Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h30-18h30
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| Titre : |
Authentification de l’origine des boyaux de porc par analyse protéomique |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Camille Boucher, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de la recherche |
| Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie |
| Année de publication : |
2022 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur |
| Langues : |
Français (fre) |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
L’étude des protéines d’un organisme, la protéomique, est une science qui ne cesse d’être développée. La spectrométrie de masse contribue grandement à ce développement. C’est une technique d’analyse qui permet de fragmenter une molécule d’intérêt en ions qui sont ensuite filtrés en fonction de leur rapport masse sur charge.
Un certain nombre de collagènes et de gélatines ont été préparés afin d’être analysés par cet instrument. Les protéines de ces échantillons ont été digérées par de la trypsine selon le protocole de routine utilisé au sein du CRA-W. Cette analyse a pour but d’identifier des peptides spécifiques au collagène de porc (Sus scrofa). Ces peptides pourraient être utilisés pour l’authentification des boyaux de porc.
Le deuxième objectif du stage était de mettre au point une technique innovante de prélèvement des protéines. Pour cela, c’est une technique de gommage qui a été adaptée aux boyaux de saucissons. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................9
Introduction générale ............................................................................................................ 11
1. Contexte général ............................................................................................................... 12
1.1. Une étude protéomique, qu’est ce que c’est ?.......................................................... 12
1.1.1. Définition de la protéomique ........................................................................... 12
1.1.2. Qu’est ce qu’une protéine ................................................................................ 12
1.2. Du collagène aux boyaux, en passant par la gélatine ............................................... 14
1.2.1. Le collagène .................................................................................................... 14
1.2.2. Les gélatines.................................................................................................... 16
1.2.3. Les saucissons et leurs boyaux ........................................................................ 17
1.3. Spectrométrie de masse (MS) ................................................................................. 20
1.3.1. Notions spécifiques en MS .............................................................................. 20
1.3.2. Principe général du spectromètre de masse ...................................................... 21
1.3.3. Les sources d’ions ........................................................................................... 22
1.3.4. Les analyseurs ................................................................................................. 23
2. Objectifs et stratégie ......................................................................................................... 26
3. Matériel et Méthode .......................................................................................................... 27
3.1. Règles de Laboratoire spécifiques à la spectrométrie de masse ............................... 27
3.2. Présentation des échantillons .................................................................................. 27
3.2.1. Collagènes, gélatines et saucissons ..................................................................27
3.3. Préparation des échantillons ................................................................................... 29
3.3.1. Prise d’essai et pré-traitement .......................................................................... 29
3.3.2. Extraction........................................................................................................ 31
3.3.3. Digestion ......................................................................................................... 32
3.3.4. Purification...................................................................................................... 32
3.3.5. Evaporation ..................................................................................................... 34
3.4. Dosage Pierce ......................................................................................................... 35
3.4.1. Principe théorique ........................................................................................... 35
3.4.2. Application...................................................................................................... 35
3.5. Analyses par spectrométrie de masse ...................................................................... 37
3.5.1. Haute résolution .............................................................................................. 37
3.5.2. Basse résolution .............................................................................................. 38
4. Résultats et discussions ..................................................................................................... 40
4.1. Dosage Pierce ......................................................................................................... 40
4.1.1. Collagènes, gélatines et saucissons ..................................................................40
4.1.2. Test de gommage ............................................................................................ 42
4.2. HRMS .................................................................................................................... 44
4.2.1. Recherche de peptides spécifiques au porc (Sus scrofa) ...................................44
4.3. LRMS ........................................................................................................................ 52
4.2.2. Biomarqueurs recherchés................................................................................. 52
4.2.3. Résultats des collagènes, gélatines et boyaux ................................................... 52
4.2.4. Résultats du test de gommage .......................................................................... 57
Conclusion générale ............................................................................................................. 59
Abréviations 60
Listes des figures et tableaux ................................................................................................ 61
Figures .............................................................................................................................. 61
Tableaux ........................................................................................................................... 62
Bibliographie ................................................................................................................. 63
Annexes ......................................................................................................................
|
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=105992 |
Authentification de l’origine des boyaux de porc par analyse protéomique [TFE / Mémoire] / Camille Boucher, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2022. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre)
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
L’étude des protéines d’un organisme, la protéomique, est une science qui ne cesse d’être développée. La spectrométrie de masse contribue grandement à ce développement. C’est une technique d’analyse qui permet de fragmenter une molécule d’intérêt en ions qui sont ensuite filtrés en fonction de leur rapport masse sur charge.
Un certain nombre de collagènes et de gélatines ont été préparés afin d’être analysés par cet instrument. Les protéines de ces échantillons ont été digérées par de la trypsine selon le protocole de routine utilisé au sein du CRA-W. Cette analyse a pour but d’identifier des peptides spécifiques au collagène de porc (Sus scrofa). Ces peptides pourraient être utilisés pour l’authentification des boyaux de porc.
Le deuxième objectif du stage était de mettre au point une technique innovante de prélèvement des protéines. Pour cela, c’est une technique de gommage qui a été adaptée aux boyaux de saucissons. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................9
Introduction générale ............................................................................................................ 11
1. Contexte général ............................................................................................................... 12
1.1. Une étude protéomique, qu’est ce que c’est ?.......................................................... 12
1.1.1. Définition de la protéomique ........................................................................... 12
1.1.2. Qu’est ce qu’une protéine ................................................................................ 12
1.2. Du collagène aux boyaux, en passant par la gélatine ............................................... 14
1.2.1. Le collagène .................................................................................................... 14
1.2.2. Les gélatines.................................................................................................... 16
1.2.3. Les saucissons et leurs boyaux ........................................................................ 17
1.3. Spectrométrie de masse (MS) ................................................................................. 20
1.3.1. Notions spécifiques en MS .............................................................................. 20
1.3.2. Principe général du spectromètre de masse ...................................................... 21
1.3.3. Les sources d’ions ........................................................................................... 22
1.3.4. Les analyseurs ................................................................................................. 23
2. Objectifs et stratégie ......................................................................................................... 26
3. Matériel et Méthode .......................................................................................................... 27
3.1. Règles de Laboratoire spécifiques à la spectrométrie de masse ............................... 27
3.2. Présentation des échantillons .................................................................................. 27
3.2.1. Collagènes, gélatines et saucissons ..................................................................27
3.3. Préparation des échantillons ................................................................................... 29
3.3.1. Prise d’essai et pré-traitement .......................................................................... 29
3.3.2. Extraction........................................................................................................ 31
3.3.3. Digestion ......................................................................................................... 32
3.3.4. Purification...................................................................................................... 32
3.3.5. Evaporation ..................................................................................................... 34
3.4. Dosage Pierce ......................................................................................................... 35
3.4.1. Principe théorique ........................................................................................... 35
3.4.2. Application...................................................................................................... 35
3.5. Analyses par spectrométrie de masse ...................................................................... 37
3.5.1. Haute résolution .............................................................................................. 37
3.5.2. Basse résolution .............................................................................................. 38
4. Résultats et discussions ..................................................................................................... 40
4.1. Dosage Pierce ......................................................................................................... 40
4.1.1. Collagènes, gélatines et saucissons ..................................................................40
4.1.2. Test de gommage ............................................................................................ 42
4.2. HRMS .................................................................................................................... 44
4.2.1. Recherche de peptides spécifiques au porc (Sus scrofa) ...................................44
4.3. LRMS ........................................................................................................................ 52
4.2.2. Biomarqueurs recherchés................................................................................. 52
4.2.3. Résultats des collagènes, gélatines et boyaux ................................................... 52
4.2.4. Résultats du test de gommage .......................................................................... 57
Conclusion générale ............................................................................................................. 59
Abréviations 60
Listes des figures et tableaux ................................................................................................ 61
Figures .............................................................................................................................. 61
Tableaux ........................................................................................................................... 62
Bibliographie ................................................................................................................. 63
Annexes ......................................................................................................................
|
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=105992 |
|
Exemplaires
| Titre : |
Création et mise en place d’analyses sensorielles |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Abib Driss, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de la recherche |
| Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie |
| Année de publication : |
2021 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
Diabeticom industrie agroalimentaire Tests sensoriels |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
Diabeticom s.a est une entreprise agro-alimentaire produisant des chips soufflées à l’air chaud. Elle collabore avec ses nombreux clients et répond à une grande partie de la demande du marché. Pour atteindre les exigences des partenaires et des consommateurs, le contrôle sensoriel est essentiel.
La première partie du travail comporte deux grands thèmes. D’une part, les sens, et ce compris leurs fonctionnements et leurs rôles. D’autre part, les tests sensoriels avec les installations, les recrutements et les différents types d’épreuves. La seconde partie présente les objectifs et stratégies : la recherche des critères, les essais, la formation des panélistes.
En conclusion, l’outil mis en place est une première version qui répond à certaines obligations. Il permet une meilleure rectification des non-conformités. Il sera ensuite possible d’en étoffer les critères de contrôle et ce TFE pourrait servir d’appui à cette évolution. |
| Note de contenu : |
REMERCIEMENTS 4
PRESENTATION DE L’ENTREPRISE 7
INTRODUCTION 8
PARTIE THEORIQUE 10
1 Les sens 10
1.1 Le Goût 10
1.1.1 La perception du goût 10
1.1.2 La salive 17
1.2 La vue 18
1.2.1 Perception du visible 19
1.3 L’odorat 20
1.3.1 Les odeurs 20
1.3.2 Les arômes 20
1.3.3 L’olfaction et la perception des odeurs 21
2 Les tests sensoriels 23
2.1 Les installations 23
2.2 L’outillage 25
2.3 Recrutement des dégustateurs 25
2.4 Les épreuves discriminatives 26
2.4.1 Le test triangulaire 26
2.4.2 Le duo-trio 27
2.4.3 Le A-non A 27
2.4.4 P parmi n 28
2.5 Les épreuves descriptives : test de classement 28
2.5.1 L’épreuve de cotation 29
2.5.2 L’épreuve d’intervalle 29
3 Objectif et stratégie 31
PARTIE PRATIQUE 32
1. Mise en place des analyses sensorielles en management 32
1.1. Les critères de dégustations 32
1.2. Le recrutement 34
1.3. Les essais 36
1.3.1. Essai 1 36
1.3.2. Essai 2 38
1.3.3. Essai 3 39
1.3.4. Essai final 40
2. Mise en place des analyses sensorielles en production 43
3. Formation du personnel 45
CONCLUSION 46
GLOSSAIRE 47
TABLE DES FIGURES 49
TABLE DES TABLEAUX 49
BIBLIOGRAPHIE 50
TABLES DES ANNEXES 53 |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=99936 |
Création et mise en place d’analyses sensorielles [TFE / Mémoire] / Abib Driss, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
Diabeticom industrie agroalimentaire Tests sensoriels |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
Diabeticom s.a est une entreprise agro-alimentaire produisant des chips soufflées à l’air chaud. Elle collabore avec ses nombreux clients et répond à une grande partie de la demande du marché. Pour atteindre les exigences des partenaires et des consommateurs, le contrôle sensoriel est essentiel.
