Centre de Documentation Campus Montignies
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Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation sera exceptionnellement fermé de 12h à 12h30 ce jeudi 30 mai. Également, il ouvrira à 8h30 ce vendredi 31 mai.
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Approche technologique des conditions de reconstruction d'épiderme humain en culture: glucose, glycogène et antibiotiques / Anushea ANANTHARAJAH
Titre : Approche technologique des conditions de reconstruction d'épiderme humain en culture: glucose, glycogène et antibiotiques Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Anushea ANANTHARAJAH, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale l’Université de Namur faculté de Médecine URPhyM Unité de Recherche en Physiologie Moléculaire peau épiderme épiderme humain reconstruit glycogène antibiotiques culture kératinocytes cellulaire MTT immunofluorescence glucose acide hyaluronique ARNm qRT-PCR Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : TABLES DES MATIERES
REMERCIEMENTS
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE …………………………………………………………………………………………………… 9
INTRODUCTION GENERALE ………………………………………………………………………………………………………………11
1. CONTEXTE GENERAL
1.1.1 La peau : structure et fonction ...................................................................................... 13
1.1.2 L’épiderme ..................................................................................................................... 14 Epiderme humain reconstruit (RHE) ..................................................................................... 19
2. OBJECTIFS ET STRATEGIES Première problématique : le glycogène ................................................................................ 21
Deuxième problématique : les antibiotiques dans le milieu de culture ............................... 23
3. MATERIEL ET METHODES Culture des kératinocytes humains : ..................................................................................... 25
Analyse histologique : ........................................................................................................... 30
Immunofluorescence : ........................................................................................................... 32
Test de viabilité cellulaire (test MTT) : .................................................................................. 34
Dosage du glycogène : ........................................................................................................... 34
Dosage du glucose : ............................................................................................................... 35
Dosage de l’acide hyaluronique (HA) : .................................................................................. 35
Analyse de l’expression des ARNm par qRT-PCR : ................................................................. 37
4. RESULTATS ET DISCUSSION Première problématique : le glycogène ................................................................................ 41
4.1.1 Dosage du glucose : ....................................................................................................... 41
4.1.2 Influence de la concentration en glucose sur la morphologie des kératinocytes : ....... 41
4.1.3 Test de viabilité cellulaire .............................................................................................. 43
4.1.4 Dosage de l’acide hyaluronique .................................................................................... 44
4.1.5 Effet de la concentration en glucose sur la culture des kératinocytes en monocouche 46
4.1.6 Effet de la concentration en glucose sur la culture des épidermes humains reconstruits (RHE) 48
4.1.7 Discussion ...................................................................................................................... 53 Deuxième problématique : les antibiotiques dans le milieu de culture ............................... 56
4.2.1 Discussion ...................................................................................................................... 60
CONCLUSION ET PERSPECTIVES………………………………………………………………………………………………………..61
LISTE DES ABREVIATIONS …………………………………………………………………………………………………………………63
BIBLIOGRAPHIE…………………………………………………………………………………………………………………………………65
ANNEXEPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65651 Approche technologique des conditions de reconstruction d'épiderme humain en culture: glucose, glycogène et antibiotiques [TFE / Mémoire] / Anushea ANANTHARAJAH, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale l’Université de Namur faculté de Médecine URPhyM Unité de Recherche en Physiologie Moléculaire peau épiderme épiderme humain reconstruit glycogène antibiotiques culture kératinocytes cellulaire MTT immunofluorescence glucose acide hyaluronique ARNm qRT-PCR Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : TABLES DES MATIERES
REMERCIEMENTS
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE …………………………………………………………………………………………………… 9
INTRODUCTION GENERALE ………………………………………………………………………………………………………………11
1. CONTEXTE GENERAL
1.1.1 La peau : structure et fonction ...................................................................................... 13
1.1.2 L’épiderme ..................................................................................................................... 14 Epiderme humain reconstruit (RHE) ..................................................................................... 19
2. OBJECTIFS ET STRATEGIES Première problématique : le glycogène ................................................................................ 21
Deuxième problématique : les antibiotiques dans le milieu de culture ............................... 23
3. MATERIEL ET METHODES Culture des kératinocytes humains : ..................................................................................... 25
Analyse histologique : ........................................................................................................... 30
Immunofluorescence : ........................................................................................................... 32
Test de viabilité cellulaire (test MTT) : .................................................................................. 34
Dosage du glycogène : ........................................................................................................... 34
Dosage du glucose : ............................................................................................................... 35
Dosage de l’acide hyaluronique (HA) : .................................................................................. 35
Analyse de l’expression des ARNm par qRT-PCR : ................................................................. 37
4. RESULTATS ET DISCUSSION Première problématique : le glycogène ................................................................................ 41
4.1.1 Dosage du glucose : ....................................................................................................... 41
4.1.2 Influence de la concentration en glucose sur la morphologie des kératinocytes : ....... 41
4.1.3 Test de viabilité cellulaire .............................................................................................. 43
4.1.4 Dosage de l’acide hyaluronique .................................................................................... 44
4.1.5 Effet de la concentration en glucose sur la culture des kératinocytes en monocouche 46
4.1.6 Effet de la concentration en glucose sur la culture des épidermes humains reconstruits (RHE) 48
4.1.7 Discussion ...................................................................................................................... 53 Deuxième problématique : les antibiotiques dans le milieu de culture ............................... 56
4.2.1 Discussion ...................................................................................................................... 60
CONCLUSION ET PERSPECTIVES………………………………………………………………………………………………………..61
LISTE DES ABREVIATIONS …………………………………………………………………………………………………………………63
BIBLIOGRAPHIE…………………………………………………………………………………………………………………………………65
ANNEXEPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65651 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation morphologique de l’effet de la Propolis sur une plaie cutanée chez le rat / Xavier Blecha
Titre : Caractérisation morphologique de l’effet de la Propolis sur une plaie cutanée chez le rat Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Xavier Blecha, Auteur ; Charles Nicaise, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur URPhym Unité de recherche en physiologie moléculaire propolis plaie rat peau cicatrisation cutanée lésion cutanée immunomarquage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La peau est l’organe le plus superficiel du corps humain. Elle exerce plusieurs fonctions différentes et est composée de trois couches qui se superposent, l’épiderme, le derme et l’hypoderme. Le derme qui va nous intéresser dans ce travail est le tissu connectif de la peau, il est vascularisé et joue un rôle nutritif et de soutien. Il est composé de matrice extracellulaire qui contient les vaisseaux sanguins, les nerfs ainsi que les fibroblastes. Lorsque la peau est endommagée, celle-ci va se reformer dans un processus nommé cicatrisation. La cicatrisation est divisée en quatre phases : l’hémostase, la phase inflammatoire, la phase de prolifération et la phase de remodélisation. Lors de la cicatrisation, les fibroblastes et les myofibroblastes jouent un rôle important, ils vont sécréter le collagène et aider la cicatrice à se refermer. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes et l’effet qu’exercerait la Propolis sur cette repopulation. La Propolis est une substance produite par les abeilles qui possède un grand nombre de propriétés thérapeutiques.
Le but du travail est d’évaluer l’effet de la Propolis sur la cicatrisation cutanée et plus particulièrement sur la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes. Diverses techniques histologiques ont été utilisées comme des colorations topographiques (Hémalun-Eosine-Safran, Trichrome de Masson vert et le Rouge Picrosirius) ainsi que des immunomarquages spécifiques des fibroblastes et des myofibroblastes. Les immunomarquages sont dirigés contre la vimentine, qui est un marqueur des fibroblastes et des myofibroblastes, contre l’α-SMA qui est un marqueur des myofibroblastes et contre Iba-1 qui est un marqueur des macrophages et va nous permettre d’avoir une idée du processus inflammatoire.
Les résultats obtenus nous montrent que l’application de Propolis accélère de quelques heures la fermeture de la cicatrice au niveau macroscopique, comparativement à l’excipient seul (Macrogol). Ceci pourrait être expliqué par le fait que la Propolis stimule l’apparition des myofibroblastes qui vont jouer un rôle important dans la fermeture de la lésion. La Propolis augmente aussi le nombre de cellules vimentines positives au jour 7, c’est-à-dire au jour au il y a le plus de différence au niveau macroscopique. La Propolis agit sur la sécrétion du collagène, en effet, les fibres de collagène de type I des peaux traitées avec de la Propolis « récupèrent » plus rapidement leur orientation et en accélérant leur sécrétion. Enfin, la Propolis n’a pas d’effet apparent sur l’inflammation car aucune différence a été relevée entre les peaux traitées avec de la Propolis et les peaux traitées avec du Macrogol.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................................. 7
1. Introduction ..................................................................................................................................... 9
1.1 La peau .......................................................................................................................................... 9
1.1.1 L’épiderme ............................................................................................................................ 10
1.1.1.1 La couche basale ........................................................................................................ 10
1.1.1.2 La couche épineuse ................................................................................................... 11
1.1.1.3 La couche granuleuse .................................................................................................... 12
1.1.1.4 La couche cornée ........................................................................................................... 12
1.1.2 Le derme ............................................................................................................................... 13
1.1.2.1 Les fibroblastes .............................................................................................................. 13
1.1.2.2 Les myofibroblastes ....................................................................................................... 14
1.1.2.3 Le collagène ................................................................................................................... 15
1.2 La cicatrisation cutanée ............................................................................................................... 16
1.2.1. Généralités .......................................................................................................................... 16
1.2.2 L’hémostase .......................................................................................................................... 17
1.2.3 La phase inflammatoire ........................................................................................................ 19
1.2.4 La phase proliférative ........................................................................................................... 20
1.2.4.1 La réépithalisation ......................................................................................................... 20
1.2.4.2 La fibroplasie ................................................................................................................. 21
1.2.4.3 L’angiogenèse ................................................................................................................ 22
1.2.5 La phase de remodélisation ................................................................................................. 23
1.3 La Propolis ................................................................................................................................... 24
1.4. But du travail .............................................................................................................................. 25
2. Matériel et méthodes .................................................................................................................... 27
2.1 Animaux et modèle de lésion cutanée .................................................................................. 27
2.2. Histologie .................................................................................................................................... 28
2.2.1 Fixateur ................................................................................................................................. 28
2.2.2. Déshydratation et mise en paraffine des échantillons ........................................................ 28
2.2.3. Microtomisation et étalement des coupons sur lames ....................................................... 29
2.2.4. Coloration hématoxyline-éosine-safran (HES) .................................................................... 30
2.2.5. Coloration trichrome de Masson vert ................................................................................. 31
2.2.6. Coloration rouge picrosirius ................................................................................................ 32
2.2.4. Immunohistochimie ............................................................................................................ 33
2.2.7. Immunofluorescence ........................................................................................................... 36
3. Résultats ........................................................................................................................................ 39
3.1. Analyse macroscopique des plaies ............................................................................................. 39
3.2. Analyse microscopique des plaies .............................................................................................. 40
3.2.1. H.E.S ..................................................................................................................................... 40
3.2.2 Trichrome de Masson vert ................................................................................................... 43
3.2.3 Rouge picrosirius .................................................................................................................. 45
3.3. Immunomarquage de la vimentine ............................................................................................ 47
3.3.1. Révélation chromogénique ............................................................................................. 47
3.3.2 Quantification de la densité des cellules vimentine positive ........................................... 50
3.3.3. Immunofluorescence ....................................................................................................... 51
3.4. Immunomarquage de l’alpha SMA ......................................................................................... 51
3.4.1 Révélation chromogénique .............................................................................................. 51
3.4.2 Immunofluorescence ........................................................................................................ 54
3.5. Immunomarquage d’Iba 1 ...................................................................................................... 54
4. Discussion et perspectives ............................................................................................................ 57
Conclusion ............................................................................................................................................. 65
Liste des abréviations ............................................................................................................................ 67
Liste des figures ..................................................................................................................................... 69
Bibliographie.......................................................................................................................................... 71Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64855 Caractérisation morphologique de l’effet de la Propolis sur une plaie cutanée chez le rat [TFE / Mémoire] / Xavier Blecha, Auteur ; Charles Nicaise, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur URPhym Unité de recherche en physiologie moléculaire propolis plaie rat peau cicatrisation cutanée lésion cutanée immunomarquage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La peau est l’organe le plus superficiel du corps humain. Elle exerce plusieurs fonctions différentes et est composée de trois couches qui se superposent, l’épiderme, le derme et l’hypoderme. Le derme qui va nous intéresser dans ce travail est le tissu connectif de la peau, il est vascularisé et joue un rôle nutritif et de soutien. Il est composé de matrice extracellulaire qui contient les vaisseaux sanguins, les nerfs ainsi que les fibroblastes. Lorsque la peau est endommagée, celle-ci va se reformer dans un processus nommé cicatrisation. La cicatrisation est divisée en quatre phases : l’hémostase, la phase inflammatoire, la phase de prolifération et la phase de remodélisation. Lors de la cicatrisation, les fibroblastes et les myofibroblastes jouent un rôle important, ils vont sécréter le collagène et aider la cicatrice à se refermer. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes et l’effet qu’exercerait la Propolis sur cette repopulation. La Propolis est une substance produite par les abeilles qui possède un grand nombre de propriétés thérapeutiques.
Le but du travail est d’évaluer l’effet de la Propolis sur la cicatrisation cutanée et plus particulièrement sur la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes. Diverses techniques histologiques ont été utilisées comme des colorations topographiques (Hémalun-Eosine-Safran, Trichrome de Masson vert et le Rouge Picrosirius) ainsi que des immunomarquages spécifiques des fibroblastes et des myofibroblastes. Les immunomarquages sont dirigés contre la vimentine, qui est un marqueur des fibroblastes et des myofibroblastes, contre l’α-SMA qui est un marqueur des myofibroblastes et contre Iba-1 qui est un marqueur des macrophages et va nous permettre d’avoir une idée du processus inflammatoire.
Les résultats obtenus nous montrent que l’application de Propolis accélère de quelques heures la fermeture de la cicatrice au niveau macroscopique, comparativement à l’excipient seul (Macrogol). Ceci pourrait être expliqué par le fait que la Propolis stimule l’apparition des myofibroblastes qui vont jouer un rôle important dans la fermeture de la lésion. La Propolis augmente aussi le nombre de cellules vimentines positives au jour 7, c’est-à-dire au jour au il y a le plus de différence au niveau macroscopique. La Propolis agit sur la sécrétion du collagène, en effet, les fibres de collagène de type I des peaux traitées avec de la Propolis « récupèrent » plus rapidement leur orientation et en accélérant leur sécrétion. Enfin, la Propolis n’a pas d’effet apparent sur l’inflammation car aucune différence a été relevée entre les peaux traitées avec de la Propolis et les peaux traitées avec du Macrogol.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................................. 7
1. Introduction ..................................................................................................................................... 9
1.1 La peau .......................................................................................................................................... 9
1.1.1 L’épiderme ............................................................................................................................ 10
1.1.1.1 La couche basale ........................................................................................................ 10
1.1.1.2 La couche épineuse ................................................................................................... 11
1.1.1.3 La couche granuleuse .................................................................................................... 12
1.1.1.4 La couche cornée ........................................................................................................... 12
1.1.2 Le derme ............................................................................................................................... 13
1.1.2.1 Les fibroblastes .............................................................................................................. 13
1.1.2.2 Les myofibroblastes ....................................................................................................... 14
1.1.2.3 Le collagène ................................................................................................................... 15
1.2 La cicatrisation cutanée ............................................................................................................... 16
1.2.1. Généralités .......................................................................................................................... 16
1.2.2 L’hémostase .......................................................................................................................... 17
1.2.3 La phase inflammatoire ........................................................................................................ 19
1.2.4 La phase proliférative ........................................................................................................... 20
1.2.4.1 La réépithalisation ......................................................................................................... 20
1.2.4.2 La fibroplasie ................................................................................................................. 21
1.2.4.3 L’angiogenèse ................................................................................................................ 22
1.2.5 La phase de remodélisation ................................................................................................. 23
1.3 La Propolis ................................................................................................................................... 24
1.4. But du travail .............................................................................................................................. 25
2. Matériel et méthodes .................................................................................................................... 27
2.1 Animaux et modèle de lésion cutanée .................................................................................. 27
2.2. Histologie .................................................................................................................................... 28
2.2.1 Fixateur ................................................................................................................................. 28
2.2.2. Déshydratation et mise en paraffine des échantillons ........................................................ 28
2.2.3. Microtomisation et étalement des coupons sur lames ....................................................... 29
2.2.4. Coloration hématoxyline-éosine-safran (HES) .................................................................... 30
2.2.5. Coloration trichrome de Masson vert ................................................................................. 31
2.2.6. Coloration rouge picrosirius ................................................................................................ 32
2.2.4. Immunohistochimie ............................................................................................................ 33
2.2.7. Immunofluorescence ........................................................................................................... 36
3. Résultats ........................................................................................................................................ 39
3.1. Analyse macroscopique des plaies ............................................................................................. 39
3.2. Analyse microscopique des plaies .............................................................................................. 40
3.2.1. H.E.S ..................................................................................................................................... 40
3.2.2 Trichrome de Masson vert ................................................................................................... 43
3.2.3 Rouge picrosirius .................................................................................................................. 45
3.3. Immunomarquage de la vimentine ............................................................................................ 47
3.3.1. Révélation chromogénique ............................................................................................. 47
3.3.2 Quantification de la densité des cellules vimentine positive ........................................... 50
3.3.3. Immunofluorescence ....................................................................................................... 51
3.4. Immunomarquage de l’alpha SMA ......................................................................................... 51
3.4.1 Révélation chromogénique .............................................................................................. 51
3.4.2 Immunofluorescence ........................................................................................................ 54
3.5. Immunomarquage d’Iba 1 ...................................................................................................... 54
4. Discussion et perspectives ............................................................................................................ 57
Conclusion ............................................................................................................................................. 65
Liste des abréviations ............................................................................................................................ 67
Liste des figures ..................................................................................................................................... 69
Bibliographie.......................................................................................................................................... 71Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64855 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point d'un test de croissance cellulaire permettant le criblage de molécules en vue de trouver un inhibiteur de ka résistance à la doxorubicine conférée par la protéine MAGE-A1 aux cellules tumorales mammaires MCF-7 / Martin Lemaire
Titre : Mise au point d'un test de croissance cellulaire permettant le criblage de molécules en vue de trouver un inhibiteur de ka résistance à la doxorubicine conférée par la protéine MAGE-A1 aux cellules tumorales mammaires MCF-7 Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Martin Lemaire, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Unamur URPhyM cancer apoptose chimiothérapie doxorubicine protéine MAGE protéine p53 HDAC culture cellulaire transfection siRNA western blot Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65678 Mise au point d'un test de croissance cellulaire permettant le criblage de molécules en vue de trouver un inhibiteur de ka résistance à la doxorubicine conférée par la protéine MAGE-A1 aux cellules tumorales mammaires MCF-7 [TFE / Mémoire] / Martin Lemaire, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Unamur URPhyM cancer apoptose chimiothérapie doxorubicine protéine MAGE protéine p53 HDAC culture cellulaire transfection siRNA western blot Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65678 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire