Centre de Documentation Campus Montignies
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Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
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Mise en place d’une technique de PCR en temps réel pour le génotypage des sous-groupes rhésus / APPOLINE ETIENNE
Titre : Mise en place d’une technique de PCR en temps réel pour le génotypage des sous-groupes rhésus Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : APPOLINE ETIENNE, Auteur Année de publication : 2013 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : BIOLOGIE MÉDICALE PCR:SSP,SSO,EC GENOTYPAGE SYSTEME RHESUS PHENOTYPAGE EXTRACTION D'ADN Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65253 Mise en place d’une technique de PCR en temps réel pour le génotypage des sous-groupes rhésus [TFE / Mémoire] / APPOLINE ETIENNE, Auteur . - 2013.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : BIOLOGIE MÉDICALE PCR:SSP,SSO,EC GENOTYPAGE SYSTEME RHESUS PHENOTYPAGE EXTRACTION D'ADN Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65253 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point et comparaison de méthodes pour le dosage du radium 226 dans les eaux de distribution. / BRUYR Julie
Titre : Mise au point et comparaison de méthodes pour le dosage du radium 226 dans les eaux de distribution. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : BRUYR Julie, Année de publication : 2008 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Mots-clés : EAUX DISTRIBUTION DOSAGE RADIUM 226 METHODE : CELLULE LUCAS : RAD DISKS / EICHROM SCINTLLATION : SOLIDE / LIQUIDE SPECTROMETRIE Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64420 Mise au point et comparaison de méthodes pour le dosage du radium 226 dans les eaux de distribution. [TFE / Mémoire] / BRUYR Julie, . - 2008.
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Mots-clés : EAUX DISTRIBUTION DOSAGE RADIUM 226 METHODE : CELLULE LUCAS : RAD DISKS / EICHROM SCINTLLATION : SOLIDE / LIQUIDE SPECTROMETRIE Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64420 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point de la détection du mutant EGFRvIII par PCR quantitative (RT- qPCR) / Rabi ADAMOU YAROU
Titre : Mise au point de la détection du mutant EGFRvIII par PCR quantitative (RT- qPCR) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Rabi ADAMOU YAROU, Auteur ; Pascal Vannuffel, Directeur de la recherche Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale IPG Gosselies Cancer : dépistage Acides nucléiques : concept Mutations génétiques // cancer Gène EGFR Réaction de polymération en chaine PCR RT-PCR ARN : extraction, dosage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Résumé
Le cancer est en augmentation dans le monde. Etant en partie provoqué par des mutations génétiques, il est important d'analyser ces mutations afin de garantir un bon suivi et un meilleur traitement des patients. La biologie moléculaire joue un rôle primordial dans la recherche de mutations et de marqueurs moléculaires pour assurer le suivi thérapeutique des malades.
Nos expériences ont pour but de détecter la mutation EGFRvIII due à une délétion de l'exon2 à l'exon7 suivi d'un réarrangement entre l'exon 1 et 8 pouvant entre autres provoquer une tumeur dans le cerveau. Avant d'arriver à notre objectif, nous avons d'abord, testé différents kits d'extraction d'ARN à partir de tissus fixés et de RT-PCR. Suite à une comparaison de nos résultats, nous avons choisi la technique la plus sensible et plus robuste. Pour confirmer notre choix, nous avons dressé un dossier de validation au moyen de tests supplémentaires tels que la répétabilité et la reproductibilité. Suite à ces analyses, nous avons pu intégrer ces techniques dans notre recherche du variant EGFRvIII.
Après l'extraction d'ARN à partir des échantillons fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE), nous avons réalisé une reverse transcription RT-PCR. L'ADNc obtenu est amplifié par PCR quantitative grâce à un Light Cycler 480. Une mise au point a été effectuée afin de choisir les amorces spécifiques, le programme de qRT-PCR et la concentration d'ARN minimale nécessaire. A ce stade, l'analyse finale "EGFRvIII" permettait uniquement un résultat qualitatif. Des courbes d'étalonnage à partir de nombre de copies connues de fragments d'ADN ont été réalisées afin d'obtenir un résultat quantitatif.
