24
1.2.4 Inactivation enzymatique de l'antibiotique ....................................................... 24
1.3 Les β-lactamases ........................................................................................................ 25
1.3.1 La classe A........................................................................................................... 26
1.3.2 La classe C : les céphalosporinases .................................................................... 27
1.3.3 La classe D : les oxacillinases .............................................................................. 28
1.4 Les carbapénèmases .................................................................................................. 28
1.4.1 Carbapénèmases de classe A ............................................................................. 29
1.4.2 Carbapénèmases de classe B ............................................................................. 29
1.4.3 Les carbapénèmases de classe D ....................................................................... 30
1.5 Epidémiologie des différentes carbapénèmases ...................................................... 30
1.6 Méthodes de détection des carbapénèmases en laboratoire .................................. 33
1.6.1 Méthodes phénotypiques .................................................................................. 34
1.6.2 Tests génotypiques ............................................................................................. 37
2. Objectifs et Stratégie ........................................................................................................ 39
2.1 Objectifs ..................................................................................................................... 39
2.2 Stratégie ..................................................................................................................... 39
3. Matériel et Méthodes ...................................................................................................... 41
3.1 Matériel ..................................................................................................................... 41
3.2 Méthodes ................................................................................................................... 42
3.2.1 Souches bactériennes ........................................................................................ 42
3.2.2 Identifications bactériennes ............................................................................... 42
3.2.3 Sensibilité aux antibiotiques .............................................................................. 43
3.2.4 Tests complémentaires destinés à la détection des bactéries productrices de carbapénèmases. ............................................................................................................. 44
3.2.5 Recherche de mécanismes de résistance par méthodes génotypiques ............ 46
3.2.6 Protocole du MBT STAR-Carba IVD Assay .......................................................... 47
4. Résultats et discussion ..................................................................................................... 53
4.1 Résultats .................................................................................................................... 53
4.1.1 Résultats du MBT STAR-Carba et du β-Carba par rapport à la référence .......... 53
4.1.2 Performances du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................................. 55
4.1.3 Evaluation de la reproductibilité du test MBT STAR-Carba ............................... 56
4.2 Discussion .................................................................................................................. 56
4.2.1 Discordances entre les résultats des tests et la référence ................................ 56
4.2.2 Comparaison des performances du MBT STAR-Carba et β-Carba ..................... 57
4.2.3 Limitations de l’étude......................................................................................... 58
4.2.4 Problèmes rencontrés ........................................................................................ 58
4.2.5 Comparaison des caractéristiques générales du MBT STAR-Carba et β-Carba . 61
4.2.6 Appréciation qualitative du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................ 63
Conclusion ................................................................................................................................ 65
Liste des figures et des tableaux .............................................................................................. 67
Bibliographie ............................................................................................................................ 68
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79794 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse / Quentin Dhesse
Titre : Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU UCL Namur Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100363 Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse [TFE / Mémoire] / Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : CHU UCL Namur Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100363 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Recherche des mécanismes de résistance à la colistine dans des isolats cliniques chez les entérobactéries / ALEXANDRE PIRAUX
Titre : Recherche des mécanismes de résistance à la colistine dans des isolats cliniques chez les entérobactéries Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : ALEXANDRE PIRAUX, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Mont Godine résistance antibiotiques PCR Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................................. 9
Introduction générale ........................................................................................................... 11
Contexte théorique ............................................................................................................... 13
1. La résistance aux antibiotiques .................................................................................... 13
1.1. La résistance naturelle .......................................................................................... 14
1.2. La résistance acquise ............................................................................................ 14
1.2.1. L’acquisition de mutations ou de gènes de résistance ............................... 15
1.2.1.1. Résistance par mutation chromosomique ............................................... 15 1.2.1.2. Résistance par acquisition de gènes ....................................................... 15 2. Identification de l’espèce bactérienne par spectrométrie de masse MALDI-TOF ...... 16
3. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) .................................. 17
3.1. Définition .............................................................................................................. 17
3.2. Technique de détermination de la CMI : la micro-dilution miniaturisée.............. 17
4. La colistine .................................................................................................................. 18
4.1. Composition chimique et structure .................................................................. 19
4.2. Mécanisme d’action ......................................................................................... 20
4.3. Toxicité ............................................................................................................ 20
4.4. Utilisation vétérinaire ...................................................................................... 21
4.5. Résistance à la colistine ................................................................................... 22
4.5.1. Mécanismes de résistance .......................................................................... 22
4.5.1.1. Résistances chromosomiques ................................................................. 23
4.5.1.2. Mécanismes de résistance chromosomique à la colistine ...................... 24
4.5.2. Résistance plasmidique : gène mcr-1 ......................................................... 25
5. La PCR classique ......................................................................................................... 26
6
Les différentes étapes de la PCR ..................................................................................... 27
6. Loop mediated isothermal amplification (LAMP) ...................................................... 28
6.1. Principe (cf. Figure n°4) ....................................................................................... 28
6.2. Détection du produit d’amplification .................................................................... 30
7. Séquençage de gènes par la méthode Sanger .............................................................. 31
7.1. Principe ................................................................................................................. 31
7.2. Méthodologie ........................................................................................................ 32
Objectifs et stratégies........................................................................................................... 35
Matériels et méthodes .......................................................................................................... 37
1. Matériels ...................................................................................................................... 37
2. Méthodes ..................................................................................................................... 37
2.1. Identification de l’espèce bactérienne ................................................................... 38
2.2. Détermination de la CMI par micro-dilution Sensititre® ...................................... 38
2.3. PCR end-point ....................................................................................................... 39
2.3.1. PCR mcr-1 ................................................................................................. 39
2.3.2. PCR mgrB externe pour Klebsiella pneumoniae ....................................... 40
2.3.3. PCR mgrB interne pour Klebsiella pneumoniae ........................................ 41
2.3.4. PCR mgrB pour Escherichia coli ............................................................... 41
2.3.5. PCR pmrAB pour Klebsiella pneumoniae ................................................. 42
2.3.6. PCR pmrB pour Escherichia coli ............................................................... 43
2.3.7. PCR pmrA pour Escherichia coli ............................................................... 43
2.3.8. PCR phoQ pour Escherichia coli ............................................................... 44
2.3.9. PCR phoP pour Escherichia coli ................................................................ 44
2.4. PCR Eazyplex MCR-1 .......................................................................................... 45
2.5. Séquençage par méthode Sanger .......................................................................... 46
Résultats et discussion ......................................................................................................... 47
1. Résultats ...................................................................................................................... 47
7
1.1. mgrB chez Klebsiella pneumoniae ....................................................................... 48
1.1.1. Les amplicons de type 1 (n=16) (cf. Tableau n°1) .................................... 48
1.1.2. Les amplicons de type 2 (n=19) (cf. Tableau n°2) .................................... 49
1.1.3. Les amplicons de type 3 (n=9) (cf Tableau n°3) ....................................... 50
1.2. mgrB chez Escherichia coli .................................................................................. 51
2. Discussion .................................................................................................................... 52
Conclusion générale ............................................................................................................ 55
Bibliographie ....................................................................................................................... 57
Annexes ............................................................................................................................... 61Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65688 Recherche des mécanismes de résistance à la colistine dans des isolats cliniques chez les entérobactéries [TFE / Mémoire] / ALEXANDRE PIRAUX, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Mont Godine résistance antibiotiques PCR Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................................. 9
Introduction générale ........................................................................................................... 11
Contexte théorique ............................................................................................................... 13
1. La résistance aux antibiotiques .................................................................................... 13
1.1. La résistance naturelle .......................................................................................... 14
1.2. La résistance acquise ............................................................................................ 14
