Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
Attention,
Votre centre de documentation sera fermé ce lundi 26 août.
Également, ce mercredi 28 août il sera fermé de 12 à 13h.
Enfin, ce jeudi 29 août il ouvrira à 14h45.
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Détail de l'auteur
Auteur Virginie Coorens |
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Titre : Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Virginie Coorens, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664 Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV [TFE / Mémoire] / Virginie Coorens, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
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Mots-clés : Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664 Exemplaires
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