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ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE / Wiâme BEN EL MOSTAPHA
Titre : ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65561 ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE [TFE / Mémoire] / Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche . - 2015.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65561 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation d’inhibiteurs potentiels de l’interaction entre le domaine PWWP de la DNMT3B et le marqueur épigénétique H3K36me3 / Fauve UITTERHAEGEN
Titre : Caractérisation d’inhibiteurs potentiels de l’interaction entre le domaine PWWP de la DNMT3B et le marqueur épigénétique H3K36me3 Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Fauve UITTERHAEGEN, Auteur ; Johan Wouters, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur laboratoire de chimie biologie structurale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage........................................................................................................ 6
Introduction .................................................................................................................................. 7
1. Contexte général ....................................................................................................................... 8
1.1 Chromatine .......................................................................................................................... 8
1.2 Épigénétique ....................................................................................................................... 9
1.2.1 Méthylation de l’ADN ................................................................................................. 10
ADN méthyltransférases ................................................................................................. 11
I Isoformes des DNMTs ............................................................................................... 11
II Structure des DNMTs ............................................................................................... 11
1.2.2 Domaine PWWP ......................................................................................................... 12
1.2.3 Modifications des histones ........................................................................................ 13
1.3 Cancer ................................................................................................................................ 14
1.4 Fonctions de méthylation de l’ADN dans le cancer .......................................................... 15
1.4.1 Répression des gènes suppresseurs de tumeurs ....................................................... 15
1.4.2 Activation d’oncogènes .............................................................................................. 16
Reconnaissance du domaine PWWP de la DNMT3B avec le marqueur épigénétique
H3K36me3 ....................................................................................................................... 17
1.4.3 Inhibiteurs des DNMTs ............................................................................................... 18
2. Objectifs et stratégie ............................................................................................................... 19
3. Principes des techniques ......................................................................................................... 20
3.1 Surexpression du domaine PWWP de la DNMT3B............................................................ 20
3.1.1 Plasmide ..................................................................................................................... 20
3.1.2 Préculture ................................................................................................................... 21
3.1.3 Culture et induction à l’IPTG ...................................................................................... 21
3.2 Purification ........................................................................................................................ 23
3.2.1 Lyse bactérienne ........................................................................................................ 23
3.2.2 Chromatographie d’affinité ........................................................................................ 23
3.2.3 Dialyse et clivage histag ............................................................................................. 25
3.2.4 Chromatographie échangeuse d’ions ........................................................................ 26
3.3 Mesure de la concentration en protéine .......................................................................... 27
3.4 Gel SDS-Page ..................................................................................................................... 28
3.5 Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ..................................................................... 30
5
3.6 Concentration de la protéine ............................................................................................ 31
3.7 Cristallogenèse .................................................................................................................. 32
3.7.1 Principes ..................................................................................................................... 32
3.8 Récupération des cristaux ................................................................................................. 34
3.9 Synchrotron soleil .............................................................................................................. 35
4. Matériel et Méthodes ............................................................................................................. 37
4.1 Surexpression du domaine PWWP de la DNMT3B............................................................ 37
4.1.1 Préculture ................................................................................................................... 37
4.1.2 Culture et induction à l’IPTG ...................................................................................... 37
4.2. Purification ....................................................................................................................... 38
4.2.1 Lyse bactérienne ........................................................................................................ 38
4.2.2 Chromatographie d’affinité 1 ..................................................................................... 38
4.2.3 Mesure de la concentration en protéine ................................................................... 39
4.2.4 Dialyse et clivage de l’histag ...................................................................................... 39
4.2.5 Chromatographie d’affinité 2 ..................................................................................... 40
4.2.6 Chromatographie échangeuse d’ions ........................................................................ 40
4.3 Gel SDS-Page ..................................................................................................................... 40
4.4 Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ..................................................................... 41
