Optimisation de protocoles d’extraction protéique de farines d’insectes dans le cadre du développement d’analyses en spectrométrie de masse / Romain Sanna

Public ISBD Titre : Optimisation de protocoles d’extraction protéique de farines d’insectes dans le cadre du développement d’analyses en spectrométrie de masse Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Romain Sanna, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie  AIBT  CRA-W  protéines  farines d'insectes Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Note de contenu : Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11 I. Partie théorique ............................................................................................................... 13 1 Introduction du sujet ........................................................................................................ 14 2 Préparation des échantillons pour les analyses ............................................................... 16 2.1 Broyage ..................................................................................................................... 16 2.1.1 Broyeur à marteaux ............................................................................................ 16 2.1.2 Broyeur à cylindres ............................................................................................. 16 2.1.3 Broyeur ultracentrifuge ..................................................................................... 17 2.1.4 Samples Grinding Kit .......................................................................................... 18 2.2 Extraction : réactifs utilisés lors des différents protocoles ...................................... 18 2.2.1 Trishydroxyméthyl-aminométhane (Tris) .......................................................... 18 2.2.2 Urée .................................................................................................................... 19 2.2.3 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) ............................................................................ 20 2.2.4 Dithiothréitol (DTT) ............................................................................................ 20 2.2.5 Acide trichloro-acétique (TCA) ........................................................................... 21 2.2.6 Acide chlorhydrique (HCl) .................................................................................. 22 2.2.7 DIGE (Differential Gel Electrophoresis) labelling buffer (DLA)........................... 22 3 Experimentation ............................................................................................................... 23 3.1 Dosage Pierce ........................................................................................................... 23 3.2 Dosage de l’azote protéique par la méthode Kjeldahl ............................................. 24 3.3 Spectrométrie de masse en tandem ........................................................................ 25 II. Partie pratique ................................................................................................................. 29 Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 30 1 Matériels et réactifs ......................................................................................................... 30 2 Méthodologie ................................................................................................................... 31 2.1 Préparation des solutions ........................................................................................ 31 2.1.1 Tampon Tris-Urée ............................................................................................... 31 2.1.2 Tampon SDS-Tris ................................................................................................ 31 2.1.3 HCl ...................................................................................................................... 31 2.1.4 DLA ..................................................................................................................... 31 2.1.5 TCA/acétone ....................................................................................................... 32 2.2 Préparation des échantillons.................................................................................... 32 2.3 Protocoles testés ...................................................................................................... 33 2.3.1 Protocole Tris-Urée « normal » 1 ....................................................................... 33 2.3.2 Protocole Tris-Urée « modifié » ......................................................................... 34 2.3.3 Protocole Tris-Urée « normal » 2 ....................................................................... 34 2.3.4 Protocole HCl ...................................................................................................... 34 2.3.5 Protocole TCA/acétone ...................................................................................... 35 2.3.6 Protocole SDS 4 % .............................................................................................. 35 2.4 Dosage Pierce (Protein Assay 660 nm) ..................................................................... 36 2.5 Dosage des protéines totales ................................................................................... 39 3 Résultats et discussion ..................................................................................................... 40 3.1 Dosage Kjeldahl ........................................................................................................ 40 3.2 Comparaison des protocoles Tris-Urée avec le protocole SDS 4 % ......................... 41 3.3 Comparaison entre les protocoles Tris-Urée, Tris + HCl et TCA/acétone ................ 44 3.4 Comparaison des 3 protocoles choisis sur l’ensemble des échantillons ................. 46 4 Conclusion ........................................................................................................................ 48 Abréviations ............................................................................................................................. 50 Glossaire ................................................................................................................................... 51 Bibliographie ............................................................................................................................ 52 Annexes .................................................................................................................................... Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79740 Optimisation de protocoles d’extraction protéique de farines d’insectes dans le cadre du développement d’analyses en spectrométrie de masse [TFE / Mémoire] / Romain Sanna, Auteur ; Valérie Norberg, Directeur de publication, rédacteur en chef . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2019. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie  AIBT  CRA-W  protéines  farines d'insectes Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Note de contenu : Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11 I. Partie théorique ............................................................................................................... 13 1 Introduction du sujet ........................................................................................................ 14 2 Préparation des échantillons pour les analyses ............................................................... 16 2.1 Broyage ..................................................................................................................... 16 2.1.1 Broyeur à marteaux ............................................................................................ 16 2.1.2 Broyeur à cylindres ............................................................................................. 16 2.1.3 Broyeur ultracentrifuge ..................................................................................... 17 2.1.4 Samples Grinding Kit .......................................................................................... 18 2.2 Extraction : réactifs utilisés lors des différents protocoles ...................................... 18 2.2.1 Trishydroxyméthyl-aminométhane (Tris) .......................................................... 18 2.2.2 Urée .................................................................................................................... 19 2.2.3 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) ............................................................................ 20 2.2.4 Dithiothréitol (DTT) ............................................................................................ 20 2.2.5 Acide trichloro-acétique (TCA) ........................................................................... 21 2.2.6 Acide chlorhydrique (HCl) .................................................................................. 22 2.2.7 DIGE (Differential Gel Electrophoresis) labelling buffer (DLA)........................... 22 3 Experimentation ............................................................................................................... 23 3.1 Dosage Pierce ........................................................................................................... 23 3.2 Dosage de l’azote protéique par la méthode Kjeldahl ............................................. 24 3.3 Spectrométrie de masse en tandem ........................................................................ 25 II. Partie pratique ................................................................................................................. 29 Objectifs et stratégie ................................................................................................................ 30 1 Matériels et réactifs ......................................................................................................... 30 2 Méthodologie ................................................................................................................... 31 2.1 Préparation des solutions ........................................................................................ 31 2.1.1 Tampon Tris-Urée ............................................................................................... 31 2.1.2 Tampon SDS-Tris ................................................................................................ 31 2.1.3 HCl ...................................................................................................................... 31 2.1.4 DLA ..................................................................................................................... 31 2.1.5 TCA/acétone ....................................................................................................... 32 2.2 Préparation des échantillons.................................................................................... 32 2.3 Protocoles testés ...................................................................................................... 33 2.3.1 Protocole Tris-Urée « normal » 1 ....................................................................... 33 2.3.2 Protocole Tris-Urée « modifié » ......................................................................... 34 2.3.3 Protocole Tris-Urée « normal » 2 ....................................................................... 34 2.3.4 Protocole HCl ...................................................................................................... 34 2.3.5 Protocole TCA/acétone ...................................................................................... 35 2.3.6 Protocole SDS 4 % .............................................................................................. 35 2.4 Dosage Pierce (Protein Assay 660 nm) ..................................................................... 36 2.5 Dosage des protéines totales ................................................................................... 39 3 Résultats et discussion ..................................................................................................... 40 3.1 Dosage Kjeldahl ........................................................................................................ 40 3.2 Comparaison des protocoles Tris-Urée avec le protocole SDS 4 % ......................... 41 3.3 Comparaison entre les protocoles Tris-Urée, Tris + HCl et TCA/acétone ................ 44 3.4 Comparaison des 3 protocoles choisis sur l’ensemble des échantillons ................. 46 4 Conclusion ........................................................................................................................ 48 Abréviations ............................................................................................................................. 50 Glossaire ................................................................................................................................... 51 Bibliographie ............................................................................................................................ 52 Annexes .................................................................................................................................... Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79740

Exemplaires

Cote	Support	Localisation	Section	Disponibilité
aucun exemplaire

---

1 (1 - 1 / 1)