Centre de Documentation Campus Montignies
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Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermé du 27/04 au 12/05 inclus.
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Détail de l'éditeur
Helha. Paramédical - Biologie médicale
localisé à :
Montignies-sur-Sambre
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Étude de la phosphosérine phosphatase de Mycobacterium marinum : Production, purification et détermination de paramètres enzymatiques. / Adrien Lesne
Titre : Étude de la phosphosérine phosphatase de Mycobacterium marinum : Production, purification et détermination de paramètres enzymatiques. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Adrien Lesne, Auteur ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : 1 INTRODUCTION 7
1.1 LA SÉRINE 7
1.1.1 Fonctions de la sérine 7
1.1.2 Voie phosphorylée de la sérine 7
1.2 LES PHOSPHOSÉRINE PHOSPHATASES 8
1.2.1 Structure 9
1.2.1.1 Domaine PSP 9
1.2.1.2 Domaine ACT 10
1.2.2 Fonctions 10
1.2.2.1 Mécanisme catalytique du domaine des PSP 10
1.2.3 Études de PSP de différents organismes 11
1.2.3.1 Alignement de séquences des PSP 12
1.3 CARACTÉRISATION DES ENZYMES 13
1.3.1 La cinétique enzymatique 13
1.3.2 Paramètres étudiés influençant l’activité des enzymes 15
1.3.2.1 La température 15
1.3.2.2 Le pH 16
1.3.2.3 Cofacteurs métalliques 17
2 OBJECTIFS ET STRATÉGIES 18
2.1 OBJECTIFS ET STRATÉGIES 18
3 MATÉRIELS ET MÉTHODES 19
3.1 PRINCIPES 19
3.1.1 Expressions des PSP 19
3.1.1.1 Les bactéries Escherichia coli Bl21 DE3 19
3.1.1.2 Le plasmide pAVA0421 19
3.1.1.3 La transformation bactérienne 20
3.1.1.4 Culture 21
3.1.1.5 L’induction 22
3.1.2 Purification de la PSP de M.marinum 23
3.1.2.1 La Lyse bactérienne 23
3.1.2.2 La chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) 24
3.1.3 Le gel SDS-PAGE 26
3.1.4 Détermination de la concentration en enzyme. 27
3.1.4.1 Le Nanodrop 27
3.1.5 Détermination d’activité enzymatique 28
3.1.5.1 Méthode de dosage 28
3.1.5.2 Détermination de paramètres cinétiques 29
3.1.5.3 Détermination de la température optimale 29
3.1.5.4 Détermination du pH optimum 29
3.1.5.5 Détermination du cofacteur métallique optimal 30
3.2 PROTOCOLES 30
4 RÉSULTATS ET DISCUSSIONS 30
4.1 TEST DE PARAMÈTRES D’INDUCTIONS DE LA PSP DE M.MARINUM 30
4.2 SUIVI DE LA PRODUCTION DE LA PSP DE M.MARINUM 31
4.3 DÉTERMINATION DES PARAMÈTRES CINÉTIQUES DE LA PSP DE M.MARINUM 34
4.4 RÉSULTATS DE LA DÉTERMINATION DE LA TEMPÉRATURE OPTIMALE DE LA PSP DE M.MARINUM 35
4.5 DÉTERMINATION DU PH OPTIMUM DE LA PSP DE M.MARINUM 36
4.6 DÉTERMINATION DU COFACTEUR OPTIMUM DE LA PSP DE M.MARINUM 37
5 CONCLUSION ET PERSPECTIVES 38
6 BIBLIOGRAPHIE 40
7 ANNEXES 43
7.1 PROTOCOLES 43
7.1.1 Préparation de milieux nutritifs bactériens 43
7.1.1.1 Milieu Lysogeny Broth base liquide (LBLiq) 43
7.1.1.2 Milieu LB agar (LBagar) 43
7.1.2 Transformation bactérienne 43
7.1.3 Préculture 43
7.1.4 Culture 44
7.1.5 Induction 44
7.1.6 Optimisation d’induction 44
7.1.7 Lyse bactérienne 44
7.1.8 Purification IMAC 45
7.1.9 Dialyse 45
7.1.10 Préparation d’un gel SDS-PAGE 12% 45
7.1.11 Migration d’échantillons dans le gel SDS-PAGE 12% 46
7.1.11.1 Préparation du tampon échantillon 46
7.1.11.2 Préparation des échantillons 46
7.1.11.3 Migration des échantillons 47
7.1.12 Coloration et décoloration du gel SDS-PAGE 47
7.1.13 Test d’activité 47
7.1.13.1 Préparation du réactif phosphate 47
7.1.13.2 Réalisation de la droite d’étalonnage 48
7.1.13.3 Préparation des échantillons et du blanc réactif 48
7.1.13.4 Détermination de l’activité de l’enzyme 48
7.1.14 Détermination du pH optimum 49
7.1.15 Détermination de la température optimale 49
7.1.16 Détermination du cofacteur optimum 49
7.1.17 Test cinétique 49
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79993 Étude de la phosphosérine phosphatase de Mycobacterium marinum : Production, purification et détermination de paramètres enzymatiques. [TFE / Mémoire] / Adrien Lesne, Auteur ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : 1 INTRODUCTION 7
1.1 LA SÉRINE 7
1.1.1 Fonctions de la sérine 7
1.1.2 Voie phosphorylée de la sérine 7
1.2 LES PHOSPHOSÉRINE PHOSPHATASES 8
1.2.1 Structure 9
1.2.1.1 Domaine PSP 9
1.2.1.2 Domaine ACT 10
1.2.2 Fonctions 10
1.2.2.1 Mécanisme catalytique du domaine des PSP 10
1.2.3 Études de PSP de différents organismes 11
1.2.3.1 Alignement de séquences des PSP 12
1.3 CARACTÉRISATION DES ENZYMES 13
1.3.1 La cinétique enzymatique 13
1.3.2 Paramètres étudiés influençant l’activité des enzymes 15
1.3.2.1 La température 15
1.3.2.2 Le pH 16
1.3.2.3 Cofacteurs métalliques 17
2 OBJECTIFS ET STRATÉGIES 18
2.1 OBJECTIFS ET STRATÉGIES 18
3 MATÉRIELS ET MÉTHODES 19
3.1 PRINCIPES 19
3.1.1 Expressions des PSP 19
3.1.1.1 Les bactéries Escherichia coli Bl21 DE3 19
3.1.1.2 Le plasmide pAVA0421 19
3.1.1.3 La transformation bactérienne 20
3.1.1.4 Culture 21
3.1.1.5 L’induction 22
3.1.2 Purification de la PSP de M.marinum 23
3.1.2.1 La Lyse bactérienne 23
3.1.2.2 La chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) 24
3.1.3 Le gel SDS-PAGE 26
3.1.4 Détermination de la concentration en enzyme. 27
3.1.4.1 Le Nanodrop 27
3.1.5 Détermination d’activité enzymatique 28
3.1.5.1 Méthode de dosage 28
3.1.5.2 Détermination de paramètres cinétiques 29
3.1.5.3 Détermination de la température optimale 29
3.1.5.4 Détermination du pH optimum 29
3.1.5.5 Détermination du cofacteur métallique optimal 30
3.2 PROTOCOLES 30
4 RÉSULTATS ET DISCUSSIONS 30
4.1 TEST DE PARAMÈTRES D’INDUCTIONS DE LA PSP DE M.MARINUM 30
4.2 SUIVI DE LA PRODUCTION DE LA PSP DE M.MARINUM 31
4.3 DÉTERMINATION DES PARAMÈTRES CINÉTIQUES DE LA PSP DE M.MARINUM 34
4.4 RÉSULTATS DE LA DÉTERMINATION DE LA TEMPÉRATURE OPTIMALE DE LA PSP DE M.MARINUM 35
4.5 DÉTERMINATION DU PH OPTIMUM DE LA PSP DE M.MARINUM 36
4.6 DÉTERMINATION DU COFACTEUR OPTIMUM DE LA PSP DE M.MARINUM 37
5 CONCLUSION ET PERSPECTIVES 38
6 BIBLIOGRAPHIE 40
7 ANNEXES 43
7.1 PROTOCOLES 43
7.1.1 Préparation de milieux nutritifs bactériens 43
7.1.1.1 Milieu Lysogeny Broth base liquide (LBLiq) 43
7.1.1.2 Milieu LB agar (LBagar) 43
7.1.2 Transformation bactérienne 43
7.1.3 Préculture 43
7.1.4 Culture 44
7.1.5 Induction 44
7.1.6 Optimisation d’induction 44
7.1.7 Lyse bactérienne 44
7.1.8 Purification IMAC 45
7.1.9 Dialyse 45
7.1.10 Préparation d’un gel SDS-PAGE 12% 45
7.1.11 Migration d’échantillons dans le gel SDS-PAGE 12% 46
7.1.11.1 Préparation du tampon échantillon 46
7.1.11.2 Préparation des échantillons 46
7.1.11.3 Migration des échantillons 47
7.1.12 Coloration et décoloration du gel SDS-PAGE 47
7.1.13 Test d’activité 47
7.1.13.1 Préparation du réactif phosphate 47
7.1.13.2 Réalisation de la droite d’étalonnage 48
7.1.13.3 Préparation des échantillons et du blanc réactif 48
7.1.13.4 Détermination de l’activité de l’enzyme 48
7.1.14 Détermination du pH optimum 49
7.1.15 Détermination de la température optimale 49
7.1.16 Détermination du cofacteur optimum 49
7.1.17 Test cinétique 49
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79993 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Etude préanalytique sur le dosage du zinc et du cuivre par spectrométrie d’absorption atomique / Lucia Lo cicero
Titre : Etude préanalytique sur le dosage du zinc et du cuivre par spectrométrie d’absorption atomique Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Lucia Lo cicero, Auteur ; Véronique Vallery, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail est une étude préanalytique concernant le dosage du zinc et du cuivre par spectrométrie d’absorption atomique. Le zinc et le cuivre font partie de la catégorie des oligoéléments et servent à un grand nombre de fonctions dans l’organisme. Bien qu’ils se retrouvent en faible quantité dans le corps humain, leur présence est indispensable au bon fonctionnement de celui-ci. Une personne en bonne santé aura un taux de zinc compris entre
0.70 mg/L et 1.20 mg/L et un taux de cuivre entre 0.70 mg/L et 1.40 mg/L. L’étude de ces oligoéléments dans ce travail est une analyse préanalytique se divisant en plusieurs points :
- L’étude de l’influence de l’hémolyse : Est-ce que la lyse des globules rouges influe sur le dosage du zinc et du cuivre ? Et si oui, à partir de quel moment ?
- L’étude de l’effet matrice : Est-ce que si le tube de référence pour le dosage des oligoéléments est manquant, d’autres tubes pourraient être utilisés ? Par exemple, un tube héparine, un tube sec sans gel ou un tube sec avec gel ?
- L’étude de stabilité :
o Stabilité du sérum : Est-ce qu’une fois le tube centrifugé et aliquoté, le sérum reste stable ? Et à des températures différentes ?
o Stabilité du sang total : Est-ce que si le tube n’est centrifugé qu’après plusieurs heures, le zinc et le cuivre resteront stables ?
o Stabilité lors de cycles de congélation : Est-ce que le sérum aliquoté peut être décongelé et recongelé plusieurs fois sans que cela n’impacte les résultats ?
