Centre de Documentation Campus Montignies
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Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV / Virginie Coorens
Titre : Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Virginie Coorens, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664 Construction génétique de la protéine C-GFP du virus BVDV [TFE / Mémoire] / Virginie Coorens, . - 2016.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale ASBL Culture in vivo Nivelles virus BVD flaviviridae génome viral cycle du virus traduction du génome du virus infection virale transmission virale vaccination transfection passage des cellules microscopie a fluorescence PCR électrophorèse sur gel d'agarose midiprep plasmide plasmide vecteur ligation bactéries compétentes transformation bactérienne miniprep Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements....................................................................................................................................... 3
Présentation de l’ASBL Culture in vivo .............................................................................................. 7
Introduction ........................................................................................................................................... 9
Partie théorique ................................................................................................................................... 11
1) Historique ................................................................................................................................. 11
2) Caractéristiques d’un virus .................................................................................................... 11
3) Structure du virus BVD .......................................................................................................... 12
3.1) Famille des Flaviviridae .................................................................................................... 12
3.2) Génome viral ..................................................................................................................... 14
3.3) Cycle du virus .................................................................................................................... 15
3.4) Traduction du génome du virus BVD................................................................................ 16
4) Description du virus BVD ....................................................................................................... 17
4.1) Différentes étapes d’une infection virale ........................................................................... 18
4.2) Transmission ..................................................................................................................... 18
4.3) Différence entre un animal infecté de manière permanente et transitoire ......................... 20
5) Diagnostic ................................................................................................................................. 20
6) Prévention ................................................................................................................................ 23
6.1) Prise en charge des bovins ..................................................................................................... 23
6.2) Vaccination ............................................................................................................................ 23
7) Présentation des plasmides utilisés ........................................................................................ 25
Partie pratique ..................................................................................................................................... 27
1) Objectif et stratégie ................................................................................................................. 27
2) Matériel et méthodes ............................................................................................................... 28
2.1) Techniques associées à la culture cellulaire ...................................................................... 28
a) Passage des cellules ............................................................................................................... 28
b) Transfection ........................................................................................................................... 28
c) Microscopie à fluorescence ................................................................................................... 29
2.2) Techniques associées à la biologie moléculaire ................................................................ 29
a) Midiprep ................................................................................................................................ 29
b) PCR : Polymerase Chain Reaction ........................................................................................ 29
c) Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 31
d) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ..................................... 32
Vérification de la double digestion du plasmide pEGFP-N1 ................................................ 32
Préparation du plasmide vecteur ........................................................................................... 32
e) Concentration du plasmide vecteur pEFGP-N1 .................................................................... 32
f) Ligation ................................................................................................................................. 32
g) Préparation des bactéries compétentes .................................................................................. 32
h) Transformation bactérienne ................................................................................................... 32
i) Miniprep ................................................................................................................................ 33
3) Résultats ................................................................................................................................... 34
a) Stratégie de la construction génétique ................................................................................... 34
b) Vérification du plasmide pEGFP-N1 .................................................................................... 36
Transfection des cellules COS-7 ........................................................................................... 36
Electrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................................... 36
Spectrophotométrie ............................................................................................................... 37
c) Amplification de l’insert (gène C) par PCR .......................................................................... 38
d) Double digestion du plasmide pEGFP-N1 par BamHI et HindIII ......................................... 39
e) Préparation du plasmide vecteur pEGFP-N1 par les enzymes de restriction BamHI et HindIII ………………………………………………………………………………………………………………………………………….40
f) Double digestion du produit PCR par BamHI et HindIII .......................................................... 41
g) Digestion enzymatique du produit PCR par BamHI et HindIII ............................................ 43
h) Ligation ................................................................................................................................. 44