1.2.1. L’acquisition de mutations ou de gènes de résistance ............................... 15
1.2.1.1. Résistance par mutation chromosomique ............................................... 15 1.2.1.2. Résistance par acquisition de gènes ....................................................... 15 2. Identification de l’espèce bactérienne par spectrométrie de masse MALDI-TOF ...... 16
3. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) .................................. 17
3.1. Définition .............................................................................................................. 17
3.2. Technique de détermination de la CMI : la micro-dilution miniaturisée.............. 17
4. La colistine .................................................................................................................. 18
4.1. Composition chimique et structure .................................................................. 19
4.2. Mécanisme d’action ......................................................................................... 20
4.3. Toxicité ............................................................................................................ 20
4.4. Utilisation vétérinaire ...................................................................................... 21
4.5. Résistance à la colistine ................................................................................... 22
4.5.1. Mécanismes de résistance .......................................................................... 22
4.5.1.1. Résistances chromosomiques ................................................................. 23
4.5.1.2. Mécanismes de résistance chromosomique à la colistine ...................... 24
4.5.2. Résistance plasmidique : gène mcr-1 ......................................................... 25
5. La PCR classique ......................................................................................................... 26
6
Les différentes étapes de la PCR ..................................................................................... 27
6. Loop mediated isothermal amplification (LAMP) ...................................................... 28
6.1. Principe (cf. Figure n°4) ....................................................................................... 28
6.2. Détection du produit d’amplification .................................................................... 30
7. Séquençage de gènes par la méthode Sanger .............................................................. 31
7.1. Principe ................................................................................................................. 31
7.2. Méthodologie ........................................................................................................ 32
Objectifs et stratégies........................................................................................................... 35
Matériels et méthodes .......................................................................................................... 37
1. Matériels ...................................................................................................................... 37
2. Méthodes ..................................................................................................................... 37
2.1. Identification de l’espèce bactérienne ................................................................... 38
2.2. Détermination de la CMI par micro-dilution Sensititre® ...................................... 38
2.3. PCR end-point ....................................................................................................... 39
2.3.1. PCR mcr-1 ................................................................................................. 39
2.3.2. PCR mgrB externe pour Klebsiella pneumoniae ....................................... 40
2.3.3. PCR mgrB interne pour Klebsiella pneumoniae ........................................ 41
2.3.4. PCR mgrB pour Escherichia coli ............................................................... 41
2.3.5. PCR pmrAB pour Klebsiella pneumoniae ................................................. 42
2.3.6. PCR pmrB pour Escherichia coli ............................................................... 43
2.3.7. PCR pmrA pour Escherichia coli ............................................................... 43
2.3.8. PCR phoQ pour Escherichia coli ............................................................... 44
2.3.9. PCR phoP pour Escherichia coli ................................................................ 44
2.4. PCR Eazyplex MCR-1 .......................................................................................... 45
2.5. Séquençage par méthode Sanger .......................................................................... 46
Résultats et discussion ......................................................................................................... 47
1. Résultats ...................................................................................................................... 47
7
1.1. mgrB chez Klebsiella pneumoniae ....................................................................... 48
1.1.1. Les amplicons de type 1 (n=16) (cf. Tableau n°1) .................................... 48
1.1.2. Les amplicons de type 2 (n=19) (cf. Tableau n°2) .................................... 49
1.1.3. Les amplicons de type 3 (n=9) (cf Tableau n°3) ....................................... 50
1.2. mgrB chez Escherichia coli .................................................................................. 51
2. Discussion .................................................................................................................... 52
Conclusion générale ............................................................................................................ 55
Bibliographie ....................................................................................................................... 57
Annexes ............................................................................................................................... 61Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65688 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Suivi à 3 et 6 mois des anomalies des analyses de l’hémostase de patients hospitalisés aux soins intensifs à cause de la COVID-19 / Loïc Gillard
