Centre de Documentation Campus Montignies
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Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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20 résultat(s) recherche sur le mot-clé 'protéine'
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Une protéine responsable des pathologies de l'obésité / Oriane Dioux in La Recherche, 521 (Mars 2017)
[article]
Titre : Une protéine responsable des pathologies de l'obésité Type de document : texte imprimé Auteurs : Oriane Dioux Année de publication : 2017 Article en page(s) : p. 73-76 Langues : Français (fre) Mots-clés : Obésité protéine IRF5 graisses répartition diabète Résumé : Le surpoids engendre souvent des complications, tel le diabète. À l'origine, une protéine produite par les cellules immunitaires qui régit la répartition des graisses dans l'organisme. Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=75887
in La Recherche > 521 (Mars 2017) . - p. 73-76[article] Une protéine responsable des pathologies de l'obésité [texte imprimé] / Oriane Dioux . - 2017 . - p. 73-76.
Langues : Français (fre)
in La Recherche > 521 (Mars 2017) . - p. 73-76
Mots-clés : Obésité protéine IRF5 graisses répartition diabète Résumé : Le surpoids engendre souvent des complications, tel le diabète. À l'origine, une protéine produite par les cellules immunitaires qui régit la répartition des graisses dans l'organisme. Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=75887 Réservation
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Exemplaires (1)
Cote Support Localisation Section Disponibilité Revue Revue Centre de Documentation HELHa Campus Montignies Armoires à volets Disponible
DisponibleDifficulté d'interprétation de l'électrophorèse des protéines sériques : cas de la protéine C réactive in Annales de Biologie Clinique, 2 (1999)
[article]
Titre : Difficulté d'interprétation de l'électrophorèse des protéines sériques : cas de la protéine C réactive Type de document : texte imprimé Année de publication : 1999 Article en page(s) : 224 - 228 Mots-clés : PROTEINE CRP INFLAMMATION Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=69565
in Annales de Biologie Clinique > 2 (1999) . - 224 - 228[article] Difficulté d'interprétation de l'électrophorèse des protéines sériques : cas de la protéine C réactive [texte imprimé] . - 1999 . - 224 - 228.
in Annales de Biologie Clinique > 2 (1999) . - 224 - 228
Mots-clés : PROTEINE CRP INFLAMMATION Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=69565 Exemplaires (1)
Cote Support Localisation Section Disponibilité Revue Revue Centre de Documentation HELHa Campus Montignies Réserve Consultable sur demande auprès des documentalistes
Exclu du prêtEvaluation préclinique de nouveaux inhibiteurs épigénétiques d’interaction protéine-protéine dans la leucémie aiguë lymphoïde / Aline HEREMANS
Titre : Evaluation préclinique de nouveaux inhibiteurs épigénétiques d’interaction protéine-protéine dans la leucémie aiguë lymphoïde Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Aline HEREMANS, Auteur Année de publication : 2014 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : BIOLOGIE MÉDICALE CENTRE DE RECHERCHE EN CANCEROLOGIE DE MARSEILLE CRCM TRGET INHIBITEUR EPIGENETIQUE INTERACTION PROTEINE-PROTEINE LEUCEMIE AIGUE LYMPHOIDE LEUCEMIE CELLULES T ONCOGENESE C-MYC ONCOGENE RESISTANCE RECHUTE TRAITEMENT INHIBITEURS DE BROMODOMAINES BRD4 CYTOTOXICITE CELLULAIRE WESTERN BLOT IC50 PROTEINE QUANTIFICATION Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65390 Evaluation préclinique de nouveaux inhibiteurs épigénétiques d’interaction protéine-protéine dans la leucémie aiguë lymphoïde [TFE / Mémoire] / Aline HEREMANS, Auteur . - 2014.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Mise au point de la fluorimétrie différentielle à balayage sur l’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine en vue de réaliser un criblage d’inhibiteurs / DARLENE DE GROOTE
Titre : Mise au point de la fluorimétrie différentielle à balayage sur l’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine en vue de réaliser un criblage d’inhibiteurs Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : DARLENE DE GROOTE, Auteur Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur. laboratoire de Chimie Biologique et Structurale CBS Protéine Indoléamine 2,3-dioxygénase humaine // cancer Hido Fluorimétrie différentielle à balayage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine (hIDO) est une enzyme impliquée dans le métabolisme du tryptophane. Elle constitue une cible thérapeutique intéressante car elle permet aux cellules cancéreuses de développer des mécanismes de résistance face au système immunitaire.