La détection du variant EGFRvIII s'est effectuée sur des échantillons cliniques. Les résultats obtenus ont montré que six patients sur vint et un testés sont porteurs de la mutation EGFRvIII . Ce résultat a été confirmé par séquençage. Toutes les séquences positives étaient identiques et portaient une délétion de l'exon2 à l'exon7.
Nos résultats étant satisfaisant, cette analyse peut être utilisée en routine au laboratoire de l'IPG.
Grâce à l'émergence des techniques et des recherches en biologie moléculaire, il est possible de développer des tests spécifiques et de plus en plus sensibles afin d'assurer le diagnostic et le suivi de patients atteint de cancer. En parallèle à ce développement, la recherche se spécialise dans la mise au point de thérapies ciblées spécifiques à certaines mutations.
Note de contenu : Table de matière
Remerciements
Introduction ..............................................................................................................9
Partie théorique......................................................................................................10
1. Les acides nucléiques .........................................................................................10
1.1 Définition......................................................................................................10
1.2 Structure.......................................................................................................10
1.3 ADN...............................................................................................................11
1.4 ARN...............................................................................................................12
1.5 Le gène..........................................................................................................13
2. Les mutations génétiques...................................................................................14
2.1 Les mutations chromosomiques...................................................................15
2.2 Les mutations ponctuelles............................................................................16
3. Le gène EGFR.......................................................................................................18
4. Dossier de validation..........................................................................................20
4.1 La précision...................................................................................................20
4.2 L'exactitude...................................................................................................21
4.3 La limite de détection...................................................................................21
4.4 La sensibilité..................................................................................................21
4.5 La spécificité..................................................................................................21
4.6 L a robustesse...............................................................................................21
5. Extraction d'ARN.................................................................................................21
6. La PCR..................................................................................................................22
7. La RT-PCR.............................................................................................................24
8. PCR en temps réel ou Réal time PCR..................................................................25
8.1 SYBR Green...................................................................................................25
8.2 La sonde Taqman..........................................................................................27
9. Le séquençage.....................................................................................................28
9.1 Séquençage Sanger.......................................................................................28
9.2 Séquençage automatique.............................................................................29
Partie pratique.........................................................................................................30
1. Préparation des lames........................................................................................30
1.1 Principe.........................................................................................................30
1.2 Découpe des blocs en paraffine et étalement sur des lames.......................30
1.2.1 Matériels et réactifs.................................................................................30
1.2.2 Mode opératoire.....................................................................................30
2. Extraction d'ARN à partir de FFPE......................................................................32
2.1 Kit QIAGEN : miRNeasy FFPE.........................................................................32
2.1.1 Matériels et réactifs.................................................................................32
2.1.2 Mode opératoire.....................................................................................32
2.2 Kit Life technologies : RecoverAll Total nucleic acid isolation.......................34
2.1.1 Matériels et réactifs.................................................................................34
2.1.2 Mode opératoire.....................................................................................34
3. Dosage fluorimétrique d'ARN sur le lecteur Qubit 2.0......................................38
3.1 Matériels et réactifs......................................................................................38
3.2 Mode opératoire...........................................................................................39
4. La transcription inverse......................................................................................40
4.1 RT-PCR M-MLV..............................................................................................40
4.1.1 Matériels et réactifs.................................................................................40
4.1.2 Mode opératoire.....................................................................................40
4.2 Super Script Vilo............................................................................................41
4.2.1 Matériels et réactifs.................................................................................41
4.2.2 Mode opératoire.....................................................................................42
5. PCR......................................................................................................................43
5.1 Matériels et réactifs......................................................................................43
5.2 Mode opératoire...........................................................................................43
6. qPCR sur LightCycler 480....................................................................................45
6.1 Matériels et réactifs......................................................................................45
6.2 Mode opératoire...........................................................................................45
7. Electrophorèse sur gel d'agarose.......................................................................46
7.1 Matériels et réactifs......................................................................................46
7.2 Mode opératoire...........................................................................................47
8. Séquençage.........................................................................................................48
8.1 Les étapes du séquençage............................................................................48
8.1.1 Purification du produit PCR par chimie AMPure.....................................48
8.1.2 Séquençage..............................................................................................48
8.1.3 Purification des séquences par chimie CleanSEQ....................................48
8.1.4 Injection sur séquenceur ABi Prism 3730................................................49
Résultats et interprétations.................................................................................50
1. Comparaison de kits d'extraction et de RT-PCR.................................................50
1.1 Kit d'extraction : miRNeasy FFPE kit Vs RecoverAll Total nucleic Acid isolation..........................................................................................................................50
1.2 RT-PCR Super Script Vilo Vs RT-PCR M-MLV.................................................52
1.2.1 Résultats RT-M-MLV................................................................................53
1.2.2 Résultats RT Vilo......................................................................................53
1.3 Validation.....................................................................................................55
1.3.1 Précision : répétabilité et reproductibilité de l'extraction d'ARN............55
1.3.2 Précision : reproductibilité de la RT-PCR.................................................56
1.3.3 Répétabilité.............................................................................................57
2. EGFRvIII...............................................................................................................58
2.1 Mise au point de la PCR................................................................................59
2.1.1 Choix des primers....................................................................................59
2.1.2 Mise au point de la qPCR.........................................................................60
2.1.2.1 Concentration en primers..................................................................60
2.1.2.2 Choix de température........................................................................61
2.1.2.3 qPCR à 56°C .......................................................................................61
2.1.2.4 Test de nouveau primers inférieur à 100 pb......................................62
2.1.3 Courbes d'étalonnage pour analyse "EGFRvIII".......................................62
2.1.4 Limite de détection en fonction de la quantité en ARN dans la RT.........64
2.1.5 Test sur des échantillons cliniques..........................................................65
2.1.6 PCR multiplex...........................................................................................66
2.1.7 Confirmation des cas cliniques positifs par séquençage.........................67
2.1.8 Autres cas cliniques.................................................................................69
Conclusion.................................................................................................................70
Liste des figures.......................................................................................................71
Bibliographie............................................................................................................73
Annexe
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65421 Mise au point de la détection du mutant EGFRvIII par PCR quantitative (RT- qPCR) [TFE / Mémoire] / Rabi ADAMOU YAROU, Auteur ; Pascal Vannuffel, Directeur de la recherche . - 2015.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale IPG Gosselies Cancer : dépistage Acides nucléiques : concept Mutations génétiques // cancer Gène EGFR Réaction de polymération en chaine PCR RT-PCR ARN : extraction, dosage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Résumé
Le cancer est en augmentation dans le monde. Etant en partie provoqué par des mutations génétiques, il est important d'analyser ces mutations afin de garantir un bon suivi et un meilleur traitement des patients. La biologie moléculaire joue un rôle primordial dans la recherche de mutations et de marqueurs moléculaires pour assurer le suivi thérapeutique des malades.
Nos expériences ont pour but de détecter la mutation EGFRvIII due à une délétion de l'exon2 à l'exon7 suivi d'un réarrangement entre l'exon 1 et 8 pouvant entre autres provoquer une tumeur dans le cerveau. Avant d'arriver à notre objectif, nous avons d'abord, testé différents kits d'extraction d'ARN à partir de tissus fixés et de RT-PCR. Suite à une comparaison de nos résultats, nous avons choisi la technique la plus sensible et plus robuste. Pour confirmer notre choix, nous avons dressé un dossier de validation au moyen de tests supplémentaires tels que la répétabilité et la reproductibilité. Suite à ces analyses, nous avons pu intégrer ces techniques dans notre recherche du variant EGFRvIII.
Après l'extraction d'ARN à partir des échantillons fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE), nous avons réalisé une reverse transcription RT-PCR. L'ADNc obtenu est amplifié par PCR quantitative grâce à un Light Cycler 480. Une mise au point a été effectuée afin de choisir les amorces spécifiques, le programme de qRT-PCR et la concentration d'ARN minimale nécessaire. A ce stade, l'analyse finale "EGFRvIII" permettait uniquement un résultat qualitatif. Des courbes d'étalonnage à partir de nombre de copies connues de fragments d'ADN ont été réalisées afin d'obtenir un résultat quantitatif.
La détection du variant EGFRvIII s'est effectuée sur des échantillons cliniques. Les résultats obtenus ont montré que six patients sur vint et un testés sont porteurs de la mutation EGFRvIII . Ce résultat a été confirmé par séquençage. Toutes les séquences positives étaient identiques et portaient une délétion de l'exon2 à l'exon7.
