Titre : |
Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse |
Type de document : |
TFE / Mémoire |
Auteurs : |
Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche |
Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale |
Année de publication : |
2021 |
Note générale : |
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Langues : |
Français (fre) |
Mots-clés : |
CHU UCL Namur Mont Godinne |
Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Résumé : |
Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. |
Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
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Mise au point du dosage du cortisol libre urinaire par UHPLC et détection de masse [TFE / Mémoire] / Quentin Dhesse, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français ( fre)
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TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Résumé : |
Ce travail de fin d’études consiste à la mise au point du dosage de cortisol urinaire par UHPLC et par détection de masse. Actuellement, le laboratoire n’effectue pas le dosage du cortisol urinaire au sein de ses installations. Les échantillons à analyser sont envoyés à un autre laboratoire. Afin d’éviter cet envoi et étant donné que le laboratoire dispose du matériel nécessaire à ce type d’analyse, il a été décidé de mettre au point une méthode de dosage du cortisol. Le choix de l’utilisation de l’UHPLC par rapport à l’HPLC se base sur le fait qu’il consomme moins de phase mobile et qu’il permet des temps d’analyses plus courts. Le détecteur employé est le QDa qui permet de détecter les molécules d’intérêts en fonction de leur masse permettant d’éliminer de nombreux pics interférents. Pour la mise en place de ce dosage, un protocole de base a été choisi à partir de la littérature existante. Les conditions chromatographiques ont d’abord été mises au point et optimisées par l’analyse de solutions pures. Dans ce protocole, il a fallu mettre en place une extraction et optimiser celles-ci : pH de l’échantillon, nature du solvant d’élution et les conditions de l’évaporation du solvant d’élution. Les résultats de la mise au point sont l’obtention de chromatogrammes où les pics d’intérêts sont isolés et quantifiables. La méthode doit être validée pour pouvoir être mise en routine au sein du laboratoire et pour cela, la limite de détection, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la reproductibilité, la robustesse, la contamination, la récupération et la corrélation ont été analysées. Tous les paramètres ont été validés sauf la corrélation par manque d’analyse. La suite de ce travail de fin d’études est la validation de la corrélation afin de compléter la validation de la méthode de dosage qui permettra de réaliser celui-ci au sein du laboratoire. |
Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage.................................................................................................................................... 7
Introduction :............................................................................................................................................................. 8
Partie théorique......................................................................................................................................................... 9
1. Le cortisol ...................................................................................................................................................... 9
2. Dosage du cortisol urinaire.......................................................................................................................... 10
2.1. Indication............................................................................................................................................. 10
2.2. Méthode de dosage............................................................................................................................. 10
2.3. Valeurs de références.......................................................................................................................... 11
3. Syndrome de Cushing.................................................................................................................................. 11
3.1. Signes cliniques.................................................................................................................................... 11
3.2. Cause du syndrome de Cushing........................................................................................................... 12
3.3. Tests de diagnostic .............................................................................................................................. 12
3.4. Le traitement ....................................................................................................................................... 14
4. Fonctionnement de l’HPLC ET UHPLC ......................................................................................................... 14
4.1. Théorie de la chromatographie ........................................................................................................... 14
4.2. Comparaison de l’HPLC ET l’UHPLC ..................................................................................................... 14
4.3. Appareillage......................................................................................................................................... 15
5. Développement de méthode ...................................................................................................................... 19
5.1. Conditions chromatographiques ......................................................................................................... 19
5.2. Extraction de l’analyte......................................................................................................................... 21
6. Validation de méthode ................................................................................................................................ 23
6.1. La limite de détection .......................................................................................................................... 23
6.2. La limite de quantification................................................................................................................... 24
6.3. La linéarité ........................................................................................................................................... 24
6.4. La répétabilité...................................................................................................................................... 25
6.5. La reproductibilité ............................................................................................................................... 25
6.6. La robustesse ....................................................................................................................................... 26
6.7. La contamination................................................................................................................................. 26
6.8. La récupération.................................................................................................................................... 27
6.9. La corrélation....................................................................................................................................... 28
Partie pratique......................................................................................................................................................... 29
1. Objectif et stratégie..................................................................................................................................... 29
2. Matériel et méthode ................................................................................................................................... 30
2.1. Matériel ............................................................................................................................................... 30
2.2. Méthode .............................................................................................................................................. 31
3. Résultats et discussion ................................................................................................................................ 33
3.1. Développement de la méthode chromatographique.......................................................................... 33
3.2. Validation de la méthode chromatographique ................................................................................... 43
Conclusion ............................................................................................................................................................... 54
Bibliographie............................................................................................................................................................ 55
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