Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV / Virginie Coorens

Public ISBD Titre : Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Virginie Coorens, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale  ASBL Culture in vivo  Nivelles  virus  BVD  flaviviridae  génome viral  cycle du virus  traduction du génome du virus  infection virale  transmission virale  vaccination  transfection  passage des cellules  microscopie a fluorescence  PCR  électrophorèse sur gel d'agarose  midiprep  plasmide  plasmide vecteur  ligation  bactéries compétentes  transformation bactérienne  miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières Remerciements....................................................................................................................................... 3 Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7 Introduction ........................................................................................................................................... 9 Partie théorique ................................................................................................................................... 11 1) Historique ................................................................................................................................. 11 2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11 3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12 3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12 3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14 3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15 3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16 4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17 4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18 4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18 4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20 5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20 6) Prévention ................................................................................................................................ 23 6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23 6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23 7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25 Partie pratique ..................................................................................................................................... 27 1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27 2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28 2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28 a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28 b) Transfection ........................................................................................................................... 28 c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29 2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29 a) Midiprep ................................................................................................................................ 29 b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29 c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31 d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32  Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32  Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32 e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32 f) Ligation ................................................................................................................................. 32 g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32 h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32 i) Miniprep ................................................................................................................................ 33 3) Résultats ................................................................................................................................... 34 a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34 b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36  Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36  Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36  Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37 c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38 d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39 e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40 f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41 g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43 h) Ligation ................................................................................................................................. 44 i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45 j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45 k) Transfection ........................................................................................................................... 49 4) Discussion ................................................................................................................................. 50 Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53 Annexes ................................................................................................................................................ 55  Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55  Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56  Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64 Liste des figures ................................................................................................................................... 67 Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69 Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71 Bibliographie ........................................................................................................................................ 73 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664 Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV [TFE / Mémoire] / Virginie Coorens,  . - 2016. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale  ASBL Culture in vivo  Nivelles  virus  BVD  flaviviridae  génome viral  cycle du virus  traduction du génome du virus  infection virale  transmission virale  vaccination  transfection  passage des cellules  microscopie a fluorescence  PCR  électrophorèse sur gel d'agarose  midiprep  plasmide  plasmide vecteur  ligation  bactéries compétentes  transformation bactérienne  miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières Remerciements....................................................................................................................................... 3 Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7 Introduction ........................................................................................................................................... 9 Partie théorique ................................................................................................................................... 11 1) Historique ................................................................................................................................. 11 2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11 3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12 3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12 3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14 3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15 3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16 4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17 4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18 4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18 4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20 5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20 6) Prévention ................................................................................................................................ 23 6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23 6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23 7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25 Partie pratique ..................................................................................................................................... 27 1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27 2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28 2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28 a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28 b) Transfection ........................................................................................................................... 28 c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29 2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29 a) Midiprep ................................................................................................................................ 29 b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29 c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31 d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32  Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32  Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32 e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32 f) Ligation ................................................................................................................................. 32 g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32 h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32 i) Miniprep ................................................................................................................................ 33 3) Résultats ................................................................................................................................... 34 a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34 b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36  Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36  Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36  Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37 c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38 d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39 e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40 f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41 g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43 h) Ligation ................................................................................................................................. 44 i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45 j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45 k) Transfection ........................................................................................................................... 49 4) Discussion ................................................................................................................................. 50 Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53 Annexes ................................................................................................................................................ 55  Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55  Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56  Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64 Liste des figures ................................................................................................................................... 67 Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69 Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71 Bibliographie ........................................................................................................................................ 73 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664

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