La première partie du travail comporte deux grands thèmes. D’une part, les sens, et ce compris leurs fonctionnements et leurs rôles. D’autre part, les tests sensoriels avec les installations, les recrutements et les différents types d’épreuves. La seconde partie présente les objectifs et stratégies : la recherche des critères, les essais, la formation des panélistes.
En conclusion, l’outil mis en place est une première version qui répond à certaines obligations. Il permet une meilleure rectification des non-conformités. Il sera ensuite possible d’en étoffer les critères de contrôle et ce TFE pourrait servir d’appui à cette évolution. |
| Note de contenu : |
REMERCIEMENTS 4
PRESENTATION DE L’ENTREPRISE 7
INTRODUCTION 8
PARTIE THEORIQUE 10
1 Les sens 10
1.1 Le Goût 10
1.1.1 La perception du goût 10
1.1.2 La salive 17
1.2 La vue 18
1.2.1 Perception du visible 19
1.3 L’odorat 20
1.3.1 Les odeurs 20
1.3.2 Les arômes 20
1.3.3 L’olfaction et la perception des odeurs 21
2 Les tests sensoriels 23
2.1 Les installations 23
2.2 L’outillage 25
2.3 Recrutement des dégustateurs 25
2.4 Les épreuves discriminatives 26
2.4.1 Le test triangulaire 26
2.4.2 Le duo-trio 27
2.4.3 Le A-non A 27
2.4.4 P parmi n 28
2.5 Les épreuves descriptives : test de classement 28
2.5.1 L’épreuve de cotation 29
2.5.2 L’épreuve d’intervalle 29
3 Objectif et stratégie 31
PARTIE PRATIQUE 32
1. Mise en place des analyses sensorielles en management 32
1.1. Les critères de dégustations 32
1.2. Le recrutement 34
1.3. Les essais 36
1.3.1. Essai 1 36
1.3.2. Essai 2 38
1.3.3. Essai 3 39
1.3.4. Essai final 40
2. Mise en place des analyses sensorielles en production 43
3. Formation du personnel 45
CONCLUSION 46
GLOSSAIRE 47
TABLE DES FIGURES 49
TABLE DES TABLEAUX 49
BIBLIOGRAPHIE 50
TABLES DES ANNEXES 53 |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=99936 |
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Exemplaires
| Titre : |
Dépistage et suivi de la maladie de la diarrhée virale bovine dans le département du Nord |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Oceane Parmentier, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de la recherche |
| Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie |
| Année de publication : |
2023 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
laboratoire Départemental Public du Nord |
| Index. décimale : |
TFE TA TFE Technologie animalière |
| Résumé : |
La maladie de la diarrhée virale bovine (BVD) est le sujet de ce travail. On développe la description de cette maladie en expliquant que c’est une maladie virale découverte en 1946 qui touche tous les ruminants. Ce travail décrit les cas observés chez les bovins plus précisément. L’objectif est d’informer sur cette maladie qui est peu connue par le grand public en appuyant sur l’importance épidémiologique. Il y a aussi l’explication des méthodes de dépistage avec leurs interprétations. En effet, le dépistage se réalise par des analyses ELISA et PCR.
L’éradication de cette maladie est réalisable grâce au plan de lutte international qui a été rendu obligatoire par l’arrêté ministériel en date du 31 juillet 2019. Ce programme d’éradication est toujours d’actualité puisque la phase 1 n’est pas encore terminée et il reste encore deux phases après celui-ci.
Des analyses sérologiques et virologiques sont réalisées à partir des boucles auriculaires ou avec des prises de sang. Des tests ELISA et PCR sont employés pour détecter la maladie. Les animaux IPI doivent être abattus dans les quinze jours. Une vaccination est actuellement possible. Celle-ci empêche la transmission in-utéro et protège également les animaux contre la forme aigue.
Pour aider les éleveurs à surmonter cette maladie qui engendre des pertes économiques importantes, le GDS aide financièrement pour le dépistage et l’abattage des animaux positifs.