Titre : Suivi à 3 et 6 mois des anomalies des analyses de l’hémostase de patients hospitalisés aux soins intensifs à cause de la COVID-19 Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Loïc Gillard, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU UCL Namur Mont-Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études explore les anomalies de l’hémostase chez les patients atteints du COVID-19 admis aux soins intensifs lors de la première vague et de la seconde vague de la pandémie du SARS-COV-2. Il a été observé que les patients qui ont une infection grave au SARS-COV-2 développent une hémostase qui a une tendance thrombotique. Ensuite, les patients ont eu une entrevue avec un médecin après 3 mois et 6 mois, ce qui permet de suivre l’évolution de la coagulation après leur admission. Cette évolution est comparée par la suite à une autre étude qui a exploré le cas de patients 4 mois après leur sortie des soins intensifs. Les tests qui ont été réalisés sur l’hémostase des patients sont composés des tests de routines ainsi que de tests plus spécifiques, comme le dosage des D-dimères, monomères de fibrine, ou encore la capacité fibrinolytique globale ou la génération de thrombine. Ils permettent d’explorer l’hémostase primaire (via l’antigène et l’activité du facteur de von Willebrand), la cascade de coagulation (grâce aux divers tests de routines ainsi qu’aux dosages des facteurs) et enfin la fibrinolyse (par le dosage des D-dimères mais également la capacité fibrinolytique globale). La COVID-19 étant une maladie causant un état inflammatoire très important, certains
paramètres sont extrêmement élevés tel que le facteur VIII ou le facteur de von Willebrand. En conclusion, les tests réalisés ont permis d’explorer une grande partie de l’hémostase perturbé chez les patients souffrant d’une forme sévère du COVID-19. Il y a une normalisation des constantes hémostatiques chez les patients issus des soins intensifs 3 mois après leur admission.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage....................................................................................................................... 8
Introduction générale .................................................................................................................................. 9
1 Partie théorique................................................................................................................................. 10
1.1 L’hémostase primaire et la cascade de coagulation ..................................................................... 10
1.1.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 10
1.1.2 Le temps vasculaire ............................................................................................................. 10
1.1.3 Le temps plaquettaire .......................................................................................................... 10
1.1.4 Le relargage plaquettaire ..................................................................................................... 11
1.2 La cascade coagulation ............................................................................................................... 11
1.3 La fibrinolyse ............................................................................................................................. 13
1.4 Pathologie de l’hémostase dans le cas du Covid-19 .................................................................... 15
1.4.1 Thromboses veineuses et Embolie pulmonaire .................................................................... 15
1.4.2 La triade de Virchow ........................................................................................................... 15
1.4.3 Formation............................................................................................................................ 16
1.4.4 Facteurs de risque................................................................................................................ 17
1.4.5 Prophylaxie ......................................................................................................................... 18
1.5 Explication et intérêt des tests de routines de l’hémostase........................................................... 18
1.5.1 Activated partial thromboplastin time (APTT) ou Temps de Céphaline Activé (TCA) ......... 19
1.5.2 Temps de Quick (TQ) ou temps de Prothrombine (PT) ........................................................ 20
1.5.3 Temps de thrombine (TT).................................................................................................... 20
1.5.4 Dosage du fibrinogène par la méthode de Clauss................................................................. 21
1.6 Explication des tests spécifiques de l’hémostase ......................................................................... 22
1.6.1 D-dimères et monomères de fibrine ..................................................................................... 22
1.6.2 Dosage de l’activité PAI-1 ou PAI....................................................................................... 23
1.6.3 Dosage du Facteur VIII ....................................................................................................... 24
1.6.4 Dosage de l’Antithrombine III............................................................................................. 24
1.6.5 Facteur de von Willebrand Antigène et l’activité ................................................................. 25
1.6.6 Facteur de von Willebrand Antigène.................................................................................... 25
1.6.7 Activité du facteur de von Willebrand ................................................................................. 26
1.6.8 Lysis Timer ......................................................................................................................... 27
1.6.9 ST-Genesia.......................................................................................................................... 27
2 Objectifs, matériel et méthode .......................................................................................................... 31
2.1 Objectifs..................................................................................................................................... 31
2.2 Stratégie ..................................................................................................................................... 31
2.3 Matériels .................................................................................................................................... 32
2.3.1 Star Max² ............................................................................................................................ 32
2.3.2 Lysis Timer ......................................................................................................................... 33
2.3.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 33
2.3.4 BIO-FLASH........................................................................................................................ 33