4.5 Cristallographie ................................................................................................................. 42
4.5.1 Concentration de la protéine ..................................................................................... 42
4.5.2 Conditions cristallographiques ................................................................................... 42
4.5.2.a Essais réalisés dans des boîtes 24 puits............................................................... 42
4.5.2.b Essais réalisés dans des plaques 96 puits ............................................................ 43
4.5.3 Récupération des cristaux .......................................................................................... 44
5. Résultats et discussion ............................................................................................................ 45
5.1 Surexpression du domaine PWWP de la DNMT3B............................................................ 45
5.2 Purification ........................................................................................................................ 46
5.3 Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ..................................................................... 51
5.4 Cristallogenèse .................................................................................................................. 57
5.5 Récupération des cristaux ................................................................................................. 60
Conclusion ................................................................................................................................... 63
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65860 Caractérisation d’inhibiteurs potentiels de l’interaction entre le domaine PWWP de la DNMT3B et le marqueur épigénétique H3K36me3 [TFE / Mémoire] / Fauve UITTERHAEGEN, Auteur ; Johan Wouters, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur laboratoire de chimie biologie structurale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage........................................................................................................ 6
Introduction .................................................................................................................................. 7
1. Contexte général ....................................................................................................................... 8
1.1 Chromatine .......................................................................................................................... 8
1.2 Épigénétique ....................................................................................................................... 9
1.2.1 Méthylation de l’ADN ................................................................................................. 10
ADN méthyltransférases ................................................................................................. 11
I Isoformes des DNMTs ............................................................................................... 11
II Structure des DNMTs ............................................................................................... 11
1.2.2 Domaine PWWP ......................................................................................................... 12
1.2.3 Modifications des histones ........................................................................................ 13
1.3 Cancer ................................................................................................................................ 14
1.4 Fonctions de méthylation de l’ADN dans le cancer .......................................................... 15
1.4.1 Répression des gènes suppresseurs de tumeurs ....................................................... 15
1.4.2 Activation d’oncogènes .............................................................................................. 16
Reconnaissance du domaine PWWP de la DNMT3B avec le marqueur épigénétique
H3K36me3 ....................................................................................................................... 17
1.4.3 Inhibiteurs des DNMTs ............................................................................................... 18
2. Objectifs et stratégie ............................................................................................................... 19
3. Principes des techniques ......................................................................................................... 20
3.1 Surexpression du domaine PWWP de la DNMT3B............................................................ 20
3.1.1 Plasmide ..................................................................................................................... 20
3.1.2 Préculture ................................................................................................................... 21
3.1.3 Culture et induction à l’IPTG ...................................................................................... 21
3.2 Purification ........................................................................................................................ 23
3.2.1 Lyse bactérienne ........................................................................................................ 23
3.2.2 Chromatographie d’affinité ........................................................................................ 23
3.2.3 Dialyse et clivage histag ............................................................................................. 25
3.2.4 Chromatographie échangeuse d’ions ........................................................................ 26
3.3 Mesure de la concentration en protéine .......................................................................... 27
3.4 Gel SDS-Page ..................................................................................................................... 28
3.5 Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ..................................................................... 30
5
3.6 Concentration de la protéine ............................................................................................ 31
3.7 Cristallogenèse .................................................................................................................. 32
3.7.1 Principes ..................................................................................................................... 32
3.8 Récupération des cristaux ................................................................................................. 34
3.9 Synchrotron soleil .............................................................................................................. 35
4. Matériel et Méthodes ............................................................................................................. 37
4.1 Surexpression du domaine PWWP de la DNMT3B............................................................ 37
4.1.1 Préculture ................................................................................................................... 37
4.1.2 Culture et induction à l’IPTG ...................................................................................... 37
4.2. Purification ....................................................................................................................... 38