Les coûts engendrés par cette maladie dépendent de la durée nécessaire à l’éradication complète du BVD. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements…………………………………………………………………………………………………………………..3
Introduction générale .......................................................................................................... 5
1. Introduction.................................................................................................................. 6
1.1 Présentation du lieu de stage ............................................................................................................... 6
1.2 Introduction bibliographique ............................................................................................................... 8
1.2.1 Description de la diarrhée bovine virale ............................................................................ 8
1.2.2 Les IPI « Infectés Permanents Immunotolérants » ............................................................ 9
1.2.3 La pathogénie ................................................................................................................... 11
1.2.4 L’impact économique ....................................................................................................... 12
1.2.5 Programme d’éradication de la BVD ................................................................................ 13
1.2.6 Prélèvements d’échantillons ............................................................................................ 16
2. Objectifs et stratégies ................................................................................................. 18
3. Matériel et méthode ................................................................................................... 18
3.1 Extraction et enregistrement des biopsies......................................................................................... 19
3.2 Elisa..................................................................................................................................................... 19
3.2.1 Analyse avec le kit BVD antigène ..................................................................................... 21
3.2.2 Critère de validation ELISA ............................................................................................... 23
3.2.3 Les résultats ELISA ............................................................................................................ 25
3.3 PCR................................................................................................................................................ 27
3.3.1 Principes de la PCR ........................................................................................................... 27
3.3.2 La PCR appliquée à la BVD ................................................................................................ 31
3.3.3 Critère de validation PCR .................................................................................................. 34
3.3.4 Résultat de la PCR............................................................................................................. 35
4. Résultats et discussions............................................................................................... 38
4.1 Analyses réalisées au laboratoire pour le programme d’éradication. ............................................... 38
4.2 Analyses réalisées au laboratoire pour détecter la BVD en dehors du programme d’éradication.... 40
4.3 Carte de contrôle................................................................................................................................ 43
Conclusions & perspectives ................................................................................................ 44
Glossaire ........................................................................................................................... 46
Liste des abréviations ....................................................................................................... 48
Bibliographie ..................................................................................................................... 49
Annexe ............................................................................................................................. 55
Résumé ………………………….…………………………………………………………………………………………………64 |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=112609 |
Dépistage et suivi de la maladie de la diarrhée virale bovine dans le département du Nord [TFE / Mémoire] / Oceane Parmentier, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2023. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
laboratoire Départemental Public du Nord |
| Index. décimale : |
TFE TA TFE Technologie animalière |
| Résumé : |
La maladie de la diarrhée virale bovine (BVD) est le sujet de ce travail. On développe la description de cette maladie en expliquant que c’est une maladie virale découverte en 1946 qui touche tous les ruminants. Ce travail décrit les cas observés chez les bovins plus précisément. L’objectif est d’informer sur cette maladie qui est peu connue par le grand public en appuyant sur l’importance épidémiologique. Il y a aussi l’explication des méthodes de dépistage avec leurs interprétations. En effet, le dépistage se réalise par des analyses ELISA et PCR.
L’éradication de cette maladie est réalisable grâce au plan de lutte international qui a été rendu obligatoire par l’arrêté ministériel en date du 31 juillet 2019. Ce programme d’éradication est toujours d’actualité puisque la phase 1 n’est pas encore terminée et il reste encore deux phases après celui-ci.
Des analyses sérologiques et virologiques sont réalisées à partir des boucles auriculaires ou avec des prises de sang. Des tests ELISA et PCR sont employés pour détecter la maladie. Les animaux IPI doivent être abattus dans les quinze jours. Une vaccination est actuellement possible. Celle-ci empêche la transmission in-utéro et protège également les animaux contre la forme aigue.
Pour aider les éleveurs à surmonter cette maladie qui engendre des pertes économiques importantes, le GDS aide financièrement pour le dépistage et l’abattage des animaux positifs.
Les coûts engendrés par cette maladie dépendent de la durée nécessaire à l’éradication complète du BVD. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Remerciements…………………………………………………………………………………………………………………..3
Introduction générale .......................................................................................................... 5
1. Introduction.................................................................................................................. 6
1.1 Présentation du lieu de stage ............................................................................................................... 6
1.2 Introduction bibliographique ............................................................................................................... 8
1.2.1 Description de la diarrhée bovine virale ............................................................................ 8
1.2.2 Les IPI « Infectés Permanents Immunotolérants » ............................................................ 9
1.2.3 La pathogénie ................................................................................................................... 11
1.2.4 L’impact économique ....................................................................................................... 12
1.2.5 Programme d’éradication de la BVD ................................................................................ 13
1.2.6 Prélèvements d’échantillons ............................................................................................ 16
2. Objectifs et stratégies ................................................................................................. 18
3. Matériel et méthode ................................................................................................... 18
3.1 Extraction et enregistrement des biopsies......................................................................................... 19
3.2 Elisa..................................................................................................................................................... 19
3.2.1 Analyse avec le kit BVD antigène ..................................................................................... 21
3.2.2 Critère de validation ELISA ............................................................................................... 23
3.2.3 Les résultats ELISA ............................................................................................................ 25
3.3 PCR................................................................................................................................................ 27
3.3.1 Principes de la PCR ........................................................................................................... 27
3.3.2 La PCR appliquée à la BVD ................................................................................................ 31
3.3.3 Critère de validation PCR .................................................................................................. 34
3.3.4 Résultat de la PCR............................................................................................................. 35
4. Résultats et discussions............................................................................................... 38
4.1 Analyses réalisées au laboratoire pour le programme d’éradication. ............................................... 38
4.2 Analyses réalisées au laboratoire pour détecter la BVD en dehors du programme d’éradication.... 40
4.3 Carte de contrôle................................................................................................................................ 43
Conclusions & perspectives ................................................................................................ 44
Glossaire ........................................................................................................................... 46
Liste des abréviations ....................................................................................................... 48
Bibliographie ..................................................................................................................... 49
Annexe ............................................................................................................................. 55
Résumé ………………………….…………………………………………………………………………………………………64 |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=112609 |
|
Exemplaires
| Titre : |
Développement des protocoles de mesure du stress oxydatif dans la semence bovine |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
LISA PLASMAN, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef |
| Année de publication : |
2017 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
Agronomie AIBT Cra-w fertilité stress oxydatif espèces réactives de l’oxygène spermatozoïde microscopie de fluorescence sonde fluorescente |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
Dans le cadre du projet « Fertiwalim » visant l’amélioration de la fertilité des taureaux
d’insémination et des vaches laitières, le développement des protocoles de mesure du stress
oxydatif dans la semence bovine a un rôle important car le phénomène engendre de graves
conséquences sur la fertilité des bovins.