2.4 Méthode ..................................................................................................................................... 34
2.4.1 StarMax² ............................................................................................................................. 34
2.4.2 Lysis Timer® ...................................................................................................................... 34
2.4.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 35
2.4.4 Bio-Flash............................................................................................................................. 36
3 Résultats et discussions ..................................................................................................................... 36
3.1 Choix des patients ...................................................................................................................... 36
3.2 Résultats et discussion de la première vague............................................................................... 39
3.2.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 39
3.2.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 40
3.2.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 45
3.2.4 Autre ................................................................................................................................... 48
3.3 Résultats et discussion de la deuxième vague.............................................................................. 52
3.3.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 52
3.3.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 53
3.3.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 56
3.4 Comparaison des 2 vagues.......................................................................................................... 60
3.5 Comparaison par rapport à l’autre étude ..................................................................................... 61
3.6 Evolution de l’hémostase des patients de l’étude comparative..................................................... 62
3.7 Bilan des deux études ................................................................................................................. 62
Conclusion générale ................................................................................................................................. 64
Bibliographie............................................................................................................................................ 69
Table des illustrations ............................................................................................................................... 65
Table des tableaux .................................................................................................................................... 67
Abréviations ............................................................................................................................................. 68
Annexes ................................................................................................................................................... 73
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100368 Suivi à 3 et 6 mois des anomalies des analyses de l’hémostase de patients hospitalisés aux soins intensifs à cause de la COVID-19 [TFE / Mémoire] / Loïc Gillard, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : CHU UCL Namur Mont-Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études explore les anomalies de l’hémostase chez les patients atteints du COVID-19 admis aux soins intensifs lors de la première vague et de la seconde vague de la pandémie du SARS-COV-2. Il a été observé que les patients qui ont une infection grave au SARS-COV-2 développent une hémostase qui a une tendance thrombotique. Ensuite, les patients ont eu une entrevue avec un médecin après 3 mois et 6 mois, ce qui permet de suivre l’évolution de la coagulation après leur admission. Cette évolution est comparée par la suite à une autre étude qui a exploré le cas de patients 4 mois après leur sortie des soins intensifs. Les tests qui ont été réalisés sur l’hémostase des patients sont composés des tests de routines ainsi que de tests plus spécifiques, comme le dosage des D-dimères, monomères de fibrine, ou encore la capacité fibrinolytique globale ou la génération de thrombine. Ils permettent d’explorer l’hémostase primaire (via l’antigène et l’activité du facteur de von Willebrand), la cascade de coagulation (grâce aux divers tests de routines ainsi qu’aux dosages des facteurs) et enfin la fibrinolyse (par le dosage des D-dimères mais également la capacité fibrinolytique globale). La COVID-19 étant une maladie causant un état inflammatoire très important, certains
paramètres sont extrêmement élevés tel que le facteur VIII ou le facteur de von Willebrand. En conclusion, les tests réalisés ont permis d’explorer une grande partie de l’hémostase perturbé chez les patients souffrant d’une forme sévère du COVID-19. Il y a une normalisation des constantes hémostatiques chez les patients issus des soins intensifs 3 mois après leur admission.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage....................................................................................................................... 8
Introduction générale .................................................................................................................................. 9
1 Partie théorique................................................................................................................................. 10
1.1 L’hémostase primaire et la cascade de coagulation ..................................................................... 10
1.1.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 10
1.1.2 Le temps vasculaire ............................................................................................................. 10
1.1.3 Le temps plaquettaire .......................................................................................................... 10
1.1.4 Le relargage plaquettaire ..................................................................................................... 11
1.2 La cascade coagulation ............................................................................................................... 11
1.3 La fibrinolyse ............................................................................................................................. 13
1.4 Pathologie de l’hémostase dans le cas du Covid-19 .................................................................... 15
1.4.1 Thromboses veineuses et Embolie pulmonaire .................................................................... 15
