Centre de Documentation Campus Montignies
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Titre : |
Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux |
Type de document : |
TFE / Mémoire |
Auteurs : |
Coleen Delatte, Auteur ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche |
Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale |
Année de publication : |
2021 |
Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur |
Langues : |
Français (fre) |
Mots-clés : |
Notre-Dame de Grâce Gosselies |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Résumé : |
Ce travail de fin d’études fut réalisé au sein du laboratoire d’hématologie à l’hopital Notre-Dame de Grâce de Gossselies.Le sujet est l’analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux. Ces dernières années, la cytométrie en flux a beaucoup évoluée et permet à ce jour de diagnostiquer et de suivre de nombreuses hémopathies malignes et, plus particulièrement au laboratoire, les lymphomes. Cette technique est utilisée en complément d’une numération et d’un examen cytologique des cellules. Le cytomètre en flux permet d’obtenir différentes informations sur les cellules en passant devant un laser. Les données récoltées donnent des caractéristiques telles que la taille, la granularité ainsi que certains marqueurs antigéniques de chaque cellule individuellement. Lors de mon arrivée au sein du laboratoire, le cytomètre en flux Beckman Coulter Navios EX, fonctionnait avec un panel de cinq couleurs et un seul laser était utilisé. Mon travail de fin d’étude a permis, en complément du travail de Klara Kara de l’an dernier, de mettre au point un panel d’anticorps avec dix fluorochromes différents permettant de réaliser l’exploration simultanée de douze paramètres analysés avec 3 lasers. Ce présent travail compare l’ancien panel 5 couleurs et le nouveau panel 10 couleurs, étudie la répétabilité et la stabilité de ce panel. |
Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage............................................................................................. 7
Introduction générale ........................................................................................................ 8
1. La cytométrie en flux : ................................................................................................ 9
1.1. Principe général ..............................................................................................................9
1.1.1. Principe de focalisation hydrodynamique .....................................................................................10
1.1.2. Principe optique ............................................................................................................................11
1.1.3. Principe électronique ....................................................................................................................13
1.1.4. Les fluorochromes .........................................................................................................................14
1.1.5. Le chevauchement et les compensations spectrales ....................................................................15
1.1.6. Les marqueurs de différenciation..................................................................................................16
2. Automate Beckman Coulter Navios EX...................................................................... 17
3. Quand doit-on réaliser un immunophénotypage ? .................................................... 18
4. Comment interpréter un histogramme de cytométrie en flux ? ................................. 19
5. Les pathologies ........................................................................................................ 20
5.1. La lymphocytose B monoclonale ...................................................................................21
5.2. La leucémie lymphoïde chronique (LLC) ........................................................................21
5.3. La leucémie à tricholeucocytes......................................................................................25
6. Marqueurs utilisés pour le diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs des cellules B
chroniques ....................................................................................................................... 26
6.1. Modification du phénotypage à la suite d’un traitement...............................................29
7. Objectifs du travail de fin d’étude............................................................................. 30
8. Matériel et méthode de travail pour réaliser un immunophénotypage ..................... 31
8.1. Matériel utilisé..............................................................................................................31
8.2. Méthode.......................................................................................................................31
8.2.1. Mode opératoire[26] .......................................................................................................................32
9. Mise en place d’un panel dix couleurs....................................................................... 33
10. La répétabilité de la méthode ............................................................................... 36
11. La stabilité de la méthode..................................................................................... 38
12. Comparaison et discussion des résultats ............................................................... 43
13. Conclusion ............................................................................................................ 57
Glossaire.......................................................................................................................... 58
Abréviations .................................................................................................................... 59
Table des figures.............................................................................................................. 60
Table des tableaux........................................................................................................... 60
Bibliographie : ................................................................................................................. 61
Annexes ........................................................................................................................... 65 |
Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=100318 |
Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux [TFE / Mémoire] / Coleen Delatte, Auteur ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre)
Mots-clés : |
Notre-Dame de Grâce Gosselies |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Résumé : |
Ce travail de fin d’études fut réalisé au sein du laboratoire d’hématologie à l’hopital Notre-Dame de Grâce de Gossselies.Le sujet est l’analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux. Ces dernières années, la cytométrie en flux a beaucoup évoluée et permet à ce jour de diagnostiquer et de suivre de nombreuses hémopathies malignes et, plus particulièrement au laboratoire, les lymphomes. Cette technique est utilisée en complément d’une numération et d’un examen cytologique des cellules. Le cytomètre en flux permet d’obtenir différentes informations sur les cellules en passant devant un laser. Les données récoltées donnent des caractéristiques telles que la taille, la granularité ainsi que certains marqueurs antigéniques de chaque cellule individuellement. Lors de mon arrivée au sein du laboratoire, le cytomètre en flux Beckman Coulter Navios EX, fonctionnait avec un panel de cinq couleurs et un seul laser était utilisé. Mon travail de fin d’étude a permis, en complément du travail de Klara Kara de l’an dernier, de mettre au point un panel d’anticorps avec dix fluorochromes différents permettant de réaliser l’exploration simultanée de douze paramètres analysés avec 3 lasers. Ce présent travail compare l’ancien panel 5 couleurs et le nouveau panel 10 couleurs, étudie la répétabilité et la stabilité de ce panel. |
Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage............................................................................................. 7