Le stress oxydatif est induit par des espèces réactives de l’oxygène ou ROS et engendre
de nombreux dommages cellulaires comme la peroxydation des lipides, l’apoptose ou des
modifications de l’ADN. Il existe différentes sources de ROS dont le spermatozoïde luimême,
les leucocytes, la xanthine oxydase, etc. Afin de prévenir ou réduire le phénomène,
l’ADN peut adopter une conformation particulière et des antioxydants supplémentaires
peuvent être ajoutés à ceux naturellement présents. L’ascorbate ferreux est utilisé comme
agent stressant et peut induire un stress aux spermatozoïdes en produisant des radicaux
hydroxyles.
La technique de microscopie de fluorescence est utilisée pour mesurer le stress dans
la semence. Des molécules sont excitées grâce à l’absorption de lumière dans le but d’émettre
une lumière de couleur différente, de longueur d’onde plus grande que celle absorbée. Les
spermatozoïdes seront visualisés en microscopie car il s’agit de cellules invisibles à l’oeil nu.
Le stress peut être mesuré grâce à des sondes fluorescentes que l’on ajoute à la
semence, on utilise différentes sondes en fonction de leur intérêt et de leur complémentarité.
Certaines permettent de marquer les spermatozoïdes morts, d’autres de détecter la présence
de ROS ou encore une molécule en particulier tel que le H2O2. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage (CRA-W) ............................................................................... 6
Introduction générale .......................................................................................................... 8
Partie théorique ................................................................................................................ 10
1) Objectif du projet ....................................................................................................... 11
2) La semence bovine ..................................................................................................... 12
3) Le stress oxydatif dans le sperme ............................................................................... 16
3.1) Sources du stress ................................................................................................. 17
3.2) Effets délétères associés ..................................................................................... 21
3.3) Prévention ........................................................................................................... 24
4) Microscopie en fluorescence ...................................................................................... 26
4.1) Microscope .......................................................................................................... 26
4.2) Fluorescence ....................................................................................................... 27
4.2.1) Fluorochrome, fluorophore ........................................................................... 28
4.2.2) Source lumineuse .......................................................................................... 29
4.2.3) Blocs filtres ..................................................................................................... 31
4.2.4) Facteurs influençant l’imagerie fluorescente ................................................ 32
Partie pratique .................................................................................................................. 33
Objectifs et stratégies ........................................................................................................ 34
1) Matériel et méthode .................................................................................................. 35
1.1) Matériel ............................................................................................................... 35
1.1.1) Échantillons .................................................................................................. 35
1.1.2) Dilueurs ........................................................................................................ 36
1.1.3) Sondes fluorescentes ................................................................................... 37
1.1.4) Agent stressant ............................................................................................ 42
1.2) Instrumentation .................................................................................................. 43
1.2.1) Olympus IX83 ............................................................................................... 43
1.2.2) Fluoroskan .................................................................................................... 46
1.3) Méthodologie ...................................................................................................... 46
2) Résultats et discussions .............................................................................................. 47
2.1) Viabilité PI/Hoechst ............................................................................................. 47
2.1.1) Propidium iodide .......................................................................................... 47
2.1.2) Hoechst 33342 ............................................................................................. 50
2.2) CellROX Deep Red ............................................................................................... 52
2.3) ContPY1 ............................................................................................................... 59
Conclusion et perspectives ................................................................................................ 63
Abréviations ....................................................................................................................... 65
Glossaire ............................................................................................................................. 66
Listes des figures et tableaux ............................................................................................. 67
Figures ............................................................................................................................ 67
Tableaux ......................................................................................................................... 70
Références bibliographiques ............................................................................................. 71
Sources écrites ............................................................................................................... 71
Sources internet ............................................................................................................. 73
Liste des annexes : ............................................................................................................. 78
Annexes .......................................................................................................................... 79 |
| Permalink : |
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Développement des protocoles de mesure du stress oxydatif dans la semence bovine [TFE / Mémoire] / LISA PLASMAN, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef . - 2017. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
Agronomie AIBT Cra-w fertilité stress oxydatif espèces réactives de l’oxygène spermatozoïde microscopie de fluorescence sonde fluorescente |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
Dans le cadre du projet « Fertiwalim » visant l’amélioration de la fertilité des taureaux
d’insémination et des vaches laitières, le développement des protocoles de mesure du stress
oxydatif dans la semence bovine a un rôle important car le phénomène engendre de graves
conséquences sur la fertilité des bovins.
Le stress oxydatif est induit par des espèces réactives de l’oxygène ou ROS et engendre
de nombreux dommages cellulaires comme la peroxydation des lipides, l’apoptose ou des
modifications de l’ADN. Il existe différentes sources de ROS dont le spermatozoïde luimême,
les leucocytes, la xanthine oxydase, etc. Afin de prévenir ou réduire le phénomène,
l’ADN peut adopter une conformation particulière et des antioxydants supplémentaires
peuvent être ajoutés à ceux naturellement présents. L’ascorbate ferreux est utilisé comme
agent stressant et peut induire un stress aux spermatozoïdes en produisant des radicaux
hydroxyles.
