Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux / Coleen Delatte

Public ISBD Titre : Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Coleen Delatte, Auteur ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Notre-Dame de Grâce  Gosselies Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études fut réalisé au sein du laboratoire d’hématologie à l’hopital Notre-Dame de Grâce de Gossselies.Le sujet est l’analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux. Ces dernières années, la cytométrie en flux a beaucoup évoluée et permet à ce jour de diagnostiquer et de suivre de nombreuses hémopathies malignes et, plus particulièrement au laboratoire, les lymphomes. Cette technique est utilisée en complément d’une numération et d’un examen cytologique des cellules. Le cytomètre en flux permet d’obtenir différentes informations sur les cellules en passant devant un laser. Les données récoltées donnent des caractéristiques telles que la taille, la granularité ainsi que certains marqueurs antigéniques de chaque cellule individuellement. Lors de mon arrivée au sein du laboratoire, le cytomètre en flux Beckman Coulter Navios EX, fonctionnait avec un panel de cinq couleurs et un seul laser était utilisé. Mon travail de fin d’étude a permis, en complément du travail de Klara Kara de l’an dernier, de mettre au point un panel d’anticorps avec dix fluorochromes différents permettant de réaliser l’exploration simultanée de douze paramètres analysés avec 3 lasers. Ce présent travail compare l’ancien panel 5 couleurs et le nouveau panel 10 couleurs, étudie la répétabilité et la stabilité de ce panel. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage............................................................................................. 7 Introduction générale ........................................................................................................ 8 1. La cytométrie en flux : ................................................................................................ 9 1.1. Principe général ..............................................................................................................9 1.1.1. Principe de focalisation hydrodynamique .....................................................................................10 1.1.2. Principe optique ............................................................................................................................11 1.1.3. Principe électronique ....................................................................................................................13 1.1.4. Les fluorochromes .........................................................................................................................14 1.1.5. Le chevauchement et les compensations spectrales ....................................................................15 1.1.6. Les marqueurs de différenciation..................................................................................................16 2. Automate Beckman Coulter Navios EX...................................................................... 17 3. Quand doit-on réaliser un immunophénotypage ? .................................................... 18 4. Comment interpréter un histogramme de cytométrie en flux ? ................................. 19 5. Les pathologies ........................................................................................................ 20 5.1. La lymphocytose B monoclonale ...................................................................................21 5.2. La leucémie lymphoïde chronique (LLC) ........................................................................21 5.3. La leucémie à tricholeucocytes......................................................................................25 6. Marqueurs utilisés pour le diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs des cellules B chroniques ....................................................................................................................... 26 6.1. Modification du phénotypage à la suite d’un traitement...............................................29 7. Objectifs du travail de fin d’étude............................................................................. 30 8. Matériel et méthode de travail pour réaliser un immunophénotypage ..................... 31 8.1. Matériel utilisé..............................................................................................................31 8.2. Méthode.......................................................................................................................31 8.2.1. Mode opératoire[26] .......................................................................................................................32 9. Mise en place d’un panel dix couleurs....................................................................... 33 10. La répétabilité de la méthode ............................................................................... 36 11. La stabilité de la méthode..................................................................................... 38 12. Comparaison et discussion des résultats ............................................................... 43 13. Conclusion ............................................................................................................ 57 Glossaire.......................................................................................................................... 58 Abréviations .................................................................................................................... 59 Table des figures.............................................................................................................. 60 Table des tableaux........................................................................................................... 60 Bibliographie : ................................................................................................................. 61 Annexes ........................................................................................................................... 65 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100318 Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux [TFE / Mémoire] / Coleen Delatte, Auteur ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Notre-Dame de Grâce  Gosselies Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études fut réalisé au sein du laboratoire d’hématologie à l’hopital Notre-Dame de Grâce de Gossselies.Le sujet est l’analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux. Ces dernières années, la cytométrie en flux a beaucoup évoluée et permet à ce jour de diagnostiquer et de suivre de nombreuses hémopathies malignes et, plus particulièrement au laboratoire, les lymphomes. Cette technique est utilisée en complément d’une numération et d’un examen cytologique des cellules. Le cytomètre en flux permet d’obtenir différentes informations sur les cellules en passant devant un laser. Les données récoltées donnent des caractéristiques telles que la taille, la granularité ainsi que certains marqueurs antigéniques de chaque cellule individuellement. Lors de mon arrivée au sein du laboratoire, le cytomètre en flux Beckman Coulter Navios EX, fonctionnait avec un panel de cinq couleurs et un seul laser était utilisé. Mon travail de fin d’étude a permis, en complément du travail de Klara Kara de l’an dernier, de mettre au point un panel d’anticorps avec dix fluorochromes différents permettant de réaliser l’exploration simultanée de douze paramètres analysés avec 3 lasers. Ce présent travail compare l’ancien panel 5 couleurs et le nouveau panel 10 couleurs, étudie la répétabilité et la stabilité de ce panel. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage............................................................................................. 7 Introduction générale ........................................................................................................ 8 1. La cytométrie en flux : ................................................................................................ 9 1.1. Principe général ..............................................................................................................9 1.1.1. Principe de focalisation hydrodynamique .....................................................................................10 1.1.2. Principe optique ............................................................................................................................11 1.1.3. Principe électronique ....................................................................................................................13 1.1.4. Les fluorochromes .........................................................................................................................14 1.1.5. Le chevauchement et les compensations spectrales ....................................................................15 1.1.6. Les marqueurs de différenciation..................................................................................................16 2. Automate Beckman Coulter Navios EX...................................................................... 17 3. Quand doit-on réaliser un immunophénotypage ? .................................................... 18 4. Comment interpréter un histogramme de cytométrie en flux ? ................................. 19 5. Les pathologies ........................................................................................................ 20 5.1. La lymphocytose B monoclonale ...................................................................................21 5.2. La leucémie lymphoïde chronique (LLC) ........................................................................21 5.3. La leucémie à tricholeucocytes......................................................................................25 6. Marqueurs utilisés pour le diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs des cellules B chroniques ....................................................................................................................... 26 6.1. Modification du phénotypage à la suite d’un traitement...............................................29 7. Objectifs du travail de fin d’étude............................................................................. 30 8. Matériel et méthode de travail pour réaliser un immunophénotypage ..................... 31 8.1. Matériel utilisé..............................................................................................................31 8.2. Méthode.......................................................................................................................31 8.2.1. Mode opératoire[26] .......................................................................................................................32 9. Mise en place d’un panel dix couleurs....................................................................... 33 10. La répétabilité de la méthode ............................................................................... 36 11. La stabilité de la méthode..................................................................................... 38 12. Comparaison et discussion des résultats ............................................................... 43 13. Conclusion ............................................................................................................ 57 Glossaire.......................................................................................................................... 58 Abréviations .................................................................................................................... 59 Table des figures.............................................................................................................. 60 Table des tableaux........................................................................................................... 60 Bibliographie : ................................................................................................................. 61 Annexes ........................................................................................................................... 65 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100318

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