Ce mémoire démontre que le zinc est un paramètre qui est impacté par l’hémolyse, par la nature du tube de prélèvement et par le temps d’attente avant la centrifugation du tube. Mais au contraire du zinc, le cuivre, lui, est un paramètre qui est à la fois non impacté par l’hémolyse, non impacté par la nature du tube de prélèvement et non impacté par le temps avant la centrifugation. Cependant, que ce soit pour le zinc ou pour le cuivre, le sérum reste
stable 48 heures à température ambiante et à 4°C et reste également stable 2 semaines à une température de -20°C.
Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE ......................................................................................................... 5
a. Bref historique de l’hôpital ......................................................................................................... 5
b. La clinique Saint-Luc de Bouge ................................................................................................... 5
c. Le laboratoire ............................................................................................................................. 6
INTRODUCTION ....................................................................................................................................... 7
1. Introduction théorique ................................................................................................................... 8
1.1. Intérêt clinique ........................................................................................................................... 8
a. Le zinc ......................................................................................................................................... 8
b. Le cuivre...................................................................................................................................... 9
1.2. Introduction à la spectrométrie ............................................................................................... 10
1.3. La spectrométrie d’absorption atomique ................................................................................ 12
1.4. Le préanalytique ....................................................................................................................... 13
2. Objectifs ........................................................................................................................................ 14
3. Matériel et méthode .................................................................................................................... 15
3.1. Le PinAAcle 900T ...................................................................................................................... 15
a. Appareillage .............................................................................................................................. 15
Le pipeteur automatique............................................................................................................... 16
Le nébuliseur ................................................................................................................................. 17
L’atomiseur .................................................................................................................................... 18
La source lumineuse ...................................................................................................................... 20
Le monochromateur et le hacheur ............................................................................................... 21
Le détecteur et les résultats .......................................................................................................... 21
3.2. Les protocoles........................................................................................................................... 22
a. L’influence de l’hémolyse ......................................................................................................... 22
b. L’effet matrice .......................................................................................................................... 25
c. La stabilité................................................................................................................................. 26
Stabilité du zinc et du cuivre dans le sérum .................................................................................. 26
Stabilité du zinc et du cuivre dans le sang total ............................................................................ 27
Stabilité lors de cycle de congélation ............................................................................................ 27
3.3. Les statistiques ......................................................................................................................... 28
4. Résultat et discussion ................................................................................................................... 29
4.1 L’influence de l’hémolyse ......................................................................................................... 29
Le zinc ............................................................................................................................................ 30
Le cuivre ........................................................................................................................................ 31
4.2. L’effet matrice .......................................................................................................................... 33
Le zinc ............................................................................................................................................ 33
Le cuivre ........................................................................................................................................ 34
4.3. La stabilité................................................................................................................................. 35
a. Stabilité dans le sérum ............................................................................................................. 35
Le zinc ............................................................................................................................................ 35
Le cuivre ........................................................................................................................................ 40
b. Stabilité dans le sang total........................................................................................................ 46
Le zinc ............................................................................................................................................ 46
Le cuivre ........................................................................................................................................ 49
c. Stabilité lors de cycle de congélation ....................................................................................... 52
Le zinc ............................................................................................................................................ 52
Le cuivre ........................................................................................................................................ 53
CONCLUSION ......................................................................................................................................... 54
BIBLIOGRAPHIE ...................................................................................................................................... 56
ANNEXE
Annexe N°1 : utilisation détaillé du PinAAcle 900 T pour le dosage du zinc et du cuivre. ................ 58
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105766 Etude préanalytique sur le dosage du zinc et du cuivre par spectrométrie d’absorption atomique [TFE / Mémoire] / Lucia Lo cicero, Auteur ; Véronique Vallery, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail est une étude préanalytique concernant le dosage du zinc et du cuivre par spectrométrie d’absorption atomique. Le zinc et le cuivre font partie de la catégorie des oligoéléments et servent à un grand nombre de fonctions dans l’organisme. Bien qu’ils se retrouvent en faible quantité dans le corps humain, leur présence est indispensable au bon fonctionnement de celui-ci. Une personne en bonne santé aura un taux de zinc compris entre
0.70 mg/L et 1.20 mg/L et un taux de cuivre entre 0.70 mg/L et 1.40 mg/L. L’étude de ces oligoéléments dans ce travail est une analyse préanalytique se divisant en plusieurs points :
- L’étude de l’influence de l’hémolyse : Est-ce que la lyse des globules rouges influe sur le dosage du zinc et du cuivre ? Et si oui, à partir de quel moment ?
- L’étude de l’effet matrice : Est-ce que si le tube de référence pour le dosage des oligoéléments est manquant, d’autres tubes pourraient être utilisés ? Par exemple, un tube héparine, un tube sec sans gel ou un tube sec avec gel ?
- L’étude de stabilité :
o Stabilité du sérum : Est-ce qu’une fois le tube centrifugé et aliquoté, le sérum reste stable ? Et à des températures différentes ?
o Stabilité du sang total : Est-ce que si le tube n’est centrifugé qu’après plusieurs heures, le zinc et le cuivre resteront stables ?
o Stabilité lors de cycles de congélation : Est-ce que le sérum aliquoté peut être décongelé et recongelé plusieurs fois sans que cela n’impacte les résultats ?
Ce mémoire démontre que le zinc est un paramètre qui est impacté par l’hémolyse, par la nature du tube de prélèvement et par le temps d’attente avant la centrifugation du tube. Mais au contraire du zinc, le cuivre, lui, est un paramètre qui est à la fois non impacté par l’hémolyse, non impacté par la nature du tube de prélèvement et non impacté par le temps avant la centrifugation. Cependant, que ce soit pour le zinc ou pour le cuivre, le sérum reste
stable 48 heures à température ambiante et à 4°C et reste également stable 2 semaines à une température de -20°C.
Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS
PRESENTATION DU LIEU DE STAGE ......................................................................................................... 5
a. Bref historique de l’hôpital ......................................................................................................... 5
b. La clinique Saint-Luc de Bouge ................................................................................................... 5
c. Le laboratoire ............................................................................................................................. 6
INTRODUCTION ....................................................................................................................................... 7
1. Introduction théorique ................................................................................................................... 8
1.1. Intérêt clinique ........................................................................................................................... 8
a. Le zinc ......................................................................................................................................... 8
b. Le cuivre...................................................................................................................................... 9
1.2. Introduction à la spectrométrie ............................................................................................... 10
1.3. La spectrométrie d’absorption atomique ................................................................................ 12
1.4. Le préanalytique ....................................................................................................................... 13
2. Objectifs ........................................................................................................................................ 14
3. Matériel et méthode .................................................................................................................... 15
3.1. Le PinAAcle 900T ...................................................................................................................... 15
a. Appareillage .............................................................................................................................. 15
Le pipeteur automatique............................................................................................................... 16
Le nébuliseur ................................................................................................................................. 17
L’atomiseur .................................................................................................................................... 18
La source lumineuse ...................................................................................................................... 20
Le monochromateur et le hacheur ............................................................................................... 21
Le détecteur et les résultats .......................................................................................................... 21
3.2. Les protocoles........................................................................................................................... 22
a. L’influence de l’hémolyse ......................................................................................................... 22
b. L’effet matrice .......................................................................................................................... 25
c. La stabilité................................................................................................................................. 26
Stabilité du zinc et du cuivre dans le sérum .................................................................................. 26
Stabilité du zinc et du cuivre dans le sang total ............................................................................ 27
Stabilité lors de cycle de congélation ............................................................................................ 27
3.3. Les statistiques ......................................................................................................................... 28
4. Résultat et discussion ................................................................................................................... 29
4.1 L’influence de l’hémolyse ......................................................................................................... 29
Le zinc ............................................................................................................................................ 30
Le cuivre ........................................................................................................................................ 31
4.2. L’effet matrice .......................................................................................................................... 33
Le zinc ............................................................................................................................................ 33
Le cuivre ........................................................................................................................................ 34
4.3. La stabilité................................................................................................................................. 35
a. Stabilité dans le sérum ............................................................................................................. 35
Le zinc ............................................................................................................................................ 35
Le cuivre ........................................................................................................................................ 40
b. Stabilité dans le sang total........................................................................................................ 46
Le zinc ............................................................................................................................................ 46
Le cuivre ........................................................................................................................................ 49
c. Stabilité lors de cycle de congélation ....................................................................................... 52
Le zinc ............................................................................................................................................ 52
Le cuivre ........................................................................................................................................ 53
CONCLUSION ......................................................................................................................................... 54
BIBLIOGRAPHIE ...................................................................................................................................... 56
ANNEXE
Annexe N°1 : utilisation détaillé du PinAAcle 900 T pour le dosage du zinc et du cuivre. ................ 58
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105766 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Etude de stabilité d’un mélange de morphine, kétamine et lorazépam utilisé en soins palliatifs / Laura Defrene
Titre : Etude de stabilité d’un mélange de morphine, kétamine et lorazépam utilisé en soins palliatifs Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Laura Defrene, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’étude s’intéresse à l’étude de stabilité physique et chimique d’un mélange composé de morphine, kétamine et lorazépam. Ce mélange est administré dans le cadre de soins palliatifs dont le but est de soulager des personnes souffrant de maladies douloureuses et incurables.
A ce jour, le mélange est reconstitué par le personnel infirmier au moment de l’injection. Néanmoins, la préparation centralisée du mélange par la pharmacie de l’hôpital comporterait de nombreux avantages tels qu’une production en lots, un gain de temps pour les infirmiers, une meilleure qualité du produit et une diminution des erreurs d’imprécision. Pour ce faire, il est nécessaire de connaitre les conditions de stockage du mélange et donc d’évaluer sa stabilité physique et chimique. Dans le cadre de ce projet, la stabilité est étudiée à 5±3°C pendant une durée d’un mois et ceci à 2 concentrations différentes couramment utilisées.
La stabilité physique est étudiée via différents tests effectués périodiquement tout au long du mois. Une mesure du pH et d’absorbances sont effectuées ainsi que différents contrôles visuels permettant de voir l’apparition d’éventuels cristaux ou impuretés. Ces différents tests ont permis de conclure que le mélange de basses concentrations était physiquement stable pendant 7 jours tandis que celui de hautes concentrations ne l’était que pendant 4 jours.
L’évaluation de la stabilité chimique consiste en l’analyse de l’évolution des concentrations des 3 composés au cours du temps. Pour cela, une méthode de dosage des 3 molécules d’intérêts a été mise au point puis validée. Une diminution maximale de 10% par rapport à la concentration initiale est tolérée afin de considérer le mélange stable. Une régression linéaire avec un intervalle de confiance à 95% a permis de conclure que le mélange de basses concentrations était chimiquement stable durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations n’était stable qu’un seul jour.
L’ensemble des résultats obtenus indique que le mélange de basses concentrations peut être stocké à 5±3°C durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations ne peut pas être stocké.Note de contenu : Présentation du lieu de stage
Introduction ................................................................................................................................... 10
Partie théorique
1. Présentation du mélange ........................................................................................................ 11 Constituants du mélange et rôle clinique ........................................................................ 11
La morphine .................................................................................................................... 11
La kétamine .................................................................................................................... 12
Le lorazépam .................................................................................................................. 13
2. Préparation centralisée .......................................................................................................... 14
3. Dosage du mélange ............................................................................................................... 14 L’UHPLC ....................................................................................................................... 14
Appareillage .................................................................................................................... 16
3.2.1. Gestionnaire de solvant quaternaire ........................................................................ 16
3.2.2. Gestionnaire des échantillons .................................................................................. 17
3.2.3. Four de la colonne ................................................................................................... 17
3.2.4. Détecteur ................................................................................................................. 18
4. Développement de la méthode chromatographique .............................................................. 20 Colonne ........................................................................................................................... 20
Phase mobile ................................................................................................................... 21
Températures de travail .................................................................................................. 21
Débit ............................................................................................................................... 21
Longueurs d’ondes utilisées ........................................................................................... 22
Concentration en analytes ............................................................................................... 22
5. Validation de la méthode ....................................................................................................... 22 Droite de calibration ....................................................................................................... 22
Linéarité .......................................................................................................................... 23
Reproductibilité .............................................................................................................. 23
Limite de détection et de quantification ......................................................................... 23
Dégradation forcée ......................................................................................................... 24
6. Tests de stabilité .................................................................................................................... 24 Stabilité physique ........................................................................................................... 24
Stabilité chimique ........................................................................................................... 25
7. Objectif .................................................................................................................................. 25
Partie pratique
1. Matériel ................................................................................................................................. 27
1.1. Produits pharmaceutiques ............................................................................................... 27
1.2. Stabilité physique ........................................................................................................... 27
1.2.1. Mesure de l’absorbance ........................................................................................... 27
1.2.2. Mesure du pH .......................................................................................................... 27
1.2.3. Contrôle visuel sur fond blanc et sur fond noir ....................................................... 27
1.2.4. Observation au microscope ..................................................................................... 28
1.3. Stabilité chimique ........................................................................................................... 28
2. Méthode ................................................................................................................................. 28
2.1. Méthode chromatographique .......................................................................................... 28
2.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 29
2.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 29
2.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 30
2.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 31
2.2.4. Limite de quantification et de détection .................................................................. 31
2.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 32
2.3. Tests de stabilité ............................................................................................................. 34
2.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 34
2.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 35
3. Résultats ................................................................................................................................ 35
3.1. Développement de la méthode ....................................................................................... 35
3.1.1. Colonne ................................................................................................................... 35
3.1.2. Phase mobile ........................................................................................................... 36
3.1.3. Température de travail ............................................................................................ 36
3.1.4. Débit et temps d’analyse ......................................................................................... 37
3.1.5. Longueurs d’ondes de travail .................................................................................. 37
3.1.6. Concentration en analytes et volume injecté ........................................................... 37
3.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 37
3.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 37
3.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 39
3.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 39
3.2.4. Limite de détection et de quantification .................................................................. 40
3.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 40
3.3. Tests de stabilités ............................................................................................................ 41
3.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 41
3.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 45
Conclusion ..................................................................................................................................... 48
Table des figures ........................................................................................................................... 49
Table des tableaux ......................................................................................................................... 50
Bibliographie ................................................................................................................................. 51
Table des annexes .......................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79987 Etude de stabilité d’un mélange de morphine, kétamine et lorazépam utilisé en soins palliatifs [TFE / Mémoire] / Laura Defrene, Auteur ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ce travail de fin d’étude s’intéresse à l’étude de stabilité physique et chimique d’un mélange composé de morphine, kétamine et lorazépam. Ce mélange est administré dans le cadre de soins palliatifs dont le but est de soulager des personnes souffrant de maladies douloureuses et incurables.
A ce jour, le mélange est reconstitué par le personnel infirmier au moment de l’injection. Néanmoins, la préparation centralisée du mélange par la pharmacie de l’hôpital comporterait de nombreux avantages tels qu’une production en lots, un gain de temps pour les infirmiers, une meilleure qualité du produit et une diminution des erreurs d’imprécision. Pour ce faire, il est nécessaire de connaitre les conditions de stockage du mélange et donc d’évaluer sa stabilité physique et chimique. Dans le cadre de ce projet, la stabilité est étudiée à 5±3°C pendant une durée d’un mois et ceci à 2 concentrations différentes couramment utilisées.
La stabilité physique est étudiée via différents tests effectués périodiquement tout au long du mois. Une mesure du pH et d’absorbances sont effectuées ainsi que différents contrôles visuels permettant de voir l’apparition d’éventuels cristaux ou impuretés. Ces différents tests ont permis de conclure que le mélange de basses concentrations était physiquement stable pendant 7 jours tandis que celui de hautes concentrations ne l’était que pendant 4 jours.
L’évaluation de la stabilité chimique consiste en l’analyse de l’évolution des concentrations des 3 composés au cours du temps. Pour cela, une méthode de dosage des 3 molécules d’intérêts a été mise au point puis validée. Une diminution maximale de 10% par rapport à la concentration initiale est tolérée afin de considérer le mélange stable. Une régression linéaire avec un intervalle de confiance à 95% a permis de conclure que le mélange de basses concentrations était chimiquement stable durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations n’était stable qu’un seul jour.