i) Transformation bactérienne ................................................................................................... 45
j) Criblage par miniprep ............................................................................................................ 45
k) Transfection ........................................................................................................................... 49
4) Discussion ................................................................................................................................. 50
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 53
Annexes ................................................................................................................................................ 55
Annexe 1 : Carte du plasmide pEGFP-N1 ............................................................................ 55
Annexe 2 : Mode opératoire ................................................................................................... 56
Annexe 3 : Préparation de différentes solutions ................................................................... 64
Liste des figures ................................................................................................................................... 67
Liste des tableaux ................................................................................................................................ 69
Liste des abréviations .......................................................................................................................... 71
Bibliographie ........................................................................................................................................ 73Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65664 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. / SABRINA DELMOITIE
Titre : Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : SABRINA DELMOITIE, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale Unamur URBM brucella abortus zoonose réplication ADN cycle cellulaire protéine PicC escherichia coli DH10B escherichia coli S-17-1 brucella abortus 544 plasmides levures PCR Digestion ADN ligation transformation par choc thermique isolation ADN plasmidique conjugaison induction à l'IPTG marquage au TRSE western blot purification de fragment Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................... 3
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 6
Introduction ................................................................................................................................ 7
Contexte général ....................................................................................................................... 9
1. La zoonose causée par Brucella abortus............................................................................. 9
1.1 Transmission ................................................................................................................. 9
1.1.1 Chez les animaux ................................................................................................... 9
1.1.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 10
1.2 Pathologie ................................................................................................................... 10
1.2.1 Chez les animaux ................................................................................................. 10
1.2.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 11
2. Trafic intracellulaire ......................................................................................................... 12
3. Cycle cellulaire ................................................................................................................. 13
3.1 Généralités .................................................................................................................. 13
3.2 Brucella abortus et sa croissance unipolaire particulière ........................................... 14
3.3 Réplication de l’ADN et division cellulaire de Brucella abortus ............................... 16
3.4 Contrôle du cycle cellulaire et l’intrigue de la protéine PicC ..................................... 17
Objectifs et stratégies ............................................................................................................. 20
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 23
1. Matériel ............................................................................................................................. 23
1.1 Souches de bactéries ................................................................................................... 23
1.1.1 Escherichia coli DH10B ...................................................................................... 23
1.1.2 Escherichia coli S-17-1 ........................................................................................ 23
1.1.3 Brucella abortus 544 ............................................................................................ 24
1.2 Plasmides .................................................................................................................... 24
1.3 Souches de levures ...................................................................................................... 24
1.3.1 Saccharomyces cerevisiae MaV103 ..................................................................... 24
1.3.2 Saccharomyces cerevisiae MaV203 ..................................................................... 25
2. Méthodes .......................................................................................................................... 25
2.1 Polymerase chain reaction (PCR) ............................................................................... 25
2.2 Digestion de l’ADN .................................................................................................... 27
2.3 Ligation ....................................................................................................................... 27
2.4 Transformation par choc thermique ............................................................................ 28
2.5 Isolation de l’ADN plasmidique (miniprep) ............................................................... 29
2.6 Conjugaison ................................................................................................................ 29
2.7 Induction à l’IPTG ...................................................................................................... 30
2.8 Marquage au TRSE ..................................................................................................... 30
2.9 Western Blot ............................................................................................................... 31
2.10 Test double hybride en levure ................................................................................... 32
2.11 Trousse de purification de fragments d’ADN ........................................................... 34
Résultats .................................................................................................................................. 35
1. Caractérisation des anticorps His6-PicC ........................................................................... 35
2. Analyse des souches surexprimant la protéine PicC ........................................................ 39
