Centre de Documentation Campus Montignies
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Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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Suivi à 3 et 6 mois des anomalies des analyses de l’hémostase de patients hospitalisés aux soins intensifs à cause de la COVID-19 / Loïc Gillard
Titre : Suivi à 3 et 6 mois des anomalies des analyses de l’hémostase de patients hospitalisés aux soins intensifs à cause de la COVID-19 Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Loïc Gillard, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU UCL Namur Mont-Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études explore les anomalies de l’hémostase chez les patients atteints du COVID-19 admis aux soins intensifs lors de la première vague et de la seconde vague de la pandémie du SARS-COV-2. Il a été observé que les patients qui ont une infection grave au SARS-COV-2 développent une hémostase qui a une tendance thrombotique. Ensuite, les patients ont eu une entrevue avec un médecin après 3 mois et 6 mois, ce qui permet de suivre l’évolution de la coagulation après leur admission. Cette évolution est comparée par la suite à une autre étude qui a exploré le cas de patients 4 mois après leur sortie des soins intensifs. Les tests qui ont été réalisés sur l’hémostase des patients sont composés des tests de routines ainsi que de tests plus spécifiques, comme le dosage des D-dimères, monomères de fibrine, ou encore la capacité fibrinolytique globale ou la génération de thrombine. Ils permettent d’explorer l’hémostase primaire (via l’antigène et l’activité du facteur de von Willebrand), la cascade de coagulation (grâce aux divers tests de routines ainsi qu’aux dosages des facteurs) et enfin la fibrinolyse (par le dosage des D-dimères mais également la capacité fibrinolytique globale). La COVID-19 étant une maladie causant un état inflammatoire très important, certains
paramètres sont extrêmement élevés tel que le facteur VIII ou le facteur de von Willebrand. En conclusion, les tests réalisés ont permis d’explorer une grande partie de l’hémostase perturbé chez les patients souffrant d’une forme sévère du COVID-19. Il y a une normalisation des constantes hémostatiques chez les patients issus des soins intensifs 3 mois après leur admission.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage....................................................................................................................... 8
Introduction générale .................................................................................................................................. 9
1 Partie théorique................................................................................................................................. 10
1.1 L’hémostase primaire et la cascade de coagulation ..................................................................... 10
1.1.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 10
1.1.2 Le temps vasculaire ............................................................................................................. 10
1.1.3 Le temps plaquettaire .......................................................................................................... 10
1.1.4 Le relargage plaquettaire ..................................................................................................... 11
1.2 La cascade coagulation ............................................................................................................... 11
1.3 La fibrinolyse ............................................................................................................................. 13
1.4 Pathologie de l’hémostase dans le cas du Covid-19 .................................................................... 15
1.4.1 Thromboses veineuses et Embolie pulmonaire .................................................................... 15
1.4.2 La triade de Virchow ........................................................................................................... 15
1.4.3 Formation............................................................................................................................ 16
1.4.4 Facteurs de risque................................................................................................................ 17
1.4.5 Prophylaxie ......................................................................................................................... 18
1.5 Explication et intérêt des tests de routines de l’hémostase........................................................... 18
1.5.1 Activated partial thromboplastin time (APTT) ou Temps de Céphaline Activé (TCA) ......... 19
1.5.2 Temps de Quick (TQ) ou temps de Prothrombine (PT) ........................................................ 20
1.5.3 Temps de thrombine (TT).................................................................................................... 20
1.5.4 Dosage du fibrinogène par la méthode de Clauss................................................................. 21
1.6 Explication des tests spécifiques de l’hémostase ......................................................................... 22
1.6.1 D-dimères et monomères de fibrine ..................................................................................... 22
1.6.2 Dosage de l’activité PAI-1 ou PAI....................................................................................... 23
1.6.3 Dosage du Facteur VIII ....................................................................................................... 24
1.6.4 Dosage de l’Antithrombine III............................................................................................. 24
1.6.5 Facteur de von Willebrand Antigène et l’activité ................................................................. 25
1.6.6 Facteur de von Willebrand Antigène.................................................................................... 25
1.6.7 Activité du facteur de von Willebrand ................................................................................. 26
1.6.8 Lysis Timer ......................................................................................................................... 27
1.6.9 ST-Genesia.......................................................................................................................... 27
2 Objectifs, matériel et méthode .......................................................................................................... 31
2.1 Objectifs..................................................................................................................................... 31
2.2 Stratégie ..................................................................................................................................... 31
2.3 Matériels .................................................................................................................................... 32
2.3.1 Star Max² ............................................................................................................................ 32
2.3.2 Lysis Timer ......................................................................................................................... 33
2.3.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 33
2.3.4 BIO-FLASH........................................................................................................................ 33
2.4 Méthode ..................................................................................................................................... 34
2.4.1 StarMax² ............................................................................................................................. 34
2.4.2 Lysis Timer® ...................................................................................................................... 34
2.4.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 35
2.4.4 Bio-Flash............................................................................................................................. 36
3 Résultats et discussions ..................................................................................................................... 36
3.1 Choix des patients ...................................................................................................................... 36
3.2 Résultats et discussion de la première vague............................................................................... 39
3.2.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 39
3.2.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 40
3.2.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 45
3.2.4 Autre ................................................................................................................................... 48
3.3 Résultats et discussion de la deuxième vague.............................................................................. 52
3.3.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 52
3.3.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 53
3.3.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 56
3.4 Comparaison des 2 vagues.......................................................................................................... 60
3.5 Comparaison par rapport à l’autre étude ..................................................................................... 61
3.6 Evolution de l’hémostase des patients de l’étude comparative..................................................... 62
3.7 Bilan des deux études ................................................................................................................. 62
Conclusion générale ................................................................................................................................. 64
Bibliographie............................................................................................................................................ 69
Table des illustrations ............................................................................................................................... 65
Table des tableaux .................................................................................................................................... 67
Abréviations ............................................................................................................................................. 68
Annexes ................................................................................................................................................... 73
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100368 Suivi à 3 et 6 mois des anomalies des analyses de l’hémostase de patients hospitalisés aux soins intensifs à cause de la COVID-19 [TFE / Mémoire] / Loïc Gillard, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : CHU UCL Namur Mont-Godinne Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études explore les anomalies de l’hémostase chez les patients atteints du COVID-19 admis aux soins intensifs lors de la première vague et de la seconde vague de la pandémie du SARS-COV-2. Il a été observé que les patients qui ont une infection grave au SARS-COV-2 développent une hémostase qui a une tendance thrombotique. Ensuite, les patients ont eu une entrevue avec un médecin après 3 mois et 6 mois, ce qui permet de suivre l’évolution de la coagulation après leur admission. Cette évolution est comparée par la suite à une autre étude qui a exploré le cas de patients 4 mois après leur sortie des soins intensifs. Les tests qui ont été réalisés sur l’hémostase des patients sont composés des tests de routines ainsi que de tests plus spécifiques, comme le dosage des D-dimères, monomères de fibrine, ou encore la capacité fibrinolytique globale ou la génération de thrombine. Ils permettent d’explorer l’hémostase primaire (via l’antigène et l’activité du facteur de von Willebrand), la cascade de coagulation (grâce aux divers tests de routines ainsi qu’aux dosages des facteurs) et enfin la fibrinolyse (par le dosage des D-dimères mais également la capacité fibrinolytique globale). La COVID-19 étant une maladie causant un état inflammatoire très important, certains
paramètres sont extrêmement élevés tel que le facteur VIII ou le facteur de von Willebrand. En conclusion, les tests réalisés ont permis d’explorer une grande partie de l’hémostase perturbé chez les patients souffrant d’une forme sévère du COVID-19. Il y a une normalisation des constantes hémostatiques chez les patients issus des soins intensifs 3 mois après leur admission.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage....................................................................................................................... 8
Introduction générale .................................................................................................................................. 9
1 Partie théorique................................................................................................................................. 10
1.1 L’hémostase primaire et la cascade de coagulation ..................................................................... 10
1.1.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 10
1.1.2 Le temps vasculaire ............................................................................................................. 10
1.1.3 Le temps plaquettaire .......................................................................................................... 10
1.1.4 Le relargage plaquettaire ..................................................................................................... 11
1.2 La cascade coagulation ............................................................................................................... 11
1.3 La fibrinolyse ............................................................................................................................. 13
1.4 Pathologie de l’hémostase dans le cas du Covid-19 .................................................................... 15
1.4.1 Thromboses veineuses et Embolie pulmonaire .................................................................... 15
1.4.2 La triade de Virchow ........................................................................................................... 15
1.4.3 Formation............................................................................................................................ 16
1.4.4 Facteurs de risque................................................................................................................ 17
1.4.5 Prophylaxie ......................................................................................................................... 18
1.5 Explication et intérêt des tests de routines de l’hémostase........................................................... 18
1.5.1 Activated partial thromboplastin time (APTT) ou Temps de Céphaline Activé (TCA) ......... 19
1.5.2 Temps de Quick (TQ) ou temps de Prothrombine (PT) ........................................................ 20
1.5.3 Temps de thrombine (TT).................................................................................................... 20
1.5.4 Dosage du fibrinogène par la méthode de Clauss................................................................. 21
1.6 Explication des tests spécifiques de l’hémostase ......................................................................... 22
1.6.1 D-dimères et monomères de fibrine ..................................................................................... 22
1.6.2 Dosage de l’activité PAI-1 ou PAI....................................................................................... 23
1.6.3 Dosage du Facteur VIII ....................................................................................................... 24
1.6.4 Dosage de l’Antithrombine III............................................................................................. 24
1.6.5 Facteur de von Willebrand Antigène et l’activité ................................................................. 25
1.6.6 Facteur de von Willebrand Antigène.................................................................................... 25
1.6.7 Activité du facteur de von Willebrand ................................................................................. 26
1.6.8 Lysis Timer ......................................................................................................................... 27
1.6.9 ST-Genesia.......................................................................................................................... 27
2 Objectifs, matériel et méthode .......................................................................................................... 31
2.1 Objectifs..................................................................................................................................... 31
2.2 Stratégie ..................................................................................................................................... 31
2.3 Matériels .................................................................................................................................... 32
2.3.1 Star Max² ............................................................................................................................ 32
2.3.2 Lysis Timer ......................................................................................................................... 33
2.3.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 33
2.3.4 BIO-FLASH........................................................................................................................ 33
2.4 Méthode ..................................................................................................................................... 34
2.4.1 StarMax² ............................................................................................................................. 34
2.4.2 Lysis Timer® ...................................................................................................................... 34
2.4.3 ST-Genesia.......................................................................................................................... 35
2.4.4 Bio-Flash............................................................................................................................. 36
3 Résultats et discussions ..................................................................................................................... 36
3.1 Choix des patients ...................................................................................................................... 36
3.2 Résultats et discussion de la première vague............................................................................... 39
3.2.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 39
3.2.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 40
3.2.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 45
3.2.4 Autre ................................................................................................................................... 48
3.3 Résultats et discussion de la deuxième vague.............................................................................. 52
3.3.1 Hémostase primaire ............................................................................................................. 52
3.3.2 Cascade de coagulation ....................................................................................................... 53
3.3.3 Fibrinolyse .......................................................................................................................... 56
3.4 Comparaison des 2 vagues.......................................................................................................... 60
3.5 Comparaison par rapport à l’autre étude ..................................................................................... 61
3.6 Evolution de l’hémostase des patients de l’étude comparative..................................................... 62
3.7 Bilan des deux études ................................................................................................................. 62
Conclusion générale ................................................................................................................................. 64
Bibliographie............................................................................................................................................ 69
Table des illustrations ............................................................................................................................... 65
Table des tableaux .................................................................................................................................... 67
Abréviations ............................................................................................................................................. 68
Annexes ................................................................................................................................................... 73
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100368 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Suivi et optimisation du processus de déshydration par pré chaulage des boues de la station d'épuration de Waterloo / Guillaume DEPREZ
Titre : Suivi et optimisation du processus de déshydration par pré chaulage des boues de la station d'épuration de Waterloo Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Guillaume DEPREZ, Auteur Année de publication : 2011 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : ENVIRONNEMENT , TRAITEMENT EAUX USEES , STATION EPURATION DE WATERLOO , PRECHAULAGE DES BOUES , OPTIMISATION DU PROCESSUS DE DESHYDRATION Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64947 Suivi et optimisation du processus de déshydration par pré chaulage des boues de la station d'épuration de Waterloo [TFE / Mémoire] / Guillaume DEPREZ, Auteur . - 2011.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : ENVIRONNEMENT , TRAITEMENT EAUX USEES , STATION EPURATION DE WATERLOO , PRECHAULAGE DES BOUES , OPTIMISATION DU PROCESSUS DE DESHYDRATION Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64947 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Sur les traces du virus de Schmallenberg, un pathogène animal apparu en Europe en 2011 / ELOISE CLAUDE
Titre : Sur les traces du virus de Schmallenberg, un pathogène animal apparu en Europe en 2011 Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : ELOISE CLAUDE, Auteur Année de publication : 2014 Langues : Français (fre) Mots-clés : BIOLOGIE MÉDICALE UNIVERSITE DE NAMUR VIRUS SCHMALLENBERG PATHOGENE ANIMAL DIAGNOSTIC ELISA SERONEUTRALISATION SATV SHAV, SBV Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65375 Sur les traces du virus de Schmallenberg, un pathogène animal apparu en Europe en 2011 [TFE / Mémoire] / ELOISE CLAUDE, Auteur . - 2014.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : BIOLOGIE MÉDICALE UNIVERSITE DE NAMUR VIRUS SCHMALLENBERG PATHOGENE ANIMAL DIAGNOSTIC ELISA SERONEUTRALISATION SATV SHAV, SBV Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65375 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Surexpression et purification de la 2-Oxoglutarate/Fe(II)- dépendante chez Caulobacter crescentus / Grégoire Vanhaelen
Titre : Surexpression et purification de la 2-Oxoglutarate/Fe(II)- dépendante chez Caulobacter crescentus Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Grégoire Vanhaelen, Auteur ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Centre de Cancérologie de Marseille CRCM Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le cuivre est un élément indispensable pour tous les organismes mais, à trop grande concentration, il provoquera un stress oxydatif pouvant provoquer la mort de la cellule. Au cours de l’évolution, différents mécanismes ont été développés par des bactéries afin de pouvoir survivre dans un milieu riche en cuivre. Caulobacter crescentus est une bactérie intéressante et fortement étudiée. Elle possède différents mécanismes lui offrant une tolérance au cuivre. Son cycle cellulaire est particulier, elle donne naissance à deux cellules filles ayant chacune une morphologie et une fonction différentes : la cellule flagellée et la cellule pédonculée. Ces deux cellules ont des mécanismes différents pour faire face à un environnement riche en cuivre.
La cellule flagellée dispose d’un flagelle lui permettant de se déplacer et grâce à la chimiotaxie négative, cela lui permet de s’éloigner des milieux à haute concentration en cuivre. La cellule pédonculée possède un système appelé PcoAB lui permettant de réguler la concentration intracellulaire en cuivre. Ce projet, réalisé dans le laboratoire de l’URBM, vise à étudier une protéine se trouvant chez la cellule pédonculée, elle semblerait jouer un rôle dans la tolérance au cuivre chez C. cresentus, la 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendantes. Ce travail de fin d’étude a comme objectif de réaliser une surexpression de la protéine 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendantes, d’en trouver les conditions optimales et de la purifier. Par la suite, des tests in vitro seront réalisés dessus dans le but de mettre en évidence la capacité de la protéine 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendantes de se lier au Cu chez C. crescentus.
Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................. 1
Université de Namur ........................................................................................................................... 1
Unité de recherche en biologie des microorganismes (URBM) .......................................................... 1
2. Contexte général ................................................................................................................................. 1
2.1. Le cuivre ....................................................................................................................................... 1
2.1.1. Toxicité du cuivre .................................................................................................................. 2
2.2. Homéostasie du Cuivre............................................................................................................ 3
2.2.1. Le système Cue................................................................................................................ 3
2.2.2. Le système Cus ................................................................................................................ 4
2.2.3. Le système Pco ................................................................................................................ 4
2.3. Caulobacter crescentus ........................................................................................................... 5
2.3.1. Cycle cellulaire de C. crescentus.......................................................................................... 5
2.4. 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendante.......................................................................................... 6
3. Objectif et stratégie......................................................................................................................... 9
4. Matériels et méthodes .................................................................................................................. 10
4.1. Matériels..................................................................................................................................... 10
Souches :........................................................................................................................................ 10
pET vecteur :.................................................................................................................................. 11
Enzyme de restriction :.................................................................................................................. 12
Milieu :........................................................................................................................................... 14
Construction : ................................................................................................................................ 14
4.2. Méthodes .............................................................................................................................. 15
4.2.1. La réaction de la polymérisation en chaine (PCR) ......................................................... 15
4.2.2. PCR Q5 ........................................................................................................................... 16
4.2.3. PCR Gotaq check (PCR colonies).................................................................................... 16
4.2.4. Electrophorèse .............................................................................................................. 17
4.2.5. Purification d’ADN sur gel ............................................................................................. 18
4.2.6. Purification PCR ............................................................................................................. 18
4.2.7. Extraction de plasmide, réalisation d’une miniprep ..................................................... 18
4.2.8. Restriction ..................................................................................................................... 19
4.2.9. Ligation .......................................................................................................................... 20
4.2.10. Transformation.............................................................................................................. 20
4.2.11. Ensemencement sur boite de Petri via la technique des billes..................................... 20
4.2.12. Le système blanc bleu X gal........................................................................................... 21
4.2.13. Surexpression de la protéine OxcT................................................................................ 22
4.2.14. SDS-page........................................................................................................................ 23
4.2.15. Western blot.................................................................................................................. 24
4.2.16. Chromatographie d’affinité au Nickel ........................................................................... 25
5. Résultats et discussion .................................................................................................................. 26
5.1. Construction DH10B-OxcT-pET28a............................................................................................. 26
5.2. Séquençage OxcT-pET28a ..................................................................................................... 28
5.3. Construction DH10B-OxcT-pSK.............................................................................................. 28
5.4. Séquençage de OxcT-pSK ...................................................................................................... 30
5.5. Construction DH10B-OxcT-pET28a........................................................................................ 30
5.6. Construction BL21plyS-OxcT-pET28a .................................................................................... 31
5.7. Surexpression de la protéine OxcT dans des BL21plysS........................................................ 33
5.8. Construction BL21-OxcT-pET28a........................................................................................... 34
5.9. Surexpression de la protéine OxcT dans des BL21plysS........................................................ 35
5.10. Surexpression d’OxcT dans des BL21 concentrations en IPTG différentes ....................... 35
5.11. Transformation OxcT-pET28a dans C41plysS .................................................................... 38
5.12. Surexpression d’OxcT dans C41plysS ................................................................................ 38
5.13. Surexpression d’OxcT dans C41plysS à des concentrations d’IPTG différentes................ 40
5.14. Surexpression d’OxcT dans C41plysS à différentes concentrations en DTT...................... 41
5.15. Western blot sur C41plysS avec du DTT............................................................................ 42
........................................................................................................................................................... 43
5.16. Western blot sur C41plysS avec beta-mercaptoéthanol................................................... 43
5.17. Séquençage OxcT-pET28a ................................................................................................. 44
5.18. Construction DH10B-OxcT-pET15b.................................................................................... 44
5.19. Séquençage OxcT-pET15b ................................................................................................. 45
5.20. Construction DH10B-OxcT-pET15b.................................................................................... 45
5.21. Séquençage OxcT-pET15b ................................................................................................. 46
5.22. Construction DH10B-OxcT-pET15b.................................................................................... 47
5.23. Séquençage OxcT-pET15b ................................................................................................. 49
5.24. Construction DH10B-OxcT-pET28a.................................................................................... 49
5.25. Séquençage OxcT-pET28a ................................................................................................. 50
6. Conclusion et Perspective ............................................................................................................. 51
7. Bibliographie.................................................................................................................................. 54
8. Liste des tableaux .......................................................................................................................... 56
9. Liste des figures............................................................................................................................. 57
10. Annexes ..................................................................................................................................... 59
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100317 Surexpression et purification de la 2-Oxoglutarate/Fe(II)- dépendante chez Caulobacter crescentus [TFE / Mémoire] / Grégoire Vanhaelen, Auteur ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Centre de Cancérologie de Marseille CRCM Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le cuivre est un élément indispensable pour tous les organismes mais, à trop grande concentration, il provoquera un stress oxydatif pouvant provoquer la mort de la cellule. Au cours de l’évolution, différents mécanismes ont été développés par des bactéries afin de pouvoir survivre dans un milieu riche en cuivre. Caulobacter crescentus est une bactérie intéressante et fortement étudiée. Elle possède différents mécanismes lui offrant une tolérance au cuivre. Son cycle cellulaire est particulier, elle donne naissance à deux cellules filles ayant chacune une morphologie et une fonction différentes : la cellule flagellée et la cellule pédonculée. Ces deux cellules ont des mécanismes différents pour faire face à un environnement riche en cuivre.
La cellule flagellée dispose d’un flagelle lui permettant de se déplacer et grâce à la chimiotaxie négative, cela lui permet de s’éloigner des milieux à haute concentration en cuivre. La cellule pédonculée possède un système appelé PcoAB lui permettant de réguler la concentration intracellulaire en cuivre. Ce projet, réalisé dans le laboratoire de l’URBM, vise à étudier une protéine se trouvant chez la cellule pédonculée, elle semblerait jouer un rôle dans la tolérance au cuivre chez C. cresentus, la 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendantes. Ce travail de fin d’étude a comme objectif de réaliser une surexpression de la protéine 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendantes, d’en trouver les conditions optimales et de la purifier. Par la suite, des tests in vitro seront réalisés dessus dans le but de mettre en évidence la capacité de la protéine 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendantes de se lier au Cu chez C. crescentus.
Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................. 1
Université de Namur ........................................................................................................................... 1
Unité de recherche en biologie des microorganismes (URBM) .......................................................... 1
2. Contexte général ................................................................................................................................. 1
2.1. Le cuivre ....................................................................................................................................... 1
2.1.1. Toxicité du cuivre .................................................................................................................. 2
2.2. Homéostasie du Cuivre............................................................................................................ 3
2.2.1. Le système Cue................................................................................................................ 3
2.2.2. Le système Cus ................................................................................................................ 4
2.2.3. Le système Pco ................................................................................................................ 4
2.3. Caulobacter crescentus ........................................................................................................... 5
2.3.1. Cycle cellulaire de C. crescentus.......................................................................................... 5
2.4. 2-Oxoglutarate/Fe(II)-dépendante.......................................................................................... 6
3. Objectif et stratégie......................................................................................................................... 9
4. Matériels et méthodes .................................................................................................................. 10
4.1. Matériels..................................................................................................................................... 10
Souches :........................................................................................................................................ 10
pET vecteur :.................................................................................................................................. 11
Enzyme de restriction :.................................................................................................................. 12
Milieu :........................................................................................................................................... 14
Construction : ................................................................................................................................ 14
4.2. Méthodes .............................................................................................................................. 15
4.2.1. La réaction de la polymérisation en chaine (PCR) ......................................................... 15
4.2.2. PCR Q5 ........................................................................................................................... 16
4.2.3. PCR Gotaq check (PCR colonies).................................................................................... 16
4.2.4. Electrophorèse .............................................................................................................. 17
4.2.5. Purification d’ADN sur gel ............................................................................................. 18
4.2.6. Purification PCR ............................................................................................................. 18
4.2.7. Extraction de plasmide, réalisation d’une miniprep ..................................................... 18
4.2.8. Restriction ..................................................................................................................... 19
4.2.9. Ligation .......................................................................................................................... 20
4.2.10. Transformation.............................................................................................................. 20
4.2.11. Ensemencement sur boite de Petri via la technique des billes..................................... 20
4.2.12. Le système blanc bleu X gal........................................................................................... 21
4.2.13. Surexpression de la protéine OxcT................................................................................ 22
4.2.14. SDS-page........................................................................................................................ 23
4.2.15. Western blot.................................................................................................................. 24
4.2.16. Chromatographie d’affinité au Nickel ........................................................................... 25
5. Résultats et discussion .................................................................................................................. 26
5.1. Construction DH10B-OxcT-pET28a............................................................................................. 26
5.2. Séquençage OxcT-pET28a ..................................................................................................... 28
5.3. Construction DH10B-OxcT-pSK.............................................................................................. 28
5.4. Séquençage de OxcT-pSK ...................................................................................................... 30
5.5. Construction DH10B-OxcT-pET28a........................................................................................ 30
5.6. Construction BL21plyS-OxcT-pET28a .................................................................................... 31
5.7. Surexpression de la protéine OxcT dans des BL21plysS........................................................ 33
5.8. Construction BL21-OxcT-pET28a........................................................................................... 34
5.9. Surexpression de la protéine OxcT dans des BL21plysS........................................................ 35
5.10. Surexpression d’OxcT dans des BL21 concentrations en IPTG différentes ....................... 35
5.11. Transformation OxcT-pET28a dans C41plysS .................................................................... 38
5.12. Surexpression d’OxcT dans C41plysS ................................................................................ 38
5.13. Surexpression d’OxcT dans C41plysS à des concentrations d’IPTG différentes................ 40
5.14. Surexpression d’OxcT dans C41plysS à différentes concentrations en DTT...................... 41
5.15. Western blot sur C41plysS avec du DTT............................................................................ 42
........................................................................................................................................................... 43
5.16. Western blot sur C41plysS avec beta-mercaptoéthanol................................................... 43
5.17. Séquençage OxcT-pET28a ................................................................................................. 44
5.18. Construction DH10B-OxcT-pET15b.................................................................................... 44
5.19. Séquençage OxcT-pET15b ................................................................................................. 45
5.20. Construction DH10B-OxcT-pET15b.................................................................................... 45
5.21. Séquençage OxcT-pET15b ................................................................................................. 46
5.22. Construction DH10B-OxcT-pET15b.................................................................................... 47
5.23. Séquençage OxcT-pET15b ................................................................................................. 49
5.24. Construction DH10B-OxcT-pET28a.................................................................................... 49
5.25. Séquençage OxcT-pET28a ................................................................................................. 50
6. Conclusion et Perspective ............................................................................................................. 51
7. Bibliographie.................................................................................................................................. 54
8. Liste des tableaux .......................................................................................................................... 56
9. Liste des figures............................................................................................................................. 57
10. Annexes ..................................................................................................................................... 59
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Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Surexpression, purification et caracterisation de l'indoléamine-2,3-dioxygénase humaine (IDO) impliquée dans le cancer / CARUANA Mélissa
Titre : Surexpression, purification et caracterisation de l'indoléamine-2,3-dioxygénase humaine (IDO) impliquée dans le cancer Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : CARUANA Mélissa, Année de publication : 2010 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Mots-clés : BIOLOGIE CLINIQUE CANCEROLOGIE ENZYMOLOGIE INDOLEAMINE-2,3-DIOXYGENASE (IDO) CRISTALLOGRAPHIE CHROMATOGRAPHIE PURIFICATION PROTEINES ACTIVITE ENZYMATIQUE Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64722 Surexpression, purification et caracterisation de l'indoléamine-2,3-dioxygénase humaine (IDO) impliquée dans le cancer [TFE / Mémoire] / CARUANA Mélissa, . - 2010.
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