Dès lors, cette enzyme fait l’objet de nombreuses recherches à l’Université de Namur. Ce travail de fin d’études est ainsi composé de deux parties : la mise au point d’un protocole de production et purification d’hIDO possédant une étiquette de 6 histidines clivable en vue de sa cristallisation ainsi que la mise au point de la fluorimétrie différentielle à balayage sur cette enzyme, afin de mettre en évidence une interaction enzyme-inhibiteur.
D’une part, nous allons mettre au point le protocole de production et de purification d’hIDO possédant une étiquette de 6 histidines clivable. Des cellules d’Escherichia coli BL21 (DE3) transformées avec un plasmide codant pour hIDO permettent la production de l’enzyme. La purification est réalisée par FPLC (fast protein liquid chromatography) à l’aide d’une colonne d’affinité au nickel (IMAC ou immobilized metal affinity chromatography). Nous avons obtenu 2,2 mg de protéine purifiée pour une culture de 200 ml. Des tests d’activité enzymatique ont révélés que les lots d’enzyme purifiée étaient inactifs. Suite à cela, des modifications ont été apportées au niveau du protocole (modification de la concentration en IPTG, du temps et de la température d’induction, du protocole de lyse et changement de précurseur), mais celles-ci n’ont pas permis d’obtenir de l’enzyme active.
D’autre part, la sélection d’inhibiteurs d’hIDO par tests d’inhibition enzymatique ont permis la mise au point de la technique de fluorimétrie différentielle à balayage (DSF ou differential scanning fluorimetry). Nous avons choisi le 4-phénylthiazole-2-thiol (C33) ainsi que le 4-phénylimidazole (PIM). Cette technique est à priori rapide, universelle, bon marché et est basée sur l’utilisation de la fluorescence pour étudier l’effet d’un inhibiteur sur la stabilité de la protéine. La mise au point de cette méthode sur hIDO a permis de montrer une différence significative sur la stabilité de la protéine à l’aide du protocole « Protein Thermal Shift TM Dye Kit », appliqué sur des stocks d’enzyme actifs disponibles au laboratoire. De plus, celui-ci est reproductible et nécessite peu d’enzyme et de réactifs.Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Introduction ................................................................................................................................ 8
Contexte général ........................................................................................................................ 9
1. La fluorimétrie différentielle à balayage ........................................................................ 9
2. L’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine .................................................................... 11 Métabolisme du tryptophane ................................................................................ 11
Intérêt thérapeutique ............................................................................................ 13
Choix du modèle protéique ................................................................................... 14
Inhibiteurs .............................................................................................................. 15
Caractéristiques ..................................................................................................... 16
Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 17
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 19
1. Techniques de biologie moléculaire ............................................................................ 19 Matériel biologique ................................................................................................ 19
Plasmide pET-15b-hIDO .................................................................................. 19
Cellules d’Escherichia coli (DH10b et BL21) ................................................... 19
Transformation bactérienne .................................................................................. 20
2. Techniques d’étude de protéines ................................................................................ 20 Mise en culture et surexpression ........................................................................... 20
Pré-culture ...................................................................................................... 20
Culture ............................................................................................................ 20
Induction ......................................................................................................... 21
Lyse bactérienne ............................................................................................. 21
Lyse par sonication .................................................................................... 22
Lyse à la presse de French ......................................................................... 22
Protocole ................................................................................................... 22
Purification ............................................................................................................. 22
Principe de la séparation ................................................................................ 23
Protocole......................................................................................................... 24
Electrophorèse SDS-page ....................................................................................... 25
Principe ........................................................................................................... 25
Protocole......................................................................................................... 26
Dialyse .................................................................................................................... 26
Principe ........................................................................................................... 27
Protocole......................................................................................................... 27
Détermination de la concentration protéique ...................................................... 28
Principe ........................................................................................................... 28