Nos résultats étant satisfaisant, cette analyse peut être utilisée en routine au laboratoire de l'IPG.
Grâce à l'émergence des techniques et des recherches en biologie moléculaire, il est possible de développer des tests spécifiques et de plus en plus sensibles afin d'assurer le diagnostic et le suivi de patients atteint de cancer. En parallèle à ce développement, la recherche se spécialise dans la mise au point de thérapies ciblées spécifiques à certaines mutations.
Note de contenu : Table de matière
Remerciements
Introduction ..............................................................................................................9
Partie théorique......................................................................................................10
1. Les acides nucléiques .........................................................................................10
1.1 Définition......................................................................................................10
1.2 Structure.......................................................................................................10
1.3 ADN...............................................................................................................11
1.4 ARN...............................................................................................................12
1.5 Le gène..........................................................................................................13
2. Les mutations génétiques...................................................................................14
2.1 Les mutations chromosomiques...................................................................15
2.2 Les mutations ponctuelles............................................................................16
3. Le gène EGFR.......................................................................................................18
4. Dossier de validation..........................................................................................20
4.1 La précision...................................................................................................20
4.2 L'exactitude...................................................................................................21
4.3 La limite de détection...................................................................................21
4.4 La sensibilité..................................................................................................21
4.5 La spécificité..................................................................................................21
4.6 L a robustesse...............................................................................................21
5. Extraction d'ARN.................................................................................................21
6. La PCR..................................................................................................................22
7. La RT-PCR.............................................................................................................24
8. PCR en temps réel ou Réal time PCR..................................................................25
8.1 SYBR Green...................................................................................................25
8.2 La sonde Taqman..........................................................................................27
9. Le séquençage.....................................................................................................28
9.1 Séquençage Sanger.......................................................................................28
9.2 Séquençage automatique.............................................................................29
Partie pratique.........................................................................................................30
1. Préparation des lames........................................................................................30
1.1 Principe.........................................................................................................30
1.2 Découpe des blocs en paraffine et étalement sur des lames.......................30
1.2.1 Matériels et réactifs.................................................................................30
1.2.2 Mode opératoire.....................................................................................30
2. Extraction d'ARN à partir de FFPE......................................................................32
2.1 Kit QIAGEN : miRNeasy FFPE.........................................................................32
2.1.1 Matériels et réactifs.................................................................................32
2.1.2 Mode opératoire.....................................................................................32
2.2 Kit Life technologies : RecoverAll Total nucleic acid isolation.......................34
2.1.1 Matériels et réactifs.................................................................................34
2.1.2 Mode opératoire.....................................................................................34
3. Dosage fluorimétrique d'ARN sur le lecteur Qubit 2.0......................................38
3.1 Matériels et réactifs......................................................................................38
3.2 Mode opératoire...........................................................................................39
4. La transcription inverse......................................................................................40
4.1 RT-PCR M-MLV..............................................................................................40
4.1.1 Matériels et réactifs.................................................................................40
4.1.2 Mode opératoire.....................................................................................40
4.2 Super Script Vilo............................................................................................41
4.2.1 Matériels et réactifs.................................................................................41
4.2.2 Mode opératoire.....................................................................................42
5. PCR......................................................................................................................43
5.1 Matériels et réactifs......................................................................................43
5.2 Mode opératoire...........................................................................................43
6. qPCR sur LightCycler 480....................................................................................45
6.1 Matériels et réactifs......................................................................................45
6.2 Mode opératoire...........................................................................................45