4.2.1 Lyse bactérienne ........................................................................................................ 38
4.2.2 Chromatographie d’affinité 1 ..................................................................................... 38
4.2.3 Mesure de la concentration en protéine ................................................................... 39
4.2.4 Dialyse et clivage de l’histag ...................................................................................... 39
4.2.5 Chromatographie d’affinité 2 ..................................................................................... 40
4.2.6 Chromatographie échangeuse d’ions ........................................................................ 40
4.3 Gel SDS-Page ..................................................................................................................... 40
4.4 Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ..................................................................... 41
4.5 Cristallographie ................................................................................................................. 42
4.5.1 Concentration de la protéine ..................................................................................... 42
4.5.2 Conditions cristallographiques ................................................................................... 42
4.5.2.a Essais réalisés dans des boîtes 24 puits............................................................... 42
4.5.2.b Essais réalisés dans des plaques 96 puits ............................................................ 43
4.5.3 Récupération des cristaux .......................................................................................... 44
5. Résultats et discussion ............................................................................................................ 45
5.1 Surexpression du domaine PWWP de la DNMT3B............................................................ 45
5.2 Purification ........................................................................................................................ 46
5.3 Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ..................................................................... 51
5.4 Cristallogenèse .................................................................................................................. 57
5.5 Récupération des cristaux ................................................................................................. 60
Conclusion ................................................................................................................................... 63
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65860 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation morphologique de l’effet de la Propolis sur une plaie cutanée chez le rat / Xavier Blecha
Titre : Caractérisation morphologique de l’effet de la Propolis sur une plaie cutanée chez le rat Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Xavier Blecha, Auteur ; Charles Nicaise, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur URPhym Unité de recherche en physiologie moléculaire propolis plaie rat peau cicatrisation cutanée lésion cutanée immunomarquage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La peau est l’organe le plus superficiel du corps humain. Elle exerce plusieurs fonctions différentes et est composée de trois couches qui se superposent, l’épiderme, le derme et l’hypoderme. Le derme qui va nous intéresser dans ce travail est le tissu connectif de la peau, il est vascularisé et joue un rôle nutritif et de soutien. Il est composé de matrice extracellulaire qui contient les vaisseaux sanguins, les nerfs ainsi que les fibroblastes. Lorsque la peau est endommagée, celle-ci va se reformer dans un processus nommé cicatrisation. La cicatrisation est divisée en quatre phases : l’hémostase, la phase inflammatoire, la phase de prolifération et la phase de remodélisation. Lors de la cicatrisation, les fibroblastes et les myofibroblastes jouent un rôle important, ils vont sécréter le collagène et aider la cicatrice à se refermer. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes et l’effet qu’exercerait la Propolis sur cette repopulation. La Propolis est une substance produite par les abeilles qui possède un grand nombre de propriétés thérapeutiques.
Le but du travail est d’évaluer l’effet de la Propolis sur la cicatrisation cutanée et plus particulièrement sur la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes. Diverses techniques histologiques ont été utilisées comme des colorations topographiques (Hémalun-Eosine-Safran, Trichrome de Masson vert et le Rouge Picrosirius) ainsi que des immunomarquages spécifiques des fibroblastes et des myofibroblastes. Les immunomarquages sont dirigés contre la vimentine, qui est un marqueur des fibroblastes et des myofibroblastes, contre l’α-SMA qui est un marqueur des myofibroblastes et contre Iba-1 qui est un marqueur des macrophages et va nous permettre d’avoir une idée du processus inflammatoire.
Les résultats obtenus nous montrent que l’application de Propolis accélère de quelques heures la fermeture de la cicatrice au niveau macroscopique, comparativement à l’excipient seul (Macrogol). Ceci pourrait être expliqué par le fait que la Propolis stimule l’apparition des myofibroblastes qui vont jouer un rôle important dans la fermeture de la lésion. La Propolis augmente aussi le nombre de cellules vimentines positives au jour 7, c’est-à-dire au jour au il y a le plus de différence au niveau macroscopique. La Propolis agit sur la sécrétion du collagène, en effet, les fibres de collagène de type I des peaux traitées avec de la Propolis « récupèrent » plus rapidement leur orientation et en accélérant leur sécrétion. Enfin, la Propolis n’a pas d’effet apparent sur l’inflammation car aucune différence a été relevée entre les peaux traitées avec de la Propolis et les peaux traitées avec du Macrogol.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................................. 7
1. Introduction ..................................................................................................................................... 9
1.1 La peau .......................................................................................................................................... 9
1.1.1 L’épiderme ............................................................................................................................ 10
1.1.1.1 La couche basale ........................................................................................................ 10
1.1.1.2 La couche épineuse ................................................................................................... 11
1.1.1.3 La couche granuleuse .................................................................................................... 12
1.1.1.4 La couche cornée ........................................................................................................... 12
1.1.2 Le derme ............................................................................................................................... 13
1.1.2.1 Les fibroblastes .............................................................................................................. 13