Protocole......................................................................................................... 28
Tests enzymatiques ................................................................................................ 29
Principe ........................................................................................................... 29
Protocole......................................................................................................... 29
3. Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ................................................................ 30 Principe .................................................................................................................. 30
Protocole ................................................................................................................ 31
Résultats et discussion ............................................................................................................. 32
1. Partie 1 : production et purification enzymatique ....................................................... 32 Culture cellulaire .................................................................................................... 32
Induction à l’IPTG ................................................................................................... 32
Lyse cellulaire ......................................................................................................... 33
Purification ............................................................................................................. 35
Caractérisation ....................................................................................................... 37
Quantification ................................................................................................. 37
Détermination de l’activité .................................................................................... 38
Test d’activité enzymatique............................................................................ 38
Rapport de l’absorbance 400/280 nm ............................................................ 40
Optimisation de la production et purification ....................................................... 41
Conclusion de la partie 1 ........................................................................................ 42
2. Partie 2 : mise au point de la DSF ................................................................................. 44 Tests d’inhibition enzymatique .............................................................................. 44
Spectres UV-visible des composés ......................................................................... 45
Protocoles utilisés .................................................................................................. 47
Premier Protocole inspiré de la littérature .................................................... 47
Protocole ................................................................................................... 47
Résultats et discussion .............................................................................. 48
Second protocole inspiré d’un kit ................................................................... 50
Protocole ................................................................................................... 50
Résultats et discussion .............................................................................. 50
Influence de la concentration en inhibiteur .............................................. 51
Comparaison des deux méthodes .................................................................. 53
Conclusion de la partie 2 ........................................................................................ 54
Conclusion et perspectives ....................................................................................................... 55
Table des abréviations.............................................................................................................. 56
Références bibliographiques .................................................................................................... 58
Table des annexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64032 Mise au point de la fluorimétrie différentielle à balayage sur l’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine en vue de réaliser un criblage d’inhibiteurs [TFE / Mémoire] / DARLENE DE GROOTE, Auteur . - 2015.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur. laboratoire de Chimie Biologique et Structurale CBS Protéine Indoléamine 2,3-dioxygénase humaine // cancer Hido Fluorimétrie différentielle à balayage Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine (hIDO) est une enzyme impliquée dans le métabolisme du tryptophane. Elle constitue une cible thérapeutique intéressante car elle permet aux cellules cancéreuses de développer des mécanismes de résistance face au système immunitaire.
Dès lors, cette enzyme fait l’objet de nombreuses recherches à l’Université de Namur. Ce travail de fin d’études est ainsi composé de deux parties : la mise au point d’un protocole de production et purification d’hIDO possédant une étiquette de 6 histidines clivable en vue de sa cristallisation ainsi que la mise au point de la fluorimétrie différentielle à balayage sur cette enzyme, afin de mettre en évidence une interaction enzyme-inhibiteur.
D’une part, nous allons mettre au point le protocole de production et de purification d’hIDO possédant une étiquette de 6 histidines clivable. Des cellules d’Escherichia coli BL21 (DE3) transformées avec un plasmide codant pour hIDO permettent la production de l’enzyme. La purification est réalisée par FPLC (fast protein liquid chromatography) à l’aide d’une colonne d’affinité au nickel (IMAC ou immobilized metal affinity chromatography). Nous avons obtenu 2,2 mg de protéine purifiée pour une culture de 200 ml. Des tests d’activité enzymatique ont révélés que les lots d’enzyme purifiée étaient inactifs. Suite à cela, des modifications ont été apportées au niveau du protocole (modification de la concentration en IPTG, du temps et de la température d’induction, du protocole de lyse et changement de précurseur), mais celles-ci n’ont pas permis d’obtenir de l’enzyme active.
