Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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Auteur Cemile Develi |
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Vérification des performances analytiques de 2 kits commerciaux pour le dosage des vitamines A/E et du bêta-carotène par chromatographie liquide (HPLC-UV) / Cemile Develi
Titre : Vérification des performances analytiques de 2 kits commerciaux pour le dosage des vitamines A/E et du bêta-carotène par chromatographie liquide (HPLC-UV) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Cemile Develi, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les vitamines A et E sont des substances organiques qui font parties des vitamines liposolubles. Le bêta-carotène est un précurseur de vitamine A. il s’agit de la principale provitamine A qui se transforme dans l’organisme via des processus métaboliques. Ces trois molécules sont synthétisées en faible quantité ou non synthétisés par l’homme, elles sont fournies par l’alimentation. Elles sont indispensables à la vie et participent à différentes fonctions de l’organisme. Leur dosage dans le sang permet de diagnostiquer une carence ou un excès vitaminique.
La méthode de référence du dosage de ces composés est la chromatographie liquide à haute pression. Le secteur de biochimie spéciale du Laboratoire Hospitalier Universitaire de Bruxelles – Universitair Laboratorium van Brussel (LHUB-ULB) utilise une méthode HPLC couplé à un détecteur UV-Visible de type DAD, qui a été développée au sein même du laboratoire selon les procédures internes du LHUB-ULB.
Cependant, une nouvelle réglementation IVDR, Règlement Diagnostic In Vitro, de type Européen qui entrera bientôt en vigueur, impose les laboratoires de biologie médicale d’utiliser des méthodes commerciales marquées CE-IVD s’ils en existent sur le marché.
En vue de cette future réglementation, le laboratoire de Biochimie spéciale est tenu de remplacer la méthode non commerciale dite « home made » par deux méthodes commerciales qui existe sur le marché. Ces méthodes sont fournies par la firme Chromsystems®.
Afin de voir si les performances analytiques de ces méthodes commerciales sont satisfaisantes, le laboratoire réalise une vérification des performances analytiques qui consiste le sujet principal de ce travail. La vérification s’effectue en évaluant certains critères comme la répétabilité, la fidélité intermédiaire, la robustesse, l’exactitude et la corrélation. D’autres tests qui ne sont pas censés être réalisés lors d’une vérification des performances analytiques et une comparaison entre les méthodes commerciales et la méthode « home made » du laboratoire ont également été réalisés.Note de contenu : 4
Tables des matières
Remerciements ..................................................................................................................... 3
Tables des matières ............................................................................................................... 4
Présentation du lieu de stage................................................................................................ 6
Introduction générale............................................................................................................ 7
Contexte général ................................................................................................................... 9
1 Les vitamines ..................................................................................................................... 9
1.1 Généralités ................................................................................................................ 9
1.2 La vitamine A ........................................................................................................... 10
1.3 Le bêta-carotène ..................................................................................................... 11
1.4 La vitamine E ........................................................................................................... 12
2 La chromatographie ........................................................................................................ 14
2.1 Définition ................................................................................................................. 14
2.2 La chromatographie liquide .................................................................................... 15
2.2.1 Méthode de séparation ..................................................................................... 15
2.2.2 La chromatographie liquide à haute/ultra performance .................................. 17
3 Traitement des échantillons ............................................................................................ 20
3.1 Contexte .................................................................................................................. 20
3.2 Les techniques de préparations des échantillons ................................................... 20
4 La validation et la vérification ......................................................................................... 23
4.1 La vérification des performances analytiques ........................................................ 24
4.1.1 La fidélité ........................................................................................................... 24
4.1.2 La justesse ou l’exactitude ................................................................................ 25
4.1.3 Incertitude de mesure ....................................................................................... 25
4.1.4 Comparaison de méthode ................................................................................. 25
Objectifs et stratégie ........................................................................................................... 26
Matériel et méthodes.......................................................................................................... 27
1 Matériel ........................................................................................................................... 27
1.1 Kits commerciaux .................................................................................................... 27
1.2 Méthode « home made » (LHUB-ULB) .................................................................... 28
1.3 Appareillages ........................................................................................................... 29
1.4 Matériel de laboratoire ........................................................................................... 29
1.5 Echantillons ............................................................................................................. 30
5
2 Méthodes ........................................................................................................................ 31
2.1 Méthode bêta-carotène ChromSystems ® .............................................................. 31
2.2 Méthode vitamine A/E ChromSystems ® ................................................................ 31
2.3 Méthode « home made » (LHUB-ULB) .................................................................... 31
2.4 Conditions chromatographiques des méthodes ..................................................... 33
Résultats et discussion ........................................................................................................ 34
1 Mise en place des méthodes sur le système HPLC ......................................................... 34
2 La vérification des performances analytiques ................................................................ 39
2.1 La répétabilité.......................................................................................................... 40
2.2 La fidélité intermédiaire .......................................................................................... 41
2.3 L’exactitude ............................................................................................................. 43
2.4 La corrélation........................................................................................................... 45
2.5 La robustesse ........................................................................................................... 47
2.6 Etendue de mesure ................................................................................................. 50
2.7 Les interférences ..................................................................................................... 50
2.8 La stabilité (demi-volume)....................................................................................... 52
3 Comparaison des méthodes Chromsystems avec la méthode « home made »............. 53
Conclusion générale et perspectives................................................................................... 58
Liste des abréviations .......................................................................................................... 59
Liste des figures ................................................................................................................... 60
Liste des tableaux ................................................................................................................ 61
Bibliographie........................................................................................................................ 62
Annexes ............................................................................................................................... 67
Résumé ................................................................................................................................ 76
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105753 Vérification des performances analytiques de 2 kits commerciaux pour le dosage des vitamines A/E et du bêta-carotène par chromatographie liquide (HPLC-UV) [TFE / Mémoire] / Cemile Develi, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les vitamines A et E sont des substances organiques qui font parties des vitamines liposolubles. Le bêta-carotène est un précurseur de vitamine A. il s’agit de la principale provitamine A qui se transforme dans l’organisme via des processus métaboliques. Ces trois molécules sont synthétisées en faible quantité ou non synthétisés par l’homme, elles sont fournies par l’alimentation. Elles sont indispensables à la vie et participent à différentes fonctions de l’organisme. Leur dosage dans le sang permet de diagnostiquer une carence ou un excès vitaminique.
