Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation fermera à 17h30 ce mardi 4 juin.
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Etude du rôle du facteur de transcription Dmrt4 dans le développement du cortex cérébral chez la souris / ÉMILIE POSSONI
Titre : Etude du rôle du facteur de transcription Dmrt4 dans le développement du cortex cérébral chez la souris Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : ÉMILIE POSSONI, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Institut de Biologie et de Médecine Moléculaires IBMM Gosselies transcription Dmrt4 cortex cérébral souris Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE
INTRODUCTION GÉNÉRALE ................................................................................................................ 7
CONTEXTE THEORIQUE ...................................................................................................................... 8
1. Généralités sur le cortex cérébral .............................................................................................. 8
1.1 Origine embryonnaire du cortex cérébral ............................................................................ 9
1.2 Subdivisions du cortex cérébral ......................................................................................... 11
1.2.1 Le néocortex ................................................................................................................ 12
1.2.2 L’archicortex ................................................................................................................ 15
1.2.3 Le paléocortex ............................................................................................................. 15
2. Mécanismes impliqués dans la mise en place des aires du néocortex .................................... 15
2.1 Signaux provenant des centres organisateurs ................................................................... 15
2.1.1 L’hème cortical ............................................................................................................ 16
2.1.2 La plaque commissurale .............................................................................................. 17
2.1.3 L’anti-hème cortical..................................................................................................... 18
2.2 Facteurs de transcription impliqués dans la mise en place des aires ................................ 20
3. Corticogenèse ........................................................................................................................... 22
3.1 Déroulement de la corticogenèse ...................................................................................... 22
3.2 Les gènes proneuraux ........................................................................................................ 23
4. Famille des gènes Dmrt ............................................................................................................ 23
4.1 Sous famille A des gènes Dmrt ........................................................................................... 24
4.1.1 Dmrt3 et Dmrt5 ........................................................................................................... 25
4.1.2 Dmrt4 .......................................................................................................................... 26
5. Phénotype des souris Dmrt4 « knock-out » ............................................................................. 27
OBJECTIFS ET STRATEGIE .................................................................................................................. 29
MATERIEL ET METHODES ................................................................................................................. 31
1. Lignées de souris ...................................................................................................................... 31
1.1 Obtention des souris Dmrt4Δ/Δ ........................................................................................... 31
1.2 Génotypage ........................................................................................................................ 32
1.2.1 Extraction d’ADN ......................................................................................................... 32
1.2.2 PCR Dmrt4Δ .................................................................................................................. 33
1.2.3 PCR Dmrt4LoxP ............................................................................................................ 35
2. Prélèvements et conservations des échantillons ..................................................................... 36
2.1 Fécondation et prélèvement .............................................................................................. 36
2.2 Conservation des embryons ............................................................................................... 36
2.3 Coupes au cryostat ............................................................................................................. 37
2.4 Conservation des cerveaux entiers .................................................................................... 37
3. Hybridation in situ (HIS) ........................................................................................................... 37
3.1 Préparation des sondes ...................................................................................................... 38
3.2 HIS sur cryosections ........................................................................................................... 38
3.3 HIS sur cerveaux entiers (Whole-mount) ........................................................................... 40
4. RT-qPCR .................................................................................................................................... 42
4.1 Extraction D’ARNs .............................................................................................................. 42
4.2 Transcription inverse .......................................................................................................... 42
4.3 PCR quantitative (qPCR) ..................................................................................................... 42
RESULTATS ET DISCUSSION .............................................................................................................. 45
1. Dmrt4 et la formation des aires primaires du néocortex ......................................................... 45
1.1 L’absence de Dmrt4 n’affecte pas la formation des aires du néocortex ........................... 45
1.2 Aucune variation significative de la surface des hémisphères cérébraux à P7 chez les souris Dmrt4Δ/Δ ......................................................................................................................... 47
2. Dmrt4 et le centre organisateur correspondant à l’anti-hème................................................ 47
2.1 L’expression de Sfrp2 ne semble pas varier chez les souris Dmrt4Δ/Δ à E12.5. .................. 47
2.2 L’expression de Dbx1 semble légèrement diminuée chez les souris Dmrt4Δ/Δ à E12.5 ..... 48
3. Dmrt4 et son rôle dans la corticogenèse ................................................................................. 49
3.1 L’expression du gène proneural Ascl1 semble perturbée au cours du développement embryonnaire chez les embryons Dmrt4Δ/Δ ............................................................................. 49
3.2 L’expression de Ngn2 semble diminuée chez les embryons Dmrt4Δ/Δ au cours de la corticogenèse ........................................................................................................................... 51
4. Potentiel rôle de Dmrt4 dans les ganglions crâniaux ............................................................... 52
4.1 Différence de patron d’expression de Sfrp2 au niveau du ganglion trigeminal ................. 52
4.2 Défaut de génération des neurones au niveaux des ganglions crâniaux chez les souris Dmrt4Δ/Δ .................................................................................................................................... 53
5. RT-qPCR .................................................................................................................................... 54
CONCLUSION ET PERSPECTIVES ....................................................................................................... 57
ABREVIATIONS .................................................................................................................................. 59
GLOSSAIRE ........................................................................................................................................ 61
LISTE DES FIGURES ........................................................................................................................... 63
BIBLIOGRAPHIE ................................................................................................................................. 65Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65689 Etude du rôle du facteur de transcription Dmrt4 dans le développement du cortex cérébral chez la souris [TFE / Mémoire] / ÉMILIE POSSONI, Auteur . - 2016.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Institut de Biologie et de Médecine Moléculaires IBMM Gosselies transcription Dmrt4 cortex cérébral souris Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE
INTRODUCTION GÉNÉRALE ................................................................................................................ 7
CONTEXTE THEORIQUE ...................................................................................................................... 8
1. Généralités sur le cortex cérébral .............................................................................................. 8
1.1 Origine embryonnaire du cortex cérébral ............................................................................ 9
1.2 Subdivisions du cortex cérébral ......................................................................................... 11
1.2.1 Le néocortex ................................................................................................................ 12
1.2.2 L’archicortex ................................................................................................................ 15
1.2.3 Le paléocortex ............................................................................................................. 15
2. Mécanismes impliqués dans la mise en place des aires du néocortex .................................... 15
2.1 Signaux provenant des centres organisateurs ................................................................... 15
2.1.1 L’hème cortical ............................................................................................................ 16
2.1.2 La plaque commissurale .............................................................................................. 17
2.1.3 L’anti-hème cortical..................................................................................................... 18
2.2 Facteurs de transcription impliqués dans la mise en place des aires ................................ 20
3. Corticogenèse ........................................................................................................................... 22
3.1 Déroulement de la corticogenèse ...................................................................................... 22
3.2 Les gènes proneuraux ........................................................................................................ 23
4. Famille des gènes Dmrt ............................................................................................................ 23
4.1 Sous famille A des gènes Dmrt ........................................................................................... 24
4.1.1 Dmrt3 et Dmrt5 ........................................................................................................... 25
4.1.2 Dmrt4 .......................................................................................................................... 26
5. Phénotype des souris Dmrt4 « knock-out » ............................................................................. 27
OBJECTIFS ET STRATEGIE .................................................................................................................. 29
MATERIEL ET METHODES ................................................................................................................. 31
1. Lignées de souris ...................................................................................................................... 31
1.1 Obtention des souris Dmrt4Δ/Δ ........................................................................................... 31
1.2 Génotypage ........................................................................................................................ 32
1.2.1 Extraction d’ADN ......................................................................................................... 32
1.2.2 PCR Dmrt4Δ .................................................................................................................. 33
1.2.3 PCR Dmrt4LoxP ............................................................................................................ 35
2. Prélèvements et conservations des échantillons ..................................................................... 36
2.1 Fécondation et prélèvement .............................................................................................. 36
2.2 Conservation des embryons ............................................................................................... 36
2.3 Coupes au cryostat ............................................................................................................. 37
2.4 Conservation des cerveaux entiers .................................................................................... 37
3. Hybridation in situ (HIS) ........................................................................................................... 37
3.1 Préparation des sondes ...................................................................................................... 38
3.2 HIS sur cryosections ........................................................................................................... 38
3.3 HIS sur cerveaux entiers (Whole-mount) ........................................................................... 40
4. RT-qPCR .................................................................................................................................... 42
4.1 Extraction D’ARNs .............................................................................................................. 42
4.2 Transcription inverse .......................................................................................................... 42
4.3 PCR quantitative (qPCR) ..................................................................................................... 42
RESULTATS ET DISCUSSION .............................................................................................................. 45
1. Dmrt4 et la formation des aires primaires du néocortex ......................................................... 45
1.1 L’absence de Dmrt4 n’affecte pas la formation des aires du néocortex ........................... 45
1.2 Aucune variation significative de la surface des hémisphères cérébraux à P7 chez les souris Dmrt4Δ/Δ ......................................................................................................................... 47
2. Dmrt4 et le centre organisateur correspondant à l’anti-hème................................................ 47
2.1 L’expression de Sfrp2 ne semble pas varier chez les souris Dmrt4Δ/Δ à E12.5. .................. 47
2.2 L’expression de Dbx1 semble légèrement diminuée chez les souris Dmrt4Δ/Δ à E12.5 ..... 48
3. Dmrt4 et son rôle dans la corticogenèse ................................................................................. 49
3.1 L’expression du gène proneural Ascl1 semble perturbée au cours du développement embryonnaire chez les embryons Dmrt4Δ/Δ ............................................................................. 49
3.2 L’expression de Ngn2 semble diminuée chez les embryons Dmrt4Δ/Δ au cours de la corticogenèse ........................................................................................................................... 51
4. Potentiel rôle de Dmrt4 dans les ganglions crâniaux ............................................................... 52
4.1 Différence de patron d’expression de Sfrp2 au niveau du ganglion trigeminal ................. 52
4.2 Défaut de génération des neurones au niveaux des ganglions crâniaux chez les souris Dmrt4Δ/Δ .................................................................................................................................... 53
5. RT-qPCR .................................................................................................................................... 54
CONCLUSION ET PERSPECTIVES ....................................................................................................... 57
ABREVIATIONS .................................................................................................................................. 59
GLOSSAIRE ........................................................................................................................................ 61
LISTE DES FIGURES ........................................................................................................................... 63
BIBLIOGRAPHIE ................................................................................................................................. 65Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65689 Exemplaires
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