Introduction générale ........................................................................................................ 8
1. La cytométrie en flux : ................................................................................................ 9
1.1. Principe général ..............................................................................................................9
1.1.1. Principe de focalisation hydrodynamique .....................................................................................10
1.1.2. Principe optique ............................................................................................................................11
1.1.3. Principe électronique ....................................................................................................................13
1.1.4. Les fluorochromes .........................................................................................................................14
1.1.5. Le chevauchement et les compensations spectrales ....................................................................15
1.1.6. Les marqueurs de différenciation..................................................................................................16
2. Automate Beckman Coulter Navios EX...................................................................... 17
3. Quand doit-on réaliser un immunophénotypage ? .................................................... 18
4. Comment interpréter un histogramme de cytométrie en flux ? ................................. 19
5. Les pathologies ........................................................................................................ 20
5.1. La lymphocytose B monoclonale ...................................................................................21
5.2. La leucémie lymphoïde chronique (LLC) ........................................................................21
5.3. La leucémie à tricholeucocytes......................................................................................25
6. Marqueurs utilisés pour le diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs des cellules B
chroniques ....................................................................................................................... 26
6.1. Modification du phénotypage à la suite d’un traitement...............................................29
7. Objectifs du travail de fin d’étude............................................................................. 30
8. Matériel et méthode de travail pour réaliser un immunophénotypage ..................... 31
8.1. Matériel utilisé..............................................................................................................31
8.2. Méthode.......................................................................................................................31
8.2.1. Mode opératoire[26] .......................................................................................................................32
9. Mise en place d’un panel dix couleurs....................................................................... 33
10. La répétabilité de la méthode ............................................................................... 36
11. La stabilité de la méthode..................................................................................... 38
12. Comparaison et discussion des résultats ............................................................... 43
13. Conclusion ............................................................................................................ 57
Glossaire.......................................................................................................................... 58
Abréviations .................................................................................................................... 59
Table des figures.............................................................................................................. 60
Table des tableaux........................................................................................................... 60
Bibliographie : ................................................................................................................. 61
Annexes ........................................................................................................................... 65 |
Permalink : |
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|
Exemplaires
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Les anticoagulants directs sous les projecteurs : quel(s) test(s) pour quelle molécule ? [TFE / Mémoire] / Anaïs LEFEVRE, Auteur . - 2014. Langues : Français ( fre) |
Exemplaires
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Les Campylobacter : Test antigénétique ou Culture ? Le dilemme… [TFE / Mémoire] / Marius MEBOUPYEWO, Auteur . - 2014. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre) |
Exemplaires
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Titre : |
CytoDiff™ de la formule sanguine et comparaison par rapport aux méthodes de références |
Type de document : |
TFE / Mémoire |
Auteurs : |
LEON NTHEUBISSE, Auteur |
Année de publication : |
2016 |
Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
Langues : |
Français (fre) |
Mots-clés : |
biologie médicale CNDG Gosselies hématopoïèse cytoDiff hémogramme formule leucocytaire hémopathie cytométrie en flux |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Note de contenu : |
Table des matières
Introduction ...................................................................................................................... 8
1 Hématopoïèse ........................................................................................................... 10
1.1 Définition...................................................................................................................................................10
1.2 Localisation ...............................................................................................................................................10
1.3 Mécanisme de différenciation...................................................................................................................11
1.3.1 Les cellules souches hématopoïétiques ...............................................................................................11
1.3.2 Les progéniteurs ...................................................................................................................................11
1.3.3 Les précurseurs .....................................................................................................................................11
1.4 Régulation .................................................................................................................................................12
1.4.1 Les facteurs de croissance CSF (Colony Stimulating Factors) ...............................................................13
1.4.2 Le microenvironnement médullaire .....................................................................................................13
1.4.3 Les facteurs de régulation négatifs.......................................................................................................13
1.5 Importance clinique ..................................................................................................................................13
2 Hémogramme et formule leucocytaire ...................................................................... 14
2.1 Eléments figurés du sang .........................................................................................................................14
2.2 Valeurs de références ................................................................................................................................16
2.3 Formule leucocytaire et variations ............................................................................................................17
2.4 Validation de l’hémogramme ...................................................................................................................17
3 Quelques hémopathies malignes ............................................................................... 18
3.1 Leucémie aiguë .........................................................................................................................................18
3.1.1 Leucémies myéloïdes aiguës ................................................................................................................18
3.1.2 Leucémies lymphoblastiques aigües ....................................................................................................19
3.1.3 Manifestations cliniques.......................................................................................................................19
3.2 La leucémie myéloïde chronique ...............................................................................................................19
3.3 La maladie de Vaquez ou polyglobulie primitive : .....................................................................................20
3.4 La splénomégalie myéloïde ou myélofibrose primitive .............................................................................21
3.5 Les lymphomes ..........................................................................................................................................21
4 Automates ................................................................................................................ 21
4.1 Analyseur hématologique (cas du Coulter DxH800) .................................................................................21
4.2 Principe de l’ACCUCOUNT [7] ....................................................................................................................22
4.2.1 Numération leucocytaire ......................................................................................................................22
4.2.2 Numération des globules rouges ..........................................................................................................22
4.2.3 Formule leucocytaire ............................................................................................................................23
4.2.4 Numération des plaquettes ..................................................................................................................23
5 Cellavision ................................................................................................................ 23
6 Cytométrie en flux .................................................................................................... 23
6.1 Principe .....................................................................................................................................................23
6.1.1 La partie fluidique : ...............................................................................................................................24
6.1.2 La partie optique et électronique .........................................................................................................24
6.1.3 Compensations de fluorescence ..........................................................................................................25
6.1.4 La partie informatique ..........................................................................................................................25
7 Réactif CytoDiff™ ...................................................................................................... 26
7.1 Rôle ...........................................................................................................................................................26
7.2 Principe .....................................................................................................................................................26
7.3 Les marqueurs ...........................................................................................................................................26
8 Matériels et méthodes .............................................................................................. 36
8.1 Coulter DxH800 .........................................................................................................................................36
8.2 Cytomic FC 500 ..........................................................................................................................................37
8.3 Microscopie ...............................................................................................................................................40
8.4 Cellavision .................................................................................................................................................41
9 Résultats et Discussion .............................................................................................. 43
9.1 Patients normaux ......................................................................................................................................43
9.1.1 Déterminations des valeurs de références ..........................................................................................43
9.1.2 Corrélation entre CytoDiff™ - DxH800, CytoDiff™- Cellavision, CytoDiff™- microscopie .....................44
9.2 Patients pathologiques .............................................................................................................................45
9.3 Répétabilité du CytoDiff™ .........................................................................................................................46
9.4 Stabilité du CytoDiff™ ...............................................................................................................................48
9.5 Évaluation du CytoDiff™............................................................................................................................49
Conclusion générale ......................................................................................................... 50
Bibliographie ................................................................................................................... 51
Tables des illustrations..................................................................................................... 53
Table des figures ....................................................................................................................................................53
Table des tableaux .................................................................................................................................................54
Table des annexes ...... 54 |
Permalink : |
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CytoDiff™ de la formule sanguine et comparaison par rapport aux méthodes de références [TFE / Mémoire] / LEON NTHEUBISSE, Auteur . - 2016. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
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biologie médicale CNDG Gosselies hématopoïèse cytoDiff hémogramme formule leucocytaire hémopathie cytométrie en flux |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Note de contenu : |
Table des matières
Introduction ...................................................................................................................... 8
1 Hématopoïèse ........................................................................................................... 10
1.1 Définition...................................................................................................................................................10
1.2 Localisation ...............................................................................................................................................10
1.3 Mécanisme de différenciation...................................................................................................................11
1.3.1 Les cellules souches hématopoïétiques ...............................................................................................11
1.3.2 Les progéniteurs ...................................................................................................................................11
1.3.3 Les précurseurs .....................................................................................................................................11
1.4 Régulation .................................................................................................................................................12