La technique de microscopie de fluorescence est utilisée pour mesurer le stress dans
la semence. Des molécules sont excitées grâce à l’absorption de lumière dans le but d’émettre
une lumière de couleur différente, de longueur d’onde plus grande que celle absorbée. Les
spermatozoïdes seront visualisés en microscopie car il s’agit de cellules invisibles à l’oeil nu.
Le stress peut être mesuré grâce à des sondes fluorescentes que l’on ajoute à la
semence, on utilise différentes sondes en fonction de leur intérêt et de leur complémentarité.
Certaines permettent de marquer les spermatozoïdes morts, d’autres de détecter la présence
de ROS ou encore une molécule en particulier tel que le H2O2. |
| Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage (CRA-W) ............................................................................... 6
Introduction générale .......................................................................................................... 8
Partie théorique ................................................................................................................ 10
1) Objectif du projet ....................................................................................................... 11
2) La semence bovine ..................................................................................................... 12
3) Le stress oxydatif dans le sperme ............................................................................... 16
3.1) Sources du stress ................................................................................................. 17
3.2) Effets délétères associés ..................................................................................... 21
3.3) Prévention ........................................................................................................... 24
4) Microscopie en fluorescence ...................................................................................... 26
4.1) Microscope .......................................................................................................... 26
4.2) Fluorescence ....................................................................................................... 27
4.2.1) Fluorochrome, fluorophore ........................................................................... 28
4.2.2) Source lumineuse .......................................................................................... 29
4.2.3) Blocs filtres ..................................................................................................... 31
4.2.4) Facteurs influençant l’imagerie fluorescente ................................................ 32
Partie pratique .................................................................................................................. 33
Objectifs et stratégies ........................................................................................................ 34
1) Matériel et méthode .................................................................................................. 35
1.1) Matériel ............................................................................................................... 35
1.1.1) Échantillons .................................................................................................. 35
1.1.2) Dilueurs ........................................................................................................ 36
1.1.3) Sondes fluorescentes ................................................................................... 37
1.1.4) Agent stressant ............................................................................................ 42
1.2) Instrumentation .................................................................................................. 43
1.2.1) Olympus IX83 ............................................................................................... 43
1.2.2) Fluoroskan .................................................................................................... 46
1.3) Méthodologie ...................................................................................................... 46
2) Résultats et discussions .............................................................................................. 47
2.1) Viabilité PI/Hoechst ............................................................................................. 47
2.1.1) Propidium iodide .......................................................................................... 47
2.1.2) Hoechst 33342 ............................................................................................. 50
2.2) CellROX Deep Red ............................................................................................... 52
2.3) ContPY1 ............................................................................................................... 59
Conclusion et perspectives ................................................................................................ 63
Abréviations ....................................................................................................................... 65
Glossaire ............................................................................................................................. 66
Listes des figures et tableaux ............................................................................................. 67
Figures ............................................................................................................................ 67
Tableaux ......................................................................................................................... 70
Références bibliographiques ............................................................................................. 71
Sources écrites ............................................................................................................... 71
Sources internet ............................................................................................................. 73
Liste des annexes : ............................................................................................................. 78
Annexes .......................................................................................................................... 79 |
| Permalink : |
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|
Exemplaires
| Titre : |
Dosage et étude de l’activité d’extraits de la spiruline |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Ophélie Dieden, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef |
| Année de publication : |
2019 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
Agronomie AIBT Biores laboratoires |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
De plus en plus de personnes souffrent de problèmes cardiovasculaires. Des études ont montréque les personnes atteintes d’hyperbilirubinémie sont moins sujettes aux problèmes cardiovasculaires car la bilirubine est un antioxydant. La phycocyanobiline, qui est un chromophore contenu dans les cyanobactéries,dont la spiruline, a une structure similaire à la bilirubine. Nous espérons donc que cecomposé a les mêmes effets antioxydantsque la bilirubine. Ce travail s’inscrit dans un projet plus large qui vise à mettre au point un complémentalimentaire composé de phycocyanobiline qui réduit le risque de problèmes cardiovasculaires.Une partie du travail a consisté à caractériser des hydrolysats de spiruline et de phycocyanine, nous avons comparé leurs capacités antioxydantes. Nous avons également tenté de transposer la méthode clinique de dosage de la bilirubine à la phycocyanobiline. |
| Note de contenu : |
Table des matièresPRESENTATION DU LIEUDE STAGE...................................................................................8INTRODUCTION................................................................................................................9PARTIE THEORIQUE........................................................................................................111SPIRULINE.................................................................................................................111.1HISTORIQUE..............................................................................................................111.2COMPOSITION...........................................................................................................121.3CULTURE EN LABO......................................................................................................121.4BIENFAITS................................................................................................................131.5SPECTRE D’ABSORPTION..............................................................................................132LES PHYCOCYANINES: C-‐PHYCOCYANINE ET ALLOPHYCOCYANINE............................152.1STRUCTURE...............................................................................................................152.2CARACTERISTIQUES PHYSICOCHIMIQUES..........................................................................162.2.1SPECTRE D’ABSORPTION..................................................................................................162.2.2PH...............................................................................................................................172.3BIENFAITS................................................................................................................173PHYCOCYANOBILINE.................................................................................................183.1SPECTRE D’ABSORPTION..............................................................................................194BILIRUBINE...............................................................................................................204.1SPECTRE D’ABSORPTION..............................................................................................205TECHNIQUES DE DOSAGEUTILISEES..........................................................................215.1COLORIMETRIE ET FLUORIMETRIE...................................................................................215.1.1COLORIMETRIE ET SPECTROPHOTOMETRIE..........................................................................21
5.1.2FLUORIMETRIE...............................................................................................................225.2DOSAGE DE LA BILIRUBINE............................................................................................236EVALUATION DE LA CAPACITEANTI-‐OXYDANTE........................................................23MATERIEL ET METHODES................................................................................................267MATERIEL.................................................................................................................267.1SPECTROPHOTOMETRE................................................................................................267.2SPECTROFLUORIMETRE................................................................................................267.3CENTRIFUGEUSE.........................................................................................................267.4SONICATEUR.............................................................................................................267.5SOXHLET..................................................................................................................277.6SONDE PH................................................................................................................277.7EVAPORATEUR ROTATIF SOUS VIDE................................................................................287.8ETUVE 37°CET 105°C................................................................................................287.9AUTOCLAVE..............................................................................................................288METHODES...............................................................................................................298.1EXTRACTION REFLUX...................................................................................................298.2EXTRACTION SOXHLET.................................................................................................308.3EXTRACTION PAR CHANGEMENT DE PHET CHAUFFAGE.......................................................318.4TEST ORAC...............................................................................................................328.5DOSAGE DE LA BILIRUBINE PAR LA METHODE DIAZO...........................................................338.6COLORIMETRIE..........................................................................................................348.7SONICATION.............................................................................................................359ECHANTILLONS ANALYSES........................................................................................35RESULTATS ET DISCUSSION.............................................................................................36
10CARACTERISATION IN VITRO DE L’ACTIVITE ANTI-‐OXYDANTE DE LA SPIRULINE, DE LA PC ET DE LA PCB..............................................................................................................3610.1INTRODUCTION........................................................................................................3610.2VITAMINE C............................................................................................................3610.3PHYCOCYANINE.......................................................................................................3710.4PCET SPIRULINE HYDROLYSEES....................................................................................4110.4.1EXTRACTION SOXHLET SUR DE LA POUDRE DE SPIRULINE......................................................4210.4.2CHLOROPHYLLINE.........................................................................................................4410.4.3EXTRACTION REFLUX SURDE LA POUDRE DE SPIRULINE........................................................4610.4.4EXTRACTION SOXHLET SUR LA POUDRE DE PC....................................................................4910.4.5EXTRACTION REFLUX SURLA POUDRE DE PC......................................................................5010.4.6PHYCOCYANINE HYDROLYSEE EN MILIEU ALCALIN...............................................................5310.4.7SPIRULINEHYDROLYSEE EN MILIEUALCALIN......................................................................5810.5SPIRULINE FERMENTEE..............................................................................................6110.5.1SPIRULINE FERMENTEE EN MILIEU LIQUIDE........................................................................6110.5.2SPIRULINE FERMENTEE SUR MILIEU SOLIDE........................................................................6310.5.3SPIRULINE FERMENTEE SUR MILIEU SOLIDE APRES SONICATION.............................................6410.6DISSCUSSION GENERALE............................................................................................6611MISE AU POINT DE LA METHODE DIAZO ET TRANSPOSITION SUR LA PCB................6711.1TRANSFERT DE LA METHODE SUR LA PHYCOCYANOBILINE...................................................6911.2SUIVI D’UNE PRODUCTION DE CYANEX..........................................................................7111.3TEST DE LA STABILITE DU CYANEX MIS DANS DIFFERENTES CONDITIONS.................................7311.3.1PH.............................................................................................................................7311.3.2TEMPERATURE............................................................................................................75CONCLUSION GENERALE.................................................................................................77
LISTE ABREVIATIONS.......................................................................................................78LISTE DES FIGURES..........................................................................................................79BIBLIOGRAPHIE...............................................................................................................84ANNEXE..........................................................................................................................87EXTRAITS DE SPIRULINE........................................................................................................87SPIRULINE FERMENTEE.........................................................................................................88EXTRAITS DE POUDRE DEPC..................................................................................................89VITAMINE C.......................................................................................................................89CHLOROPHYLINE.................................................................................................................90BILIRUBINE........................................................................................................................90 |
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Dosage et étude de l’activité d’extraits de la spiruline [TFE / Mémoire] / Ophélie Dieden, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef . - 2019. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
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Agronomie AIBT Biores laboratoires |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Résumé : |
De plus en plus de personnes souffrent de problèmes cardiovasculaires. Des études ont montréque les personnes atteintes d’hyperbilirubinémie sont moins sujettes aux problèmes cardiovasculaires car la bilirubine est un antioxydant. La phycocyanobiline, qui est un chromophore contenu dans les cyanobactéries,dont la spiruline, a une structure similaire à la bilirubine. Nous espérons donc que cecomposé a les mêmes effets antioxydantsque la bilirubine. Ce travail s’inscrit dans un projet plus large qui vise à mettre au point un complémentalimentaire composé de phycocyanobiline qui réduit le risque de problèmes cardiovasculaires.Une partie du travail a consisté à caractériser des hydrolysats de spiruline et de phycocyanine, nous avons comparé leurs capacités antioxydantes. Nous avons également tenté de transposer la méthode clinique de dosage de la bilirubine à la phycocyanobiline. |
| Note de contenu : |
