Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h30-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
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| Titre : |
Optimisation de protocoles d’extraction protéique de farines d’insectes dans le cadre du développement d’analyses en spectrométrie de masse |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Romain Sanna, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef |
| Editeur : |
Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie |
| Année de publication : |
2019 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
Agronomie AIBT CRA-W protéines farines d'insectes |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Note de contenu : |
Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11
I. Partie théorique ............................................................................................................... 13
1 Introduction du sujet ........................................................................................................ 14
2 Préparation des échantillons pour les analyses ............................................................... 16
2.1 Broyage ..................................................................................................................... 16
2.1.1 Broyeur à marteaux ............................................................................................ 16
2.1.2 Broyeur à cylindres ............................................................................................. 16
2.1.3 Broyeur ultracentrifuge ..................................................................................... 17
2.1.4 Samples Grinding Kit .......................................................................................... 18
2.2 Extraction : réactifs utilisés lors des différents protocoles ...................................... 18
2.2.1 Trishydroxyméthyl-aminométhane (Tris) .......................................................... 18
2.2.2 Urée .................................................................................................................... 19
2.2.3 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) ............................................................................ 20
2.2.4 Dithiothréitol (DTT) ............................................................................................ 20
2.2.5 Acide trichloro-acétique (TCA) ........................................................................... 21
2.2.6 Acide chlorhydrique (HCl) .................................................................................. 22
2.2.7 DIGE (Differential Gel Electrophoresis) labelling buffer (DLA)........................... 22
3 Experimentation ............................................................................................................... 23
3.1 Dosage Pierce ........................................................................................................... 23
3.2 Dosage de l’azote protéique par la méthode Kjeldahl ............................................. 24
3.3 Spectrométrie de masse en tandem ........................................................................ 25
II. Partie pratique ................................................................................................................. 29
Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 30
1 Matériels et réactifs ......................................................................................................... 30
2 Méthodologie ................................................................................................................... 31
2.1 Préparation des solutions ........................................................................................ 31
2.1.1 Tampon Tris-Urée ............................................................................................... 31
2.1.2 Tampon SDS-Tris ................................................................................................ 31
2.1.3 HCl ...................................................................................................................... 31
2.1.4 DLA ..................................................................................................................... 31
2.1.5 TCA/acétone ....................................................................................................... 32
2.2 Préparation des échantillons.................................................................................... 32
2.3 Protocoles testés ...................................................................................................... 33
2.3.1 Protocole Tris-Urée « normal » 1 ....................................................................... 33
2.3.2 Protocole Tris-Urée « modifié » ......................................................................... 34
2.3.3 Protocole Tris-Urée « normal » 2 ....................................................................... 34
2.3.4 Protocole HCl ...................................................................................................... 34
2.3.5 Protocole TCA/acétone ...................................................................................... 35
2.3.6 Protocole SDS 4 % .............................................................................................. 35
2.4 Dosage Pierce (Protein Assay 660 nm) ..................................................................... 36
2.5 Dosage des protéines totales ................................................................................... 39
3 Résultats et discussion ..................................................................................................... 40
3.1 Dosage Kjeldahl ........................................................................................................ 40
3.2 Comparaison des protocoles Tris-Urée avec le protocole SDS 4 % ......................... 41
3.3 Comparaison entre les protocoles Tris-Urée, Tris + HCl et TCA/acétone ................ 44
3.4 Comparaison des 3 protocoles choisis sur l’ensemble des échantillons ................. 46
4 Conclusion ........................................................................................................................ 48
Abréviations ............................................................................................................................. 50
Glossaire ................................................................................................................................... 51
Bibliographie ............................................................................................................................ 52
Annexes .................................................................................................................................... |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=79740 |
Optimisation de protocoles d’extraction protéique de farines d’insectes dans le cadre du développement d’analyses en spectrométrie de masse [TFE / Mémoire] / Romain Sanna, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2019. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
Agronomie AIBT CRA-W protéines farines d'insectes |
| Index. décimale : |
TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies |
| Note de contenu : |
Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11
I. Partie théorique ............................................................................................................... 13
1 Introduction du sujet ........................................................................................................ 14
2 Préparation des échantillons pour les analyses ............................................................... 16
2.1 Broyage ..................................................................................................................... 16
2.1.1 Broyeur à marteaux ............................................................................................ 16
2.1.2 Broyeur à cylindres ............................................................................................. 16
2.1.3 Broyeur ultracentrifuge ..................................................................................... 17
2.1.4 Samples Grinding Kit .......................................................................................... 18
2.2 Extraction : réactifs utilisés lors des différents protocoles ...................................... 18
2.2.1 Trishydroxyméthyl-aminométhane (Tris) .......................................................... 18
2.2.2 Urée .................................................................................................................... 19
2.2.3 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) ............................................................................ 20
2.2.4 Dithiothréitol (DTT) ............................................................................................ 20
2.2.5 Acide trichloro-acétique (TCA) ........................................................................... 21
2.2.6 Acide chlorhydrique (HCl) .................................................................................. 22
2.2.7 DIGE (Differential Gel Electrophoresis) labelling buffer (DLA)........................... 22
3 Experimentation ............................................................................................................... 23
3.1 Dosage Pierce ........................................................................................................... 23
3.2 Dosage de l’azote protéique par la méthode Kjeldahl ............................................. 24
3.3 Spectrométrie de masse en tandem ........................................................................ 25
II. Partie pratique ................................................................................................................. 29
Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 30
1 Matériels et réactifs ......................................................................................................... 30
2 Méthodologie ................................................................................................................... 31
2.1 Préparation des solutions ........................................................................................ 31
2.1.1 Tampon Tris-Urée ............................................................................................... 31
2.1.2 Tampon SDS-Tris ................................................................................................ 31
2.1.3 HCl ...................................................................................................................... 31
2.1.4 DLA ..................................................................................................................... 31
2.1.5 TCA/acétone ....................................................................................................... 32
2.2 Préparation des échantillons.................................................................................... 32
2.3 Protocoles testés ...................................................................................................... 33
2.3.1 Protocole Tris-Urée « normal » 1 ....................................................................... 33
2.3.2 Protocole Tris-Urée « modifié » ......................................................................... 34
2.3.3 Protocole Tris-Urée « normal » 2 ....................................................................... 34
2.3.4 Protocole HCl ...................................................................................................... 34
2.3.5 Protocole TCA/acétone ...................................................................................... 35
2.3.6 Protocole SDS 4 % .............................................................................................. 35
2.4 Dosage Pierce (Protein Assay 660 nm) ..................................................................... 36
2.5 Dosage des protéines totales ................................................................................... 39
3 Résultats et discussion ..................................................................................................... 40
3.1 Dosage Kjeldahl ........................................................................................................ 40
3.2 Comparaison des protocoles Tris-Urée avec le protocole SDS 4 % ......................... 41
3.3 Comparaison entre les protocoles Tris-Urée, Tris + HCl et TCA/acétone ................ 44
3.4 Comparaison des 3 protocoles choisis sur l’ensemble des échantillons ................. 46
4 Conclusion ........................................................................................................................ 48
Abréviations ............................................................................................................................. 50
Glossaire ................................................................................................................................... 51
Bibliographie ............................................................................................................................ 52
Annexes .................................................................................................................................... |
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Exemplaires