La méthode de référence du dosage de ces composés est la chromatographie liquide à haute pression. Le secteur de biochimie spéciale du Laboratoire Hospitalier Universitaire de Bruxelles – Universitair Laboratorium van Brussel (LHUB-ULB) utilise une méthode HPLC couplé à un détecteur UV-Visible de type DAD, qui a été développée au sein même du laboratoire selon les procédures internes du LHUB-ULB.
Cependant, une nouvelle réglementation IVDR, Règlement Diagnostic In Vitro, de type Européen qui entrera bientôt en vigueur, impose les laboratoires de biologie médicale d’utiliser des méthodes commerciales marquées CE-IVD s’ils en existent sur le marché.
En vue de cette future réglementation, le laboratoire de Biochimie spéciale est tenu de remplacer la méthode non commerciale dite « home made » par deux méthodes commerciales qui existe sur le marché. Ces méthodes sont fournies par la firme Chromsystems®.
Afin de voir si les performances analytiques de ces méthodes commerciales sont satisfaisantes, le laboratoire réalise une vérification des performances analytiques qui consiste le sujet principal de ce travail. La vérification s’effectue en évaluant certains critères comme la répétabilité, la fidélité intermédiaire, la robustesse, l’exactitude et la corrélation. D’autres tests qui ne sont pas censés être réalisés lors d’une vérification des performances analytiques et une comparaison entre les méthodes commerciales et la méthode « home made » du laboratoire ont également été réalisés.Note de contenu : 4
Tables des matières
Remerciements ..................................................................................................................... 3
Tables des matières ............................................................................................................... 4
Présentation du lieu de stage................................................................................................ 6
Introduction générale............................................................................................................ 7
Contexte général ................................................................................................................... 9
1 Les vitamines ..................................................................................................................... 9
1.1 Généralités ................................................................................................................ 9
1.2 La vitamine A ........................................................................................................... 10
1.3 Le bêta-carotène ..................................................................................................... 11
1.4 La vitamine E ........................................................................................................... 12
2 La chromatographie ........................................................................................................ 14
2.1 Définition ................................................................................................................. 14
2.2 La chromatographie liquide .................................................................................... 15
2.2.1 Méthode de séparation ..................................................................................... 15
2.2.2 La chromatographie liquide à haute/ultra performance .................................. 17
3 Traitement des échantillons ............................................................................................ 20
3.1 Contexte .................................................................................................................. 20
3.2 Les techniques de préparations des échantillons ................................................... 20
4 La validation et la vérification ......................................................................................... 23
4.1 La vérification des performances analytiques ........................................................ 24
4.1.1 La fidélité ........................................................................................................... 24
4.1.2 La justesse ou l’exactitude ................................................................................ 25
4.1.3 Incertitude de mesure ....................................................................................... 25
4.1.4 Comparaison de méthode ................................................................................. 25
Objectifs et stratégie ........................................................................................................... 26
Matériel et méthodes.......................................................................................................... 27
1 Matériel ........................................................................................................................... 27
1.1 Kits commerciaux .................................................................................................... 27
1.2 Méthode « home made » (LHUB-ULB) .................................................................... 28
1.3 Appareillages ........................................................................................................... 29
1.4 Matériel de laboratoire ........................................................................................... 29
1.5 Echantillons ............................................................................................................. 30
5
2 Méthodes ........................................................................................................................ 31
2.1 Méthode bêta-carotène ChromSystems ® .............................................................. 31
2.2 Méthode vitamine A/E ChromSystems ® ................................................................ 31
2.3 Méthode « home made » (LHUB-ULB) .................................................................... 31
2.4 Conditions chromatographiques des méthodes ..................................................... 33
Résultats et discussion ........................................................................................................ 34
1 Mise en place des méthodes sur le système HPLC ......................................................... 34
2 La vérification des performances analytiques ................................................................ 39
2.1 La répétabilité.......................................................................................................... 40
2.2 La fidélité intermédiaire .......................................................................................... 41
2.3 L’exactitude ............................................................................................................. 43
2.4 La corrélation........................................................................................................... 45
2.5 La robustesse ........................................................................................................... 47
2.6 Etendue de mesure ................................................................................................. 50
2.7 Les interférences ..................................................................................................... 50
2.8 La stabilité (demi-volume)....................................................................................... 52
3 Comparaison des méthodes Chromsystems avec la méthode « home made »............. 53
Conclusion générale et perspectives................................................................................... 58
Liste des abréviations .......................................................................................................... 59
Liste des figures ................................................................................................................... 60
Liste des tableaux ................................................................................................................ 61
Bibliographie........................................................................................................................ 62
Annexes ............................................................................................................................... 67
Résumé ................................................................................................................................ 76
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