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Borréliose de Lyme : spécificité du Western blot (expérience nantaise) in MMI / Médecine et Maladies Infectieuses, MARS (1996)
[article]
Titre : Borréliose de Lyme : spécificité du Western blot (expérience nantaise) Type de document : texte imprimé Année de publication : 1996 Article en page(s) : 332 - 337 Mots-clés : BORRELIA BURGDORFERI ELISA WESTERN BLOT Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=68474
in MMI / Médecine et Maladies Infectieuses > MARS (1996) . - 332 - 337[article] Borréliose de Lyme : spécificité du Western blot (expérience nantaise) [texte imprimé] . - 1996 . - 332 - 337.
in MMI / Médecine et Maladies Infectieuses > MARS (1996) . - 332 - 337
Mots-clés : BORRELIA BURGDORFERI ELISA WESTERN BLOT Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=68474 Exemplaires (1)
Cote Support Localisation Section Disponibilité Revue Revue Centre de Documentation HELHa Campus Montignies Réserve Consultable sur demande auprès des documentalistes
Exclu du prêtComparaison de méthodes pour la détection des anticorps IgM et IgG dirigés contre les borrelia dans le sérum et le LCR / Gaëlle Molle
Titre : Comparaison de méthodes pour la détection des anticorps IgM et IgG dirigés contre les borrelia dans le sérum et le LCR Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Gaëlle Molle, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie bactérie anticorps IgG IgM borrelia tique immunologie chimiluminescence ELISA western blot liaison XL ETI-MAX gemini Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ------------------------------------------------------------------------------- 11
Introduction générale ----------------------------------------------------------------------------------------- 13
Partie théorique ------------------------------------------------------------------------------------------------ 15
1. Introduction ----------------------------------------------------------------------------------------------- 15
2. La bactérie à l’origine de cette pathologie. --------------------------------------------------------- 15
3. L’hôte vecteur de la bactérie : la tique -------------------------------------------------------------- 16
3.1. La morphologie ------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.2. La fixation -------------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.3. Le milieu de vie ------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.4. La nutrition ------------------------------------------------------------------------------------------ 18
3.5. Le cycle de vie --------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.6. Les relations entre tiques, Borrelia et l’hôte ------------------------------------------------- 19
4. La pathologie ---------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.1. Généralités ------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.2. Le diagnostic ----------------------------------------------------------------------------------------- 23
4.3. Le(s) traitement(s) --------------------------------------------------------------------------------- 24
4.4. Pronostic --------------------------------------------------------------------------------------------- 24
4.5. Le risque d’infection ------------------------------------------------------------------------------- 25
4.6. Physiologie des anticorps ------------------------------------------------------------------------- 25
4.7. L’incidence de la pathologie et population concernée ------------------------------------ 26
5. Le dosage et les techniques utilisées ---------------------------------------------------------------- 27
5.1. Les différentes matrices de dosage ------------------------------------------------------------ 27
5.2. Le principe de base du dosage : une réaction antigène - anticorps -------------------- 27
5.3. Principe du dosage utilisant la chimiluminescence ----------------------------------------- 28
5.4. Principe de l’ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay) (figure n°10) ------------ 29
5.5. Principe du test de confirmation : le Western blot ----------------------------------------- 30
6. Objectifs et stratégies ----------------------------------------------------------------------------------- 31
Partie pratique -------------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1. Le LIAISON XL ---------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 33
1.2. Matériel ------------------------------------------------------------------------------------------------- 35
1.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 35
1.4. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 36
1.5. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 36
1.6. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 36
1.7. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 37
2. L’ETI-MAX -------------------------------------------------------------------------------------------------- 38
2.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 38
2.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 38
2.3. Réactifs -------------------------------------------------------------------------------------------------- 39
2.4. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.5. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.6. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 39
2.7. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 39
2.8. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 40
3. Le Gemini --------------------------------------------------------------------------------------------------- 41
3.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 41
3.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 41
3.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 41
3.4. Méthode, calibration et contrôles ----------------------------------------------------------------- 41
6
3.5. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 41
4. Tableau comparatif ----------------------------------------------------------------------------------- 43
5. Le Western blot ---------------------------------------------------------------------------------------- 45
6. Les échantillons : la sélection, la préparation et la conservation -------------------------- 47
7. Résultats et interprétations ---------------------------------------------------------------------------- 47
7.1. Résultats ---------------------------------------------------------------------------------------------- 47
7.1.1. Sérum IgM ------------------------------------------------------------------------------------- 48
7.1.2. Sérum IgG -------------------------------------------------------------------------------------- 50
7.1.3. Association sérum – LCR : analyse de la population (IgG/IgM) -------------------- 52
Conclusion générale et perspectives ---------------------------------------------------------------------- 53
Lexique ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- 54
Bibliographie ---------------------------------------------------------------------------------------------------- 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65682 Comparaison de méthodes pour la détection des anticorps IgM et IgG dirigés contre les borrelia dans le sérum et le LCR [TFE / Mémoire] / Gaëlle Molle, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie bactérie anticorps IgG IgM borrelia tique immunologie chimiluminescence ELISA western blot liaison XL ETI-MAX gemini Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ------------------------------------------------------------------------------- 11
Introduction générale ----------------------------------------------------------------------------------------- 13
Partie théorique ------------------------------------------------------------------------------------------------ 15