2.1 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBRI-picC ........................ 39
2.2 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBR-1-picC ...................... 44
3. Recherche des nouveaux partenaires protéiques de PicC ................................................. 46
Discussions .............................................................................................................................. 51
Conclusion et perspectives ..................................................................................................... 55
Lexique .................................................................................................................................... 57
Bibliographie ........................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65668 Etude du rôle de la protéine PicC de Brucella abortus. [TFE / Mémoire] / SABRINA DELMOITIE, . - 2016.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale Unamur URBM brucella abortus zoonose réplication ADN cycle cellulaire protéine PicC escherichia coli DH10B escherichia coli S-17-1 brucella abortus 544 plasmides levures PCR Digestion ADN ligation transformation par choc thermique isolation ADN plasmidique conjugaison induction à l'IPTG marquage au TRSE western blot purification de fragment Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................... 3
Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 6
Introduction ................................................................................................................................ 7
Contexte général ....................................................................................................................... 9
1. La zoonose causée par Brucella abortus............................................................................. 9
1.1 Transmission ................................................................................................................. 9
1.1.1 Chez les animaux ................................................................................................... 9
1.1.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 10
1.2 Pathologie ................................................................................................................... 10
1.2.1 Chez les animaux ................................................................................................. 10
1.2.2 Chez l’homme ...................................................................................................... 11
2. Trafic intracellulaire ......................................................................................................... 12
3. Cycle cellulaire ................................................................................................................. 13
3.1 Généralités .................................................................................................................. 13
3.2 Brucella abortus et sa croissance unipolaire particulière ........................................... 14
3.3 Réplication de l’ADN et division cellulaire de Brucella abortus ............................... 16
3.4 Contrôle du cycle cellulaire et l’intrigue de la protéine PicC ..................................... 17
Objectifs et stratégies ............................................................................................................. 20
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 23
1. Matériel ............................................................................................................................. 23
1.1 Souches de bactéries ................................................................................................... 23
1.1.1 Escherichia coli DH10B ...................................................................................... 23
1.1.2 Escherichia coli S-17-1 ........................................................................................ 23
1.1.3 Brucella abortus 544 ............................................................................................ 24
1.2 Plasmides .................................................................................................................... 24
1.3 Souches de levures ...................................................................................................... 24
1.3.1 Saccharomyces cerevisiae MaV103 ..................................................................... 24
1.3.2 Saccharomyces cerevisiae MaV203 ..................................................................... 25
2. Méthodes .......................................................................................................................... 25
2.1 Polymerase chain reaction (PCR) ............................................................................... 25
2.2 Digestion de l’ADN .................................................................................................... 27
2.3 Ligation ....................................................................................................................... 27
2.4 Transformation par choc thermique ............................................................................ 28
2.5 Isolation de l’ADN plasmidique (miniprep) ............................................................... 29
2.6 Conjugaison ................................................................................................................ 29
2.7 Induction à l’IPTG ...................................................................................................... 30
2.8 Marquage au TRSE ..................................................................................................... 30
2.9 Western Blot ............................................................................................................... 31
2.10 Test double hybride en levure ................................................................................... 32
2.11 Trousse de purification de fragments d’ADN ........................................................... 34
Résultats .................................................................................................................................. 35
1. Caractérisation des anticorps His6-PicC ........................................................................... 35
2. Analyse des souches surexprimant la protéine PicC ........................................................ 39
2.1 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBRI-picC ........................ 39
2.2 Surexpression de la protéine PicC à l’aide du plasmide pBBR-1-picC ...................... 44
3. Recherche des nouveaux partenaires protéiques de PicC ................................................. 46
Discussions .............................................................................................................................. 51
Conclusion et perspectives ..................................................................................................... 55
Lexique .................................................................................................................................... 57
Bibliographie ........................................................................................................................... 58
Annexes ................................................................................................................................... 59Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65668 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Impact de la méthylation sur le promoteur des LATs durant l'infection in vivo et in vitro du virus de la maladie de Marek / Oriana Laforgia
Titre : Impact de la méthylation sur le promoteur des LATs durant l'infection in vivo et in vitro du virus de la maladie de Marek Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Oriana Laforgia, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Unité de Recherche Vétérinaire Intégrée URVI maladie de Malek microARN transcription expression phase de latence du MDV epigénétique culture cellulaire extraction ADN quantification ADN bisulfite nested PCR électrophorèse ADN purification acide nucléique ligation clonage LAT Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : SOMMAIRE
Remerciements
1 PrÉsentation du lieu de stage................................................................................................ 7
2 Introduction .......................................................................................................................... 9
3 Contexte général ................................................................................................................. 11
3.1 La maladie de Marek ................................................................................................... 11
3.1.1 Historique: ........................................................................................................... 11
3.1.2 Classification:....................................................................................................... 12
3.1.3 Formes cliniques.................................................................................................. 13
3.1.4 Structure du virus ................................................................................................ 14
3.1.5 Cycle de vie .......................................................................................................... 15
3.2 Les microARN .............................................................................................................. 17
3.2.1 Généralités .......................................................................................................... 17
3.2.2 Biogenèse des microARN .................................................................................... 18
3.2.3 Les microARN de GaHV-2 .................................................................................... 19
3.2.4 Initiation de la transcription et « core » promoteur ........................................... 20
3.3 Transcription et expression des gènes durant la phase de latence du MDV .............. 21
3.3.1 Le gène ICP4 ........................................................................................................ 21
3.3.3 LAT (Latency associated transcript) .................................................................... 22
3.4 Épigénétique ............................................................................................................... 24
3.4.1 Généralités .......................................................................................................... 24
3.4.2 Acétylation des histones ..................................................................................... 24
3.4.3 Phosphorylation des histones ............................................................................. 25
3.4.4 Méthylation des histones .................................................................................... 25
3.4.5 Méthylation de l'ADN .......................................................................................... 26
3.4.6 Méthylation de l'ADN dans le MDV .................................................................... 27
4 Objectifs et stratÉgie ........................................................................................................... 29
5 Matériel et méthodes ......................................................................................................... 31
5.1 Culture cellulaire ......................................................................................................... 31
5.1.1 Les cellules MSB-1 ............................................................................................... 31
5.1.2 Cellules embryonnaires de poulet infectées (CEFs) par la souche virale RB-1B . 31
5.1.3 Epithéliums de follicules plumeux (FFE) .............................................................. 31
5.2 Extraction d'ADN et quantification ............................................................................. 32
5.3 Traitement au bisulfite ................................................................................................ 32
5.4 Nested polymerase chain reaction (nested PCR) ........................................................ 34
5.5 Électrophorèse d'ADN ................................................................................................. 35
5.6 Purification des acides nucléiques .............................................................................. 36
5.7 Préparation des bactéries compétentes ..................................................................... 36
6
5.8 Ligation vecteur/insert ................................................................................................ 36
5.9 Clonage ........................................................................................................................ 37
5.10 Système blanc/bleu ..................................................................................................... 38
5.11 Screen PCR et séquençage .......................................................................................... 39
6 RÉsultats et discussion ........................................................................................................ 41
6.1 Construction de la région promotrice du LAT ............................................................. 41
6.2 Effet du traitement au bisulfite ................................................................................... 43
6.3 Amplification par PCR nichée des échantillons traités au bisulfite ............................. 45
6.4 Clonage des amplicons obtenus à partir d'échantillons biologiques .......................... 47
6.5 Analyse des profils de méthylation du promoteur LAT dans différents contextes biologiques .............................................................................................................................. 50
6.5.1 Distribution des répétitions in vivo et in vitro ..................................................... 50
6.5.2 Profils de méthylation in vivo et in vitro ............................................................. 52
6.5.3 Pourcentage de méthylation pour chaque site CpG ........................................... 54
7 Discussion et conclusion ..................................................................................................... 57
8 Liste des figures ................................................................................................................... 59
9 Liste des tableaux ................................................................................................................ 60
10 Glossaire .......................................................................................................................... 61
11 Bibliographie ................................................................................................................... 65Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65676 Impact de la méthylation sur le promoteur des LATs durant l'infection in vivo et in vitro du virus de la maladie de Marek [TFE / Mémoire] / Oriana Laforgia, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Unité de Recherche Vétérinaire Intégrée URVI maladie de Malek microARN transcription expression phase de latence du MDV epigénétique culture cellulaire extraction ADN quantification ADN bisulfite nested PCR électrophorèse ADN purification acide nucléique ligation clonage LAT Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : SOMMAIRE
Remerciements
1 PrÉsentation du lieu de stage................................................................................................ 7
2 Introduction .......................................................................................................................... 9
3 Contexte général ................................................................................................................. 11
3.1 La maladie de Marek ................................................................................................... 11
3.1.1 Historique: ........................................................................................................... 11
3.1.2 Classification:....................................................................................................... 12
3.1.3 Formes cliniques.................................................................................................. 13
3.1.4 Structure du virus ................................................................................................ 14
3.1.5 Cycle de vie .......................................................................................................... 15
3.2 Les microARN .............................................................................................................. 17
3.2.1 Généralités .......................................................................................................... 17
3.2.2 Biogenèse des microARN .................................................................................... 18
3.2.3 Les microARN de GaHV-2 .................................................................................... 19
3.2.4 Initiation de la transcription et « core » promoteur ........................................... 20
3.3 Transcription et expression des gènes durant la phase de latence du MDV .............. 21
3.3.1 Le gène ICP4 ........................................................................................................ 21
3.3.3 LAT (Latency associated transcript) .................................................................... 22
3.4 Épigénétique ............................................................................................................... 24
3.4.1 Généralités .......................................................................................................... 24
3.4.2 Acétylation des histones ..................................................................................... 24
3.4.3 Phosphorylation des histones ............................................................................. 25
3.4.4 Méthylation des histones .................................................................................... 25
3.4.5 Méthylation de l'ADN .......................................................................................... 26
3.4.6 Méthylation de l'ADN dans le MDV .................................................................... 27
4 Objectifs et stratÉgie ........................................................................................................... 29
5 Matériel et méthodes ......................................................................................................... 31
5.1 Culture cellulaire ......................................................................................................... 31
5.1.1 Les cellules MSB-1 ............................................................................................... 31
5.1.2 Cellules embryonnaires de poulet infectées (CEFs) par la souche virale RB-1B . 31
5.1.3 Epithéliums de follicules plumeux (FFE) .............................................................. 31
5.2 Extraction d'ADN et quantification ............................................................................. 32
5.3 Traitement au bisulfite ................................................................................................ 32
5.4 Nested polymerase chain reaction (nested PCR) ........................................................ 34
5.5 Électrophorèse d'ADN ................................................................................................. 35
5.6 Purification des acides nucléiques .............................................................................. 36
5.7 Préparation des bactéries compétentes ..................................................................... 36
6
5.8 Ligation vecteur/insert ................................................................................................ 36
5.9 Clonage ........................................................................................................................ 37
5.10 Système blanc/bleu ..................................................................................................... 38
5.11 Screen PCR et séquençage .......................................................................................... 39
6 RÉsultats et discussion ........................................................................................................ 41
6.1 Construction de la région promotrice du LAT ............................................................. 41
6.2 Effet du traitement au bisulfite ................................................................................... 43
6.3 Amplification par PCR nichée des échantillons traités au bisulfite ............................. 45
6.4 Clonage des amplicons obtenus à partir d'échantillons biologiques .......................... 47
6.5 Analyse des profils de méthylation du promoteur LAT dans différents contextes biologiques .............................................................................................................................. 50
6.5.1 Distribution des répétitions in vivo et in vitro ..................................................... 50
6.5.2 Profils de méthylation in vivo et in vitro ............................................................. 52
6.5.3 Pourcentage de méthylation pour chaque site CpG ........................................... 54
7 Discussion et conclusion ..................................................................................................... 57
8 Liste des figures ................................................................................................................... 59
9 Liste des tableaux ................................................................................................................ 60
10 Glossaire .......................................................................................................................... 61
11 Bibliographie ................................................................................................................... 65Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65676 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire