Centre de Documentation Campus Montignies
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Mercredi 9h-16h30
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Auteur LOÏC MARISCAL-DIAZ |
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Développement et évaluation de cibles PCR pour l’authentification de sous-produits dérivés d’insectes / LOÏC MARISCAL-DIAZ
Titre : Développement et évaluation de cibles PCR pour l’authentification de sous-produits dérivés d’insectes Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : LOÏC MARISCAL-DIAZ, Auteur Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : AGRONOMIE TA Index. décimale : TFE TA TFE Technologie animalière Résumé : D'ici 2050, la population mondiale atteindra les 9 milliards d'habitants. La demande de denrées nécessaires pour nourrir chacun d'entre eux ne fait qu'augmenter proportionnellement à cette croissance démographique tandis que les disponibilités terres arables sont limitées. Le bétail devant également être nourri avant de finir dans nos assiettes, la distribution des ressources alimentaires est en phase de devenir un grand problème dans les années à venir.
Pour pallier à cette problématique d'ordre mondial, les insectes sont une solution alternative digne d'intérêt. Les initiatives se multiplient pour proposer ces insectes à la consommation en Belgique. En 2011, l’AFSCA publie une liste de 10 insectes tolérés pour l’alimentation humaine. Toutefois, en raison du manque de régulations précises concernant ces nouveaux aliments, nul n’est à l’abri de la fraude et les consommateurs ne peuvent avoir l’assurance de ce qu’ils auront dans leur assiette. Afin d’authentifier avec précision le contenu de ces nouveaux produits alimentaires aux insectes, des méthodes d’identification doivent être mises en place.
Ainsi, ce travail de fin d’études a pour vocation d’entreprendre des démarches dans ce sens. Cela commence par établir des protocoles permettant d’extraire un ADN de qualité dans les produits dérivés d’insectes. Ensuite, différentes méthodes basées sur la PCR en temps réel doivent être évaluées quant à leur spécificité et leur sensibilité. Les analyses initiées dans ce travail ont porté essentiellement sur le ver de farine (Tenebrio molitor) qui trouve actuellement des débouchés à la fois en alimentation humaine et en alimentation animale.Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Le CRA-W ................................................................................................................................................. 9
1. Introduction ....................................................................................................................................... 11
1.1. Les insectes dans le monde ........................................................................................................ 11
1.2. Les insectes en tant qu'aliment de substitution......................................................................... 12
1.3. Méthodes de détection et d'analyses ........................................................................................ 14
1.3.1. Extraction ............................................................................................................................ 15
1.3.2. Détection et quantification ................................................................................................. 16
2. Objectifs de l'étude ........................................................................................................................... 21
3. Matériel et méthodes ........................................................................................................................ 22
3.1. Echantillonnage, recherche de séquences d’intérêt et design d'amorces ................................. 22
3.1.1. Echantillons d'intérêts ......................................................................................................... 22
3.1.2. Séquences d’intérêt ............................................................................................................. 24
3.2. Préparation des échantillons ...................................................................................................... 28
3.2.1. Congélation ......................................................................................................................... 28
3.2.2. Tamisage .............................................................................................................................. 28
3.2.3. Lyophilisation....................................................................................................................... 29
3.2.4. Mouture............................................................................................................................... 29
3.2.5. Pesée ................................................................................................................................... 31
3.3. Techniques d'extractions ............................................................................................................ 32
3.3.1. CTAB .................................................................................................................................... 32
3.3.2. CTAB/Genomics Tips ........................................................................................................... 33
3.3.3. Extraction par billes magnétiques : Kit Wizard For Food sur Kingfisher ............................. 34
3.3.4. Extraction par billes magnétiques : Kit Personnal Automation Promega pour Maxwell .... 35
3.4. Quantification ............................................................................................................................. 35
3.4.1. Analyse pré-PCR .................................................................................................................. 35
3.4.2. Analyse PCR ......................................................................................................................... 37
4. Résultats et discussion ...................................................................................................................... 49
4.1. Extraction d’ADN ........................................................................................................................ 49
4.1.1. Problèmes rencontrés en manipulation .............................................................................. 49
4.1.2. Analyse quantitative au Nanodrop® et QuantusTM Fluorometer ......................................... 50
4.2. Rendement des techniques d'extractions .................................................................................. 52
4.2.1. Analyse qualitative pré-PCR ................................................................................................ 52
4.2.2. Analyses PCR ........................................................................................................................ 53
4.3. Performance des cibles utilisées ................................................................................................ 54
4.3.1. Spécificité ............................................................................................................................ 54
4.3.2. Discussion de la spécificité .................................................................................................. 56
4.3.3. Limite de détection.............................................................................................................. 57
4.3.4. Discussion sur la limite de détection ................................................................................... 58
5. Conclusion et perspectives ................................................................................................................ 59
Bibliographie.......................................................................................................................................... 60
Annexes ................................................................................................................................................. 66Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65600 Développement et évaluation de cibles PCR pour l’authentification de sous-produits dérivés d’insectes [TFE / Mémoire] / LOÏC MARISCAL-DIAZ, Auteur . - 2015.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : AGRONOMIE TA Index. décimale : TFE TA TFE Technologie animalière Résumé : D'ici 2050, la population mondiale atteindra les 9 milliards d'habitants. La demande de denrées nécessaires pour nourrir chacun d'entre eux ne fait qu'augmenter proportionnellement à cette croissance démographique tandis que les disponibilités terres arables sont limitées. Le bétail devant également être nourri avant de finir dans nos assiettes, la distribution des ressources alimentaires est en phase de devenir un grand problème dans les années à venir.
Pour pallier à cette problématique d'ordre mondial, les insectes sont une solution alternative digne d'intérêt. Les initiatives se multiplient pour proposer ces insectes à la consommation en Belgique. En 2011, l’AFSCA publie une liste de 10 insectes tolérés pour l’alimentation humaine. Toutefois, en raison du manque de régulations précises concernant ces nouveaux aliments, nul n’est à l’abri de la fraude et les consommateurs ne peuvent avoir l’assurance de ce qu’ils auront dans leur assiette. Afin d’authentifier avec précision le contenu de ces nouveaux produits alimentaires aux insectes, des méthodes d’identification doivent être mises en place.
Ainsi, ce travail de fin d’études a pour vocation d’entreprendre des démarches dans ce sens. Cela commence par établir des protocoles permettant d’extraire un ADN de qualité dans les produits dérivés d’insectes. Ensuite, différentes méthodes basées sur la PCR en temps réel doivent être évaluées quant à leur spécificité et leur sensibilité. Les analyses initiées dans ce travail ont porté essentiellement sur le ver de farine (Tenebrio molitor) qui trouve actuellement des débouchés à la fois en alimentation humaine et en alimentation animale.Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Le CRA-W ................................................................................................................................................. 9
1. Introduction ....................................................................................................................................... 11
1.1. Les insectes dans le monde ........................................................................................................ 11
1.2. Les insectes en tant qu'aliment de substitution......................................................................... 12
1.3. Méthodes de détection et d'analyses ........................................................................................ 14
1.3.1. Extraction ............................................................................................................................ 15
1.3.2. Détection et quantification ................................................................................................. 16
2. Objectifs de l'étude ........................................................................................................................... 21
3. Matériel et méthodes ........................................................................................................................ 22
3.1. Echantillonnage, recherche de séquences d’intérêt et design d'amorces ................................. 22
3.1.1. Echantillons d'intérêts ......................................................................................................... 22
3.1.2. Séquences d’intérêt ............................................................................................................. 24
3.2. Préparation des échantillons ...................................................................................................... 28
3.2.1. Congélation ......................................................................................................................... 28
3.2.2. Tamisage .............................................................................................................................. 28
3.2.3. Lyophilisation....................................................................................................................... 29
3.2.4. Mouture............................................................................................................................... 29
3.2.5. Pesée ................................................................................................................................... 31
3.3. Techniques d'extractions ............................................................................................................ 32
3.3.1. CTAB .................................................................................................................................... 32
3.3.2. CTAB/Genomics Tips ........................................................................................................... 33
3.3.3. Extraction par billes magnétiques : Kit Wizard For Food sur Kingfisher ............................. 34
3.3.4. Extraction par billes magnétiques : Kit Personnal Automation Promega pour Maxwell .... 35
3.4. Quantification ............................................................................................................................. 35
3.4.1. Analyse pré-PCR .................................................................................................................. 35
3.4.2. Analyse PCR ......................................................................................................................... 37
4. Résultats et discussion ...................................................................................................................... 49
4.1. Extraction d’ADN ........................................................................................................................ 49
4.1.1. Problèmes rencontrés en manipulation .............................................................................. 49
4.1.2. Analyse quantitative au Nanodrop® et QuantusTM Fluorometer ......................................... 50
4.2. Rendement des techniques d'extractions .................................................................................. 52
4.2.1. Analyse qualitative pré-PCR ................................................................................................ 52
4.2.2. Analyses PCR ........................................................................................................................ 53
4.3. Performance des cibles utilisées ................................................................................................ 54
4.3.1. Spécificité ............................................................................................................................ 54
4.3.2. Discussion de la spécificité .................................................................................................. 56
4.3.3. Limite de détection.............................................................................................................. 57
4.3.4. Discussion sur la limite de détection ................................................................................... 58
5. Conclusion et perspectives ................................................................................................................ 59
Bibliographie.......................................................................................................................................... 60
Annexes ................................................................................................................................................. 66Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65600 Exemplaires
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