1. Introduction ----------------------------------------------------------------------------------------------- 15
2. La bactérie à l’origine de cette pathologie. --------------------------------------------------------- 15
3. L’hôte vecteur de la bactérie : la tique -------------------------------------------------------------- 16
3.1. La morphologie ------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.2. La fixation -------------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.3. Le milieu de vie ------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.4. La nutrition ------------------------------------------------------------------------------------------ 18
3.5. Le cycle de vie --------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.6. Les relations entre tiques, Borrelia et l’hôte ------------------------------------------------- 19
4. La pathologie ---------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.1. Généralités ------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.2. Le diagnostic ----------------------------------------------------------------------------------------- 23
4.3. Le(s) traitement(s) --------------------------------------------------------------------------------- 24
4.4. Pronostic --------------------------------------------------------------------------------------------- 24
4.5. Le risque d’infection ------------------------------------------------------------------------------- 25
4.6. Physiologie des anticorps ------------------------------------------------------------------------- 25
4.7. L’incidence de la pathologie et population concernée ------------------------------------ 26
5. Le dosage et les techniques utilisées ---------------------------------------------------------------- 27
5.1. Les différentes matrices de dosage ------------------------------------------------------------ 27
5.2. Le principe de base du dosage : une réaction antigène - anticorps -------------------- 27
5.3. Principe du dosage utilisant la chimiluminescence ----------------------------------------- 28
5.4. Principe de l’ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay) (figure n°10) ------------ 29
5.5. Principe du test de confirmation : le Western blot ----------------------------------------- 30
6. Objectifs et stratégies ----------------------------------------------------------------------------------- 31
Partie pratique -------------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1. Le LIAISON XL ---------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 33
1.2. Matériel ------------------------------------------------------------------------------------------------- 35
1.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 35
1.4. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 36
1.5. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 36
1.6. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 36
1.7. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 37
2. L’ETI-MAX -------------------------------------------------------------------------------------------------- 38
2.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 38
2.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 38
2.3. Réactifs -------------------------------------------------------------------------------------------------- 39
2.4. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.5. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.6. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 39
2.7. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 39
2.8. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 40
3. Le Gemini --------------------------------------------------------------------------------------------------- 41
3.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 41
3.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 41
3.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 41
3.4. Méthode, calibration et contrôles ----------------------------------------------------------------- 41
6
3.5. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 41
4. Tableau comparatif ----------------------------------------------------------------------------------- 43
5. Le Western blot ---------------------------------------------------------------------------------------- 45
6. Les échantillons : la sélection, la préparation et la conservation -------------------------- 47
7. Résultats et interprétations ---------------------------------------------------------------------------- 47
7.1. Résultats ---------------------------------------------------------------------------------------------- 47
7.1.1. Sérum IgM ------------------------------------------------------------------------------------- 48
7.1.2. Sérum IgG -------------------------------------------------------------------------------------- 50
7.1.3. Association sérum – LCR : analyse de la population (IgG/IgM) -------------------- 52
Conclusion générale et perspectives ---------------------------------------------------------------------- 53
Lexique ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- 54
Bibliographie ---------------------------------------------------------------------------------------------------- 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65682 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale / NATHAN DEWIT
Titre : Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : NATHAN DEWIT, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale UMONS service de Biologie Moléculaire muscle strié cellules satellites gène DUX4 gène DUX4c partenaire protéique cavéoles protéines cavéolaires myoblastes immortels congélation des cellules transfert inverse PCR électrophorèse sur gel d'agarose Western Blot électrophorèse sur gel de polyacrylamide blotting Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................................ 3
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
Contexte général .................................................................................................................................. 10
1. Le muscle strié squelettique .......................................................................................................... 10
1.1 Structure histologique ........................................................................................................ 10
1.2 Les cellules satellites ......................................................................................................... 11
2. La maladie ................................................................................................................................ 12
2.1 Généralités ......................................................................................................................... 12
2.2 Signes cliniques ................................................................................................................. 13
2.3 Aspects génétiques ............................................................................................................ 14
2.3.1 Le gène DUX4 ........................................................................................................... 15
2.3.2 Le gène DUX4c ......................................................................................................... 15
3. Les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ...................................................................... 16
3.1 Généralités ......................................................................................................................... 16
3.2 Les partenaires protéiques associés aux ARN messagers.................................................. 16
3.3 Les partenaires protéiques associés au cytosquelette ........................................................ 18
4. Les cavéoles ............................................................................................................................. 18
