Accélérer le diagnostic des carbapénémases en milieu hospitalier : évaluation du kit BD MAX Check- Points CPO (Becton, Dickinson and Company) / Ghalia Nedjai

Public ISBD Titre : Accélérer le diagnostic des carbapénémases en milieu hospitalier : évaluation du kit BD MAX Check- Points CPO (Becton, Dickinson and Company) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Ghalia Nedjai ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2024 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les entérobactéries productrices de carbapénémases sont devenues une menace croissante pour la santé publique en raison de leur résistance aux carbapénèmes, les antibiotiques de dernier recours. Dans cette étude, les performances du kit BD MAX Check-Points CPO sont évaluées pour la détection rapide des CPE en milieu hospitalier. Les performances du kit BD MAX Check-Points CPO dans la détection des bactéries entérobactéries productrices de carbapénémases (CPE) sont évaluées dans cette étude. Deux méthodes sont comparées : celle de routine au laboratoire du CNDG et celle réalisée par biologie moléculaire grâce à l'automate BD-MAX. L'objectif est d'assurer une détection rapide des CPE et d'évaluer l'impact clinique et financier de l'utilisation du kit BD MAX CPC. L'efficacité du kit a été testée sur des cultures de bactéries CPE, des souches en croissance sur un milieu chromogène spécifique (OXA/CARB), ainsi que sur des échantillons primaires prélevés. Une analyse financière a ensuite été réalisée pour évaluer la viabilité de son intégration dans les pratiques de routine. Les résultats indiquent que l'utilisation du BD MAX en complément de la méthode de routine représente des coûts comparables à ceux de la méthode de routine seule, tout en permettant un gain de 24 heures. L'utilisation de cette technologie permettrait une détection spécifique, rapide et efficace des résistances bactériennes, améliorant ainsi significativement le diagnostic et la gestion des infections nosocomiales. En perspective, le développement d'une technique de PCR capable d'identifier simultanément les BLSE, CPE et VRE pourrait encore améliorer la détection de ces résistances bactériennes. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 7 Introduction ............................................................................................................................... 9 1 Partie théorique ............................................................................................................... 10 1.1 Les bactéries résistantes .......................................................................................... 10 1.1.1 Les entérobactéries.......................................................................................... 10 1.2 Les antibiotiques ...................................................................................................... 11 1.2.1 Les β-lactamines .............................................................................................. 11 1.2.2 Mécanismes d’action des antibiotiques .......................................................... 13 1.2.3 Mécanismes de résistance aux antibiotiques .................................................. 14 1.3 Les β-lactamases ...................................................................................................... 15 1.3.1 Les carbapénémases ........................................................................................ 15 1.4 Les implications cliniques des infections dues aux CPE ........................................... 17 1.4.1 Epidémiologie des carbapénémases en Belgique............................................ 17 1.4.2 Transmission .................................................................................................... 20 1.4.3 Surveillance et dépistage des CPE ................................................................... 21 1.4.4 Traitement des infections dues aux CPE.......................................................... 23 1.5 Diagnostic des carbapénémases .............................................................................. 23 1.5.1 L’antibiogramme par disque de diffusion sur gélose ...................................... 23 1.5.2 Test immunochromatographique .................................................................... 25 1.5.3 La PCR en temps réel ....................................................................................... 25 1.6 Objectifs et stratégie................................................................................................ 27 2 Partie Pratique ................................................................................................................. 28 2.1 Matériel.................................................................................................................... 28 2.2 Méthodes ................................................................................................................. 28 2.2.1 Dépistage des CPE par la méthode de routine ................................................ 28 2.2.2 Dépistage des CPE à l’aide de l’automate BD MAX ......................................... 31 2.2.3 Evaluation des performances du kit BD MAX CPC ........................................... 38 2.2.4 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAX sur colonies 39 2.2.5 Evaluation des performances du kit sur frottis rectal ..................................... 40 2.2.6 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 40 2.2.7 Analyse financière ............................................................................................ 41 2.3 Résultats et discussion ............................................................................................. 42 2.3.1 Evaluation des performances du kit BD MAXTM CPC ....................................... 42 2.3.2 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAXTM sur colonies 46 2.3.3 Evaluation des performances du kit BD MAXTM sur frottis rectal ................... 51 2.3.4 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 52 2.3.5 Comparaison des coûts .................................................................................... 52 Conclusion générale ................................................................................................................. 55 Liste des figures ....................................................................................................................... 57 Liste des tableaux..................................................................................................................... 58 Abréviations ............................................................................................................................. 59 Bibliographie ............................................................................................................................ 60 Table des annexes .................................................................................................................... 64 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119415 Accélérer le diagnostic des carbapénémases en milieu hospitalier : évaluation du kit BD MAX Check- Points CPO (Becton, Dickinson and Company) [TFE / Mémoire] / Ghalia Nedjai ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2024. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les entérobactéries productrices de carbapénémases sont devenues une menace croissante pour la santé publique en raison de leur résistance aux carbapénèmes, les antibiotiques de dernier recours. Dans cette étude, les performances du kit BD MAX Check-Points CPO sont évaluées pour la détection rapide des CPE en milieu hospitalier. Les performances du kit BD MAX Check-Points CPO dans la détection des bactéries entérobactéries productrices de carbapénémases (CPE) sont évaluées dans cette étude. Deux méthodes sont comparées : celle de routine au laboratoire du CNDG et celle réalisée par biologie moléculaire grâce à l'automate BD-MAX. L'objectif est d'assurer une détection rapide des CPE et d'évaluer l'impact clinique et financier de l'utilisation du kit BD MAX CPC. L'efficacité du kit a été testée sur des cultures de bactéries CPE, des souches en croissance sur un milieu chromogène spécifique (OXA/CARB), ainsi que sur des échantillons primaires prélevés. Une analyse financière a ensuite été réalisée pour évaluer la viabilité de son intégration dans les pratiques de routine. Les résultats indiquent que l'utilisation du BD MAX en complément de la méthode de routine représente des coûts comparables à ceux de la méthode de routine seule, tout en permettant un gain de 24 heures. L'utilisation de cette technologie permettrait une détection spécifique, rapide et efficace des résistances bactériennes, améliorant ainsi significativement le diagnostic et la gestion des infections nosocomiales. En perspective, le développement d'une technique de PCR capable d'identifier simultanément les BLSE, CPE et VRE pourrait encore améliorer la détection de ces résistances bactériennes. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 7 Introduction ............................................................................................................................... 9 1 Partie théorique ............................................................................................................... 10 1.1 Les bactéries résistantes .......................................................................................... 10 1.1.1 Les entérobactéries.......................................................................................... 10 1.2 Les antibiotiques ...................................................................................................... 11 1.2.1 Les β-lactamines .............................................................................................. 11 1.2.2 Mécanismes d’action des antibiotiques .......................................................... 13 1.2.3 Mécanismes de résistance aux antibiotiques .................................................. 14 1.3 Les β-lactamases ...................................................................................................... 15 1.3.1 Les carbapénémases ........................................................................................ 15 1.4 Les implications cliniques des infections dues aux CPE ........................................... 17 1.4.1 Epidémiologie des carbapénémases en Belgique............................................ 17 1.4.2 Transmission .................................................................................................... 20 1.4.3 Surveillance et dépistage des CPE ................................................................... 21 1.4.4 Traitement des infections dues aux CPE.......................................................... 23 1.5 Diagnostic des carbapénémases .............................................................................. 23 1.5.1 L’antibiogramme par disque de diffusion sur gélose ...................................... 23 1.5.2 Test immunochromatographique .................................................................... 25 1.5.3 La PCR en temps réel ....................................................................................... 25 1.6 Objectifs et stratégie................................................................................................ 27 2 Partie Pratique ................................................................................................................. 28 2.1 Matériel.................................................................................................................... 28 2.2 Méthodes ................................................................................................................. 28 2.2.1 Dépistage des CPE par la méthode de routine ................................................ 28 2.2.2 Dépistage des CPE à l’aide de l’automate BD MAX ......................................... 31 2.2.3 Evaluation des performances du kit BD MAX CPC ........................................... 38 2.2.4 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAX sur colonies 39 2.2.5 Evaluation des performances du kit sur frottis rectal ..................................... 40 2.2.6 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 40 2.2.7 Analyse financière ............................................................................................ 41 2.3 Résultats et discussion ............................................................................................. 42 2.3.1 Evaluation des performances du kit BD MAXTM CPC ....................................... 42 2.3.2 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAXTM sur colonies 46 2.3.3 Evaluation des performances du kit BD MAXTM sur frottis rectal ................... 51 2.3.4 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 52 2.3.5 Comparaison des coûts .................................................................................... 52 Conclusion générale ................................................................................................................. 55 Liste des figures ....................................................................................................................... 57 Liste des tableaux..................................................................................................................... 58 Abréviations ............................................................................................................................. 59 Bibliographie ............................................................................................................................ 60 Table des annexes .................................................................................................................... 64 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119415