7. Electrophorèse sur gel d'agarose.......................................................................46
7.1 Matériels et réactifs......................................................................................46
7.2 Mode opératoire...........................................................................................47
8. Séquençage.........................................................................................................48
8.1 Les étapes du séquençage............................................................................48
8.1.1 Purification du produit PCR par chimie AMPure.....................................48
8.1.2 Séquençage..............................................................................................48
8.1.3 Purification des séquences par chimie CleanSEQ....................................48
8.1.4 Injection sur séquenceur ABi Prism 3730................................................49
Résultats et interprétations.................................................................................50
1. Comparaison de kits d'extraction et de RT-PCR.................................................50
1.1 Kit d'extraction : miRNeasy FFPE kit Vs RecoverAll Total nucleic Acid isolation..........................................................................................................................50
1.2 RT-PCR Super Script Vilo Vs RT-PCR M-MLV.................................................52
1.2.1 Résultats RT-M-MLV................................................................................53
1.2.2 Résultats RT Vilo......................................................................................53
1.3 Validation.....................................................................................................55
1.3.1 Précision : répétabilité et reproductibilité de l'extraction d'ARN............55
1.3.2 Précision : reproductibilité de la RT-PCR.................................................56
1.3.3 Répétabilité.............................................................................................57
2. EGFRvIII...............................................................................................................58
2.1 Mise au point de la PCR................................................................................59
2.1.1 Choix des primers....................................................................................59
2.1.2 Mise au point de la qPCR.........................................................................60
2.1.2.1 Concentration en primers..................................................................60
2.1.2.2 Choix de température........................................................................61
2.1.2.3 qPCR à 56°C .......................................................................................61
2.1.2.4 Test de nouveau primers inférieur à 100 pb......................................62
2.1.3 Courbes d'étalonnage pour analyse "EGFRvIII".......................................62
2.1.4 Limite de détection en fonction de la quantité en ARN dans la RT.........64
2.1.5 Test sur des échantillons cliniques..........................................................65
2.1.6 PCR multiplex...........................................................................................66
2.1.7 Confirmation des cas cliniques positifs par séquençage.........................67
2.1.8 Autres cas cliniques.................................................................................69
Conclusion.................................................................................................................70
Liste des figures.......................................................................................................71
Bibliographie............................................................................................................73
Annexe
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65421 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point du dosage anti-bêta-2-glycoprotéine I IgG et IgM, réalisé sur le Phadia 250, pour le diagnostic du syndrome antiphospholipides (SAPL) / Melisa Esen
Titre : Mise au point du dosage anti-bêta-2-glycoprotéine I IgG et IgM, réalisé sur le Phadia 250, pour le diagnostic du syndrome antiphospholipides (SAPL) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Melisa Esen, Auteur ; Catherine Rollin, Directeur de la recherche Année de publication : 2018 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=66082 Mise au point du dosage anti-bêta-2-glycoprotéine I IgG et IgM, réalisé sur le Phadia 250, pour le diagnostic du syndrome antiphospholipides (SAPL) [TFE / Mémoire] / Melisa Esen, Auteur ; Catherine Rollin, Directeur de la recherche . - 2018.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=66082 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse / Quentin Dhesse
Titre : Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU UCL Namur Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100363 Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse [TFE / Mémoire] / Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : CHU UCL Namur Mont Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100363 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point du dosage de la nicotine et de ses métabolites sur HPLC et validation du dosage de la cotinine sur UPLC / Marie Antonnaux
PermalinkMise au point de la fluorimétrie différentielle à balayage sur l’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine en vue de réaliser un criblage d’inhibiteurs / DARLENE DE GROOTE
PermalinkMise au point de marquage de biomarqueurs de sénescence dans des cultures de fibroblastes humains. / ALEXIS MATHY
PermalinkMise au point d'une méthode analytique pour éliminer les interférences du daratumumab sur les tests pré-transfusionnels / Thibaut Corbisier
PermalinkMise au point d'une méthode chromatographique pour doser un mélange quaternaire utilisé en anesthésie et étudier sa stabilité physico-chimique / Océane Charles
PermalinkMise au point d’une méthode de confirmation des drogues urinaires par LC-MS/MS / Hermann Wouantou Djoumatchou
PermalinkMise au point d'une méthode diagnostique pour la détection et le typage des souches vaccinales et virulentes africaines du virus de la fièvre jaune (YFV) par RT-qPCR et pyroséquençage / Anthony Tulli
PermalinkMise au point d’une méthode de dosage du lévétiracétam et de la lamotrigine par UHPLC et détection de masse / Dan Do dinh
PermalinkMise au point d’une méthode de dosage des phospholipides par HPLC couplé à un détecteur ELS – application à des composés animaux / Najib Amazian
PermalinkMise au point d’une méthode pour l’analyse de divers pesticides dans des moustiquaires traitées et des supports muraux / MAXIME BURTON
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