D’autre part, la sélection d’inhibiteurs d’hIDO par tests d’inhibition enzymatique ont permis la mise au point de la technique de fluorimétrie différentielle à balayage (DSF ou differential scanning fluorimetry). Nous avons choisi le 4-phénylthiazole-2-thiol (C33) ainsi que le 4-phénylimidazole (PIM). Cette technique est à priori rapide, universelle, bon marché et est basée sur l’utilisation de la fluorescence pour étudier l’effet d’un inhibiteur sur la stabilité de la protéine. La mise au point de cette méthode sur hIDO a permis de montrer une différence significative sur la stabilité de la protéine à l’aide du protocole « Protein Thermal Shift TM Dye Kit », appliqué sur des stocks d’enzyme actifs disponibles au laboratoire. De plus, celui-ci est reproductible et nécessite peu d’enzyme et de réactifs.Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Introduction ................................................................................................................................ 8
Contexte général ........................................................................................................................ 9
1. La fluorimétrie différentielle à balayage ........................................................................ 9
2. L’indoléamine 2,3-dioxygénase humaine .................................................................... 11 Métabolisme du tryptophane ................................................................................ 11
Intérêt thérapeutique ............................................................................................ 13
Choix du modèle protéique ................................................................................... 14
Inhibiteurs .............................................................................................................. 15
Caractéristiques ..................................................................................................... 16
Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 17
Matériel et méthodes .............................................................................................................. 19
1. Techniques de biologie moléculaire ............................................................................ 19 Matériel biologique ................................................................................................ 19
Plasmide pET-15b-hIDO .................................................................................. 19
Cellules d’Escherichia coli (DH10b et BL21) ................................................... 19
Transformation bactérienne .................................................................................. 20
2. Techniques d’étude de protéines ................................................................................ 20 Mise en culture et surexpression ........................................................................... 20
Pré-culture ...................................................................................................... 20
Culture ............................................................................................................ 20
Induction ......................................................................................................... 21
Lyse bactérienne ............................................................................................. 21
Lyse par sonication .................................................................................... 22
Lyse à la presse de French ......................................................................... 22
Protocole ................................................................................................... 22
Purification ............................................................................................................. 22
Principe de la séparation ................................................................................ 23
Protocole......................................................................................................... 24
Electrophorèse SDS-page ....................................................................................... 25
Principe ........................................................................................................... 25
Protocole......................................................................................................... 26
Dialyse .................................................................................................................... 26
Principe ........................................................................................................... 27
Protocole......................................................................................................... 27
Détermination de la concentration protéique ...................................................... 28
Principe ........................................................................................................... 28
Protocole......................................................................................................... 28
Tests enzymatiques ................................................................................................ 29
Principe ........................................................................................................... 29
Protocole......................................................................................................... 29
3. Fluorimétrie différentielle à balayage (DSF) ................................................................ 30 Principe .................................................................................................................. 30
Protocole ................................................................................................................ 31
Résultats et discussion ............................................................................................................. 32
1. Partie 1 : production et purification enzymatique ....................................................... 32 Culture cellulaire .................................................................................................... 32
Induction à l’IPTG ................................................................................................... 32
Lyse cellulaire ......................................................................................................... 33
Purification ............................................................................................................. 35
Caractérisation ....................................................................................................... 37
Quantification ................................................................................................. 37
Détermination de l’activité .................................................................................... 38
Test d’activité enzymatique............................................................................ 38
Rapport de l’absorbance 400/280 nm ............................................................ 40
Optimisation de la production et purification ....................................................... 41
Conclusion de la partie 1 ........................................................................................ 42
2. Partie 2 : mise au point de la DSF ................................................................................. 44 Tests d’inhibition enzymatique .............................................................................. 44
Spectres UV-visible des composés ......................................................................... 45
Protocoles utilisés .................................................................................................. 47
Premier Protocole inspiré de la littérature .................................................... 47
Protocole ................................................................................................... 47
Résultats et discussion .............................................................................. 48
Second protocole inspiré d’un kit ................................................................... 50
Protocole ................................................................................................... 50
Résultats et discussion .............................................................................. 50
Influence de la concentration en inhibiteur .............................................. 51
Comparaison des deux méthodes .................................................................. 53
Conclusion de la partie 2 ........................................................................................ 54
Conclusion et perspectives ....................................................................................................... 55
Table des abréviations.............................................................................................................. 56
Références bibliographiques .................................................................................................... 58
Table des annexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64032 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Quand les protéines se rebellent / Anne Debroise in La Recherche. Hors-série, Hors-série 28 (Décembre 2018-janvier 2019)
[article]
Titre : Quand les protéines se rebellent Type de document : texte imprimé Auteurs : Anne Debroise Année de publication : 2018 Article en page(s) : p. 72-75 Langues : Français (fre) Mots-clés : Parkinson protéine alpha-synucléine a Résumé : À l'origine de la maladie de Parkinson, une protéine du cerveau, l'alpha-synucléine, devient pathologique quand elle forme des agrégats, provoquant la mort neuronale.
La maladie de Parkinson est-elle une maladie à prion ? La question a été largement discutée lors des derniers Congrès internationaux de la maladie de Parkinson et des troubles du mouvement, dont celui de 2018 qui s'est déroulé à Hong Kong. La dernière décennie de recherche a en effet montré le rôle essentiel joué par une protéine, l'alpha-synucléine, dont le comportement exhibe d'évidentes parentés avec celui des prions impliqués dans la maladie de Creutzfeldt-Jakob et la maladie de la vache folle. Comme eux, l'alpha-synucléine adopte des formes géométriques capables de s'agréger, formant des dépôts qui ravagent le cerveau des malades. Ce modèle a reçu une très sérieuse confirmation de la ...
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=77457
in La Recherche. Hors-série > Hors-série 28 (Décembre 2018-janvier 2019) . - p. 72-75[article] Quand les protéines se rebellent [texte imprimé] / Anne Debroise . - 2018 . - p. 72-75.
Langues : Français (fre)
in La Recherche. Hors-série > Hors-série 28 (Décembre 2018-janvier 2019) . - p. 72-75
Mots-clés : Parkinson protéine alpha-synucléine a Résumé : À l'origine de la maladie de Parkinson, une protéine du cerveau, l'alpha-synucléine, devient pathologique quand elle forme des agrégats, provoquant la mort neuronale.
La maladie de Parkinson est-elle une maladie à prion ? La question a été largement discutée lors des derniers Congrès internationaux de la maladie de Parkinson et des troubles du mouvement, dont celui de 2018 qui s'est déroulé à Hong Kong. La dernière décennie de recherche a en effet montré le rôle essentiel joué par une protéine, l'alpha-synucléine, dont le comportement exhibe d'évidentes parentés avec celui des prions impliqués dans la maladie de Creutzfeldt-Jakob et la maladie de la vache folle. Comme eux, l'alpha-synucléine adopte des formes géométriques capables de s'agréger, formant des dépôts qui ravagent le cerveau des malades. Ce modèle a reçu une très sérieuse confirmation de la ...
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=77457 Réservation
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Cote Support Localisation Section Disponibilité Revue Revue Centre de Documentation HELHa Campus Montignies Armoires à volets Disponible
DisponibleStructure et fonction des protéines / Gregory A. Petsko
PermalinkDes « Assemblages PROtéiques multi-Fonctionnels pour l’Innovation en industrie Laitière » (projet PROFIL) / Joëlle Léonil in IAA / Industries alimentaires et agricoles, 70 (11/12 2020)
PermalinkPermalinkEtude in vitro de la dégradabilité des protéines d’un enlisage / Nathalie Leva
PermalinkIls ont créé le premier être vivant qui rajeunit / Marine Corniou in Science et vie, 1121 (février 2011)
Permalink