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Adaptation du kit Innovance® VWF:Ac (Siemens) sur STAR-MAX (Stago) / Sevgi Yoldas

Public ISBD Titre : Adaptation du kit Innovance® VWF:Ac (Siemens) sur STAR-MAX (Stago) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Sevgi Yoldas, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU Charleroi  maladie Willebrand  dosage fonctionnel  VWF:Ac  diagnostic biologique  protocole Stago et GRAF  validation méthode Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La maladie de Von Willebrand est la maladie héréditaire hémorragique la plus fréquente de l’hémostase primaire avec une prévalence de l’ordre de 1 %. Elle est due soit à une anomalie qualitative (type 2) ou quantitative (type 1 ou type 3) du VWF. Le diagnostic de la maladie de Von Willebrand reste complexe du fait de la très grande hétérogénéité clinique et biologique. La détermination de l’activité de liaison au GP1b reste un point important dans le diagnostic de la maladie. Pendant de longues années, le VWF:Rco c’est-à-dire la liaison du VWF au GP1b plaquettaire en présence de ristocétine a été utilisé. Cependant, cette méthode présente de nombreux désavantages : défaut de reproductibilité, sensibilité, polymorphisme du domaine A1 ne répondant pas à la ristocétine. Tous ces défauts ont conduit à l’apparition de nouveaux tests sur le marché, notamment le coffret Innovance® VWF:Ac de la firme Siemens. Dans cette méthode, une GP1b possédant deux mutations-de-gains se lie spontanément au VWF en absence de ristocétine. Elle offre même une meilleure reproductibilité et une limite de détection plus basse d’après l’insert. Le laboratoire du CHU de Charleroi utilise l’Innovance® sur l’automate BCS-XP de la firme Siemens pour la détermination de l’activité du VWF (méthode de référence). Mais, cet automate n’est utilisé qu'une fois par semaine et donc est incompatible avec des dosages en urgence. De plus, effectuer un dosage en urgence sur BCS-XP coûte cher, c’est un appareil avec un système d’allumage spécifique qui nécessite la reconstitution de contrôles coûteux. La société Diagnostica Stago et GRAF L. ont proposé deux protocoles différents pour adapter ce dosage sur STAR-MAX, l’automate de routine d’hémostase. L’objectif de ce travail est d’adapter le coffret Innovance sur STAR-MAX selon les deux méthodes, effectuer une validation en évaluant différents critères (répétabilité, reproductibilité, calibration, courbe dose-réponse, sensibilité, stabilité et les interférences liées à l’hémoglobine) et enfin, de comparer à la méthode de référence pour savoir si les deux méthodes offrent des résultats similaires et peuvent être échangées sans altération du diagnostic du patient. La méthode de GRAF a rapidement été abandonnée due à une mauvaise réponse. Malgré que des résultats satisfaisants ont été obtenus pour la plupart des critères dans méthode de Stago, elle n’a pas été mise au point dû à un défaut de sensibilité. Note de contenu : Table des matières Remerciements...........................................................................................................................1 Table des matières......................................................................................................................2 Contexte général ........................................................................................................................1 1. L’hémostase ...................................................................................................................1 1.1 L’hémostase primaire ...................................................................................................1 1.2 La coagulation ..............................................................................................................1 1.3 La fibrinolyse................................................................................................................2 1.4 La régulation de l’hémostase........................................................................................2 1.5 Troubles de l’hémostase ...............................................................................................3 2. Le facteur Von Willebrand ............................................................................................3 2.1 Biosynthèse : du gène à la protéine ..............................................................................4 2.2 Les domaines fonctionnels du VWF ............................................................................5 2.3 ADAMTS13 .................................................................................................................6 2.4 Rôles physiologiques....................................................................................................7 2.4.1 Hémostase primaire : adhésion et agrégation plaquettaire ...................................7 2.4.2 Coagulation : transport et protection du FVIII .....................................................7 2.4.3 Participation à la thrombopoïèse...........................................................................7 2.5 Les valeurs normales et les variations physiologiques .................................................8 3. La maladie de Von Willebrand ......................................................................................9 3.1 Classification ................................................................................................................9 3.1.1 Maladie de Von Willebrand de type 1 ..................................................................9 3.1.2 Maladie de Von Willebrand de type 2 ................................................................10 3.1.3 Maladie de Von Willebrand de type 3 ................................................................11 3.2 Diagnostic biologique de la maladie de Von Willebrand...........................................12 3.2.2 Diagnostic difficile..............................................................................................12 3.2.3 Diagnostic différentiel ........................................................................................12 3.2.4 Différents tests réalisés dans un laboratoire médical ..........................................13 A. Test de routine................................................................................................13 B. Test spécifique réalisé lors d’une suspicion de la maladie de Willebrand.....13 C. Tests discriminatifs et spécialisés ..................................................................16 3.3 Traitement...................................................................................................................19 3.3.1 La DDAVP.....................................................................................................19 3.3.2 Les concentrés du VWF .................................................................................19 Objectif et stratégie ..................................................................................................................20 Matériels et méthode................................................................................................................21 1. Réactifs ........................................................................................................................21 1.1 Le coffret Innovance® VWF Ac ................................................................................21 1.2 Autres réactifs, contrôles et calibrateurs.....................................................................23 2. Matériels et appareils ...................................................................................................23 2.1 Matériels .....................................................................................................................23 2.2 Appareils.....................................................................................................................24 2.2.1 STAR®-Max.......................................................................................................24 2.2.2 BCS-XP® ...........................................................................................................25 3. Échantillons..................................................................................................................26 4. Mise au point de la méthode ........................................................................................27 4.1 Le facteur de dilution de l’automate...........................................................................27 4.2 Les volumes des réactifs 1, 2 et 3...............................................................................28 4.3 Le volume d’échantillon.............................................................................................28 Validation de la méthode .........................................................................................................30 1. La fidélité .....................................................................................................................30 1.1 La répétabilité ........................................................................................................31 1.2 La reproductibilité .................................................................................................31 2. La calibration ...............................................................................................................32 3. La courbe dose-réponse ...............................................................................................32 3.1 La sensibilité...............................................................................................................33 4. La stabilité....................................................................................................................34 4.1 La stabilité des QC-Routine Stago .............................................................................34 4.2 La stabilité du réactif 1 ...............................................................................................34 5. La corrélation ...............................................................................................................36 5.1 Passing-Bablok ...........................................................................................................36 5.2 Bland-Altman .............................................................................................................36 6. Les interférences ..........................................................................................................37 Résultats...................................................................................................................................39 1. Évaluation de la répétabilité.........................................................................................39 2. Évaluation de la reproductibilité..................................................................................41 3. La calibration ...............................................................................................................43 4. La courbe dose-réponse ...............................................................................................44 4.1 La sensibilité...............................................................................................................45 5. La stabilité....................................................................................................................46 5.1 Du réactif 1 .................................................................................................................46 5.2 Des QC-routine...........................................................................................................49 6. La corrélation ...............................................................................................................50 7. Les interférences liées à l’Hb.......................................................................................52 Discussion ................................................................................................................................53 Comparaison des automates.....................................................................................................54 1. Nombre de tests............................................................................................................54 2. Prix...............................................................................................................................54 Conclusion ...............................................................................................................................56 Liste des figures .........................................................................................................................1 Liste des tables...........................................................................................................................2 Liste des abréviations.................................................................................................................4 Bibliographie..............................................................................................................................5 Annexes......................................................................................................................................9 Résumé.....................................................................................................................................16 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100374 Adaptation du kit Innovance® VWF:Ac (Siemens) sur STAR-MAX (Stago) [TFE / Mémoire] / Sevgi Yoldas, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU Charleroi  maladie Willebrand  dosage fonctionnel  VWF:Ac  diagnostic biologique  protocole Stago et GRAF  validation méthode Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La maladie de Von Willebrand est la maladie héréditaire hémorragique la plus fréquente de l’hémostase primaire avec une prévalence de l’ordre de 1 %. Elle est due soit à une anomalie qualitative (type 2) ou quantitative (type 1 ou type 3) du VWF. Le diagnostic de la maladie de Von Willebrand reste complexe du fait de la très grande hétérogénéité clinique et biologique. La détermination de l’activité de liaison au GP1b reste un point important dans le diagnostic de la maladie. Pendant de longues années, le VWF:Rco c’est-à-dire la liaison du VWF au GP1b plaquettaire en présence de ristocétine a été utilisé. Cependant, cette méthode présente de nombreux désavantages : défaut de reproductibilité, sensibilité, polymorphisme du domaine A1 ne répondant pas à la ristocétine. Tous ces défauts ont conduit à l’apparition de nouveaux tests sur le marché, notamment le coffret Innovance® VWF:Ac de la firme Siemens. Dans cette méthode, une GP1b possédant deux mutations-de-gains se lie spontanément au VWF en absence de ristocétine. Elle offre même une meilleure reproductibilité et une limite de détection plus basse d’après l’insert. Le laboratoire du CHU de Charleroi utilise l’Innovance® sur l’automate BCS-XP de la firme Siemens pour la détermination de l’activité du VWF (méthode de référence). Mais, cet automate n’est utilisé qu'une fois par semaine et donc est incompatible avec des dosages en urgence. De plus, effectuer un dosage en urgence sur BCS-XP coûte cher, c’est un appareil avec un système d’allumage spécifique qui nécessite la reconstitution de contrôles coûteux. La société Diagnostica Stago et GRAF L. ont proposé deux protocoles différents pour adapter ce dosage sur STAR-MAX, l’automate de routine d’hémostase. L’objectif de ce travail est d’adapter le coffret Innovance sur STAR-MAX selon les deux méthodes, effectuer une validation en évaluant différents critères (répétabilité, reproductibilité, calibration, courbe dose-réponse, sensibilité, stabilité et les interférences liées à l’hémoglobine) et enfin, de comparer à la méthode de référence pour savoir si les deux méthodes offrent des résultats similaires et peuvent être échangées sans altération du diagnostic du patient. La méthode de GRAF a rapidement été abandonnée due à une mauvaise réponse. Malgré que des résultats satisfaisants ont été obtenus pour la plupart des critères dans méthode de Stago, elle n’a pas été mise au point dû à un défaut de sensibilité. Note de contenu : Table des matières Remerciements...........................................................................................................................1 Table des matières......................................................................................................................2 Contexte général ........................................................................................................................1 1. L’hémostase ...................................................................................................................1 1.1 L’hémostase primaire ...................................................................................................1 1.2 La coagulation ..............................................................................................................1 1.3 La fibrinolyse................................................................................................................2 1.4 La régulation de l’hémostase........................................................................................2 1.5 Troubles de l’hémostase ...............................................................................................3 2. Le facteur Von Willebrand ............................................................................................3 2.1 Biosynthèse : du gène à la protéine ..............................................................................4 2.2 Les domaines fonctionnels du VWF ............................................................................5 2.3 ADAMTS13 .................................................................................................................6 2.4 Rôles physiologiques....................................................................................................7 2.4.1 Hémostase primaire : adhésion et agrégation plaquettaire ...................................7 2.4.2 Coagulation : transport et protection du FVIII .....................................................7 2.4.3 Participation à la thrombopoïèse...........................................................................7 2.5 Les valeurs normales et les variations physiologiques .................................................8 3. La maladie de Von Willebrand ......................................................................................9 3.1 Classification ................................................................................................................9 3.1.1 Maladie de Von Willebrand de type 1 ..................................................................9 3.1.2 Maladie de Von Willebrand de type 2 ................................................................10 3.1.3 Maladie de Von Willebrand de type 3 ................................................................11 3.2 Diagnostic biologique de la maladie de Von Willebrand...........................................12 3.2.2 Diagnostic difficile..............................................................................................12 3.2.3 Diagnostic différentiel ........................................................................................12 3.2.4 Différents tests réalisés dans un laboratoire médical ..........................................13 A. Test de routine................................................................................................13 B. Test spécifique réalisé lors d’une suspicion de la maladie de Willebrand.....13 C. Tests discriminatifs et spécialisés ..................................................................16 3.3 Traitement...................................................................................................................19 3.3.1 La DDAVP.....................................................................................................19 3.3.2 Les concentrés du VWF .................................................................................19 Objectif et stratégie ..................................................................................................................20 Matériels et méthode................................................................................................................21 1. Réactifs ........................................................................................................................21 1.1 Le coffret Innovance® VWF Ac ................................................................................21 1.2 Autres réactifs, contrôles et calibrateurs.....................................................................23 2. Matériels et appareils ...................................................................................................23 2.1 Matériels .....................................................................................................................23 2.2 Appareils.....................................................................................................................24 2.2.1 STAR®-Max.......................................................................................................24 2.2.2 BCS-XP® ...........................................................................................................25 3. Échantillons..................................................................................................................26 4. Mise au point de la méthode ........................................................................................27 4.1 Le facteur de dilution de l’automate...........................................................................27 4.2 Les volumes des réactifs 1, 2 et 3...............................................................................28 4.3 Le volume d’échantillon.............................................................................................28 Validation de la méthode .........................................................................................................30 1. La fidélité .....................................................................................................................30 1.1 La répétabilité ........................................................................................................31 1.2 La reproductibilité .................................................................................................31 2. La calibration ...............................................................................................................32 3. La courbe dose-réponse ...............................................................................................32 3.1 La sensibilité...............................................................................................................33 4. La