1.1.2.2 Les myofibroblastes ....................................................................................................... 14
1.1.2.3 Le collagène ................................................................................................................... 15
1.2 La cicatrisation cutanée ............................................................................................................... 16
1.2.1. Généralités .......................................................................................................................... 16
1.2.2 L’hémostase .......................................................................................................................... 17
1.2.3 La phase inflammatoire ........................................................................................................ 19
1.2.4 La phase proliférative ........................................................................................................... 20
1.2.4.1 La réépithalisation ......................................................................................................... 20
1.2.4.2 La fibroplasie ................................................................................................................. 21
1.2.4.3 L’angiogenèse ................................................................................................................ 22
1.2.5 La phase de remodélisation ................................................................................................. 23
1.3 La Propolis ................................................................................................................................... 24
1.4. But du travail .............................................................................................................................. 25
2. Matériel et méthodes .................................................................................................................... 27
2.1 Animaux et modèle de lésion cutanée .................................................................................. 27
2.2. Histologie .................................................................................................................................... 28
2.2.1 Fixateur ................................................................................................................................. 28
2.2.2. Déshydratation et mise en paraffine des échantillons ........................................................ 28
2.2.3. Microtomisation et étalement des coupons sur lames ....................................................... 29
2.2.4. Coloration hématoxyline-éosine-safran (HES) .................................................................... 30
2.2.5. Coloration trichrome de Masson vert ................................................................................. 31
2.2.6. Coloration rouge picrosirius ................................................................................................ 32
2.2.4. Immunohistochimie ............................................................................................................ 33
2.2.7. Immunofluorescence ........................................................................................................... 36
3. Résultats ........................................................................................................................................ 39
3.1. Analyse macroscopique des plaies ............................................................................................. 39
3.2. Analyse microscopique des plaies .............................................................................................. 40
3.2.1. H.E.S ..................................................................................................................................... 40
3.2.2 Trichrome de Masson vert ................................................................................................... 43
3.2.3 Rouge picrosirius .................................................................................................................. 45
3.3. Immunomarquage de la vimentine ............................................................................................ 47
3.3.1. Révélation chromogénique ............................................................................................. 47
3.3.2 Quantification de la densité des cellules vimentine positive ........................................... 50
3.3.3. Immunofluorescence ....................................................................................................... 51
3.4. Immunomarquage de l’alpha SMA ......................................................................................... 51
3.4.1 Révélation chromogénique .............................................................................................. 51
3.4.2 Immunofluorescence ........................................................................................................ 54
3.5. Immunomarquage d’Iba 1 ...................................................................................................... 54
4. Discussion et perspectives ............................................................................................................ 57
Conclusion ............................................................................................................................................. 65
Liste des abréviations ............................................................................................................................ 67
Liste des figures ..................................................................................................................................... 69
Bibliographie.......................................................................................................................................... 71Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64855 Caractérisation morphologique de l’effet de la Propolis sur une plaie cutanée chez le rat [TFE / Mémoire] / Xavier Blecha, Auteur ; Charles Nicaise, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur URPhym Unité de recherche en physiologie moléculaire propolis plaie rat peau cicatrisation cutanée lésion cutanée immunomarquage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La peau est l’organe le plus superficiel du corps humain. Elle exerce plusieurs fonctions différentes et est composée de trois couches qui se superposent, l’épiderme, le derme et l’hypoderme. Le derme qui va nous intéresser dans ce travail est le tissu connectif de la peau, il est vascularisé et joue un rôle nutritif et de soutien. Il est composé de matrice extracellulaire qui contient les vaisseaux sanguins, les nerfs ainsi que les fibroblastes. Lorsque la peau est endommagée, celle-ci va se reformer dans un processus nommé cicatrisation. La cicatrisation est divisée en quatre phases : l’hémostase, la phase inflammatoire, la phase de prolifération et la phase de remodélisation. Lors de la cicatrisation, les fibroblastes et les myofibroblastes jouent un rôle important, ils vont sécréter le collagène et aider la cicatrice à se refermer. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes et l’effet qu’exercerait la Propolis sur cette repopulation. La Propolis est une substance produite par les abeilles qui possède un grand nombre de propriétés thérapeutiques.
