Validation du dosage des IgE totales sur le Phadia 250 par immunofluorescence / Luca Hutsenband

Public ISBD Titre : Validation du dosage des IgE totales sur le Phadia 250 par immunofluorescence Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Luca Hutsenband, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : GHDC  Saint-Joseph Gilly Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études a été réalisé au laboratoire du GHdC (Grand Hôpital de Charleroi) site Saint-Joseph à Gilly en chimie clinique dans le secteur ligne sérum. Le sujet central du mémoire consiste en la validation d’une méthode de dosage des immunoglobulines E totales. La mesure de la concentration de ces anticorps est réalisée dans de nombreux laboratoires hospitaliers en cas de suspicion d’allergie. En effet, il s’agit des immunoglobulines sécrétées lorsqu’une substance étrangère pénètre dans l’organisme (allergène). Donc déterminer leur concentration est le meilleur moyen de confirmer le diagnostic de réaction d’hypersensibilité. Par ailleurs, une production excessive d’IgE peut également être associée à certaines parasitoses (infections provoquées par des helminthes). Au GHdC site Saint-Joseph, la concentration de ces anticorps est déterminée par immuno-chimiluminescence sur l’automate Immulite 2000 XPi (Siemens). Cependant, le contrat établi entre le laboratoire et la firme produisant cet appareil arrive à son terme. De ce fait, il faut mettre au point une méthode de mesure des immunoglobulines E totales sur un autre automate. L’objectif de ce mémoire est donc de mettre à l’étude la méthode de dosage immuno-enzymatique par fluorescence des IgE totales sur le Phadia 250 (ThermoFischer) afin de faire passer le test en routine. La mise au point de la technique de mesure sur le Phadia 250 (TermoFischer) est divisée en deux parties : la vérification et la comparaison. La répétabilité, la reproductibilité, la justesse et la fidélité de la méthode sont étudiées à l’aide de deux pools sériques et de contrôles qualité (fournis par la firme). Les résultats permettent, une fois confrontés aux valeurs instaurées par la firme de production de l’automate (Phadia AB) et la Société Française de Biologie Clinique (Vassault), de valider ou non ces critères d’acceptabilité. Ensuite, les concentrations de 41 échantillons de patient obtenues via le Phadia 250 (ThermoFischer) et via l’Immulite 2000 XPi sont comparées afin de vérifier la corrélation avec la technique de référence. Suite à l’ensemble de ces étapes, les résultats obtenus permettent de valider techniquement la méthode de dosage des IgE totales par immuno-fluorescence sur le Phadia 250 (ThermoFischer) et de commencer le test en routine sur cet automate. Note de contenu : Tables des matières Remerciements .................................................................................................................. Présentation du lieu de stage ............................................................................................ Introduction...................................................................................................................... 7 1) Généralités ............................................................................................................... 8 1.1) Les immunoglobulines ....................................................................................... 8 1.1.1 Rôle dans la réaction immunitaire humorale ............................................. 8 1.1.2 Structure des immunoglobulines.............................................................. 10 1.1.3 Classification des immunoglobulines........................................................ 13 1.2) Les immunoglobulines de type E ..................................................................... 15 1.2.1 Structure et fonction................................................................................. 15 1.2.2 Implication des IgE dans les réactions allergiques ................................... 16 1.2.2.1. La réaction d’hypersensibilité de type I................................................. 17 1.2.2.2. Le choc anaphylactique ......................................................................... 19 1.2.2.3. Tests réalisés en allergologie pour la mise en évidence d’une réaction immédiate........................................................................................................... 20 1.2.3 Implication des IgE dans certaines infections parasitaires....................... 21 1.3) Présentation du Phadia 250 ............................................................................. 22 1.3.1 Présentation générale............................................................................... 22 1.3.2 Compartiments du Phadia 250 ................................................................. 23 1.3.2.1. La chambre d’immuno-réaction ............................................................ 23 1.3.2.2. La chambre de réaction enzymatique ................................................... 24 1.4) Principe du test ImmunoCAP pour le dosage des IgE totales .......................... 24 2) Objectifs et stratégie.............................................................................................. 27 3) Matériel et méthodes ............................................................................................ 28 3.1) Matériel............................................................................................................ 28 3.1.1 Echantillons étudiés.................................................................................. 28 3.1.1.1. Sélection des échantillons ..................................................................... 29 3.1.1.2. Conservation et interférences (spécificité) ........................................... 29 3.2) Méthodes ......................................................................................................... 30 3.2.1 Procédure d’utilisation du Phadia 250 ..................................................... 30 3.2.2 Valeurs usuelles du Phadia 250 ................................................................ 34 3.2.3 Vérification de la méthode de dosage...................................................... 35 3.2.3.1. Répétabilité............................................................................................ 35 5 3.2.3.2. Reproductibilité ..................................................................................... 36 3.2.3.3. Fidélité ................................................................................................... 36 3.2.3.4. Justesse .................................................................................................. 37 3.2.4 Comparaison avec la méthode de référence............................................ 37 4) Résultats et discussion........................................................................................... 38 4.1) Vérification de la méthode de dosage ............................................................. 38 4.1.1 Répétabilité............................................................................................... 38 4.1.2 Reproductibilité ........................................................................................ 40 4.1.3 Fidélité ...................................................................................................... 42 4.1.4 Justesse ..................................................................................................... 44 4.2) Comparaison avec la méthode de référence................................................... 46 Conclusion ...................................................................................................................... 56 Liste des illustrations ..................................................................................................... 57 Liste des tableaux........................................................................................................... 58 Bibliographie .................................................................................................................. 59 Annexes .............................................................................................................................. Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100369 Validation du dosage des IgE totales sur le Phadia 250 par immunofluorescence [TFE / Mémoire] / Luca Hutsenband, Auteur ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : GHDC  Saint-Joseph Gilly Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études a été réalisé au laboratoire du GHdC (Grand Hôpital de Charleroi) site Saint-Joseph à Gilly en chimie clinique dans le secteur ligne sérum. Le sujet central du mémoire consiste en la validation d’une méthode de dosage des immunoglobulines E totales. La mesure de la concentration de ces anticorps est réalisée dans de nombreux laboratoires hospitaliers en cas de suspicion d’allergie. En effet, il s’agit des immunoglobulines sécrétées lorsqu’une substance étrangère pénètre dans l’organisme (allergène). Donc déterminer leur concentration est le meilleur moyen de confirmer le diagnostic de réaction d’hypersensibilité. Par ailleurs, une production excessive d’IgE peut également être associée à certaines parasitoses (infections provoquées par des helminthes). Au GHdC site Saint-Joseph, la concentration de ces anticorps est déterminée par immuno-chimiluminescence sur l’automate Immulite 2000 XPi (Siemens). Cependant, le contrat établi entre le laboratoire et la firme produisant cet appareil arrive à son terme. De ce fait, il faut mettre au point une méthode de mesure des immunoglobulines E totales sur un autre automate. L’objectif de ce mémoire est donc de mettre à l’étude la méthode de dosage immuno-enzymatique par fluorescence des IgE totales sur le Phadia 250 (ThermoFischer) afin de faire passer le test en routine. La mise au point de la technique de mesure sur le Phadia 250 (TermoFischer) est divisée en deux parties : la vérification et la comparaison. La répétabilité, la reproductibilité, la justesse et la fidélité de la méthode sont étudiées à l’aide de deux pools sériques et de contrôles qualité (fournis par la firme). Les résultats permettent, une fois confrontés aux valeurs instaurées par la firme de production de l’automate (Phadia AB) et la Société Française de Biologie Clinique (Vassault), de valider ou non ces critères d’acceptabilité. Ensuite, les concentrations de 41 échantillons de patient obtenues via le Phadia 250 (ThermoFischer) et via l’Immulite 2000 XPi sont comparées afin de vérifier la corrélation avec la technique de référence. Suite à l’ensemble de ces étapes, les résultats obtenus permettent de valider techniquement la méthode de dosage des IgE totales par immuno-fluorescence sur le Phadia 250 (ThermoFischer) et de commencer le test en routine sur cet automate. Note de contenu : Tables des matières Remerciements .................................................................................................................. Présentation du lieu de stage ............................................................................................ Introduction...................................................................................................................... 7 1) Généralités ............................................................................................................... 8 1.1) Les immunoglobulines ....................................................................................... 8 1.1.1 Rôle dans la réaction immunitaire humorale ............................................. 8 1.1.2 Structure des immunoglobulines.............................................................. 10 1.1.3 Classification des immunoglobulines........................................................ 13 1.2) Les immunoglobulines de type E ..................................................................... 15 1.2.1 Structure et fonction................................................................................. 15 1.2.2 Implication des IgE dans les réactions allergiques ................................... 16 1.2.2.1. La réaction d’hypersensibilité de type I................................................. 17 1.2.2.2. Le choc anaphylactique ......................................................................... 19 1.2.2.3. Tests réalisés en allergologie pour la mise en évidence d’une réaction immédiate........................................................................................................... 20 1.2.3 Implication des IgE dans certaines infections parasitaires....................... 21 1.3) Présentation du Phadia 250 ............................................................................. 22 1.3.1 Présentation générale............................................................................... 22 1.3.2 Compartiments du Phadia 250 ................................................................. 23 1.3.2.1. La chambre d’immuno-réaction ............................................................ 23 1.3.2.2. La chambre de réaction enzymatique ................................................... 24 1.4) Principe du test ImmunoCAP pour le dosage des IgE totales .......................... 24 2) Objectifs et stratégie.............................................................................................. 27 3) Matériel et méthodes ............................................................................................ 28 3.1) Matériel............................................................................................................ 28 3.1.1 Echantillons étudiés.................................................................................. 28 3.1.1.1. Sélection des échantillons ..................................................................... 29 3.1.1.2. Conservation et interférences (spécificité) ........................................... 29 3.2) Méthodes ......................................................................................................... 30 3.2.1 Procédure d’utilisation du Phadia 250 ..................................................... 30 3.2.2 Valeurs usuelles du Phadia 250 ................................................................ 34 3.2.3 Vérification de la méthode de dosage...................................................... 35 3.2.3.1. Répétabilité............................................................................................ 35 5 3.2.3.2. Reproductibilité ..................................................................................... 36 3.2.3.3. Fidélité ................................................................................................... 36 3.2.3.4. Justesse .................................................................................................. 37 3.2.4 Comparaison avec la méthode de référence............................................ 37 4) Résultats et discussion........................................................................................... 38 4.1) Vérification de la méthode de dosage ............................................................. 38 4.1.1 Répétabilité............................................................................................... 38 4.1.2 Reproductibilité ........................................................................................ 40 4.1.3 Fidélité ...................................................................................................... 42 4.1.4 Justesse ..................................................................................................... 44 4.2) Comparaison avec la méthode de référence................................................... 46 Conclusion ...................................................................................................................... 56 Liste des illustrations ..................................................................................................... 57 Liste des tableaux........................................................................................................... 58 Bibliographie .................................................................................................................. 59 Annexes .............................................................................................................................. 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