Centre de Documentation Campus Montignies
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Titre : |
Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV |
Type de document : |
TFE / Mémoire |
Auteurs : |
Virginie Coorens, |
Année de publication : |
2016 |
Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
Langues : |
Français (fre) |
Mots-clés : |
Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73 |
Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=65664 |
Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV [TFE / Mémoire] / Virginie Coorens, . - 2016. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
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Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73 |
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|
Exemplaires
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Titre : |
Développement de techniques nécessaires à la transformation génétique du rotifère bdelloïde Adineta vaga |
Type de document : |
TFE / Mémoire |
Auteurs : |
LUDOVIC HERTER, Auteur |
Année de publication : |
2016 |
Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
Langues : |
Français (fre) |
Mots-clés : |
Biologie médicale Unité de Recherche en Biologie Environnementale et Evolutive URBE rotifères adineta vaga écologie souches plasmides additifs culture ADN ARN électrophorèse sur gel agarose purification ADN feeding transformation bactérienne transfection DAPI |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................ 11
Introduction générale ............................................................................................ 13
1. Contexte général ........................................................................................... 15
1.1 Les rotifères… ........................................................................................ 15
1.2 …un embranchement très diversifié ..................................................... 15
1.3 Notre rotifère bdelloïde modèle, Adineta vaga .................................... 17
1.3.1 Ecologie .............................................................................................. 17
1.3.2 Anatomie/physiologie ........................................................................ 17
1.3.3 Un organisme eutélique ..................................................................... 21
1.4 « Un Scandale de l’évolution» ............................................................... 21
1.5 De nombreux gènes étrangers .............................................................. 23
1.6 Un organisme extraordinairement résistant ......................................... 23
1.7 Les transferts horizontaux, source de variabilité ? ............................... 25
2. Objectifs et stratégies ................................................................................... 27
3. Matériel et méthodes ................................................................................... 29
3.1 Souches et plasmides ............................................................................ 29
3.1.1 Rotifère bdelloïde .............................................................................. 29
3.1.2 Souche bactérienne ........................................................................... 29
3.1.3 Plasmides ........................................................................................... 29
3.2 Milieux, tampons et solutions ............................................................... 30
3.2.1 Milieux de culture .............................................................................. 30
3.2.2 Additifs aux milieux de culture .......................................................... 30
3.2.3 Tampons et solutions ......................................................................... 31
3.3 Maintien des cultures de rotifères ........................................................ 31
3.3.1 Conditions de culture ......................................................................... 31
3.3.2 Récolte d’un grand nombre d’individus ............................................ 32
3.4 Techniques relatives aux acides nucléiques .......................................... 32
3.4.1 Techniques relatives à l’ADN ............................................................. 32
3.4.2 Techniques relatives à l’ARN .............................................................. 38
3.4.3 Electrophorèse sur gel d’agarose ...................................................... 39
3.4.4 Purification d’ADN sur gel d’agarose ................................................. 39
3.5 Techniques relatives à l’utilisation de bactéries ................................... 40
3.5.1 Feeding des rotifères aux bactéries fluorescentes ............................ 40
3.5.2 Transformation de bactéries.............................................................. 40
3.6 Transfection de A. vaga ........................................................................ 42
3.7 Dessiccation du rotifère bdelloïde A.vaga ............................................ 42
3.8 Microscopie ........................................................................................... 43
3.8.1 Technique de fixation ........................................................................ 43
3.8.2 Marquage au DAPI et montage au Mowiol ....................................... 43
4. Résultats et discussion ................................................................................. 45
4.1 Processus d’internalisation d’acides nucléiques ................................... 45
4.1.1 Synthèse des acides nucléiques marqués ......................................... 45
4.1.2 Transfection des acides nucléiques marqués chez A.vaga ................ 52
4.1.3 Nourrissage d’A.vaga aux bactéries fluorescentes : est-ce que la
localisation du signal est identique ? ...................................................................... 54
4.1.4 La dessiccation, origine probable des transferts horizontaux .......... 55
4.2 La fluorescence est-elle altérée par la fixation ? .................................. 58
4.2.1 Fixation au paraformaldéhyde .......................................................... 58
4.2.2 « Le monde est stone » ..................................................................... 59
4.2.3 Observation d’A.vaga in vivo ............................................................. 60
4.2.4 Transfection sur des oeufs, plus efficace ? ........................................ 60
4.3 Transgenèse transitoire ........................................................................ 61
4.3.1 Purification et validation des plasmides pCS2+ et pCS2+eGFP ......... 61
4.3.2 Construction du plasmide mCherry ................................................... 62
4.4 Etude de la résistance/sensibilité d’A.vaga aux antibiotiques ............. 68
Conclusion générale et perspectives ..................................................................... 73
Liste des illustrations ............................................................................................. 77
Lexique .................................................................................................................. 78
Bibliographie .......................................................................................................... 79
Annexes ................................................................................................................. 81
Résumé .................................................................................................................. 94 |
Permalink : |
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Développement de techniques nécessaires à la transformation génétique du rotifère bdelloïde Adineta vaga [TFE / Mémoire] / LUDOVIC HERTER, Auteur . - 2016. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
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Biologie médicale Unité de Recherche en Biologie Environnementale et Evolutive URBE rotifères adineta vaga écologie souches plasmides additifs culture ADN ARN électrophorèse sur gel agarose purification ADN feeding transformation bactérienne transfection DAPI |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................ 11
Introduction générale ............................................................................................ 13
1. Contexte général ........................................................................................... 15
1.1 Les rotifères… ........................................................................................ 15
1.2 …un embranchement très diversifié ..................................................... 15
1.3 Notre rotifère bdelloïde modèle, Adineta vaga .................................... 17
1.3.1 Ecologie .............................................................................................. 17
1.3.2 Anatomie/physiologie ........................................................................ 17
1.3.3 Un organisme eutélique ..................................................................... 21
1.4 « Un Scandale de l’évolution» ............................................................... 21
1.5 De nombreux gènes étrangers .............................................................. 23
1.6 Un organisme extraordinairement résistant ......................................... 23
1.7 Les transferts horizontaux, source de variabilité ? ............................... 25
2. Objectifs et stratégies ................................................................................... 27
3. Matériel et méthodes ................................................................................... 29
3.1 Souches et plasmides ............................................................................ 29
3.1.1 Rotifère bdelloïde .............................................................................. 29
3.1.2 Souche bactérienne ........................................................................... 29
3.1.3 Plasmides ........................................................................................... 29
3.2 Milieux, tampons et solutions ............................................................... 30
3.2.1 Milieux de culture .............................................................................. 30
3.2.2 Additifs aux milieux de culture .......................................................... 30
3.2.3 Tampons et solutions ......................................................................... 31
3.3 Maintien des cultures de rotifères ........................................................ 31
3.3.1 Conditions de culture ......................................................................... 31
3.3.2 Récolte d’un grand nombre d’individus ............................................ 32
3.4 Techniques relatives aux acides nucléiques .......................................... 32
3.4.1 Techniques relatives à l’ADN ............................................................. 32
3.4.2 Techniques relatives à l’ARN .............................................................. 38
3.4.3 Electrophorèse sur gel d’agarose ...................................................... 39
3.4.4 Purification d’ADN sur gel d’agarose ................................................. 39
3.5 Techniques relatives à l’utilisation de bactéries ................................... 40
3.5.1 Feeding des rotifères aux bactéries fluorescentes ............................ 40
3.5.2 Transformation de bactéries.............................................................. 40
3.6 Transfection de A. vaga ........................................................................ 42
3.7 Dessiccation du rotifère bdelloïde A.vaga ............................................ 42
3.8 Microscopie ........................................................................................... 43
3.8.1 Technique de fixation ........................................................................ 43
3.8.2 Marquage au DAPI et montage au Mowiol ....................................... 43
4. Résultats et discussion ................................................................................. 45
4.1 Processus d’internalisation d’acides nucléiques ................................... 45
4.1.1 Synthèse des acides nucléiques marqués ......................................... 45
4.1.2 Transfection des acides nucléiques marqués chez A.vaga ................ 52
4.1.3 Nourrissage d’A.vaga aux bactéries fluorescentes : est-ce que la
localisation du signal est identique ? ...................................................................... 54
4.1.4 La dessiccation, origine probable des transferts horizontaux .......... 55
4.2 La fluorescence est-elle altérée par la fixation ? .................................. 58
4.2.1 Fixation au paraformaldéhyde .......................................................... 58
4.2.2 « Le monde est stone » ..................................................................... 59
4.2.3 Observation d’A.vaga in vivo ............................................................. 60
4.2.4 Transfection sur des oeufs, plus efficace ? ........................................ 60
4.3 Transgenèse transitoire ........................................................................ 61
4.3.1 Purification et validation des plasmides pCS2+ et pCS2+eGFP ......... 61
4.3.2 Construction du plasmide mCherry ................................................... 62
4.4 Etude de la résistance/sensibilité d’A.vaga aux antibiotiques ............. 68
Conclusion générale et perspectives ..................................................................... 73
Liste des illustrations ............................................................................................. 77
Lexique .................................................................................................................. 78
Bibliographie .......................................................................................................... 79
Annexes ................................................................................................................. 81
Résumé .................................................................................................................. 94 |
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|
Exemplaires
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Implication de l'hyaluronidase Hyal-2 dans le comportement tumoral [TFE / Mémoire] / BACCARI Donia, . - 2009. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
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Exemplaires (1)
|
Revue | Revue | Centre de Documentation HELHa Campus Montignies | Réserve | Consultable sur demande auprès des documentalistes Exclu du prêt |
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Mise au point d'un test de croissance cellulaire permettant le criblage de molécules en vue de trouver un inhibiteur de ka résistance à la doxorubicine conférée par la protéine MAGE-A1 aux cellules tumorales mammaires MCF-7 [TFE / Mémoire] / Martin Lemaire, Auteur . - 2016. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre) |
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