1.4.1 Les facteurs de croissance CSF (Colony Stimulating Factors) ...............................................................13
1.4.2 Le microenvironnement médullaire .....................................................................................................13
1.4.3 Les facteurs de régulation négatifs.......................................................................................................13
1.5 Importance clinique ..................................................................................................................................13
2 Hémogramme et formule leucocytaire ...................................................................... 14
2.1 Eléments figurés du sang .........................................................................................................................14
2.2 Valeurs de références ................................................................................................................................16
2.3 Formule leucocytaire et variations ............................................................................................................17
2.4 Validation de l’hémogramme ...................................................................................................................17
3 Quelques hémopathies malignes ............................................................................... 18
3.1 Leucémie aiguë .........................................................................................................................................18
3.1.1 Leucémies myéloïdes aiguës ................................................................................................................18
3.1.2 Leucémies lymphoblastiques aigües ....................................................................................................19
3.1.3 Manifestations cliniques.......................................................................................................................19
3.2 La leucémie myéloïde chronique ...............................................................................................................19
3.3 La maladie de Vaquez ou polyglobulie primitive : .....................................................................................20
3.4 La splénomégalie myéloïde ou myélofibrose primitive .............................................................................21
3.5 Les lymphomes ..........................................................................................................................................21
4 Automates ................................................................................................................ 21
4.1 Analyseur hématologique (cas du Coulter DxH800) .................................................................................21
4.2 Principe de l’ACCUCOUNT [7] ....................................................................................................................22
4.2.1 Numération leucocytaire ......................................................................................................................22
4.2.2 Numération des globules rouges ..........................................................................................................22
4.2.3 Formule leucocytaire ............................................................................................................................23
4.2.4 Numération des plaquettes ..................................................................................................................23
5 Cellavision ................................................................................................................ 23
6 Cytométrie en flux .................................................................................................... 23
6.1 Principe .....................................................................................................................................................23
6.1.1 La partie fluidique : ...............................................................................................................................24
6.1.2 La partie optique et électronique .........................................................................................................24
6.1.3 Compensations de fluorescence ..........................................................................................................25
6.1.4 La partie informatique ..........................................................................................................................25
7 Réactif CytoDiff™ ...................................................................................................... 26
7.1 Rôle ...........................................................................................................................................................26
7.2 Principe .....................................................................................................................................................26
7.3 Les marqueurs ...........................................................................................................................................26
8 Matériels et méthodes .............................................................................................. 36
8.1 Coulter DxH800 .........................................................................................................................................36
8.2 Cytomic FC 500 ..........................................................................................................................................37
8.3 Microscopie ...............................................................................................................................................40
8.4 Cellavision .................................................................................................................................................41
9 Résultats et Discussion .............................................................................................. 43
9.1 Patients normaux ......................................................................................................................................43
9.1.1 Déterminations des valeurs de références ..........................................................................................43
9.1.2 Corrélation entre CytoDiff™ - DxH800, CytoDiff™- Cellavision, CytoDiff™- microscopie .....................44
9.2 Patients pathologiques .............................................................................................................................45
9.3 Répétabilité du CytoDiff™ .........................................................................................................................46
9.4 Stabilité du CytoDiff™ ...............................................................................................................................48
9.5 Évaluation du CytoDiff™............................................................................................................................49
Conclusion générale ......................................................................................................... 50
Bibliographie ................................................................................................................... 51
Tables des illustrations..................................................................................................... 53
Table des figures ....................................................................................................................................................53
Table des tableaux .................................................................................................................................................54
Table des annexes ...... 54 |
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Exemplaires
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Le dépistage systématique des hémoglobinopathies sur sang de cordon par la méthode de Capillarys [TFE / Mémoire] / Jullyan NITELET, Auteur . - 2012. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre) |
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