L’ensemble des résultats obtenus indique que le mélange de basses concentrations peut être stocké à 5±3°C durant 3 jours tandis que le mélange de hautes concentrations ne peut pas être stocké.Note de contenu : Présentation du lieu de stage
Introduction ................................................................................................................................... 10
Partie théorique
1. Présentation du mélange ........................................................................................................ 11 Constituants du mélange et rôle clinique ........................................................................ 11
La morphine .................................................................................................................... 11
La kétamine .................................................................................................................... 12
Le lorazépam .................................................................................................................. 13
2. Préparation centralisée .......................................................................................................... 14
3. Dosage du mélange ............................................................................................................... 14 L’UHPLC ....................................................................................................................... 14
Appareillage .................................................................................................................... 16
3.2.1. Gestionnaire de solvant quaternaire ........................................................................ 16
3.2.2. Gestionnaire des échantillons .................................................................................. 17
3.2.3. Four de la colonne ................................................................................................... 17
3.2.4. Détecteur ................................................................................................................. 18
4. Développement de la méthode chromatographique .............................................................. 20 Colonne ........................................................................................................................... 20
Phase mobile ................................................................................................................... 21
Températures de travail .................................................................................................. 21
Débit ............................................................................................................................... 21
Longueurs d’ondes utilisées ........................................................................................... 22
Concentration en analytes ............................................................................................... 22
5. Validation de la méthode ....................................................................................................... 22 Droite de calibration ....................................................................................................... 22
Linéarité .......................................................................................................................... 23
Reproductibilité .............................................................................................................. 23
Limite de détection et de quantification ......................................................................... 23
Dégradation forcée ......................................................................................................... 24
6. Tests de stabilité .................................................................................................................... 24 Stabilité physique ........................................................................................................... 24
Stabilité chimique ........................................................................................................... 25
7. Objectif .................................................................................................................................. 25
Partie pratique
1. Matériel ................................................................................................................................. 27
1.1. Produits pharmaceutiques ............................................................................................... 27
1.2. Stabilité physique ........................................................................................................... 27
1.2.1. Mesure de l’absorbance ........................................................................................... 27
1.2.2. Mesure du pH .......................................................................................................... 27
1.2.3. Contrôle visuel sur fond blanc et sur fond noir ....................................................... 27
1.2.4. Observation au microscope ..................................................................................... 28
1.3. Stabilité chimique ........................................................................................................... 28
2. Méthode ................................................................................................................................. 28
2.1. Méthode chromatographique .......................................................................................... 28
2.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 29
2.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 29
2.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 30
2.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 31
2.2.4. Limite de quantification et de détection .................................................................. 31
2.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 32
2.3. Tests de stabilité ............................................................................................................. 34
2.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 34
2.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 35
3. Résultats ................................................................................................................................ 35
3.1. Développement de la méthode ....................................................................................... 35
3.1.1. Colonne ................................................................................................................... 35
3.1.2. Phase mobile ........................................................................................................... 36
3.1.3. Température de travail ............................................................................................ 36
3.1.4. Débit et temps d’analyse ......................................................................................... 37
3.1.5. Longueurs d’ondes de travail .................................................................................. 37
3.1.6. Concentration en analytes et volume injecté ........................................................... 37
3.2. Validation de la méthode ................................................................................................ 37
3.2.1. Droite de calibration ................................................................................................ 37
3.2.2. Linéarité .................................................................................................................. 39
3.2.3. Reproductibilité ....................................................................................................... 39
3.2.4. Limite de détection et de quantification .................................................................. 40
3.2.5. Dégradation forcée .................................................................................................. 40
3.3. Tests de stabilités ............................................................................................................ 41
3.3.1. Stabilité physique .................................................................................................... 41
3.3.2. Stabilité chimique .................................................................................................... 45
Conclusion ..................................................................................................................................... 48
Table des figures ........................................................................................................................... 49
Table des tableaux ......................................................................................................................... 50
Bibliographie ................................................................................................................................. 51
Table des annexes .......................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79987 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Étude des systèmes de réponse aux stress d’enveloppe chez Brucella abortus / Marine Van Der Gucht
Titre : Étude des systèmes de réponse aux stress d’enveloppe chez Brucella abortus Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Marine Van Der Gucht, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Université de Namur BRUCELLOSE BOVINE Brucella abortus Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Brucella abortus est un pathogène intracellulaire facultativement extracellulaire provoquant la brucellose chez les bovins et entrainant des avortements. Une fois l’animal testé positif, tout le troupeau est abattu. Cela engendre donc des pertes économiques importantes dans les pays endémiques. De surcroit, lors de l’évolution, les bactéries ont développé des mécanismes, des systèmes de réponse afin de survivre et de proliférer dans un environnement représentant un stress pour elles, notamment un stress perturbant l’enveloppe bactérienne. Il est donc important d’étudier ces systèmes afin d’approfondir les connaissances sur la bactérie pour ainsi mieux contrôler les infections et les pertes économiques que cela engendre. Ce travail de fin d’étude aborde l’éventuelle intervention du système à deux composants, BvrR/BvrS dans la réponse aux stress d’enveloppe chez B. abortus et la caractérisation d’une potentielle interaction entre les protéines ExoR et BvrS. Afin d’y parvenir, une surexpression de ces deux protéines a été réalisée chez B. abortus. Les mutants de surexpression ont ensuite été déposés sur un milieu avec et sans stress d’enveloppe afin d’observer une éventuelle différence de croissance. Ces protéines ont également été fusionnées à des protéines fluorescentes afin d’être visualisées au microscope à fluorescence permettant l’étude de la localisation de ces protéines et d’une éventuelle co-localisation de celles-ci, qui pourrait indiquer une potentielle interaction entre ces deux protéines. Il a premièrement été démontré que la surexpression de BvrS induisait des différences de croissance des clones lorsqu’ils sont soumis à un stress d’enveloppe, ce qui atteste que BvrS joue un rôle dans la réponse de la bactérie face à ce type de stress ou du moins qu’il perturbe sa croissance. La surexpression d’ExoR semble quant à elle montrer une légère amélioration de croissance, celle-ci n’étant cependant pas confirmée par les CFU obtenus. La localisation et la co-localisation des protéines n’ont pas pu être mises en évidence car aucune fluorescence n’a été obtenue. Les hypothèses qui ont alors été émises est que l’expression des protéines par la bactérie est peut-être trop faible pour observer une fluorescence ou qu’il y a un problème au niveau des constructions. Pour vérifier cela, une surexpression des protéines de fusion a été testée. Cependant, les transformations n’étant pas concluantes, la seconde hypothèse émise est que les protéines surexprimées sont peut-être toxiques pour la bactérie.
Le bilan de ce travail démontre donc que le système BvrS/BvrR serait impliqué dans la réponse au stress d’enveloppe chez B. abortus. L’interaction avec ExoR n’ayant pas pu être mise en évidence, des méthodes sont proposées afin d’y remédier. L’utilisation d’un plasmide inductible d’une part permettra d’exprimer les protéines à un moment voulu, réglant le problème de toxicité. D’autre part, le remplacement génomique du promoteur de BvrS et d’ExoR par un promoteur plus fort permettra de surexprimer la protéine d’un point de vue génomique.Note de contenu : Tables des matières
Remerciements ....................................................................................................................
Présentation du lieu de stage ............................................................................................. 8
Introduction générale ........................................................................................................ 9
I. Partie théorique ........................................................................................................11
1. Généralités....................................................................................................................... 11
2. Mode d’infection cellulaire de Brucella spp..................................................................... 13
2.1. Cycle de vie intracellulaire de Brucella spp. .................................................................................14
3. Les systèmes de réponse aux stress d’enveloppe chez Escherichia coli ........................... 15
3.1. Les systèmes dépendant d’un facteur sigma..................................................................................16
3.2. Les systèmes à deux composants (TCS)........................................................................................17
4. Le système BvrR/BvrS .................................................................................................... 18
4.1. Rôle et fonctionnement du système BvrR/BvrS ............................................................................19
4.2. Interaction d’ExoR avec le système BvrR/BvrS ? .........................................................................20
5. La double recombinaison homologue.............................................................................. 21
II. Partie pratique ......................................................................................................24
1. Objectifs et stratégie........................................................................................................ 24
2. Matériel ........................................................................................................................... 24
2.1. Les constructions ...........................................................................................................................24
2.2. Les plasmides ................................................................................................................................27
2.2.1. Le pNPTS 138 ..........................................................................................................................29
2.2.2. Le pBBR ...................................................................................................................................30
2.2.3. Le pGem ...................................................................................................................................31
2.2.4. Le pMR10.................................................................................................................................32
2.3. Les enzymes de restriction ............................................................................................................32
2.4. Les souches bactériennes...............................................................................................................34
2.4.1. Escherichia coli.........................................................................................................................34
2.4.1.1. DH10B ............................................................................................................................35
2.4.1.2. S17-1 ...............................................................................................................................35
2.4.2. Brucella abortus 544 .................................................................................................................35
3. Méthodes ......................................................................................................................... 36
3.1. La PCR ..........................................................................................................................................36
3.1.1. La PCR préparatrice..................................................................................................................37
3.1.2. La PCR jointive ........................................................................................................................37
3.1.3. La PCR de diagnostic ...............................................................................................................38
3.2. Électrophorèse ...............................................................................................................................39
3.3. La purification ...............................................................................................................................39
3.4. La restriction..................................................................................................................................40
3.5. La ligation......................................................................................................................................41
3.6. La transformation ..........................................................................................................................41
3.6.1. La transformation par choc thermique ......................................................................................41
3.7. Sélection des transformants : test blanc/bleu .................................................................................42
3.8. Extraction d’ADN plasmidique .....................................................................................................43
3.9. La conjugaison...............................................................................................................................43
3.10. La microscopie à fluorescence.......................................................................................................44
3.10.1. Principe ................................................................................................................................45
3.11. Le western blot ..............................................................................................................................46
3.11.1. Principe ................................................................................................................................47
4. Résultats et discussion ..................................................................................................... 49
4.1. Surexpression d’ExoR et BvrS ......................................................................................................49
4.2. Construction des protéines de fusion .............................................................................................54
4.3. Transformation en DH10B ............................................................................................................56
4.4. PCR de diagnostic des thermolysats..............................................................................................58
4.5. Observation au microscope à fluorescence....................................................................................59
4.6. Western blot ..................................................................................................................................63
4.7. Surexpression des protéines de fusion ...........................................................................................65
4.8. Amplification des séquences d’intérêt...........................................................................................65
Conclusion générale et perspectives..................................................................................69
Glossaire ..........................................................................................................................71
Liste des abréviations........................................................................................................74
Liste des tableaux .............................................................................................................77
Bibliographie....................................................................................................................78
Annexes............................................................................................................................82
Résumé.............................................................................................................................91Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100370 Étude des systèmes de réponse aux stress d’enveloppe chez Brucella abortus [TFE / Mémoire] / Marine Van Der Gucht, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Université de Namur BRUCELLOSE BOVINE Brucella abortus Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Brucella abortus est un pathogène intracellulaire facultativement extracellulaire provoquant la brucellose chez les bovins et entrainant des avortements. Une fois l’animal testé positif, tout le troupeau est abattu. Cela engendre donc des pertes économiques importantes dans les pays endémiques. De surcroit, lors de l’évolution, les bactéries ont développé des mécanismes, des systèmes de réponse afin de survivre et de proliférer dans un environnement représentant un stress pour elles, notamment un stress perturbant l’enveloppe bactérienne. Il est donc important d’étudier ces systèmes afin d’approfondir les connaissances sur la bactérie pour ainsi mieux contrôler les infections et les pertes économiques que cela engendre. Ce travail de fin d’étude aborde l’éventuelle intervention du système à deux composants, BvrR/BvrS dans la réponse aux stress d’enveloppe chez B. abortus et la caractérisation d’une potentielle interaction entre les protéines ExoR et BvrS. Afin d’y parvenir, une surexpression de ces deux protéines a été réalisée chez B. abortus. Les mutants de surexpression ont ensuite été déposés sur un milieu avec et sans stress d’enveloppe afin d’observer une éventuelle différence de croissance. Ces protéines ont également été fusionnées à des protéines fluorescentes afin d’être visualisées au microscope à fluorescence permettant l’étude de la localisation de ces protéines et d’une éventuelle co-localisation de celles-ci, qui pourrait indiquer une potentielle interaction entre ces deux protéines. Il a premièrement été démontré que la surexpression de BvrS induisait des différences de croissance des clones lorsqu’ils sont soumis à un stress d’enveloppe, ce qui atteste que BvrS joue un rôle dans la réponse de la bactérie face à ce type de stress ou du moins qu’il perturbe sa croissance. La surexpression d’ExoR semble quant à elle montrer une légère amélioration de croissance, celle-ci n’étant cependant pas confirmée par les CFU obtenus. La localisation et la co-localisation des protéines n’ont pas pu être mises en évidence car aucune fluorescence n’a été obtenue. Les hypothèses qui ont alors été émises est que l’expression des protéines par la bactérie est peut-être trop faible pour observer une fluorescence ou qu’il y a un problème au niveau des constructions. Pour vérifier cela, une surexpression des protéines de fusion a été testée. Cependant, les transformations n’étant pas concluantes, la seconde hypothèse émise est que les protéines surexprimées sont peut-être toxiques pour la bactérie.
Le bilan de ce travail démontre donc que le système BvrS/BvrR serait impliqué dans la réponse au stress d’enveloppe chez B. abortus. L’interaction avec ExoR n’ayant pas pu être mise en évidence, des méthodes sont proposées afin d’y remédier. L’utilisation d’un plasmide inductible d’une part permettra d’exprimer les protéines à un moment voulu, réglant le problème de toxicité. D’autre part, le remplacement génomique du promoteur de BvrS et d’ExoR par un promoteur plus fort permettra de surexprimer la protéine d’un point de vue génomique.Note de contenu : Tables des matières
Remerciements ....................................................................................................................
Présentation du lieu de stage ............................................................................................. 8
Introduction générale ........................................................................................................ 9
I. Partie théorique ........................................................................................................11
1. Généralités....................................................................................................................... 11
2. Mode d’infection cellulaire de Brucella spp..................................................................... 13
2.1. Cycle de vie intracellulaire de Brucella spp. .................................................................................14
3. Les systèmes de réponse aux stress d’enveloppe chez Escherichia coli ........................... 15
3.1. Les systèmes dépendant d’un facteur sigma..................................................................................16
3.2. Les systèmes à deux composants (TCS)........................................................................................17
4. Le système BvrR/BvrS .................................................................................................... 18
4.1. Rôle et fonctionnement du système BvrR/BvrS ............................................................................19
4.2. Interaction d’ExoR avec le système BvrR/BvrS ? .........................................................................20
5. La double recombinaison homologue.............................................................................. 21
II. Partie pratique ......................................................................................................24
1. Objectifs et stratégie........................................................................................................ 24
2. Matériel ........................................................................................................................... 24
2.1. Les constructions ...........................................................................................................................24
2.2. Les plasmides ................................................................................................................................27
2.2.1. Le pNPTS 138 ..........................................................................................................................29
2.2.2. Le pBBR ...................................................................................................................................30
2.2.3. Le pGem ...................................................................................................................................31
2.2.4. Le pMR10.................................................................................................................................32
2.3. Les enzymes de restriction ............................................................................................................32
2.4. Les souches bactériennes...............................................................................................................34
2.4.1. Escherichia coli.........................................................................................................................34
2.4.1.1. DH10B ............................................................................................................................35
2.4.1.2. S17-1 ...............................................................................................................................35
2.4.2. Brucella abortus 544 .................................................................................................................35
3. Méthodes ......................................................................................................................... 36
3.1. La PCR ..........................................................................................................................................36
3.1.1. La PCR préparatrice..................................................................................................................37
3.1.2. La PCR jointive ........................................................................................................................37
3.1.3. La PCR de diagnostic ...............................................................................................................38
3.2. Électrophorèse ...............................................................................................................................39
3.3. La purification ...............................................................................................................................39
3.4. La restriction..................................................................................................................................40
3.5. La ligation......................................................................................................................................41
3.6. La transformation ..........................................................................................................................41
3.6.1. La transformation par choc thermique ......................................................................................41
3.7. Sélection des transformants : test blanc/bleu .................................................................................42
3.8. Extraction d’ADN plasmidique .....................................................................................................43
3.9. La conjugaison...............................................................................................................................43
3.10. La microscopie à fluorescence.......................................................................................................44
3.10.1. Principe ................................................................................................................................45
3.11. Le western blot ..............................................................................................................................46
3.11.1. Principe ................................................................................................................................47
4. Résultats et discussion ..................................................................................................... 49
4.1. Surexpression d’ExoR et BvrS ......................................................................................................49
4.2. Construction des protéines de fusion .............................................................................................54
4.3. Transformation en DH10B ............................................................................................................56
4.4. PCR de diagnostic des thermolysats..............................................................................................58
4.5. Observation au microscope à fluorescence....................................................................................59
4.6. Western blot ..................................................................................................................................63
4.7. Surexpression des protéines de fusion ...........................................................................................65
4.8. Amplification des séquences d’intérêt...........................................................................................65
Conclusion générale et perspectives..................................................................................69
Glossaire ..........................................................................................................................71
Liste des abréviations........................................................................................................74
Liste des tableaux .............................................................................................................77
Bibliographie....................................................................................................................78
Annexes............................................................................................................................82
Résumé.............................................................................................................................91Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100370 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation comparative de 6 kits commerciaux pour la détection de l’hémoglobine dans les selles / Marie Lavaert
Titre : Evaluation comparative de 6 kits commerciaux pour la détection de l’hémoglobine dans les selles Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Marie Lavaert, Auteur ; Alaeddine Meghraoui, Directeur de la recherche ; Véronique Yvette Miendje Deyi, Directeur de la recherche ; Luc Blockx, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Contexte : La présence du sang dans les selles est un indicateur de plusieurs pathologies gastro-intestinales, dont le cancer du côlon. Les tests qualitatifs immuno-chromatographiques sont souvent utilisés afin d’orienter le clinicien à faire des examens complémentaires et diagnostiquer de manière précoce ces pathologies.
But : Le but de cette étude est de comparer les performances de 6 kits commerciaux : Bionexia® FOBplus (BioMérieux), FOB-test® (Ultimed), Hemdetect® immo i-FOB (Diplomed), Proflow® FOB (Prolab Diagnostics), Bioline® SD FOB (Abott), Hemoccult® (Beckman Coulter). Cela permettra de remplacer au LHUB-ULB le kit Bionexia® FOBplus (BioMérieux) qui ne sera plus commercialisé.
Matériels/méthodes : Les échantillons sont prélevés dans la routine de manière aléatoire et testés à l’aide des 6 kits à comparer. Les échantillons présentant des disparités sont testés sur l’OC Sensor pour quantifier l’hémoglobine présent dans les selles. Le résultat final permet de comptabiliser les faux positifs, faux négatifs, vrai positifs et vrai négatifs et ainsi calculer les performances analytiques de chaque kit.
Résultats : L’étude a été effectuée sur 138 tests avec un pourcentage de positivité de 34.7%. Hemdetect® immo i-FOB, FOB-Test® et Proflow® FOB montrent les meilleures performances car leurs sensibilités et spécificités sont plus ou moins équilibrées. Un effet de saturation a également été prouvé pour le Proflow®FOB provoquant une diminution d’intensité de la bande test (T) à des fortes concentrations d’hémoglobine. Nous notons que les pathologies retrouvées chez les patients positifs sont pour 62.5% d’entre-elles liées à un problème gastro-intestinal dont seulement 1 patient présentant un cancer du côlon.
Conclusion : Le choix final du test à implémenter au laboratoire se porte sur FOB-Test®, puisqu’il présente les meilleures performances analytiques (sensibilité : 91.3%, spécificité : 95.65), une bonne spécificité en comparaison avec Hemdetect® et l’effet de saturation est détectable puisqu’il touche également la ligne contrôle (C).Note de contenu : Table des matières
1 Présentation du lieu de stage .................................................................................................................. 1
2 Introduction ............................................................................................................................................. 1
2.1 Contexte général.............................................................................................................................. 2
2.1.1 Types de saignements gastro-intestinaux ................................................................................. 2
2.1.2 Les pathologies liées à une présence du sang dans les selles ................................................... 3
2.1.2.1 Maladies hémorroïdaires : ................................................................................................. 3
2.1.2.2 Rectocolite hémorragique ou colite ulcéreuse : ................................................................ 3
2.1.2.3 Maladie de Crohn : ............................................................................................................. 3
2.1.2.4 Cancers colorectaux : ......................................................................................................... 4
2.1.2.4.1 Données anatomiques ................................................................................................... 4
2.1.2.4.2 Les types de cancer colorectal ....................................................................................... 5
2.1.2.4.3 Stade d’un cancer colorectal : ....................................................................................... 6
2.1.2.4.4 Quels sont les symptômes du cancer colorectal ?......................................................... 8
2.1.2.4.5 Quelles sont les personnes à risque ? ............................................................................ 8
2.1.2.4.6 Les tests de dépistage du cancer colorectal .................................................................. 9
2.1.2.4.7 Traitements .................................................................................................................. 12
2.1.3 Détection de l’hémoglobine dans les selles ............................................................................ 12
2.1.3.1 Principe de l’immuno-chromatographie .......................................................................... 13
2.2 But de l’étude ................................................................................................................................ 14
3 Matériels et méthodes .......................................................................................................................... 15
3.1 Echantillons .................................................................................................................................... 15
3.2 Les différents kits commerciaux utilisés ........................................................................................ 15
3.2.1 Bionexia FOBplus® ................................................................................................................... 16
3.2.2 Comparaison des différents kits commerciaux testés............................................................. 17
3.3 Détection quantitative de l’hémoglobine par l’OC Sensor ............................................................ 18
3.4 Définition de cas ............................................................................................................................ 19
3.5 Méthodes statistiques ................................................................................................................... 19
3.5.1 La sensibilité............................................................................................................................. 19
3.5.2 La spécificité............................................................................................................................. 20
3.5.3 La valeur prédictive positive (VPP) .......................................................................................... 20
3.5.4 La valeur prédictive négative (VPN) ........................................................................................ 20
3.5.5 Sexe ratio et âge médian ......................................................................................................... 20
3.5.6 Comparaison statistique .......................................................................................................... 21
3.6 Tableau de contingence ................................................................................................................. 21
4 Résultats et discussion ........................................................................................................................... 22
4.1 Données sur les prélèvements et les patients ............................................................................... 22
4.2 Performances analytiques des différents kits ............................................................................... 23
4.2.1 Comparaison et interprétation des performances analytiques des différents kits ................ 25
4.3 Analyse du tableau clinique des patients positifs ......................................................................... 27
4.4 Effet de saturation ......................................................................................................................... 29
4.5 Effet de l’homogénéisation ........................................................................................................... 31
4.6 Facilité d’exécution et problèmes pratiques ................................................................................. 32
5 Conclusion .............................................................................................................................................. 33
6 Références ............................................................................................................................................. 35
7 Annexes .................................................................................................................................................. 39
Abstract .......................................................................................................................................................... 44Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89141 Evaluation comparative de 6 kits commerciaux pour la détection de l’hémoglobine dans les selles [TFE / Mémoire] / Marie Lavaert, Auteur ; Alaeddine Meghraoui, Directeur de la recherche ; Véronique Yvette Miendje Deyi, Directeur de la recherche ; Luc Blockx, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2020.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Contexte : La présence du sang dans les selles est un indicateur de plusieurs pathologies gastro-intestinales, dont le cancer du côlon. Les tests qualitatifs immuno-chromatographiques sont souvent utilisés afin d’orienter le clinicien à faire des examens complémentaires et diagnostiquer de manière précoce ces pathologies.
But : Le but de cette étude est de comparer les performances de 6 kits commerciaux : Bionexia® FOBplus (BioMérieux), FOB-test® (Ultimed), Hemdetect® immo i-FOB (Diplomed), Proflow® FOB (Prolab Diagnostics), Bioline® SD FOB (Abott), Hemoccult® (Beckman Coulter). Cela permettra de remplacer au LHUB-ULB le kit Bionexia® FOBplus (BioMérieux) qui ne sera plus commercialisé.
Matériels/méthodes : Les échantillons sont prélevés dans la routine de manière aléatoire et testés à l’aide des 6 kits à comparer. Les échantillons présentant des disparités sont testés sur l’OC Sensor pour quantifier l’hémoglobine présent dans les selles. Le résultat final permet de comptabiliser les faux positifs, faux négatifs, vrai positifs et vrai négatifs et ainsi calculer les performances analytiques de chaque kit.
Résultats : L’étude a été effectuée sur 138 tests avec un pourcentage de positivité de 34.7%. Hemdetect® immo i-FOB, FOB-Test® et Proflow® FOB montrent les meilleures performances car leurs sensibilités et spécificités sont plus ou moins équilibrées. Un effet de saturation a également été prouvé pour le Proflow®FOB provoquant une diminution d’intensité de la bande test (T) à des fortes concentrations d’hémoglobine. Nous notons que les pathologies retrouvées chez les patients positifs sont pour 62.5% d’entre-elles liées à un problème gastro-intestinal dont seulement 1 patient présentant un cancer du côlon.
Conclusion : Le choix final du test à implémenter au laboratoire se porte sur FOB-Test®, puisqu’il présente les meilleures performances analytiques (sensibilité : 91.3%, spécificité : 95.65), une bonne spécificité en comparaison avec Hemdetect® et l’effet de saturation est détectable puisqu’il touche également la ligne contrôle (C).Note de contenu : Table des matières
1 Présentation du lieu de stage .................................................................................................................. 1
2 Introduction ............................................................................................................................................. 1
2.1 Contexte général.............................................................................................................................. 2
2.1.1 Types de saignements gastro-intestinaux ................................................................................. 2
2.1.2 Les pathologies liées à une présence du sang dans les selles ................................................... 3
2.1.2.1 Maladies hémorroïdaires : ................................................................................................. 3
2.1.2.2 Rectocolite hémorragique ou colite ulcéreuse : ................................................................ 3
2.1.2.3 Maladie de Crohn : ............................................................................................................. 3
2.1.2.4 Cancers colorectaux : ......................................................................................................... 4
2.1.2.4.1 Données anatomiques ................................................................................................... 4
2.1.2.4.2 Les types de cancer colorectal ....................................................................................... 5
2.1.2.4.3 Stade d’un cancer colorectal : ....................................................................................... 6
2.1.2.4.4 Quels sont les symptômes du cancer colorectal ?......................................................... 8
2.1.2.4.5 Quelles sont les personnes à risque ? ............................................................................ 8
2.1.2.4.6 Les tests de dépistage du cancer colorectal .................................................................. 9
2.1.2.4.7 Traitements .................................................................................................................. 12
2.1.3 Détection de l’hémoglobine dans les selles ............................................................................ 12
2.1.3.1 Principe de l’immuno-chromatographie .......................................................................... 13
2.2 But de l’étude ................................................................................................................................ 14
3 Matériels et méthodes .......................................................................................................................... 15
3.1 Echantillons .................................................................................................................................... 15
3.2 Les différents kits commerciaux utilisés ........................................................................................ 15
3.2.1 Bionexia FOBplus® ................................................................................................................... 16
3.2.2 Comparaison des différents kits commerciaux testés............................................................. 17
3.3 Détection quantitative de l’hémoglobine par l’OC Sensor ............................................................ 18
3.4 Définition de cas ............................................................................................................................ 19
3.5 Méthodes statistiques ................................................................................................................... 19
3.5.1 La sensibilité............................................................................................................................. 19
3.5.2 La spécificité............................................................................................................................. 20
3.5.3 La valeur prédictive positive (VPP) .......................................................................................... 20
3.5.4 La valeur prédictive négative (VPN) ........................................................................................ 20
3.5.5 Sexe ratio et âge médian ......................................................................................................... 20
3.5.6 Comparaison statistique .......................................................................................................... 21
3.6 Tableau de contingence ................................................................................................................. 21
4 Résultats et discussion ........................................................................................................................... 22
4.1 Données sur les prélèvements et les patients ............................................................................... 22
4.2 Performances analytiques des différents kits ............................................................................... 23
4.2.1 Comparaison et interprétation des performances analytiques des différents kits ................ 25
4.3 Analyse du tableau clinique des patients positifs ......................................................................... 27
4.4 Effet de saturation ......................................................................................................................... 29
4.5 Effet de l’homogénéisation ........................................................................................................... 31
4.6 Facilité d’exécution et problèmes pratiques ................................................................................. 32
5 Conclusion .............................................................................................................................................. 33
6 Références ............................................................................................................................................. 35
7 Annexes .................................................................................................................................................. 39
Abstract .......................................................................................................................................................... 44Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89141 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation comparative de l’antibiogramme rapide de l’EUCAST (RAST) avec les méthodes standards / Vanessa Siani Yanken
PermalinkEvaluation de la fiabilité des paramètres d’hémoglobine et d’hématocrite par comparaison de méthodes sur un panel d’automates de biologie délocalisée / Donatien Plancq
PermalinkEVALUATION D'UNE METHODE D'ANTIBIOGRAMME RAPIDE A PARTIR DES FLACONS D'HEMOCULTURE POSITIVE SELON LES RECOMMANDATIONS DE L'EUCAST / Blandine Ngongang Nana
PermalinkÉvaluation de la nouvelle méthode d’antibiogramme rapide directe sur flacon d’hémoculture selon EUCAST / Carolane Van Caneghem
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PermalinkEvaluation pré-clinique in vitro de candidats médicaments en vue d’un traitement du gliome infiltrant du tronc cérébral et mise à l’essai de nouveaux tests de quantification de l’apoptose et de la nécrose in vitro. / Mélanie Debroux
PermalinkEvaluation pré-clinique in vitro du potentiel anti-leucémique de deux nouvelles molécules inhibitrices de bromodomaines / Louise Janssens
PermalinkEvaluation pré-clinique in- vitro d’un potentiel candidat thérapeutique anti- leucémique / Elyse Fievet
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PermalinkHow temperature affects fertility in the key pollinator Bombus terrestris / Luc Beaugnet
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