Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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Auteur Sara BOUSSALAÂ |
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Caractérisation de plasmides d’Escherichia coli productrices de bêta-lactamase à spectre étendu provenant d’Afrique centrale / Sara BOUSSALAÂ
Titre : Caractérisation de plasmides d’Escherichia coli productrices de bêta-lactamase à spectre étendu provenant d’Afrique centrale Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Sara BOUSSALAÂ, Auteur ; M Irenge, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale UCL Woluwé St Lambert Centre de technologie moléculaire appliqué. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : TABLE DES MATIERES
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction générale ...................................................................................................................... 7
1. Contexte et principes de base à la compréhension de l’étude ............................................... 8
1.1. La problématique de la résistance des microorganismes aux antibiotiques .............. 8
1.2. Les bêta-lactamines ..................................................................................................... 9
1.3. Mécanisme d’action des bêta-lactamines ................................................................. 10
1.3.1. Pénétration dans la bactérie .............................................................................. 10
1.3.2. Activité antibactérienne ..................................................................................... 10
1.4. Mécanisme de résistance aux bêta-lactamines ........................................................ 12
1.4.1. Les bêta-lactamases ........................................................................................... 12
1.4.2. Les bêta-lactamases à spectre étendu (BLSE) .................................................... 13
1.4.3. Gènes de la résistance BLSE ............................................................................... 13
1.4.4. Mobilité de la résistance aux bêta-lactamines .................................................. 15
2. Présentation de la question de recherche ............................................................................. 16
3. Matériel et méthodes............................................................................................................. 17
3.1 Plan de travail ............................................................................................................ 17
3.2 Liste des bactéries et des transconjugants ................................................................ 18
3.3 Isolement des bactéries ............................................................................................. 19
3.4 Antibiogramme et test de double synergie ............................................................... 20
3.5 Test Indole et MR/VP ................................................................................................. 22
3.6 Extraction d’ADN chromosomique ............................................................................ 23
3.7 Extraction d’ADN plasmidique sur les transconjugants obtenus à partir des souches africaines. .............................................................................................................................. 25
3.8 Dosage de la concentration en ADN par Nanodrop .................................................. 28
3.9 Dosage de la concentration en ADN par Qubit ......................................................... 29
3.10 Restriction enzymatique ............................................................................................ 31
3.11 Estimation de la taille des plasmides après digestion enzymatique ......................... 32
3.12 PCR (A-tailing) ............................................................................................................ 33
3.13 Purification du produit PCR ....................................................................................... 35
3.14 Clonage (TA Cloning).................................................................................................. 35
3.15 Le séquençage des produits après restriction ........................................................... 39
3.16 Traitement des données obtenues après séquençage ............................................. 41
4. Résultats et discussion ........................................................................................................... 42
4.1. Isolement d’Enterobacteriaceae provenant d’Afrique sur gélose ............................ 42
4.2. Antibiogramme et test de double synergie ............................................................... 44
4.3. Test MR/VP et indole ................................................................................................. 47
4.4. Estimation de la taille des plasmides......................................................................... 48
4.5. Transformation de cellules compétentes .................................................................. 52
5
4.6. Migration des ADN plasmidiques recombinants après digestion par XhoI ............... 52
4.7. Séquençage des produits après digestion ................................................................. 53
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65826 Caractérisation de plasmides d’Escherichia coli productrices de bêta-lactamase à spectre étendu provenant d’Afrique centrale [TFE / Mémoire] / Sara BOUSSALAÂ, Auteur ; M Irenge, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale UCL Woluwé St Lambert Centre de technologie moléculaire appliqué. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : TABLE DES MATIERES
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction générale ...................................................................................................................... 7
1. Contexte et principes de base à la compréhension de l’étude ............................................... 8
1.1. La problématique de la résistance des microorganismes aux antibiotiques .............. 8
1.2. Les bêta-lactamines ..................................................................................................... 9
1.3. Mécanisme d’action des bêta-lactamines ................................................................. 10
1.3.1. Pénétration dans la bactérie .............................................................................. 10
1.3.2. Activité antibactérienne ..................................................................................... 10
1.4. Mécanisme de résistance aux bêta-lactamines ........................................................ 12
1.4.1. Les bêta-lactamases ........................................................................................... 12
1.4.2. Les bêta-lactamases à spectre étendu (BLSE) .................................................... 13
1.4.3. Gènes de la résistance BLSE ............................................................................... 13
1.4.4. Mobilité de la résistance aux bêta-lactamines .................................................. 15
2. Présentation de la question de recherche ............................................................................. 16
3. Matériel et méthodes............................................................................................................. 17
3.1 Plan de travail ............................................................................................................ 17
3.2 Liste des bactéries et des transconjugants ................................................................ 18
3.3 Isolement des bactéries ............................................................................................. 19
3.4 Antibiogramme et test de double synergie ............................................................... 20
3.5 Test Indole et MR/VP ................................................................................................. 22
3.6 Extraction d’ADN chromosomique ............................................................................ 23
3.7 Extraction d’ADN plasmidique sur les transconjugants obtenus à partir des souches africaines. .............................................................................................................................. 25
3.8 Dosage de la concentration en ADN par Nanodrop .................................................. 28
3.9 Dosage de la concentration en ADN par Qubit ......................................................... 29
3.10 Restriction enzymatique ............................................................................................ 31
3.11 Estimation de la taille des plasmides après digestion enzymatique ......................... 32
3.12 PCR (A-tailing) ............................................................................................................ 33
3.13 Purification du produit PCR ....................................................................................... 35
3.14 Clonage (TA Cloning).................................................................................................. 35
3.15 Le séquençage des produits après restriction ........................................................... 39
3.16 Traitement des données obtenues après séquençage ............................................. 41
4. Résultats et discussion ........................................................................................................... 42
4.1. Isolement d’Enterobacteriaceae provenant d’Afrique sur gélose ............................ 42
4.2. Antibiogramme et test de double synergie ............................................................... 44
4.3. Test MR/VP et indole ................................................................................................. 47
4.4. Estimation de la taille des plasmides......................................................................... 48
4.5. Transformation de cellules compétentes .................................................................. 52
5
4.6. Migration des ADN plasmidiques recombinants après digestion par XhoI ............... 52
4.7. Séquençage des produits après digestion ................................................................. 53
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