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3 résultat(s) recherche sur le mot-clé 'électrophorèse sur gel d'agarose'
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Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV / Virginie Coorens
Titre : Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Virginie Coorens, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664 Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV [TFE / Mémoire] / Virginie Coorens, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale / NATHAN DEWIT
Titre : Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : NATHAN DEWIT, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale UMONS service de Biologie Moléculaire muscle strié cellules satellites gène DUX4 gène DUX4c partenaire protéique cavéoles protéines cavéolaires myoblastes immortels congélation des cellules transfert inverse PCR électrophorèse sur gel d'agarose Western Blot électrophorèse sur gel de polyacrylamide blotting Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................................ 3
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
Contexte général .................................................................................................................................. 10
1. Le muscle strié squelettique .......................................................................................................... 10
1.1 Structure histologique ........................................................................................................ 10
1.2 Les cellules satellites ......................................................................................................... 11
2. La maladie ................................................................................................................................ 12
2.1 Généralités ......................................................................................................................... 12
2.2 Signes cliniques ................................................................................................................. 13
2.3 Aspects génétiques ............................................................................................................ 14
2.3.1 Le gène DUX4 ........................................................................................................... 15
2.3.2 Le gène DUX4c ......................................................................................................... 15
3. Les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ...................................................................... 16
3.1 Généralités ......................................................................................................................... 16
3.2 Les partenaires protéiques associés aux ARN messagers.................................................. 16
3.3 Les partenaires protéiques associés au cytosquelette ........................................................ 18
4. Les cavéoles ............................................................................................................................. 18
4.1 Les radeaux lipidiques ....................................................................................................... 18
4.2 Les cavéoles ...................................................................................................................... 19
4.3 Les protéines cavéolaires ................................................................................................... 20
Objectifs et stratégies .......................................................................................................................... 22
Matériel et méthodes ........................................................................................................................... 23
1. Culture cellulaire ........................................................................................................................... 23
1.1 Culture de myoblastes immortels in vitro.......................................................................... 24
1.2 Différenciation de myoblastes in vitro .............................................................................. 25
1.3 Congélation de cellules ...................................................................................................... 26
1.4 Induction iC2C12-DUX4 .................................................................................................. 27
1.5 Transfection inverse des C2C12 ........................................................................................ 28
1.6 Test mycoplasme ............................................................................................................... 29
1.6.1 La Polymerase Chain Reaction (PCR) ...................................................................... 30
1.6.2 Electrophorèse sur gel d’agarose ............................................................................... 32
2. Immunodétection par Western blot .......................................................................................... 32
2.1 Extraits protéiques ............................................................................................................. 33
2.1.1 Extraction nucléaire ................................................................................................... 33
2.1.2 Extraction des protéines ............................................................................................ 34
2.1.3 Préparation des échantillons ...................................................................................... 34
2.2 Dosage protéique BCA ...................................................................................................... 35
2.3 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide ......................................................................... 36
2.3.1 Préparation des gels ................................................................................................... 36
2.3.2 Electrophorèse ........................................................................................................... 37
2.4 Transfert sur membrane de nitrocellulose (Blotting)......................................................... 38
2.5 Immunodétection ............................................................................................................... 39
3. Immunofluorescence indirecte ................................................................................................. 42
4. In situ PLA ............................................................................................................................... 44
Résultats ............................................................................................................................................... 47
Partie 1: Validation des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c .................................................... 47
1. Co-immunofluorescence................................................................................................................ 47
1.1 ILF3 ................................................................................................................................... 47
1.1.1 Myoblastes ................................................................................................................. 47
1.1.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 48
1.2 NF90 .................................................................................................................................. 51
1.2.1 Myoblastes ................................................................................................................. 51
1.2.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 53
1.3 IGF2BP1 ............................................................................................................................ 55
1.3.1 Stade de prolifération ................................................................................................ 55
2. In situ PLA (Proximity Ligation Assay) .................................................................................. 55
2.1 Myoblastes sains (16 Ubic) sur-exprimant DUX4 ............................................................ 55
2.2 Myoblastes FSHD en différenciation (16 Abic) exprimant DUX4 de manière endogène 57
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 58
1. Induction des iC2C12-DUX4 (myoblastes) .................................................................................. 58
1.1 Immunofluorescence indirecte .......................................................................................... 58
1.1.1 Vérification des conditions d’induction de DUX4 .................................................... 58
1.1.2 La dérégulation des cavines ....................................................................................... 59
1.2 Immunodétection par Western blot ................................................................................... 60
1.2.1 Détection de DUX4 ................................................................................................... 60
1.2.2 Détection des cavines ................................................................................................ 61
2. Différenciation des iC2C12-DUX4 .......................................................................................... 63
3. C2C12 transfectées ................................................................................................................... 65
Discussions ........................................................................................................................................... 67
Partie 1 : les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ..................................................................... 67
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 69
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 72
Lexique ................................................................................................................................................. 72
Bibliographie ........................................................................................................................................ 74
Annexes ................................................................................................................................................ 78Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65670 Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale [TFE / Mémoire] / NATHAN DEWIT, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale UMONS service de Biologie Moléculaire muscle strié cellules satellites gène DUX4 gène DUX4c partenaire protéique cavéoles protéines cavéolaires myoblastes immortels congélation des cellules transfert inverse PCR électrophorèse sur gel d'agarose Western Blot électrophorèse sur gel de polyacrylamide blotting Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................................ 3
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
Contexte général .................................................................................................................................. 10
1. Le muscle strié squelettique .......................................................................................................... 10
1.1 Structure histologique ........................................................................................................ 10
1.2 Les cellules satellites ......................................................................................................... 11
2. La maladie ................................................................................................................................ 12
2.1 Généralités ......................................................................................................................... 12
2.2 Signes cliniques ................................................................................................................. 13
2.3 Aspects génétiques ............................................................................................................ 14
2.3.1 Le gène DUX4 ........................................................................................................... 15
2.3.2 Le gène DUX4c ......................................................................................................... 15
3. Les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ...................................................................... 16
3.1 Généralités ......................................................................................................................... 16
3.2 Les partenaires protéiques associés aux ARN messagers.................................................. 16
3.3 Les partenaires protéiques associés au cytosquelette ........................................................ 18
4. Les cavéoles ............................................................................................................................. 18
4.1 Les radeaux lipidiques ....................................................................................................... 18
4.2 Les cavéoles ...................................................................................................................... 19
4.3 Les protéines cavéolaires ................................................................................................... 20
Objectifs et stratégies .......................................................................................................................... 22
Matériel et méthodes ........................................................................................................................... 23
1. Culture cellulaire ........................................................................................................................... 23
1.1 Culture de myoblastes immortels in vitro.......................................................................... 24
1.2 Différenciation de myoblastes in vitro .............................................................................. 25
1.3 Congélation de cellules ...................................................................................................... 26
1.4 Induction iC2C12-DUX4 .................................................................................................. 27
1.5 Transfection inverse des C2C12 ........................................................................................ 28
1.6 Test mycoplasme ............................................................................................................... 29
1.6.1 La Polymerase Chain Reaction (PCR) ...................................................................... 30
1.6.2 Electrophorèse sur gel d’agarose ............................................................................... 32
2. Immunodétection par Western blot .......................................................................................... 32
2.1 Extraits protéiques ............................................................................................................. 33
2.1.1 Extraction nucléaire ................................................................................................... 33
2.1.2 Extraction des protéines ............................................................................................ 34
2.1.3 Préparation des échantillons ...................................................................................... 34
2.2 Dosage protéique BCA ...................................................................................................... 35
2.3 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide ......................................................................... 36
2.3.1 Préparation des gels ................................................................................................... 36
2.3.2 Electrophorèse ........................................................................................................... 37
2.4 Transfert sur membrane de nitrocellulose (Blotting)......................................................... 38
2.5 Immunodétection ............................................................................................................... 39
3. Immunofluorescence indirecte ................................................................................................. 42
4. In situ PLA ............................................................................................................................... 44
Résultats ............................................................................................................................................... 47
Partie 1: Validation des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c .................................................... 47
1. Co-immunofluorescence................................................................................................................ 47
1.1 ILF3 ................................................................................................................................... 47
1.1.1 Myoblastes ................................................................................................................. 47
1.1.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 48
1.2 NF90 .................................................................................................................................. 51
1.2.1 Myoblastes ................................................................................................................. 51
1.2.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 53
1.3 IGF2BP1 ............................................................................................................................ 55
1.3.1 Stade de prolifération ................................................................................................ 55
2. In situ PLA (Proximity Ligation Assay) .................................................................................. 55
2.1 Myoblastes sains (16 Ubic) sur-exprimant DUX4 ............................................................ 55
2.2 Myoblastes FSHD en différenciation (16 Abic) exprimant DUX4 de manière endogène 57
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 58
1. Induction des iC2C12-DUX4 (myoblastes) .................................................................................. 58
1.1 Immunofluorescence indirecte .......................................................................................... 58
1.1.1 Vérification des conditions d’induction de DUX4 .................................................... 58
1.1.2 La dérégulation des cavines ....................................................................................... 59
1.2 Immunodétection par Western blot ................................................................................... 60
1.2.1 Détection de DUX4 ................................................................................................... 60
1.2.2 Détection des cavines ................................................................................................ 61
2. Différenciation des iC2C12-DUX4 .......................................................................................... 63
3. C2C12 transfectées ................................................................................................................... 65
Discussions ........................................................................................................................................... 67
Partie 1 : les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ..................................................................... 67
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 69
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 72
Lexique ................................................................................................................................................. 72
Bibliographie ........................................................................................................................................ 74
Annexes ................................................................................................................................................ 78Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65670 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire L'électrophorèse des protéines sériques en biologie médicale : interférences et facteurs confonants / Colette Chapuis Cellier in RFL : Revue Francophone des Laboratoires, 499 (février 2018)
[article]
Titre : L'électrophorèse des protéines sériques en biologie médicale : interférences et facteurs confonants Type de document : texte imprimé Auteurs : Colette Chapuis Cellier Année de publication : 2018 Article en page(s) : p. 47-58 Langues : Français (fre) Mots-clés : électrophorèse capillaire électrophorèse protéines sériques électrophorèse sur gel d'agarose facteurs confondants interférences analytiques Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=76817
in RFL : Revue Francophone des Laboratoires > 499 (février 2018) . - p. 47-58[article] L'électrophorèse des protéines sériques en biologie médicale : interférences et facteurs confonants [texte imprimé] / Colette Chapuis Cellier . - 2018 . - p. 47-58.
Langues : Français (fre)
in RFL : Revue Francophone des Laboratoires > 499 (février 2018) . - p. 47-58Réservation
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