Le but du travail est d’évaluer l’effet de la Propolis sur la cicatrisation cutanée et plus particulièrement sur la repopulation du lit cellulaire par les fibroblastes et les myofibroblastes. Diverses techniques histologiques ont été utilisées comme des colorations topographiques (Hémalun-Eosine-Safran, Trichrome de Masson vert et le Rouge Picrosirius) ainsi que des immunomarquages spécifiques des fibroblastes et des myofibroblastes. Les immunomarquages sont dirigés contre la vimentine, qui est un marqueur des fibroblastes et des myofibroblastes, contre l’α-SMA qui est un marqueur des myofibroblastes et contre Iba-1 qui est un marqueur des macrophages et va nous permettre d’avoir une idée du processus inflammatoire.
Les résultats obtenus nous montrent que l’application de Propolis accélère de quelques heures la fermeture de la cicatrice au niveau macroscopique, comparativement à l’excipient seul (Macrogol). Ceci pourrait être expliqué par le fait que la Propolis stimule l’apparition des myofibroblastes qui vont jouer un rôle important dans la fermeture de la lésion. La Propolis augmente aussi le nombre de cellules vimentines positives au jour 7, c’est-à-dire au jour au il y a le plus de différence au niveau macroscopique. La Propolis agit sur la sécrétion du collagène, en effet, les fibres de collagène de type I des peaux traitées avec de la Propolis « récupèrent » plus rapidement leur orientation et en accélérant leur sécrétion. Enfin, la Propolis n’a pas d’effet apparent sur l’inflammation car aucune différence a été relevée entre les peaux traitées avec de la Propolis et les peaux traitées avec du Macrogol.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................................. 7
1. Introduction ..................................................................................................................................... 9
1.1 La peau .......................................................................................................................................... 9
1.1.1 L’épiderme ............................................................................................................................ 10
1.1.1.1 La couche basale ........................................................................................................ 10
1.1.1.2 La couche épineuse ................................................................................................... 11
1.1.1.3 La couche granuleuse .................................................................................................... 12
1.1.1.4 La couche cornée ........................................................................................................... 12
1.1.2 Le derme ............................................................................................................................... 13
1.1.2.1 Les fibroblastes .............................................................................................................. 13
1.1.2.2 Les myofibroblastes ....................................................................................................... 14
1.1.2.3 Le collagène ................................................................................................................... 15
1.2 La cicatrisation cutanée ............................................................................................................... 16
1.2.1. Généralités .......................................................................................................................... 16
1.2.2 L’hémostase .......................................................................................................................... 17
1.2.3 La phase inflammatoire ........................................................................................................ 19
1.2.4 La phase proliférative ........................................................................................................... 20
1.2.4.1 La réépithalisation ......................................................................................................... 20
1.2.4.2 La fibroplasie ................................................................................................................. 21
1.2.4.3 L’angiogenèse ................................................................................................................ 22
1.2.5 La phase de remodélisation ................................................................................................. 23
1.3 La Propolis ................................................................................................................................... 24
1.4. But du travail .............................................................................................................................. 25
2. Matériel et méthodes .................................................................................................................... 27
2.1 Animaux et modèle de lésion cutanée .................................................................................. 27
2.2. Histologie .................................................................................................................................... 28
2.2.1 Fixateur ................................................................................................................................. 28
2.2.2. Déshydratation et mise en paraffine des échantillons ........................................................ 28
2.2.3. Microtomisation et étalement des coupons sur lames ....................................................... 29
2.2.4. Coloration hématoxyline-éosine-safran (HES) .................................................................... 30
2.2.5. Coloration trichrome de Masson vert ................................................................................. 31
2.2.6. Coloration rouge picrosirius ................................................................................................ 32
2.2.4. Immunohistochimie ............................................................................................................ 33
2.2.7. Immunofluorescence ........................................................................................................... 36
3. Résultats ........................................................................................................................................ 39
3.1. Analyse macroscopique des plaies ............................................................................................. 39
3.2. Analyse microscopique des plaies .............................................................................................. 40
3.2.1. H.E.S ..................................................................................................................................... 40
3.2.2 Trichrome de Masson vert ................................................................................................... 43
3.2.3 Rouge picrosirius .................................................................................................................. 45
3.3. Immunomarquage de la vimentine ............................................................................................ 47
3.3.1. Révélation chromogénique ............................................................................................. 47