1.4.2 La triade de Virchow ........................................................................................................... 15
1.4.3 Formation............................................................................................................................ 16
1.4.4 Facteurs de risque................................................................................................................ 17
1.4.5 Prophylaxie ......................................................................................................................... 18
1.5 Explication et intérêt des tests de routines de l’hémostase........................................................... 18
1.5.1 Activated partial thromboplastin time (APTT) ou Temps de Céphaline Activé (TCA) ......... 19
1.5.2 Temps de Quick (TQ) ou temps de Prothrombine (PT) ........................................................ 20
1.5.3 Temps de thrombine (TT).................................................................................................... 20
1.5.4 Dosage du fibrinogène par la méthode de Clauss................................................................. 21
1.6 Explication des tests spécifiques de l’hémostase ......................................................................... 22
1.6.1 D-dimères et monomères de fibrine ..................................................................................... 22
1.6.2 Dosage de l’activité PAI-1 ou PAI....................................................................................... 23
1.6.3 Dosage du Facteur VIII ....................................................................................................... 24
1.6.4 Dosage de l’Antithrombine III............................................................................................. 24
1.6.5 Facteur de von Willebrand Antigène et l’activité ................................................................. 25
1.6.6 Facteur de von Willebrand Antigène.................................................................................... 25
1.6.7 Activité du facteur de von Willebrand ................................................................................. 26
1.6.8 Lysis Timer ......................................................................................................................... 27
1.6.9 ST-Genesia.......................................................................................................................... 27
2 Objectifs, matériel et méthode .......................................................................................................... 31
2.1 Objectifs..................................................................................................................................... 31
2.2 Stratégie ..................................................................................................................................... 31
2.3 Matériels .................................................................................................................................... 32
2.3.1 Star Max² ............................................................................................................................ 32
2.3.2 Lysis Timer ......................................................................................................................... 33
2.3.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 33
2.3.4 BIO-FLASH........................................................................................................................ 33
2.4 Méthode ..................................................................................................................................... 34
2.4.1 StarMax² ............................................................................................................................. 34
2.4.2 Lysis Timer® ...................................................................................................................... 34
2.4.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 35
2.4.4 Bio-Flash............................................................................................................................. 36
3 Résultats et discussions ..................................................................................................................... 36
3.1 Choix des patients ...................................................................................................................... 36
3.2 Résultats et discussion de la première vague............................................................................... 39
3.2.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 39
3.2.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 40
3.2.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 45
3.2.4 Autre ................................................................................................................................... 48
3.3 Résultats et discussion de la deuxième vague.............................................................................. 52
3.3.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 52
3.3.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 53
3.3.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 56
3.4 Comparaison des 2 vagues.......................................................................................................... 60
3.5 Comparaison par rapport à l’autre étude ..................................................................................... 61
3.6 Evolution de l’hémostase des patients de l’étude comparative..................................................... 62
3.7 Bilan des deux études ................................................................................................................. 62
Conclusion générale ................................................................................................................................. 64
Bibliographie............................................................................................................................................ 69
Table des illustrations ............................................................................................................................... 65
Table des tableaux .................................................................................................................................... 67
Abréviations ............................................................................................................................................. 68
Annexes ................................................................................................................................................... 73
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