stabilité....................................................................................................................34 4.1 La stabilité des QC-Routine Stago .............................................................................34 4.2 La stabilité du réactif 1 ...............................................................................................34 5. La corrélation ...............................................................................................................36 5.1 Passing-Bablok ...........................................................................................................36 5.2 Bland-Altman .............................................................................................................36 6. Les interférences ..........................................................................................................37 Résultats...................................................................................................................................39 1. Évaluation de la répétabilité.........................................................................................39 2. Évaluation de la reproductibilité..................................................................................41 3. La calibration ...............................................................................................................43 4. La courbe dose-réponse ...............................................................................................44 4.1 La sensibilité...............................................................................................................45 5. La stabilité....................................................................................................................46 5.1 Du réactif 1 .................................................................................................................46 5.2 Des QC-routine...........................................................................................................49 6. La corrélation ...............................................................................................................50 7. Les interférences liées à l’Hb.......................................................................................52 Discussion ................................................................................................................................53 Comparaison des automates.....................................................................................................54 1. Nombre de tests............................................................................................................54 2. Prix...............................................................................................................................54 Conclusion ...............................................................................................................................56 Liste des figures .........................................................................................................................1 Liste des tables...........................................................................................................................2 Liste des abréviations.................................................................................................................4 Bibliographie..............................................................................................................................5 Annexes......................................................................................................................................9 Résumé.....................................................................................................................................16 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100374

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Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux / Coleen Delatte

Public ISBD Titre : Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Coleen Delatte, Auteur ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Notre-Dame de Grâce  Gosselies Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études fut réalisé au sein du laboratoire d’hématologie à l’hopital Notre-Dame de Grâce de Gossselies.Le sujet est l’analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux. Ces dernières années, la cytométrie en flux a beaucoup évoluée et permet à ce jour de diagnostiquer et de suivre de nombreuses hémopathies malignes et, plus particulièrement au laboratoire, les lymphomes. Cette technique est utilisée en complément d’une numération et d’un examen cytologique des cellules. Le cytomètre en flux permet d’obtenir différentes informations sur les cellules en passant devant un laser. Les données récoltées donnent des caractéristiques telles que la taille, la granularité ainsi que certains marqueurs antigéniques de chaque cellule individuellement. Lors de mon arrivée au sein du laboratoire, le cytomètre en flux Beckman Coulter Navios EX, fonctionnait avec un panel de cinq couleurs et un seul laser était utilisé. Mon travail de fin d’étude a permis, en complément du travail de Klara Kara de l’an dernier, de mettre au point un panel d’anticorps avec dix fluorochromes différents permettant de réaliser l’exploration simultanée de douze paramètres analysés avec 3 lasers. Ce présent travail compare l’ancien panel 5 couleurs et le nouveau panel 10 couleurs, étudie la répétabilité et la stabilité de ce panel. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage............................................................................................. 7 Introduction générale ........................................................................................................ 8 1. La cytométrie en flux : ................................................................................................ 9 1.1. Principe général ..............................................................................................................9 1.1.1. Principe de focalisation hydrodynamique .....................................................................................10 1.1.2. Principe optique ............................................................................................................................11 1.1.3. Principe électronique ....................................................................................................................13 1.1.4. Les fluorochromes .........................................................................................................................14 1.1.5. Le chevauchement et les compensations spectrales ....................................................................15 1.1.6. Les marqueurs de différenciation..................................................................................................16 2. Automate Beckman Coulter Navios EX...................................................................... 17 3. Quand doit-on réaliser un immunophénotypage ? .................................................... 18 4. Comment interpréter un histogramme de cytométrie en flux ? ................................. 19 5. Les pathologies ........................................................................................................ 20 5.1. La lymphocytose B monoclonale ...................................................................................21 5.2. La leucémie lymphoïde chronique (LLC) ........................................................................21 5.3. La leucémie à tricholeucocytes......................................................................................25 6. Marqueurs utilisés pour le diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs des cellules B chroniques ....................................................................................................................... 26 6.1. Modification du phénotypage à la suite d’un traitement...............................................29 7. Objectifs du travail de fin d’étude............................................................................. 30 8. Matériel et méthode de travail pour réaliser un immunophénotypage ..................... 31 8.1. Matériel utilisé..............................................................................................................31 8.2. Méthode.......................................................................................................................31 8.2.1. Mode opératoire[26] .......................................................................................................................32 9. Mise en place d’un panel dix couleurs....................................................................... 33 10. La répétabilité de la méthode ............................................................................... 36 11. La stabilité de la méthode..................................................................................... 38 12. Comparaison et discussion des résultats ............................................................... 43 13. Conclusion ............................................................................................................ 57 Glossaire.......................................................................................................................... 58 Abréviations .................................................................................................................... 59 Table des figures.............................................................................................................. 60 Table des tableaux........................................................................................................... 60 Bibliographie : ................................................................................................................. 61 Annexes ........................................................................................................................... 65 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100318 Analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux [TFE / Mémoire] / Coleen Delatte, Auteur ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Notre-Dame de Grâce  Gosselies Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’études fut réalisé au sein du laboratoire d’hématologie à l’hopital Notre-Dame de Grâce de Gossselies.Le sujet est l’analyse comparative de deux panels d’immunophénotypage cinq et dix couleurs en cytométrie en flux. Ces dernières années, la cytométrie en flux a beaucoup évoluée et permet à ce jour de diagnostiquer et de suivre de nombreuses hémopathies malignes et, plus particulièrement au laboratoire, les lymphomes. Cette technique est utilisée en complément d’une numération et d’un examen cytologique des cellules. Le cytomètre en flux permet d’obtenir différentes informations sur les cellules en passant devant un laser. Les données récoltées donnent des caractéristiques telles que la taille, la granularité ainsi que certains marqueurs antigéniques de chaque cellule individuellement. Lors de mon arrivée au sein du laboratoire, le cytomètre en flux Beckman Coulter Navios EX, fonctionnait avec un panel de cinq couleurs et un seul laser était utilisé. Mon travail de fin d’étude a permis, en complément du travail de Klara Kara de l’an dernier, de mettre au point un panel d’anticorps avec dix fluorochromes différents permettant de réaliser l’exploration simultanée de douze paramètres analysés avec 3 lasers. Ce présent travail compare l’ancien panel 5 couleurs et le nouveau panel 10 couleurs, étudie la répétabilité et la stabilité de ce panel. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage............................................................................................. 7 Introduction générale ........................................................................................................ 8 1. La cytométrie en flux : ................................................................................................ 