3.3.2 Quantification de la densité des cellules vimentine positive ........................................... 50
3.3.3. Immunofluorescence ....................................................................................................... 51
3.4. Immunomarquage de l’alpha SMA ......................................................................................... 51
3.4.1 Révélation chromogénique .............................................................................................. 51
3.4.2 Immunofluorescence ........................................................................................................ 54
3.5. Immunomarquage d’Iba 1 ...................................................................................................... 54
4. Discussion et perspectives ............................................................................................................ 57
Conclusion ............................................................................................................................................. 65
Liste des abréviations ............................................................................................................................ 67
Liste des figures ..................................................................................................................................... 69
Bibliographie.......................................................................................................................................... 71Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64855 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Caractérisation du transcrit EGFL7/miR-126 dans un modèle de lymphome viro-induit chez le poulet / ELODIE DEBODT
Titre : Caractérisation du transcrit EGFL7/miR-126 dans un modèle de lymphome viro-induit chez le poulet Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : ELODIE DEBODT, Auteur ; Isabelle Gennart, Directeur de la recherche Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Unité de recherche vétérinaire intégrée URVI Volailles poulets : maladie Virus Maladie de Marek Virus GaHV-2 Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64284 Caractérisation du transcrit EGFL7/miR-126 dans un modèle de lymphome viro-induit chez le poulet [TFE / Mémoire] / ELODIE DEBODT, Auteur ; Isabelle Gennart, Directeur de la recherche . - 2015.
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Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Unité de recherche vétérinaire intégrée URVI Volailles poulets : maladie Virus Maladie de Marek Virus GaHV-2 Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64284 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Effets de la surexpression du microARN-126 dans le contexte de la maladie de Marek / Pauline PELLIN
Titre : Effets de la surexpression du microARN-126 dans le contexte de la maladie de Marek Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Pauline PELLIN, Auteur ; Isabelle Gennart, Directeur de la recherche ; Laeticia WIGGERS, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Unité de recherche vétérinaire intégrée. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
Présentation du lieu de stage ............................................................................................................ 12
Introduction ....................................................................................................................................... 14
Contexte général ................................................................................................................................ 18
1. La maladie de Marek ............................................................................................................... 18
1.1 Généralités ....................................................................................................................... 18
1.2 Le virus de la maladie de Marek ...................................................................................... 19
1.3 Cycle viral ......................................................................................................................... 20
2. Les microARN .......................................................................................................................... 22
2.1 Notions théoriques .......................................................................................................... 22
2.2 MiR-126............................................................................................................................ 25
Objectifs et stratégie .......................................................................................................................... 30
Matériels et méthodes ....................................................................................................................... 32
1. Culture cellulaire ..................................................................................................................... 32
1.1 La lignée cellulaire MSB-1 ................................................................................................ 32
2. Design d’amorces .................................................................................................................... 33
3. Système Tet ON ....................................................................................................................... 34
3.1 Les plasmides ................................................................................................................... 34
3.2 Système Tet-REX ou Tet-On ............................................................................................. 37
3.3 Construction plasmidique ................................................................................................ 38
3.4 Les antibiotiques .............................................................................................................. 38
4. Transfection de cellules eucaryotes........................................................................................ 40
5. Extraction et quantification d’ARN ......................................................................................... 43
6. Reverse-transcription-quantitative-PCR (RT-Q-PCR) .............................................................. 44
7. Etude du métabolisme cellulaire ............................................................................................ 46
8. Apoptose ................................................................................................................................. 48
8.1 Généralités ....................................................................................................................... 48
8.2 Perte d’asymétrie de la membrane plasmique ............................................................... 49
8.3 Fragmentation de l’ADN .................................................................................................. 51
Résultats ............................................................................................................................................. 52
1. Détermination de la concentration en blasticidine et zéocine nécessaire à la sélection cellulaire des MSB-1 ....................................................................................................................... 52