Table des matièresPRESENTATION DU LIEUDE STAGE...................................................................................8INTRODUCTION................................................................................................................9PARTIE THEORIQUE........................................................................................................111SPIRULINE.................................................................................................................111.1HISTORIQUE..............................................................................................................111.2COMPOSITION...........................................................................................................121.3CULTURE EN LABO......................................................................................................121.4BIENFAITS................................................................................................................131.5SPECTRE D’ABSORPTION..............................................................................................132LES PHYCOCYANINES: C-‐PHYCOCYANINE ET ALLOPHYCOCYANINE............................152.1STRUCTURE...............................................................................................................152.2CARACTERISTIQUES PHYSICOCHIMIQUES..........................................................................162.2.1SPECTRE D’ABSORPTION..................................................................................................162.2.2PH...............................................................................................................................172.3BIENFAITS................................................................................................................173PHYCOCYANOBILINE.................................................................................................183.1SPECTRE D’ABSORPTION..............................................................................................194BILIRUBINE...............................................................................................................204.1SPECTRE D’ABSORPTION..............................................................................................205TECHNIQUES DE DOSAGEUTILISEES..........................................................................215.1COLORIMETRIE ET FLUORIMETRIE...................................................................................215.1.1COLORIMETRIE ET SPECTROPHOTOMETRIE..........................................................................21
5.1.2FLUORIMETRIE...............................................................................................................225.2DOSAGE DE LA BILIRUBINE............................................................................................236EVALUATION DE LA CAPACITEANTI-‐OXYDANTE........................................................23MATERIEL ET METHODES................................................................................................267MATERIEL.................................................................................................................267.1SPECTROPHOTOMETRE................................................................................................267.2SPECTROFLUORIMETRE................................................................................................267.3CENTRIFUGEUSE.........................................................................................................267.4SONICATEUR.............................................................................................................267.5SOXHLET..................................................................................................................277.6SONDE PH................................................................................................................277.7EVAPORATEUR ROTATIF SOUS VIDE................................................................................287.8ETUVE 37°CET 105°C................................................................................................287.9AUTOCLAVE..............................................................................................................288METHODES...............................................................................................................298.1EXTRACTION REFLUX...................................................................................................298.2EXTRACTION SOXHLET.................................................................................................308.3EXTRACTION PAR CHANGEMENT DE PHET CHAUFFAGE.......................................................318.4TEST ORAC...............................................................................................................328.5DOSAGE DE LA BILIRUBINE PAR LA METHODE DIAZO...........................................................338.6COLORIMETRIE..........................................................................................................348.7SONICATION.............................................................................................................359ECHANTILLONS ANALYSES........................................................................................35RESULTATS ET DISCUSSION.............................................................................................36
10CARACTERISATION IN VITRO DE L’ACTIVITE ANTI-‐OXYDANTE DE LA SPIRULINE, DE LA PC ET DE LA PCB..............................................................................................................3610.1INTRODUCTION........................................................................................................3610.2VITAMINE C............................................................................................................3610.3PHYCOCYANINE.......................................................................................................3710.4PCET SPIRULINE HYDROLYSEES....................................................................................4110.4.1EXTRACTION SOXHLET SUR DE LA POUDRE DE SPIRULINE......................................................4210.4.2CHLOROPHYLLINE.........................................................................................................4410.4.3EXTRACTION REFLUX SURDE LA POUDRE DE SPIRULINE........................................................4610.4.4EXTRACTION SOXHLET SUR LA POUDRE DE PC....................................................................4910.4.5EXTRACTION REFLUX SURLA POUDRE DE PC......................................................................5010.4.6PHYCOCYANINE HYDROLYSEE EN MILIEU ALCALIN...............................................................5310.4.7SPIRULINEHYDROLYSEE EN MILIEUALCALIN......................................................................5810.5SPIRULINE FERMENTEE..............................................................................................6110.5.1SPIRULINE FERMENTEE EN MILIEU LIQUIDE........................................................................6110.5.2SPIRULINE FERMENTEE SUR MILIEU SOLIDE........................................................................6310.5.3SPIRULINE FERMENTEE SUR MILIEU SOLIDE APRES SONICATION.............................................6410.6DISSCUSSION GENERALE............................................................................................6611MISE AU POINT DE LA METHODE DIAZO ET TRANSPOSITION SUR LA PCB................6711.1TRANSFERT DE LA METHODE SUR LA PHYCOCYANOBILINE...................................................6911.2SUIVI D’UNE PRODUCTION DE CYANEX..........................................................................7111.3TEST DE LA STABILITE DU CYANEX MIS DANS DIFFERENTES CONDITIONS.................................7311.3.1PH.............................................................................................................................7311.3.2TEMPERATURE............................................................................................................75CONCLUSION GENERALE.................................................................................................77
LISTE ABREVIATIONS.......................................................................................................78LISTE DES FIGURES..........................................................................................................79BIBLIOGRAPHIE...............................................................................................................84ANNEXE..........................................................................................................................87EXTRAITS DE SPIRULINE........................................................................................................87SPIRULINE FERMENTEE.........................................................................................................88EXTRAITS DE POUDRE DEPC..................................................................................................89VITAMINE C.......................................................................................................................89CHLOROPHYLINE.................................................................................................................90BILIRUBINE........................................................................................................................90 |
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