9 1.1. Principe général ..............................................................................................................9 1.1.1. Principe de focalisation hydrodynamique .....................................................................................10 1.1.2. Principe optique ............................................................................................................................11 1.1.3. Principe électronique ....................................................................................................................13 1.1.4. Les fluorochromes .........................................................................................................................14 1.1.5. Le chevauchement et les compensations spectrales ....................................................................15 1.1.6. Les marqueurs de différenciation..................................................................................................16 2. Automate Beckman Coulter Navios EX...................................................................... 17 3. Quand doit-on réaliser un immunophénotypage ? .................................................... 18 4. Comment interpréter un histogramme de cytométrie en flux ? ................................. 19 5. Les pathologies ........................................................................................................ 20 5.1. La lymphocytose B monoclonale ...................................................................................21 5.2. La leucémie lymphoïde chronique (LLC) ........................................................................21 5.3. La leucémie à tricholeucocytes......................................................................................25 6. Marqueurs utilisés pour le diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs des cellules B chroniques ....................................................................................................................... 26 6.1. Modification du phénotypage à la suite d’un traitement...............................................29 7. Objectifs du travail de fin d’étude............................................................................. 30 8. Matériel et méthode de travail pour réaliser un immunophénotypage ..................... 31 8.1. Matériel utilisé..............................................................................................................31 8.2. Méthode.......................................................................................................................31 8.2.1. Mode opératoire[26] .......................................................................................................................32 9. Mise en place d’un panel dix couleurs....................................................................... 33 10. La répétabilité de la méthode ............................................................................... 36 11. La stabilité de la méthode..................................................................................... 38 12. Comparaison et discussion des résultats ............................................................... 43 13. Conclusion ............................................................................................................ 57 Glossaire.......................................................................................................................... 58 Abréviations .................................................................................................................... 59 Table des figures.............................................................................................................. 60 Table des tableaux........................................................................................................... 60 Bibliographie : ................................................................................................................. 61 Annexes ........................................................................................................................... 65 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100318

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Anémie macrocytaire, est-il possible de prédire l’orientation clinique sur base des paramètres de positionnement des nuages leucocytaires sur XN-SERIES SYSMEX ® ? / Joëlle Njanda Nana Judicaiel

Public ISBD Titre : Anémie macrocytaire, est-il possible de prédire l’orientation clinique sur base des paramètres de positionnement des nuages leucocytaires sur XN-SERIES SYSMEX ® ? Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Joëlle Njanda Nana Judicaiel ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2024 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Anémie macrocytaire, est-il possible de prédire l’orientation clinique sur base des paramètres de positionnement des nuages leucocytaires sur XN-SERIES SYSMEX ? Introduction : D'un point de vue biologique, les anémies sont catégorisées en fonction du volume globulaire moyen des érythrocytes (MCV). On peut identifier trois sous-types, notamment les anémies macrocytaires, caractérisées par un MCV supérieur à 101 femtolitres, qui sont généralement causées par un déficit en acide folique et/ou en vitamine B12. Actuellement, distinguer une macrocytose liée à un déficit en acide folique et/ou en B12 de celle associée à un syndrome myélodysplasique (SMD) représente un défi. Prédire l'origine en se basant sur les paramètres de positionnement du nuage leucocytaire serait d'un grand intérêt pour un diagnostic clinique rapide, soulignant ainsi l'importance de cette étude clinique. Objectifs de ce mémoire : Mener une étude préliminaire pour déterminer la possibilité de prédire une anémie macrocytaire en utilisant les paramètres de positionnement du nuage sur XN-SERIES SYSMEX comme paru en 2022 dans l’IJHL disant : « Cell Population Data NE-WX, NE-FSC, LY-Y of Sysmex XN9000 can provide additional information to differentiate macrocytic anaemia from myélodysplastic syndrome ». Stratégies : Les données patients ont été récoltées via le logiciel Glims sur une période de plus d’un an pour les normaux, de ceux ayant des déficits en acide folique et/ou en vitamine B12 et de ceux ayant des SMD. Ces données ont été traitées et interprétées via le test non paramètrique de type chi-square pour le paramètre ‘’sexe’’, de type Kruskal Wallis, puis le test post hoc via la procédure de Dunn et correction de Bonferroni pour les autres paramètres. Ensuite, grâce à une formule statistique de régression logistique binaire, la courbe ROC a été établie, permettant de mettre en exergue la relation entre la sensibilité, la spécificité, la VPP et VPN de la méthode de test utilisée. Résultats et discussion : Après analyse et interprétation des résultats sur 449 patients normaux, 156 patients avec déficit et 88 patients SMD. Il en ressort, pour certains paramètres (NE-X, NE-WX, MicroR, etc. …), qu’il y a une différence significative entre les 3 catégories. En termes de screening et de diagnostic clinique, la méthode est assez fiable car la courbe ROC donne un cut off de 0.7086709 avec une sensibilité de 84.6 %, une spécificité de 86.4 %, une VPP de 91.67 % et une VPN de 76 % pour différencier les MDS et déficit. Cependant, en raison de plusieurs sous- types de SMD, on peut voir la formule varier. Néanmoins, l’étude est intéressante et peut-être implémentée pour la routine. Conclusion et perspectives À la fin de cette étude, l'objectif était de déterminer si à partir d’une analyse sanguine, on peut distinguer une anémie macrocytaire liée à un SMD ou à une carence vitaminique en utilisant les paramètres de population leucocytaire. Les résultats de la courbe ROC suggèrent que la méthode de test est plutôt fiable. Un diagnostic précoce de l'anémie macrocytaire représenterait un gain de temps significatif. À l'avenir, il pourrait être envisageable de développer un algorithme statistique permettant de différencier et de diagnostiquer précocement cette condition. Cependant, quelques limites lors de l’étude doivent être prises en compte. Note de contenu : Table des matières Remerciements ............................................................................................................................................. 4 Présentation du lieu de stage....................................................................................................................... 7 Introduction générale ................................................................................................................................... 9 Partie théorique .......................................................................................................................................... 11 Chapitre 1 : Le sang ................................................................................................................................. 11 1. L’hématopoïèse ........................................................................................................................... 12 1.1. L’érythropoïèse.................................................................................................................... 13 1.1.1. La lignée érythrocytaire ............................................................................................... 13 1.1.2. Les agents de croissance de l’érythropoïèse ............................................................... 14 1.1.2.1. La vitamine B12 ....................................................................................................... 14 1.1.2.2. Acide folique............................................................................................................ 15 1.1.2.3. Le Fer ....................................................................................................................... 16 1.2. Granulopoïèse ..................................................................................................................... 16 1.2.1. La lignée granulocytaire .............................................................................................. 17 1.2.2. L’hémoglobine ............................................................................................................. 18 Chapitre 2 : Métabolisme de la VIT B12 et de l’acide folique ................................................................. 19 1. Absorption de la vitamine B12 dans l’organisme ........................................................................ 19 2. Métabolisme de la vitamine B12 ................................................................................................. 21 2.1. Place de cobalamine dans la synthèse de l’acide méthylmalonique .................................. 21 2.2. Place de la cobalamine dans la synthèse de l’homocystéine .............................................. 22 3. Absorption des folates ................................................................................................................ 23 4. Métabolisme des folates ............................................................................................................. 24 Chapitre 3 : Les anémies macrocytaires ................................................................................................. 25 1. Classification des anémies macrocytaires ................................................................................... 25 1.1. Anémies macrocytaires mégaloblastiques .......................................................................... 25 1.2. Anémies macrocytaires non mégaloblastiques................................................................... 26 1.2.1. Anémie macrocytaire liée à un Syndrome myélodysplasique (SMD) ......................... 27 1.2.1.1. Définition ................................................................................................................. 27 1.2.1.2. Classification des SMD............................................................................................. 27 Chapitre 4 : Principe de fonctionnement de l’automate XN-Séries Sysmex ........................................... 29 1. Principe des XN-Séries SYSMEX ................................................................................................... 29 1.1. L’impédance couplée à la focalisation hydrodynamique .................................................... 29 1.2. Détermination de l’hématocrite.......................................................................................... 32 1.3. Détermination de l’hémoglobine par le Sodium Lauryl Sulfate (SLS) ................................. 32 1.4. Cytométrie en flux par diode laser ...................................................................................... 34 2. Les différents canaux d’analyses sur le XN SERIES SYSMEX ........................................................ 35 2.1. Canal WNR ........................................................................................................................... 35 2.2. Canal WDF ........................................................................................................................... 36 Partie Pratique ............................................................................................................................................ 39 1. Objectifs ...................................................................................................................................... 39 2. Matériels et méthodes ............................................................................................................... 39 2.1. Matériels.............................................................................................................................. 39 2.1.1. Prélèvement ................................................................................................................ 39 2.1.2. Populations étudiées ................................................................................................... 39 2.1.2.1. Patients normaux (PN) ............................................................................................ 39 2.1.2.2. Patients SMD ........................................................................................................... 39 2.1.2.3. Patients avec déficit en acide folique /vitamine B12 (PD) ...................................... 40 2.1.3. Etude rétrospective ..................................................................................................... 40 2.2. Méthodes ............................................................................................................................ 41 2.2.1. Le test chi-square (X²)................................................................................................. 42 2.2.2. Le test de type Kruskal-Wallis : test non paramétrique. ............................................ 42 2.2.3. Le test post hoc .......................................................................................................... 43 3. Résultats...................................................................................................................................... 45 3.1. Modèle régression logistique binaire .................................................................................. 47 4. Discussions .................................................................................................................................. 50 Conclusion ................................................................................................................................................... 53 Liste des abréviations ................................................................................................................................. 54 Liste des figures .......................................................................................................................................... 56 Bibliographie.............................................................................................................................................. 57 Tables des annexes ..................................................................................................................................... 63 Résumé........................................................................................................................................................ 92 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119427 Anémie macrocytaire, est-il possible de prédire l’orientation clinique sur base des paramètres de positionnement des nuages leucocytaires sur XN-SERIES SYSMEX ® ? [TFE / Mémoire] / Joëlle Njanda Nana Judicaiel ; Louise-Marie Vincent, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2024. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Anémie macrocytaire, est-il possible de prédire l’orientation clinique sur base des paramètres de positionnement des nuages leucocytaires sur XN-SERIES SYSMEX ? Introduction : D'un point de vue biologique, les anémies sont catégorisées en fonction du volume globulaire moyen des érythrocytes (MCV). On peut identifier trois sous-types, notamment les anémies macrocytaires, caractérisées par un MCV supérieur à 101 femtolitres, qui sont généralement causées par un déficit en acide folique et/ou en vitamine B12. Actuellement, distinguer une macrocytose liée à un déficit en acide folique et/ou en B12 de celle associée à un syndrome myélodysplasique (SMD) représente un défi. Prédire l'origine en se basant sur les paramètres de positionnement du nuage leucocytaire serait d'un grand intérêt pour un diagnostic clinique rapide, soulignant ainsi l'importance de cette étude clinique. Objectifs de ce mémoire : Mener une étude préliminaire pour déterminer la possibilité de prédire une anémie macrocytaire en utilisant les paramètres de positionnement du nuage sur XN-SERIES SYSMEX comme paru en 2022 dans l’IJHL disant : « Cell Population Data NE-WX, NE-FSC, LY-Y of Sysmex XN9000 can provide additional information to differentiate macrocytic anaemia from myélodysplastic syndrome ». Stratégies : Les données patients ont été récoltées via le logiciel Glims sur une période de plus d’un an pour les normaux, de ceux ayant des déficits en acide folique et/ou en vitamine B12 et de ceux ayant des SMD. Ces données ont été traitées et interprétées via le test non paramètrique de type chi-square pour le paramètre ‘’sexe’’, de type Kruskal Wallis, puis le test post hoc via la procédure de Dunn et correction de Bonferroni pour les autres paramètres. Ensuite, grâce à une formule statistique de régression logistique binaire, la courbe ROC a été établie, permettant de mettre en exergue la relation entre la sensibilité, la spécificité, la VPP et VPN de la méthode de test utilisée. Résultats et discussion : Après analyse et interprétation des résultats sur 449 patients normaux, 156 patients avec déficit et 88 patients SMD. Il en ressort, pour certains paramètres (NE-X, NE-WX, MicroR, etc. …), qu’il y a une différence significative entre les 3 catégories. En termes de screening et de diagnostic clinique, la méthode est assez fiable car la courbe ROC donne un cut off de 0.7086709 avec une sensibilité de 84.6 %, une spécificité de 86.4 %, une VPP de 91.67 % et une VPN de 76 % pour différencier les MDS et déficit. Cependant, en raison de plusieurs sous- types de SMD, on peut voir la formule varier. Néanmoins, l’étude est intéressante et peut-être implémentée pour la routine. Conclusion et perspectives À la fin de cette étude, l'objectif était de déterminer si à partir d’une analyse sanguine, on peut distinguer une anémie macrocytaire liée à un SMD ou à une carence vitaminique en utilisant les paramètres de population leucocytaire. Les résultats de la courbe ROC suggèrent que la méthode de test est plutôt fiable. Un diagnostic précoce de l'anémie macrocytaire représenterait un gain de temps significatif. À l'avenir, il pourrait être envisageable de développer un algorithme statistique permettant de différencier et de diagnostiquer précocement cette condition. Cependant, quelques limites lors de l’étude doivent être prises en compte. Note de contenu : Table des matières Remerciements ............................................................................................................................................. 4 Présentation du lieu de stage....................................................................................................................... 7 Introduction générale ................................................................................................................................... 9 Partie théorique .......................................................................................................................................... 11 Chapitre 1 : Le sang ................................................................................................................................. 11 1. L’hématopoïèse ........................................................................................................................... 12 1.1. L’érythropoïèse.................................................................................................................... 13 1.1.1. La lignée érythrocytaire ............................................................................................... 13 1.1.2. Les agents de croissance de l’érythropoïèse ............................................................... 14 1.1.2.1. La vitamine B12 ....................................................................................................... 14 1.1.2.2. Acide folique............................................................................................................ 15 1.1.2.3. Le Fer ....................................................................................................................... 16 1.2. Granulopoïèse ..................................................................................................................... 16 1.2.1. La lignée granulocytaire .............................................................................................. 17 1.2.2. L’hémoglobine ............................................................................................................. 18 Chapitre 2 : Métabolisme de la VIT B12 et de l’acide folique ................................................................. 19 1. Absorption de la vitamine B12 dans l’organisme ........................................................................ 19 2. Métabolisme de la vitamine B12 ................................................................................................. 21 2.1. Place de cobalamine dans la synthèse de l’acide méthylmalonique .................................. 21 2.2. Place de la cobalamine dans la synthèse de l’homocystéine .............................................. 22 3. Absorption des folates ................................................................................................................ 23 4. Métabolisme des folates ............................................................................................................. 24 Chapitre 3 : Les anémies macrocytaires ................................................................................................. 25 1. Classification des anémies macrocytaires ................................................................................... 25 1.1. Anémies macrocytaires mégaloblastiques .......................................................................... 25 1.2. Anémies macrocytaires non mégaloblastiques................................................................... 26 1.2.1. Anémie macrocytaire liée à un Syndrome myélodysplasique (SMD) ......................... 27 1.2.1.1. Définition ................................................................................................................. 27 1.2.1.2. Classification des SMD............................................................................................. 27 Chapitre 4 : Principe de fonctionnement de l’automate XN-Séries Sysmex ........................................... 29 1. Principe des XN-Séries SYSMEX ................................................................................................... 29 1.1. L’impédance couplée à la focalisation hydrodynamique .................................................... 29 1.2. Détermination de l’hématocrite.......................................................................................... 32 1.3. Détermination de l’hémoglobine par le Sodium Lauryl Sulfate (SLS) ................................. 32 1.4. Cytométrie en flux par diode laser ...................................................................................... 34 2. Les différents canaux d’analyses sur le XN SERIES SYSMEX ........................................................ 35 2.1. Canal WNR ........................................................................................................................... 35 2.2. Canal WDF ........................................................................................................................... 36 Partie Pratique ............................................................................................................................................ 39 1. Objectifs ...................................................................................................................................... 39 2. Matériels et méthodes ............................................................................................................... 39 2.1. Matériels.............................................................................................................................. 39 2.1.1. Prélèvement ................................................................................................................ 39 2.1.2. Populations étudiées ................................................................................................... 39 2.1.2.1. Patients normaux (PN) ............................................................................................ 39 2.1.2.2. Patients SMD ........................................................................................................... 39 2.1.2.3. Patients avec déficit en acide folique /vitamine B12 (PD) ...................................... 40 2.1.3. Etude rétrospective ..................................................................................................... 40 2.2. Méthodes ............................................................................................................................ 41 2.2.1. Le test chi-square (X²)................................................................................................. 42 2.2.2. Le test de type Kruskal-Wallis : test non paramétrique. ............................................ 42 2.2.3. Le test post hoc .......................................................................................................... 43 3. Résultats...................................................................................................................................... 45 3.1. Modèle régression logistique binaire .................................................................................. 47 4. Discussions .................................................................................................................................. 50 Conclusion ................................................................................................................................................... 53 Liste des abréviations ................................................................................................................................. 54 Liste des figures .......................................................................................................................................... 56 Bibliographie.............................................................................................................................................. 57 Tables des annexes ..................................................................................................................................... 63 Résumé........................................................................................................................................................ 92 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119427

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Anticorps anti-CCP : Apports diagnostiques et validation de méthode / Doygu Sanak

Public ISBD Titre : Anticorps anti-CCP : Apports diagnostiques et validation de méthode Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Doygu Sanak, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale  CHU Charleroi  Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La polyarthrite rhumatoïde est une maladie auto-immune fréquente qui touche entre 0,5 et 1% de la population mondiale. Elle se caractérise par une inflammation de la membrane synoviale et touche principalement les poignets ainsi que les articulations interphalangiennes. Il est primordial de dépister rapidement la maladie afin d’éviter une destruction articulaire irréversible et des complications pouvant mener jusqu’à la mort du patient. Dans cette optique, les anticorps anti-CCP sont des marqueurs de dosage très précoces, présents même avant le début des premiers signes cliniques de la pathologie. Au laboratoire de biochimie de l’Hôpital Civil Marie Curie, ces anticorps étaient initialement dosés au moyen d’une technique immuno-enzymatique semi-automatisée (Inova, Werfen). Aujourd'hui, le dosage des anti-CCP est réalisé via une méthode entièrement automatisée basée sur une détection par chimiluminescence (Architect, Abbott). Ce travail a pour objectifs d’une part de faire le point sur les anti-CCP en tant que marqueur biologique de la polyarthrite rhumatoïde et d’autre part d’évaluer les performances analytiques du dosage des anti-CCP avec détection par chimiluminescence. Une comparaison des résultats issus des deux méthodes de dosage et portant sur 68 patients a notamment été réalisée. En conclusion, le dosage des anti-CCP sur Architect présente des performances analytiques satisfaisantes et démontre une plus grande spécificité clinique que la méthode semi-automatisée. Note de contenu : Introduction ............................................................................................................................................. 7 Partie théorique ...................................................................................................................................... 8 1. Auto-immunité ................................................................................................................................ 9 1.1 Introduction ............................................................................................................................. 9 1.2 Anticorps ................................................................................................................................. 9 1.3 Auto-anticorps ....................................................................................................................... 10 1.3.1 Les auto-anticorps naturels ........................................................................................... 11 1.3.2 Les auto-anticorps pathologiques ................................................................................. 11 1.4 Les maladies auto immunes (MAI) ........................................................................................ 11 1.4.1 Les maladies auto-immunes non spécifiques d’organe ................................................ 11 1.4.2 Les maladies auto-immunes spécifiques d’organes ...................................................... 13 2. La polyarthrite rhumatoïde ........................................................................................................... 14 2.1 Introduction ........................................................................................................................... 14 2.2 Facteurs de risques : .............................................................................................................. 14 2.2.1 Facteurs génétiques ...................................................................................................... 14 2.2.2 Facteurs environnementaux ......................................................................................... 15 2.2.3 Facteurs infectieux ........................................................................................................ 15 2.3 Physiopathologie ................................................................................................................... 15 2.4 Signes cliniques :.................................................................................................................... 16 2.5 Signes biologiques ................................................................................................................. 16 2.6 Critères diagnostiques de l’American College of Rheumatology (ACR) ................................ 17 2.7 Marqueurs sérologiques : ...................................................................................................... 18 2.8 Traitement ............................................................................................................................. 18 2.8.1 Traitement de la douleur, de l’inflammation et du désordre immunitaire .................. 18 2.8.2 Traitements ciblés ......................................................................................................... 18 3. Anticorps anti-peptides cycliques citrullinés (anti-CCP) ................................................................ 19 3.1 Introduction ........................................................................................................................... 19 3.2 Historique .............................................................................................................................. 19 3.3 Intérêts .................................................................................................................................. 20 3.4 Dosage ................................................................................................................................... 20 4. PhD lx ............................................................................................................................................. 21 4.1 Appareillage ........................................................................................................................... 21 4.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 22 5. Architect I2000 .............................................................................................................................. 23 5.1 Appareillage : ......................................................................................................................... 23 5 5.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 24 6. Méthode de validation .................................................................................................................. 26 Objectifs et stratégie du travail ............................................................................................................. 27 Partie pratique ...................................................................................................................................... 28 1. Matériels et méthodes .................................................................................................................. 29 1.1 Dosage des anticorps anti-CCP sur le PhD lx ......................................................................... 29 1.1.1 Réactifs .......................................................................................................................... 29 1.1.2 Échantillons ................................................................................................................... 29 1.1.3 Méthode ........................................................................................................................ 29 1.1.4 Contrôle qualité ............................................................................................................. 30 1.1.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 30 1.1.6 Limite du test et interférence ........................................................................................ 30 1.2 Dosage des anti-CCP sur l’Architect ...................................................................................... 31 1.2.1 Réactifs .......................................................................................................................... 31 1.2.2 Échantillons ................................................................................................................... 31 1.2.3 Méthode ........................................................................................................................ 32 1.2.4 Limite et interférence du test ........................................................................................ 32 1.2.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 32 2. Résultats ........................................................................................................................................ 33 2.1 La calibration ......................................................................................................................... 33 2.2 Répétabilité ........................................................................................................................... 33 2.3 Reproductibilité ..................................................................................................................... 34 2.4 Linéarité ................................................................................................................................. 35 3.Comparaison ...................................................................................................................................... 37 3.1 Comparaison des résultats patients ...................................................................................... 37 3.2 Comparaison des automates ................................................................................................. 40 3.3 Discussion .............................................................................................................................. 40 Conclusion ............................................................................................................................................. 42 Liste des figures et abréviations ............................................................................................................ 44 Bibliographie.......................................................................................................................................... 46 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=80000 Anticorps anti-CCP : Apports diagnostiques et validation de méthode [TFE / Mémoire] / Doygu Sanak, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale  CHU Charleroi  Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La polyarthrite rhumatoïde est une maladie auto-immune fréquente qui touche entre 0,5 et 1% de la population mondiale. Elle se caractérise par une inflammation de la membrane synoviale et touche principalement les poignets ainsi que les articulations interphalangiennes. Il est primordial de dépister rapidement la maladie afin d’éviter une destruction articulaire irréversible et des complications pouvant mener jusqu’à la mort du patient. Dans cette optique, les anticorps anti-CCP sont des marqueurs de dosage très précoces, présents même avant le début des premiers signes cliniques de la pathologie. Au laboratoire de biochimie de l’Hôpital Civil Marie Curie, ces anticorps étaient initialement dosés au moyen d’une technique immuno-enzymatique semi-automatisée (Inova, Werfen). Aujourd'hui, le dosage des anti-CCP est réalisé via une méthode entièrement automatisée basée sur une détection par chimiluminescence (Architect, Abbott). Ce travail a pour objectifs d’une part de faire le point sur les anti-CCP en tant que marqueur biologique de la polyarthrite rhumatoïde et d’autre part d’évaluer les performances analytiques du dosage des anti-CCP avec détection par chimiluminescence. Une comparaison des résultats issus des deux méthodes de dosage et portant sur 68 patients a notamment été réalisée. En conclusion, le dosage des anti-CCP sur Architect présente des performances analytiques satisfaisantes et démontre une plus grande spécificité clinique que la méthode semi-automatisée. Note de contenu : Introduction ............................................................................................................................................. 7 Partie théorique ...................................................................................................................................... 8 1. Auto-immunité ................................................................................................................................ 9 1.1 Introduction ............................................................................................................................. 9 1.2 Anticorps ................................................................................................................................. 9 1.3 Auto-anticorps ....................................................................................................................... 10 1.3.1 Les auto-anticorps naturels ........................................................................................... 11 1.3.2 Les auto-anticorps pathologiques ................................................................................. 11 1.4 Les maladies auto immunes (MAI) ........................................................................................ 11 1.4.1 Les maladies auto-immunes non spécifiques d’organe ................................................ 11 1.4.2 Les maladies auto-immunes spécifiques d’organes ...................................................... 13 2. La polyarthrite rhumatoïde ........................................................................................................... 14 2.1 Introduction ........................................................................................................................... 14 2.2 Facteurs de risques : .............................................................................................................. 14 2.2.1 Facteurs génétiques ...................................................................................................... 14 2.2.2 Facteurs environnementaux ......................................................................................... 15 2.2.3 Facteurs infectieux ........................................................................................................ 15 2.3 Physiopathologie ................................................................................................................... 15 2.4 Signes cliniques :.................................................................................................................... 16 2.5 Signes biologiques ................................................................................................................. 16 2.6 Critères diagnostiques de l’American College of Rheumatology (ACR) ................................ 17 2.7 Marqueurs sérologiques : ...................................................................................................... 18 2.8 Traitement ............................................................................................................................. 18 2.8.1 Traitement de la douleur, de l’inflammation et du désordre immunitaire .................. 18 2.8.2 Traitements ciblés ......................................................................................................... 18 3. Anticorps anti-peptides cycliques citrullinés (anti-CCP) ................................................................ 19 3.1 Introduction ........................................................................................................................... 19 3.2 Historique .............................................................................................................................. 19 3.3 Intérêts .................................................................................................................................. 20 3.4 Dosage ................................................................................................................................... 20 4. PhD lx ............................................................................................................................................. 21 4.1 Appareillage ........................................................................................................................... 21 4.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 22 5. Architect I2000 .............................................................................................................................. 23 5.1 Appareillage : ......................................................................................................................... 23 5 5.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 24 6. Méthode de validation .................................................................................................................. 26 Objectifs et stratégie du travail ............................................................................................................. 27 Partie pratique ...................................................................................................................................... 28 1. Matériels et méthodes .................................................................................................................. 29 1.1 Dosage des anticorps anti-CCP sur le PhD lx ......................................................................... 29 1.1.1 Réactifs .......................................................................................................................... 29 1.1.2 Échantillons ................................................................................................................... 29 1.1.3 Méthode ........................................................................................................................ 29 1.1.4 Contrôle qualité ............................................................................................................. 30 1.1.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 30 1.1.6 Limite du test et interférence ........................................................................................ 30 1.2 Dosage des anti-CCP sur l’Architect ...................................................................................... 31 1.2.1 Réactifs .......................................................................................................................... 31 1.2.2 Échantillons ................................................................................................................... 31 1.2.3 Méthode ........................................................................................................................ 32 1.2.4 Limite et interférence du test ........................................................................................ 32 1.2.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 32 2. Résultats ........................................................................................................................................ 33 2.1 La calibration ......................................................................................................................... 33 2.2 Répétabilité ........................................................................................................................... 33 2.3 Reproductibilité ..................................................................................................................... 34 2.4 Linéarité ................................................................................................................................. 35 3.Comparaison ...................................................................................................................................... 37 3.1 Comparaison des résultats patients ...................................................................................... 37 3.2 Comparaison des automates ................................................................................................. 40 3.3 Discussion .............................................................................................................................. 40 Conclusion ............................................................................................................................................. 42 Liste des figures et abréviations ............................................................................................................ 44 Bibliographie.......................................................................................................................................... 46 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=80000

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