2. Etablissement de la lignée cellulaire stable avec les plasmides pcDNA6/TR et pcDNA4/T0 (Tet On system) .............................................................................................................................. 54
2.1 Etude de la transfection avec pcDNA6/TR ...................................................................... 54
2.2 Quantification relative de Tet R par RT-Q-PCR ................................................................ 56
2.3 Etude de la transfection avec pcDNA4/T0 ....................................................................... 57
3. Mise au point des conditions d’études de l’effet de miR-126 ................................................ 59
3.1 Etude de la prolifération et du métabolisme cellulaire ................................................... 59
3.2 Etude de l’apoptose ......................................................................................................... 62
Conclusion et perspectives ................................................................................................................ 70
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65848 Effets de la surexpression du microARN-126 dans le contexte de la maladie de Marek [TFE / Mémoire] / Pauline PELLIN, Auteur ; Isabelle Gennart, Directeur de la recherche ; Laeticia WIGGERS, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Unité de recherche vétérinaire intégrée. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
Présentation du lieu de stage ............................................................................................................ 12
Introduction ....................................................................................................................................... 14
Contexte général ................................................................................................................................ 18
1. La maladie de Marek ............................................................................................................... 18
1.1 Généralités ....................................................................................................................... 18
1.2 Le virus de la maladie de Marek ...................................................................................... 19
1.3 Cycle viral ......................................................................................................................... 20
2. Les microARN .......................................................................................................................... 22
2.1 Notions théoriques .......................................................................................................... 22
2.2 MiR-126............................................................................................................................ 25
Objectifs et stratégie .......................................................................................................................... 30
Matériels et méthodes ....................................................................................................................... 32
1. Culture cellulaire ..................................................................................................................... 32
1.1 La lignée cellulaire MSB-1 ................................................................................................ 32
2. Design d’amorces .................................................................................................................... 33
3. Système Tet ON ....................................................................................................................... 34
3.1 Les plasmides ................................................................................................................... 34
3.2 Système Tet-REX ou Tet-On ............................................................................................. 37
3.3 Construction plasmidique ................................................................................................ 38
3.4 Les antibiotiques .............................................................................................................. 38
4. Transfection de cellules eucaryotes........................................................................................ 40
5. Extraction et quantification d’ARN ......................................................................................... 43
6. Reverse-transcription-quantitative-PCR (RT-Q-PCR) .............................................................. 44
7. Etude du métabolisme cellulaire ............................................................................................ 46
8. Apoptose ................................................................................................................................. 48
8.1 Généralités ....................................................................................................................... 48
8.2 Perte d’asymétrie de la membrane plasmique ............................................................... 49
8.3 Fragmentation de l’ADN .................................................................................................. 51
Résultats ............................................................................................................................................. 52
1. Détermination de la concentration en blasticidine et zéocine nécessaire à la sélection cellulaire des MSB-1 ....................................................................................................................... 52
2. Etablissement de la lignée cellulaire stable avec les plasmides pcDNA6/TR et pcDNA4/T0 (Tet On system) .............................................................................................................................. 54
2.1 Etude de la transfection avec pcDNA6/TR ...................................................................... 54
2.2 Quantification relative de Tet R par RT-Q-PCR ................................................................ 56
2.3 Etude de la transfection avec pcDNA4/T0 ....................................................................... 57
3. Mise au point des conditions d’études de l’effet de miR-126 ................................................ 59
3.1 Etude de la prolifération et du métabolisme cellulaire ................................................... 59
3.2 Etude de l’apoptose ......................................................................................................... 62
Conclusion et perspectives ................................................................................................................ 70
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65848 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Étude ex vivo des effets directs de la mélatonine et du cortisol sur le système immunitaire du sandre Sander lucioperca / Marie Balau
PermalinkEtude des mécanismes de résistance de Caulobacter crescentus au cuivre / Esma ALPAN
PermalinkÉtude des systèmes de réponse aux stress d’enveloppe chez Brucella abortus / Marine Van Der Gucht
PermalinkEvaluation de la structure et de la fonction rénales dans des modèles murins de néphropathies expérimentales / Belinda VAIRA
PermalinkExpression de LAMP 2 dans le kératinocyte humain : détermination de l’influence de la vitamine D3 / Geoffroy VAN DESSEL
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