Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermι du 27/04 au 12/05 inclus.
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1 rιsultat(s) recherche sur le mot-clι 'Hôpital Saint Joseph'
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NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS : Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction) / Pierre ROLLIN
Titre : NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS : Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction) Type de document : TFE / Mιmoire Auteurs : Pierre ROLLIN, Auteur ; Lιonidas Banyihishako, Directeur de la recherche Annιe de publication : 2015 Note gιnιrale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Franηais (fre) Mots-clιs : biologie mιdicale GHDC Hτpital Saint Joseph anticoagulants Index. dιcimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Rιsumι : NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS
Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction)
Prιsentι par ROLLIN Pierre
Avant de pouvoir doser une molιcule, il faut prιparer et dιvelopper une mιthode de dosage ainsi que la valider.
Pour ce travail, les molιcules choisies pour κtre dosιes sont les nouveaux anticoagulants oraux, Dabigatran, Rivaroxaban et Apixaban.
En effet, le dosage danticoagulants devient indispensable pour une certaine fraction de la population. Si le traitement nest pas assez dosι, celui-ci sera inefficace. Tandis quun surdosage peut faciliter lapparition dhιmorragies.
Le dosage, ΰ proprement parlι, se rιalise sur chromatographie liquide couplιe ΰ un spectromθtre de masse en tandem (LC-MS/MS).
Il faut donc prιparer chaque compartiment ΰ pouvoir dιtecter et quantifier les molιcules anticoagulantes.
Pour la chromatographie liquide, les paramθtres de la colonne, la prιparation des phases mobiles ainsi que celle du gradient de concentration sont indispensables.
Pour le spectromθtre de masse, il faut dιterminer les fractions des ions parents et fils et la tension au cτne et lιnergie de collision.
Mais ce nest pas tout. Il faut aussi mettre en place des mιthodes de traitement et de prιparation des ιchantillons.
Pour ce travail, deux mιthodes ont ιtι dιveloppιes. Une par extraction sur un automate nommι Extrahera qui rιalise une extraction liquide/liquide sur support solide, ou SLE, rιalisιe sur plaques de 96 puits, et une autre mιthode par prιcipitation.
Enfin, une mιthode de validation peut κtre mise en place. Elle permet de dιmontrer qu'elle correspond ΰ l'usage pour lequel elle est prιvue. Elle inclut un ensemble dopιrations nιcessaires pour prouver que le protocole est suffisamment exact et fiable pour avoir confiance dans les rιsultats fournis.
On travaille sur la linιaritι ιtendue, la rιpιtabilitι, la reproductibilitι, la limite de dιtection, la limite de quantification et la suppression ou laugmentation dions.
Avec tout ceci, une mιthode valide et prιcise est prκte ΰ lemploi.
Note de contenu : Table des matiθres
Remerciements
Prιsentation du lieu de stage
Introduction ..8
Partie thιorique 10
1. Les anticoagulants 10
1.1 Un anticoagulant ..10
1.2 Les nouveaux anticoagulants oraux .10
2. Le prιanalytique 14
2.1 La prιcipitation des protιines (Protein Crash) ....14
2.2 La SLE .15
2.3 Lιvaporation 16
2.4 La reconstitution .17
2.5 La chromatographie liquide ..17
2.6 Le spectromθtre de masse 17
3. La validation de mιthode .21
3.1 La linιaritι ιtendue .21
3.2 La rιpιtabilitι ..21
3.3 La reproductibilitι 22
3.4 LOD (Limit Of Detection) .22
3.5 LOQ (Limit Of Quantification) 22
3.6 La suppression ou laugmentation dions .22
Partie pratique .23
1. Le matιriel et les mιthodes 23
1.1 Paramθtres de rιglage du spectromθtre de masse ..23
1.1.1 La dιtermination des transitions 23
1.2 Paramθtres de la chromatographie liquide .25
1.2.1 Les paramθtres de la colonne .25
1.2.2 Les phases mobiles .26
1.2.3 Le gradient de concentration .26
1.3 Les standards internes 28
1.4 La prιparation et le traitement des ιchantillons ..29
1.4.1 Prιcipitation : mode opιratoire 29
1.4.2 SLE (Extrahera) : mode opιratoire .29
1.5 Evaluation de linιaritι ..30
1.5.1 La linιaritι en solution........................................................ ...30
1.5.2 La linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι) . .30
1.5.3 La linιaritι par rapport ΰ SLE (Extrahera) .31
Kits commerciaux (Hyphen BioMed) ..33
1.6 Les calibrateurs 33
1.7 Les contrτles 34
1.8 La rιpιtabilitι 35
1.9 La reproductibilitι 35
1.10 La limite de dιtection 36
1.11 La limite de quantification 36
Rιsultats .37
1. Rιsultats de la linιaritι en phase liquide (sans plasma) . ..37
2. Rιsultats de la linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι) 38
3. Rιsultats de la linιaritι sur plasma lyophilisι par SLE . .40
3.1 DCM/IPA 95/5 .40
3.2 Acιtate dιthyle .41
3.3 TBME 42
3.4 DCM/IPA 90/10 ..43
4. La limite de linιaritι .44
5. Passage des calibrateurs et des contrτles 46
6. La rιpιtabilitι de la mιthode pour la molιcule dApixaban ..49
7. La reproductibilitι de la mιthode .50
8. La limite de dιtection .51
9. La limite de quantification .51
10. La suppression ou laugmentation dions 53
Conclusion 54
Glossaire ..55
Bibliographie 56
Annexes
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64051 NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS : Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction) [TFE / Mιmoire] / Pierre ROLLIN, Auteur ; Lιonidas Banyihishako, Directeur de la recherche . - 2015.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Franηais (fre)
Mots-clιs : biologie mιdicale GHDC Hτpital Saint Joseph anticoagulants Index. dιcimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Rιsumι : NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS
Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction)
Prιsentι par ROLLIN Pierre
Avant de pouvoir doser une molιcule, il faut prιparer et dιvelopper une mιthode de dosage ainsi que la valider.
Pour ce travail, les molιcules choisies pour κtre dosιes sont les nouveaux anticoagulants oraux, Dabigatran, Rivaroxaban et Apixaban.
En effet, le dosage danticoagulants devient indispensable pour une certaine fraction de la population. Si le traitement nest pas assez dosι, celui-ci sera inefficace. Tandis quun surdosage peut faciliter lapparition dhιmorragies.
Le dosage, ΰ proprement parlι, se rιalise sur chromatographie liquide couplιe ΰ un spectromθtre de masse en tandem (LC-MS/MS).
Il faut donc prιparer chaque compartiment ΰ pouvoir dιtecter et quantifier les molιcules anticoagulantes.
Pour la chromatographie liquide, les paramθtres de la colonne, la prιparation des phases mobiles ainsi que celle du gradient de concentration sont indispensables.
Pour le spectromθtre de masse, il faut dιterminer les fractions des ions parents et fils et la tension au cτne et lιnergie de collision.
Mais ce nest pas tout. Il faut aussi mettre en place des mιthodes de traitement et de prιparation des ιchantillons.
Pour ce travail, deux mιthodes ont ιtι dιveloppιes. Une par extraction sur un automate nommι Extrahera qui rιalise une extraction liquide/liquide sur support solide, ou SLE, rιalisιe sur plaques de 96 puits, et une autre mιthode par prιcipitation.
Enfin, une mιthode de validation peut κtre mise en place. Elle permet de dιmontrer qu'elle correspond ΰ l'usage pour lequel elle est prιvue. Elle inclut un ensemble dopιrations nιcessaires pour prouver que le protocole est suffisamment exact et fiable pour avoir confiance dans les rιsultats fournis.
On travaille sur la linιaritι ιtendue, la rιpιtabilitι, la reproductibilitι, la limite de dιtection, la limite de quantification et la suppression ou laugmentation dions.
Avec tout ceci, une mιthode valide et prιcise est prκte ΰ lemploi.
Note de contenu : Table des matiθres
Remerciements
Prιsentation du lieu de stage
Introduction ..8
Partie thιorique 10
1. Les anticoagulants 10
1.1 Un anticoagulant ..10
1.2 Les nouveaux anticoagulants oraux .10
2. Le prιanalytique 14
2.1 La prιcipitation des protιines (Protein Crash) ....14
2.2 La SLE .15
2.3 Lιvaporation 16
2.4 La reconstitution .17
2.5 La chromatographie liquide ..17
2.6 Le spectromθtre de masse 17
3. La validation de mιthode .21
3.1 La linιaritι ιtendue .21
3.2 La rιpιtabilitι ..21
3.3 La reproductibilitι 22
3.4 LOD (Limit Of Detection) .22
3.5 LOQ (Limit Of Quantification) 22
3.6 La suppression ou laugmentation dions .22
Partie pratique .23
1. Le matιriel et les mιthodes 23
1.1 Paramθtres de rιglage du spectromθtre de masse ..23
1.1.1 La dιtermination des transitions 23
1.2 Paramθtres de la chromatographie liquide .25
1.2.1 Les paramθtres de la colonne .25
1.2.2 Les phases mobiles .26
1.2.3 Le gradient de concentration .26
1.3 Les standards internes 28
1.4 La prιparation et le traitement des ιchantillons ..29
1.4.1 Prιcipitation : mode opιratoire 29
1.4.2 SLE (Extrahera) : mode opιratoire .29
1.5 Evaluation de linιaritι ..30
1.5.1 La linιaritι en solution........................................................ ...30
1.5.2 La linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι) . .30
1.5.3 La linιaritι par rapport ΰ SLE (Extrahera) .31
Kits commerciaux (Hyphen BioMed) ..33
1.6 Les calibrateurs 33
1.7 Les contrτles 34
1.8 La rιpιtabilitι 35
1.9 La reproductibilitι 35
1.10 La limite de dιtection 36
1.11 La limite de quantification 36
Rιsultats .37
1. Rιsultats de la linιaritι en phase liquide (sans plasma) . ..37
2. Rιsultats de la linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι) 38
3. Rιsultats de la linιaritι sur plasma lyophilisι par SLE . .40
3.1 DCM/IPA 95/5 .40
3.2 Acιtate dιthyle .41
3.3 TBME 42
3.4 DCM/IPA 90/10 ..43
4. La limite de linιaritι .44
5. Passage des calibrateurs et des contrτles 46
6. La rιpιtabilitι de la mιthode pour la molιcule dApixaban ..49
7. La reproductibilitι de la mιthode .50
8. La limite de dιtection .51
9. La limite de quantification .51
10. La suppression ou laugmentation dions 53
Conclusion 54
Glossaire ..55
Bibliographie 56
Annexes
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