Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
Bienvenue sur le catalogue du centre de documentation du campus de Montignies.
Résultat de la recherche
1 résultat(s) recherche sur le mot-clé 'congélation des cellules'
Ajouter le résultat dans votre panier Affiner la recherche Générer le flux rss de la recherche
Partager le résultat de cette recherche Faire une suggestion
Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale / NATHAN DEWIT
Titre : Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : NATHAN DEWIT, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale UMONS service de Biologie Moléculaire muscle strié cellules satellites gène DUX4 gène DUX4c partenaire protéique cavéoles protéines cavéolaires myoblastes immortels congélation des cellules transfert inverse PCR électrophorèse sur gel d'agarose Western Blot électrophorèse sur gel de polyacrylamide blotting Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................................ 3
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
Contexte général .................................................................................................................................. 10
1. Le muscle strié squelettique .......................................................................................................... 10
1.1 Structure histologique ........................................................................................................ 10
1.2 Les cellules satellites ......................................................................................................... 11
2. La maladie ................................................................................................................................ 12
2.1 Généralités ......................................................................................................................... 12
2.2 Signes cliniques ................................................................................................................. 13
2.3 Aspects génétiques ............................................................................................................ 14
2.3.1 Le gène DUX4 ........................................................................................................... 15
2.3.2 Le gène DUX4c ......................................................................................................... 15
3. Les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ...................................................................... 16
3.1 Généralités ......................................................................................................................... 16
3.2 Les partenaires protéiques associés aux ARN messagers.................................................. 16
3.3 Les partenaires protéiques associés au cytosquelette ........................................................ 18
4. Les cavéoles ............................................................................................................................. 18
4.1 Les radeaux lipidiques ....................................................................................................... 18
4.2 Les cavéoles ...................................................................................................................... 19
4.3 Les protéines cavéolaires ................................................................................................... 20
Objectifs et stratégies .......................................................................................................................... 22
Matériel et méthodes ........................................................................................................................... 23
1. Culture cellulaire ........................................................................................................................... 23
1.1 Culture de myoblastes immortels in vitro.......................................................................... 24
1.2 Différenciation de myoblastes in vitro .............................................................................. 25
1.3 Congélation de cellules ...................................................................................................... 26
1.4 Induction iC2C12-DUX4 .................................................................................................. 27
1.5 Transfection inverse des C2C12 ........................................................................................ 28
1.6 Test mycoplasme ............................................................................................................... 29
1.6.1 La Polymerase Chain Reaction (PCR) ...................................................................... 30
1.6.2 Electrophorèse sur gel d’agarose ............................................................................... 32
2. Immunodétection par Western blot .......................................................................................... 32
2.1 Extraits protéiques ............................................................................................................. 33
2.1.1 Extraction nucléaire ................................................................................................... 33
2.1.2 Extraction des protéines ............................................................................................ 34
2.1.3 Préparation des échantillons ...................................................................................... 34
2.2 Dosage protéique BCA ...................................................................................................... 35
2.3 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide ......................................................................... 36
2.3.1 Préparation des gels ................................................................................................... 36
2.3.2 Electrophorèse ........................................................................................................... 37
2.4 Transfert sur membrane de nitrocellulose (Blotting)......................................................... 38
2.5 Immunodétection ............................................................................................................... 39
3. Immunofluorescence indirecte ................................................................................................. 42
4. In situ PLA ............................................................................................................................... 44
Résultats ............................................................................................................................................... 47
Partie 1: Validation des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c .................................................... 47
1. Co-immunofluorescence................................................................................................................ 47
1.1 ILF3 ................................................................................................................................... 47
1.1.1 Myoblastes ................................................................................................................. 47
1.1.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 48
1.2 NF90 .................................................................................................................................. 51
1.2.1 Myoblastes ................................................................................................................. 51
1.2.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 53
1.3 IGF2BP1 ............................................................................................................................ 55
1.3.1 Stade de prolifération ................................................................................................ 55
2. In situ PLA (Proximity Ligation Assay) .................................................................................. 55
2.1 Myoblastes sains (16 Ubic) sur-exprimant DUX4 ............................................................ 55
2.2 Myoblastes FSHD en différenciation (16 Abic) exprimant DUX4 de manière endogène 57
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 58
1. Induction des iC2C12-DUX4 (myoblastes) .................................................................................. 58
1.1 Immunofluorescence indirecte .......................................................................................... 58
1.1.1 Vérification des conditions d’induction de DUX4 .................................................... 58
1.1.2 La dérégulation des cavines ....................................................................................... 59
1.2 Immunodétection par Western blot ................................................................................... 60
1.2.1 Détection de DUX4 ................................................................................................... 60
1.2.2 Détection des cavines ................................................................................................ 61
2. Différenciation des iC2C12-DUX4 .......................................................................................... 63
3. C2C12 transfectées ................................................................................................................... 65
Discussions ........................................................................................................................................... 67
Partie 1 : les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ..................................................................... 67
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 69
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 72
Lexique ................................................................................................................................................. 72
Bibliographie ........................................................................................................................................ 74
Annexes ................................................................................................................................................ 78Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65670 Contribution à l’étude du rôle des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale [TFE / Mémoire] / NATHAN DEWIT, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale UMONS service de Biologie Moléculaire muscle strié cellules satellites gène DUX4 gène DUX4c partenaire protéique cavéoles protéines cavéolaires myoblastes immortels congélation des cellules transfert inverse PCR électrophorèse sur gel d'agarose Western Blot électrophorèse sur gel de polyacrylamide blotting Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements ........................................................................................................................................ 3
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
Contexte général .................................................................................................................................. 10
1. Le muscle strié squelettique .......................................................................................................... 10
1.1 Structure histologique ........................................................................................................ 10
1.2 Les cellules satellites ......................................................................................................... 11
2. La maladie ................................................................................................................................ 12
2.1 Généralités ......................................................................................................................... 12
2.2 Signes cliniques ................................................................................................................. 13
2.3 Aspects génétiques ............................................................................................................ 14
2.3.1 Le gène DUX4 ........................................................................................................... 15
2.3.2 Le gène DUX4c ......................................................................................................... 15
3. Les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ...................................................................... 16
3.1 Généralités ......................................................................................................................... 16
3.2 Les partenaires protéiques associés aux ARN messagers.................................................. 16
3.3 Les partenaires protéiques associés au cytosquelette ........................................................ 18
4. Les cavéoles ............................................................................................................................. 18
4.1 Les radeaux lipidiques ....................................................................................................... 18
4.2 Les cavéoles ...................................................................................................................... 19
4.3 Les protéines cavéolaires ................................................................................................... 20
Objectifs et stratégies .......................................................................................................................... 22
Matériel et méthodes ........................................................................................................................... 23
1. Culture cellulaire ........................................................................................................................... 23
1.1 Culture de myoblastes immortels in vitro.......................................................................... 24
1.2 Différenciation de myoblastes in vitro .............................................................................. 25
1.3 Congélation de cellules ...................................................................................................... 26
1.4 Induction iC2C12-DUX4 .................................................................................................. 27
1.5 Transfection inverse des C2C12 ........................................................................................ 28
1.6 Test mycoplasme ............................................................................................................... 29
1.6.1 La Polymerase Chain Reaction (PCR) ...................................................................... 30
1.6.2 Electrophorèse sur gel d’agarose ............................................................................... 32
2. Immunodétection par Western blot .......................................................................................... 32
2.1 Extraits protéiques ............................................................................................................. 33
2.1.1 Extraction nucléaire ................................................................................................... 33
2.1.2 Extraction des protéines ............................................................................................ 34
2.1.3 Préparation des échantillons ...................................................................................... 34
2.2 Dosage protéique BCA ...................................................................................................... 35
2.3 Electrophorèse sur gel de polyacrylamide ......................................................................... 36
2.3.1 Préparation des gels ................................................................................................... 36
2.3.2 Electrophorèse ........................................................................................................... 37
2.4 Transfert sur membrane de nitrocellulose (Blotting)......................................................... 38
2.5 Immunodétection ............................................................................................................... 39
3. Immunofluorescence indirecte ................................................................................................. 42
4. In situ PLA ............................................................................................................................... 44
Résultats ............................................................................................................................................... 47
Partie 1: Validation des partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c .................................................... 47
1. Co-immunofluorescence................................................................................................................ 47
1.1 ILF3 ................................................................................................................................... 47
1.1.1 Myoblastes ................................................................................................................. 47
1.1.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 48
1.2 NF90 .................................................................................................................................. 51
1.2.1 Myoblastes ................................................................................................................. 51
1.2.2 Myoblastes en différenciation (3 jours) ..................................................................... 53
1.3 IGF2BP1 ............................................................................................................................ 55
1.3.1 Stade de prolifération ................................................................................................ 55
2. In situ PLA (Proximity Ligation Assay) .................................................................................. 55
2.1 Myoblastes sains (16 Ubic) sur-exprimant DUX4 ............................................................ 55
2.2 Myoblastes FSHD en différenciation (16 Abic) exprimant DUX4 de manière endogène 57
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 58
1. Induction des iC2C12-DUX4 (myoblastes) .................................................................................. 58
1.1 Immunofluorescence indirecte .......................................................................................... 58
1.1.1 Vérification des conditions d’induction de DUX4 .................................................... 58
1.1.2 La dérégulation des cavines ....................................................................................... 59
1.2 Immunodétection par Western blot ................................................................................... 60
1.2.1 Détection de DUX4 ................................................................................................... 60
1.2.2 Détection des cavines ................................................................................................ 61
2. Différenciation des iC2C12-DUX4 .......................................................................................... 63
3. C2C12 transfectées ................................................................................................................... 65
Discussions ........................................................................................................................................... 67
Partie 1 : les partenaires protéiques de DUX4 et DUX4c ..................................................................... 67
Partie 2 : la dérégulation des cavines .................................................................................................... 69
Conclusion et perspectives .................................................................................................................. 72
Lexique ................................................................................................................................................. 72
Bibliographie ........................................................................................................................................ 74
Annexes ................................................................................................................................................ 78Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65670 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire