Centre de Documentation Campus Montignies
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Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. / SABRINA DELMOITIE
Titre : Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : SABRINA DELMOITIE, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale Unamur URBM brucella abortus zoonose réplication ADN cycle cellulaire protéine PicC escherichia coli DH10B escherichia coli S-17-1 brucella abortus 544 plasmides levures PCR Digestion ADN ligation transformation par choc thermique isolation ADN plasmidique conjugaison induction à l'IPTG marquage au TRSE western blot purification de fragment Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................... 3
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 6
Introduction ................................................................................................................................ 7
Contexte général ....................................................................................................................... 9
1. La zoonose causée par Brucella abortus............................................................................. 9
1.1 Transmission ................................................................................................................. 9
1.1.1 Chez les animaux ................................................................................................... 9
1.1.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 10
1.2 Pathologie ................................................................................................................... 10
1.2.1 Chez les animaux ................................................................................................. 10
1.2.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 11
2. Trafic intracellulaire ......................................................................................................... 12
3. Cycle cellulaire ................................................................................................................. 13
3.1 Généralités .................................................................................................................. 13
3.2 Brucella abortus et sa croissance unipolaire particulière ........................................... 14
3.3 Réplication de l’ADN et division cellulaire de Brucella abortus ............................... 16
3.4 Contrôle du cycle cellulaire et l’intrigue de la protéine PicC ..................................... 17
Objectifs et stratégies ............................................................................................................. 20
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 23
1. Matériel ............................................................................................................................. 23
1.1 Souches de bactéries ................................................................................................... 23
1.1.1 Escherichia coli DH10B ...................................................................................... 23
1.1.2 Escherichia coli S-17-1 ........................................................................................ 23
1.1.3 Brucella abortus 544 ............................................................................................ 24
1.2 Plasmides .................................................................................................................... 24
1.3 Souches de levures ...................................................................................................... 24
1.3.1 Saccharomyces cerevisiae MaV103 ..................................................................... 24
1.3.2 Saccharomyces cerevisiae MaV203 ..................................................................... 25
2. Méthodes .......................................................................................................................... 25
2.1 Polymerase chain reaction (PCR) ............................................................................... 25
2.2 Digestion de l’ADN .................................................................................................... 27
2.3 Ligation ....................................................................................................................... 27
2.4 Transformation par choc thermique ............................................................................ 28
2.5 Isolation de l’ADN plasmidique (miniprep) ............................................................... 29
2.6 Conjugaison ................................................................................................................ 29
2.7 Induction à l’IPTG ...................................................................................................... 30
2.8 Marquage au TRSE ..................................................................................................... 30
2.9 Western Blot ............................................................................................................... 31
2.10 Test double hybride en levure ................................................................................... 32
2.11 Trousse de purification de fragments d’ADN ........................................................... 34
Résultats .................................................................................................................................. 35
1. Caractérisation des anticorps His6-PicC ........................................................................... 35
2. Analyse des souches surexprimant la protéine PicC ........................................................ 39
2.1 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBRI-picC ........................ 39
2.2 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBR-1-picC ...................... 44
3. Recherche des nouveaux partenaires protéiques de PicC ................................................. 46
Discussions .............................................................................................................................. 51
Conclusion et perspectives ..................................................................................................... 55
Lexique .................................................................................................................................... 57
Bibliographie ........................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65668 Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. [TFE / Mémoire] / SABRINA DELMOITIE, . - 2016.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale Unamur URBM brucella abortus zoonose réplication ADN cycle cellulaire protéine PicC escherichia coli DH10B escherichia coli S-17-1 brucella abortus 544 plasmides levures PCR Digestion ADN ligation transformation par choc thermique isolation ADN plasmidique conjugaison induction à l'IPTG marquage au TRSE western blot purification de fragment Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................... 3
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 6
Introduction ................................................................................................................................ 7
Contexte général ....................................................................................................................... 9
1. La zoonose causée par Brucella abortus............................................................................. 9
1.1 Transmission ................................................................................................................. 9
1.1.1 Chez les animaux ................................................................................................... 9
1.1.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 10
1.2 Pathologie ................................................................................................................... 10
1.2.1 Chez les animaux ................................................................................................. 10
1.2.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 11
2. Trafic intracellulaire ......................................................................................................... 12
3. Cycle cellulaire ................................................................................................................. 13
3.1 Généralités .................................................................................................................. 13
3.2 Brucella abortus et sa croissance unipolaire particulière ........................................... 14
3.3 Réplication de l’ADN et division cellulaire de Brucella abortus ............................... 16
3.4 Contrôle du cycle cellulaire et l’intrigue de la protéine PicC ..................................... 17
Objectifs et stratégies ............................................................................................................. 20
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 23
1. Matériel ............................................................................................................................. 23
1.1 Souches de bactéries ................................................................................................... 23
1.1.1 Escherichia coli DH10B ...................................................................................... 23
1.1.2 Escherichia coli S-17-1 ........................................................................................ 23
1.1.3 Brucella abortus 544 ............................................................................................ 24
1.2 Plasmides .................................................................................................................... 24
1.3 Souches de levures ...................................................................................................... 24
1.3.1 Saccharomyces cerevisiae MaV103 ..................................................................... 24
1.3.2 Saccharomyces cerevisiae MaV203 ..................................................................... 25
2. Méthodes .......................................................................................................................... 25
2.1 Polymerase chain reaction (PCR) ............................................................................... 25
2.2 Digestion de l’ADN .................................................................................................... 27
2.3 Ligation ....................................................................................................................... 27
2.4 Transformation par choc thermique ............................................................................ 28
2.5 Isolation de l’ADN plasmidique (miniprep) ............................................................... 29
2.6 Conjugaison ................................................................................................................ 29
2.7 Induction à l’IPTG ...................................................................................................... 30
2.8 Marquage au TRSE ..................................................................................................... 30
2.9 Western Blot ............................................................................................................... 31
2.10 Test double hybride en levure ................................................................................... 32
2.11 Trousse de purification de fragments d’ADN ........................................................... 34
Résultats .................................................................................................................................. 35
1. Caractérisation des anticorps His6-PicC ........................................................................... 35
2. Analyse des souches surexprimant la protéine PicC ........................................................ 39
2.1 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBRI-picC ........................ 39
2.2 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBR-1-picC ...................... 44
3. Recherche des nouveaux partenaires protéiques de PicC ................................................. 46
Discussions .............................................................................................................................. 51
Conclusion et perspectives ..................................................................................................... 55
Lexique .................................................................................................................................... 57
Bibliographie ........................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65668 Exemplaires
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