Centre de Documentation Campus Montignies
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Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
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Auteur Pauline PELLIN |
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Effets de la surexpression du microARN-126 dans le contexte de la maladie de Marek / Pauline PELLIN
Titre : Effets de la surexpression du microARN-126 dans le contexte de la maladie de Marek Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Pauline PELLIN, Auteur ; Isabelle Gennart, Directeur de la recherche ; Laeticia WIGGERS, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Unité de recherche vétérinaire intégrée. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
Présentation du lieu de stage ............................................................................................................ 12
Introduction ....................................................................................................................................... 14
Contexte général ................................................................................................................................ 18
1. La maladie de Marek ............................................................................................................... 18
1.1 Généralités ....................................................................................................................... 18
1.2 Le virus de la maladie de Marek ...................................................................................... 19
1.3 Cycle viral ......................................................................................................................... 20
2. Les microARN .......................................................................................................................... 22
2.1 Notions théoriques .......................................................................................................... 22
2.2 MiR-126............................................................................................................................ 25
Objectifs et stratégie .......................................................................................................................... 30
Matériels et méthodes ....................................................................................................................... 32
1. Culture cellulaire ..................................................................................................................... 32
1.1 La lignée cellulaire MSB-1 ................................................................................................ 32
2. Design d’amorces .................................................................................................................... 33
3. Système Tet ON ....................................................................................................................... 34
3.1 Les plasmides ................................................................................................................... 34
3.2 Système Tet-REX ou Tet-On ............................................................................................. 37
3.3 Construction plasmidique ................................................................................................ 38
3.4 Les antibiotiques .............................................................................................................. 38
4. Transfection de cellules eucaryotes........................................................................................ 40
5. Extraction et quantification d’ARN ......................................................................................... 43
6. Reverse-transcription-quantitative-PCR (RT-Q-PCR) .............................................................. 44
7. Etude du métabolisme cellulaire ............................................................................................ 46
8. Apoptose ................................................................................................................................. 48
8.1 Généralités ....................................................................................................................... 48
8.2 Perte d’asymétrie de la membrane plasmique ............................................................... 49
8.3 Fragmentation de l’ADN .................................................................................................. 51
Résultats ............................................................................................................................................. 52
1. Détermination de la concentration en blasticidine et zéocine nécessaire à la sélection cellulaire des MSB-1 ....................................................................................................................... 52
2. Etablissement de la lignée cellulaire stable avec les plasmides pcDNA6/TR et pcDNA4/T0 (Tet On system) .............................................................................................................................. 54
2.1 Etude de la transfection avec pcDNA6/TR ...................................................................... 54
2.2 Quantification relative de Tet R par RT-Q-PCR ................................................................ 56
2.3 Etude de la transfection avec pcDNA4/T0 ....................................................................... 57
3. Mise au point des conditions d’études de l’effet de miR-126 ................................................ 59
3.1 Etude de la prolifération et du métabolisme cellulaire ................................................... 59
3.2 Etude de l’apoptose ......................................................................................................... 62
Conclusion et perspectives ................................................................................................................ 70
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65848 Effets de la surexpression du microARN-126 dans le contexte de la maladie de Marek [TFE / Mémoire] / Pauline PELLIN, Auteur ; Isabelle Gennart, Directeur de la recherche ; Laeticia WIGGERS, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Unité de recherche vétérinaire intégrée. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
Présentation du lieu de stage ............................................................................................................ 12
Introduction ....................................................................................................................................... 14
Contexte général ................................................................................................................................ 18
1. La maladie de Marek ............................................................................................................... 18
1.1 Généralités ....................................................................................................................... 18
1.2 Le virus de la maladie de Marek ...................................................................................... 19
1.3 Cycle viral ......................................................................................................................... 20
2. Les microARN .......................................................................................................................... 22
2.1 Notions théoriques .......................................................................................................... 22
2.2 MiR-126............................................................................................................................ 25
Objectifs et stratégie .......................................................................................................................... 30
Matériels et méthodes ....................................................................................................................... 32
1. Culture cellulaire ..................................................................................................................... 32
1.1 La lignée cellulaire MSB-1 ................................................................................................ 32
2. Design d’amorces .................................................................................................................... 33
3. Système Tet ON ....................................................................................................................... 34
3.1 Les plasmides ................................................................................................................... 34
3.2 Système Tet-REX ou Tet-On ............................................................................................. 37
3.3 Construction plasmidique ................................................................................................ 38
3.4 Les antibiotiques .............................................................................................................. 38
4. Transfection de cellules eucaryotes........................................................................................ 40
5. Extraction et quantification d’ARN ......................................................................................... 43
6. Reverse-transcription-quantitative-PCR (RT-Q-PCR) .............................................................. 44
7. Etude du métabolisme cellulaire ............................................................................................ 46
8. Apoptose ................................................................................................................................. 48
8.1 Généralités ....................................................................................................................... 48
8.2 Perte d’asymétrie de la membrane plasmique ............................................................... 49
8.3 Fragmentation de l’ADN .................................................................................................. 51
Résultats ............................................................................................................................................. 52
1. Détermination de la concentration en blasticidine et zéocine nécessaire à la sélection cellulaire des MSB-1 ....................................................................................................................... 52
2. Etablissement de la lignée cellulaire stable avec les plasmides pcDNA6/TR et pcDNA4/T0 (Tet On system) .............................................................................................................................. 54
2.1 Etude de la transfection avec pcDNA6/TR ...................................................................... 54
2.2 Quantification relative de Tet R par RT-Q-PCR ................................................................ 56
2.3 Etude de la transfection avec pcDNA4/T0 ....................................................................... 57
3. Mise au point des conditions d’études de l’effet de miR-126 ................................................ 59
3.1 Etude de la prolifération et du métabolisme cellulaire ................................................... 59
3.2 Etude de l’apoptose ......................................................................................................... 62
Conclusion et perspectives ................................................................................................................ 70
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