4.1 Les radeaux lipidiques ....................................................................................................... 18
4.2 Les cavéoles ...................................................................................................................... 19
4.3 Les protéines cavéolaires ................................................................................................... 20
Objectifs et stratégies .......................................................................................................................... 22
Matériel et méthodes ........................................................................................................................... 23
1. Culture cellulaire ........................................................................................................................... 23
1.1 Culture de myoblastes immortels in vitro.......................................................................... 24
1.2 Différenciation de myoblastes in vitro .............................................................................. 25
1.3 Congélation de cellules ...................................................................................................... 26
1.4 Induction iC2C12-DUX4 .................................................................................................. 27
1.5 Transfection inverse des C2C12 ........................................................................................ 28
1.6 Test mycoplasme ............................................................................................................... 29
1.6.1 La Polymerase Chain Reaction (PCR) ...................................................................... 30
1.6.2 Electrophorèse sur gel d’agarose ............................................................................... 32
2. Immunodétection par Western blot .......................................................................................... 32
2.1 Extraits protéiques ............................................................................................................. 33
2.1.1 Extraction nucléaire ................................................................................................... 33
2.1.2 Extraction des protéines ............................................................................................ 34
2.1.3 Préparation des échantillons ...................................................................................... 34
2.2 Dosage protéique BCA ...................................................................................................... 35
2.3 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide ......................................................................... 36
2.3.1 Préparation des gels ................................................................................................... 36
2.3.2 Electrophorèse ........................................................................................................... 37
2.4 Transfert sur membrane de nitrocellulose (Blotting)......................................................... 38
2.5 Immunodétection ............................................................................................................... 39
3. Immunofluorescence indirecte ................................................................................................. 42
4. In situ PLA ............................................................................................................................... 44
Résultats ............................................................................................................................................... 47
Partie 1: Validation des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c .................................................... 47
1. Co-immunofluorescence................................................................................................................ 47
1.1 ILF3 ................................................................................................................................... 47
1.1.1 Myoblastes ................................................................................................................. 47
1.1.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 48
1.2 NF90 .................................................................................................................................. 51
1.2.1 Myoblastes ................................................................................................................. 51
1.2.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 53
1.3 IGF2BP1 ............................................................................................................................ 55
1.3.1 Stade de prolifération ................................................................................................ 55
2. In situ PLA (Proximity Ligation Assay) .................................................................................. 55
2.1 Myoblastes sains (16 Ubic) sur-exprimant DUX4 ............................................................ 55
2.2 Myoblastes FSHD en différenciation (16 Abic) exprimant DUX4 de manière endogène 57
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 58
1. Induction des iC2C12-DUX4 (myoblastes) .................................................................................. 58
1.1 Immunofluorescence indirecte .......................................................................................... 58
1.1.1 Vérification des conditions d’induction de DUX4 .................................................... 58
1.1.2 La dérégulation des cavines ....................................................................................... 59
1.2 Immunodétection par Western blot ................................................................................... 60
1.2.1 Détection de DUX4 ................................................................................................... 60
1.2.2 Détection des cavines ................................................................................................ 61
2. Différenciation des iC2C12-DUX4 .......................................................................................... 63
3. C2C12 transfectées ................................................................................................................... 65
Discussions ........................................................................................................................................... 67
Partie 1 : les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ..................................................................... 67
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 69
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 72
Lexique ................................................................................................................................................. 72
Bibliographie ........................................................................................................................................ 74
Annexes ................................................................................................................................................ 78Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65670 Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale [TFE / Mémoire] / NATHAN DEWIT, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale UMONS service de Biologie Moléculaire muscle strié cellules satellites gène DUX4 gène DUX4c partenaire protéique cavéoles protéines cavéolaires myoblastes immortels congélation des cellules transfert inverse PCR électrophorèse sur gel d'agarose Western Blot électrophorèse sur gel de polyacrylamide blotting Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................................ 3
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
Contexte général .................................................................................................................................. 10
1. Le muscle strié squelettique .......................................................................................................... 10
1.1 Structure histologique ........................................................................................................ 10
1.2 Les cellules satellites ......................................................................................................... 11
2. La maladie ................................................................................................................................ 12
2.1 Généralités ......................................................................................................................... 12
2.2 Signes cliniques ................................................................................................................. 13
2.3 Aspects génétiques ............................................................................................................ 14
2.3.1 Le gène DUX4 ........................................................................................................... 15
2.3.2 Le gène DUX4c ......................................................................................................... 15
3. Les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ...................................................................... 16
3.1 Généralités ......................................................................................................................... 16
3.2 Les partenaires protéiques associés aux ARN messagers.................................................. 16
3.3 Les partenaires protéiques associés au cytosquelette ........................................................ 18
4. Les cavéoles ............................................................................................................................. 18
4.1 Les radeaux lipidiques ....................................................................................................... 18
4.2 Les cavéoles ...................................................................................................................... 19
4.3 Les protéines cavéolaires ................................................................................................... 20
Objectifs et stratégies .......................................................................................................................... 22
Matériel et méthodes ........................................................................................................................... 23
1. Culture cellulaire ........................................................................................................................... 23
1.1 Culture de myoblastes immortels in vitro.......................................................................... 24
1.2 Différenciation de myoblastes in vitro .............................................................................. 25
1.3 Congélation de cellules ...................................................................................................... 26
1.4 Induction iC2C12-DUX4 .................................................................................................. 27
1.5 Transfection inverse des C2C12 ........................................................................................ 28
1.6 Test mycoplasme ............................................................................................................... 29
1.6.1 La Polymerase Chain Reaction (PCR) ...................................................................... 30
1.6.2 Electrophorèse sur gel d’agarose ............................................................................... 32
2. Immunodétection par Western blot .......................................................................................... 32
2.1 Extraits protéiques ............................................................................................................. 33
2.1.1 Extraction nucléaire ................................................................................................... 33
2.1.2 Extraction des protéines ............................................................................................ 34
2.1.3 Préparation des échantillons ...................................................................................... 34
2.2 Dosage protéique BCA ...................................................................................................... 35
2.3 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide ......................................................................... 36
2.3.1 Préparation des gels ................................................................................................... 36
2.3.2 Electrophorèse ........................................................................................................... 37
2.4 Transfert sur membrane de nitrocellulose (Blotting)......................................................... 38
2.5 Immunodétection ............................................................................................................... 39
3. Immunofluorescence indirecte ................................................................................................. 42
4. In situ PLA ............................................................................................................................... 44
Résultats ............................................................................................................................................... 47
Partie 1: Validation des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c .................................................... 47
1. Co-immunofluorescence................................................................................................................ 47
1.1 ILF3 ................................................................................................................................... 47
1.1.1 Myoblastes ................................................................................................................. 47
1.1.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 48
1.2 NF90 .................................................................................................................................. 51
1.2.1 Myoblastes ................................................................................................................. 51
1.2.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 53
1.3 IGF2BP1 ............................................................................................................................ 55
1.3.1 Stade de prolifération ................................................................................................ 55
2. In situ PLA (Proximity Ligation Assay) .................................................................................. 55
2.1 Myoblastes sains (16 Ubic) sur-exprimant DUX4 ............................................................ 55
2.2 Myoblastes FSHD en différenciation (16 Abic) exprimant DUX4 de manière endogène 57
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 58
1. Induction des iC2C12-DUX4 (myoblastes) .................................................................................. 58
1.1 Immunofluorescence indirecte .......................................................................................... 58
1.1.1 Vérification des conditions d’induction de DUX4 .................................................... 58
1.1.2 La dérégulation des cavines ....................................................................................... 59
1.2 Immunodétection par Western blot ................................................................................... 60
1.2.1 Détection de DUX4 ................................................................................................... 60
1.2.2 Détection des cavines ................................................................................................ 61
2. Différenciation des iC2C12-DUX4 .......................................................................................... 63
3. C2C12 transfectées ................................................................................................................... 65
Discussions ........................................................................................................................................... 67
Partie 1 : les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ..................................................................... 67
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 69
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 72
Lexique ................................................................................................................................................. 72
Bibliographie ........................................................................................................................................ 74
Annexes ................................................................................................................................................ 78Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65670 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. / SABRINA DELMOITIE
Titre : Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : SABRINA DELMOITIE, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale Unamur URBM brucella abortus zoonose réplication ADN cycle cellulaire protéine PicC escherichia coli DH10B escherichia coli S-17-1 brucella abortus 544 plasmides levures PCR Digestion ADN ligation transformation par choc thermique isolation ADN plasmidique conjugaison induction à l'IPTG marquage au TRSE western blot purification de fragment Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................... 3
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 6
Introduction ................................................................................................................................ 7
Contexte général ....................................................................................................................... 9
1. La zoonose causée par Brucella abortus............................................................................. 9
1.1 Transmission ................................................................................................................. 9
1.1.1 Chez les animaux ................................................................................................... 9
1.1.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 10
1.2 Pathologie ................................................................................................................... 10
1.2.1 Chez les animaux ................................................................................................. 10
1.2.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 11
2. Trafic intracellulaire ......................................................................................................... 12
3. Cycle cellulaire ................................................................................................................. 13
3.1 Généralités .................................................................................................................. 13
3.2 Brucella abortus et sa croissance unipolaire particulière ........................................... 14
3.3 Réplication de l’ADN et division cellulaire de Brucella abortus ............................... 16
3.4 Contrôle du cycle cellulaire et l’intrigue de la protéine PicC ..................................... 17
Objectifs et stratégies ............................................................................................................. 20
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 23
1. Matériel ............................................................................................................................. 23
1.1 Souches de bactéries ................................................................................................... 23
1.1.1 Escherichia coli DH10B ...................................................................................... 23
1.1.2 Escherichia coli S-17-1 ........................................................................................ 23
1.1.3 Brucella abortus 544 ............................................................................................ 24
1.2 Plasmides .................................................................................................................... 24
1.3 Souches de levures ...................................................................................................... 24
1.3.1 Saccharomyces cerevisiae MaV103 ..................................................................... 24
1.3.2 Saccharomyces cerevisiae MaV203 ..................................................................... 25
2. Méthodes .......................................................................................................................... 25
2.1 Polymerase chain reaction (PCR) ............................................................................... 25
2.2 Digestion de l’ADN .................................................................................................... 27
2.3 Ligation ....................................................................................................................... 27
2.4 Transformation par choc thermique ............................................................................ 28
2.5 Isolation de l’ADN plasmidique (miniprep) ............................................................... 29
2.6 Conjugaison ................................................................................................................ 29
2.7 Induction à l’IPTG ...................................................................................................... 30
2.8 Marquage au TRSE ..................................................................................................... 30
2.9 Western Blot ............................................................................................................... 31
2.10 Test double hybride en levure ................................................................................... 32
2.11 Trousse de purification de fragments d’ADN ........................................................... 34
Résultats .................................................................................................................................. 35
1. Caractérisation des anticorps His6-PicC ........................................................................... 35
2. Analyse des souches surexprimant la protéine PicC ........................................................ 39
2.1 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBRI-picC ........................ 39
2.2 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBR-1-picC ...................... 44
3. Recherche des nouveaux partenaires protéiques de PicC ................................................. 46
Discussions .............................................................................................................................. 51
Conclusion et perspectives ..................................................................................................... 55
Lexique .................................................................................................................................... 57
Bibliographie ........................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65668 Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. [TFE / Mémoire] / SABRINA DELMOITIE, . - 2016.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale Unamur URBM brucella abortus zoonose réplication ADN cycle cellulaire protéine PicC escherichia coli DH10B escherichia coli S-17-1 brucella abortus 544 plasmides levures PCR Digestion ADN ligation transformation par choc thermique isolation ADN plasmidique conjugaison induction à l'IPTG marquage au TRSE western blot purification de fragment Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................... 3
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 6
Introduction ................................................................................................................................ 7
Contexte général ....................................................................................................................... 9
1. La zoonose causée par Brucella abortus............................................................................. 9
1.1 Transmission ................................................................................................................. 9
1.1.1 Chez les animaux ................................................................................................... 9
1.1.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 10
1.2 Pathologie ................................................................................................................... 10
1.2.1 Chez les animaux ................................................................................................. 10
1.2.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 11
2. Trafic intracellulaire ......................................................................................................... 12
3. Cycle cellulaire ................................................................................................................. 13
3.1 Généralités .................................................................................................................. 13
3.2 Brucella abortus et sa croissance unipolaire particulière ........................................... 14
3.3 Réplication de l’ADN et division cellulaire de Brucella abortus ............................... 16
3.4 Contrôle du cycle cellulaire et l’intrigue de la protéine PicC ..................................... 17
Objectifs et stratégies ............................................................................................................. 20
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 23
1. Matériel ............................................................................................................................. 23
1.1 Souches de bactéries ................................................................................................... 23
1.1.1 Escherichia coli DH10B ...................................................................................... 23
1.1.2 Escherichia coli S-17-1 ........................................................................................ 23
1.1.3 Brucella abortus 544 ............................................................................................ 24
1.2 Plasmides .................................................................................................................... 24
1.3 Souches de levures ...................................................................................................... 24
1.3.1 Saccharomyces cerevisiae MaV103 ..................................................................... 24
1.3.2 Saccharomyces cerevisiae MaV203 ..................................................................... 25
2. Méthodes .......................................................................................................................... 25
2.1 Polymerase chain reaction (PCR) ............................................................................... 25
2.2 Digestion de l’ADN .................................................................................................... 27
2.3 Ligation ....................................................................................................................... 27
2.4 Transformation par choc thermique ............................................................................ 28
2.5 Isolation de l’ADN plasmidique (miniprep) ............................................................... 29
2.6 Conjugaison ................................................................................................................ 29
2.7 Induction à l’IPTG ...................................................................................................... 30
2.8 Marquage au TRSE ..................................................................................................... 30
2.9 Western Blot ............................................................................................................... 31
2.10 Test double hybride en levure ................................................................................... 32
2.11 Trousse de purification de fragments d’ADN ........................................................... 34
Résultats .................................................................................................................................. 35
1. Caractérisation des anticorps His6-PicC ........................................................................... 35
2. Analyse des souches surexprimant la protéine PicC ........................................................ 39
2.1 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBRI-picC ........................ 39
2.2 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBR-1-picC ...................... 44
3. Recherche des nouveaux partenaires protéiques de PicC ................................................. 46
Discussions .............................................................................................................................. 51
Conclusion et perspectives ..................................................................................................... 55
Lexique .................................................................................................................................... 57
Bibliographie ........................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65668 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Analyse d'une technique de dot-blot pour la détection de trois autoanticorps (anti-Jo-1 , anti-M-2 , antiribosomes) . Comparaison avec les techniques de référence in Annales de Biologie Clinique, 9 (1995)
[article]
Titre : Analyse d'une technique de dot-blot pour la détection de trois autoanticorps (anti-Jo-1 , anti-M-2 , antiribosomes) . Comparaison avec les techniques de référence Type de document : texte imprimé Année de publication : 1995 Article en page(s) : 487 - 490 Mots-clés : AUTOANTICORPS DOT BLOT IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE IFI IMMUNODIFFUSION DOUBLE IDD WESTERN BLOT WB Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=68416
in Annales de Biologie Clinique > 9 (1995) . - 487 - 490[article] Analyse d'une technique de dot-blot pour la détection de trois autoanticorps (anti-Jo-1 , anti-M-2 , antiribosomes) . Comparaison avec les techniques de référence [texte imprimé] . - 1995 . - 487 - 490.
in Annales de Biologie Clinique > 9 (1995) . - 487 - 490
Mots-clés : AUTOANTICORPS DOT BLOT IMMUNOFLUORESCENCE INDIRECTE IFI IMMUNODIFFUSION DOUBLE IDD WESTERN BLOT WB Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=68416 Exemplaires (1)
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