Centre de Documentation Campus Montignies
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Caractérisation de pools de cellules souches dentaires en vue du développement de nouvelles procédures de régénération de la pulpe dentaire / SOPHIE LIGOT
Titre : Caractérisation de pools de cellules souches dentaires en vue du développement de nouvelles procédures de régénération de la pulpe dentaire Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : SOPHIE LIGOT, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Louvain Drug Research Institute LDRI Woluwe-Saint-Lambert dent cellules souches émail dentine pulpe papille carie DPSCs SCAPs culture cellulaire pools FACS RT-PCR chondroblastes neurodifférenciation ostéoblastes Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage....................................................................................................8
Introduction.............................................................................................................................10
Contexte général......................................................................................................................12
1 La dent ............................................................................................................................... 12
1.1 Généralités ................................................................................................................. 12
1.1.1 Structure ............................................................................................................. 12
1.1.2 Développement .................................................................................................. 12
1.1.3 Eruption .............................................................................................................. 13
1.2 L'émail ........................................................................................................................ 15
1.3 La dentine .................................................................................................................. 16
1.4 La pulpe ...................................................................................................................... 17
1.5 La papille .................................................................................................................... 19
2 La carie .............................................................................................................................. 20
2.1 Généralités ................................................................................................................. 20
2.2 Pulpite et nécrose pulpaire ........................................................................................ 23
2.3 Traitement ................................................................................................................. 26
3 Les cellules souches ........................................................................................................... 27
3.1 Les cellules souches en général ................................................................................. 27
3.2 Les cellules souches dentaires ................................................................................... 29
3.2.1 DPSCs .................................................................................................................. 29
3.2.2 SCAPs .................................................................................................................. 30
3.2.3 Autres types de cellules souches dentaires ....................................................... 30
Objectifs...................................................................................................................................32
Matériels et méthodes.............................................................................................................34
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 34
2 Décongélation et culture cellulaire ................................................................................... 34
2.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 34
2.2 Méthode .................................................................................................................... 35
3 Comptage et passage des cellules..................................................................................... 35
3.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 35
3.2 Méthode .................................................................................................................... 36
4 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 37
4.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 37
4.2 Méthode .................................................................................................................... 38
5 Congélation des pools ....................................................................................................... 38
5.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 38
5.2 Méthode .................................................................................................................... 38
6 FACS ................................................................................................................................... 39
6.1 Point théorique .......................................................................................................... 39
6.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 41
6.3 Méthode .................................................................................................................... 41
7 RT-PCR ............................................................................................................................... 42
7.1 Point théorique .......................................................................................................... 42
7.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 45
7.3 Méthode .................................................................................................................... 46
7.3.1 Extraction d'ARN ................................................................................................. 46
7.3.2 Préparation des cDNA : ...................................................................................... 47
7.3.3 RT-PCR : .............................................................................................................. 47
8 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 48
8.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 48
8.2 Méthode .................................................................................................................... 49
8.3 Enrobage, réalisation de coupes histologiques et colorations : ................................ 49
9 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 50
9.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 50
9.2 Méthode .................................................................................................................... 51
9.3 Marquage panNeuroFilament : ................................................................................. 51
10 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 51
10.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 51
10.2 Méthode .................................................................................................................... 52
10.3 Marquage Alizarin Red : ............................................................................................. 52
Résultats..................................................................................................................................54
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 54
2 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 54
2.1 DPSCs ......................................................................................................................... 54
2.2 SCAPs .......................................................................................................................... 54
3 Congélation des pools à P3 ............................................................................................... 55
3.1 DPSCs ......................................................................................................................... 55
3.2 SCAPs .......................................................................................................................... 55
4 FACS ................................................................................................................................... 56
4.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 56
4.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 56
4.3 DPSCs à P10 ................................................................................................................ 56
4.4 SCAPs à P10 ................................................................................................................ 56
4.5 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
4.6 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
5 RT-PCR ............................................................................................................................... 57
6 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 59
6.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 59
6.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 59
7 Neurodifférenciation des DPSCs et SCAPs à P5 ................................................................ 59
8 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 60
8.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 60
8.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 61
Discussion................................................................................................................................62
1 FACS ................................................................................................................................... 62
2 RT-PCR ............................................................................................................................... 62
3 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 63
4 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 63
5 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 64
Conclusion................................................................................................................................66
Liste des abréviations...............................................................................................................68
Bibliographie............................................................................................................................70
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65680 Caractérisation de pools de cellules souches dentaires en vue du développement de nouvelles procédures de régénération de la pulpe dentaire [TFE / Mémoire] / SOPHIE LIGOT, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Louvain Drug Research Institute LDRI Woluwe-Saint-Lambert dent cellules souches émail dentine pulpe papille carie DPSCs SCAPs culture cellulaire pools FACS RT-PCR chondroblastes neurodifférenciation ostéoblastes Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage....................................................................................................8
Introduction.............................................................................................................................10
Contexte général......................................................................................................................12
1 La dent ............................................................................................................................... 12
1.1 Généralités ................................................................................................................. 12
1.1.1 Structure ............................................................................................................. 12
1.1.2 Développement .................................................................................................. 12
1.1.3 Eruption .............................................................................................................. 13
1.2 L'émail ........................................................................................................................ 15
1.3 La dentine .................................................................................................................. 16
1.4 La pulpe ...................................................................................................................... 17
1.5 La papille .................................................................................................................... 19
2 La carie .............................................................................................................................. 20
2.1 Généralités ................................................................................................................. 20
2.2 Pulpite et nécrose pulpaire ........................................................................................ 23
2.3 Traitement ................................................................................................................. 26
3 Les cellules souches ........................................................................................................... 27
3.1 Les cellules souches en général ................................................................................. 27
3.2 Les cellules souches dentaires ................................................................................... 29
3.2.1 DPSCs .................................................................................................................. 29
3.2.2 SCAPs .................................................................................................................. 30
3.2.3 Autres types de cellules souches dentaires ....................................................... 30
Objectifs...................................................................................................................................32
Matériels et méthodes.............................................................................................................34
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 34
2 Décongélation et culture cellulaire ................................................................................... 34
2.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 34
2.2 Méthode .................................................................................................................... 35
3 Comptage et passage des cellules..................................................................................... 35
3.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 35
3.2 Méthode .................................................................................................................... 36
4 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 37
4.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 37
4.2 Méthode .................................................................................................................... 38
5 Congélation des pools ....................................................................................................... 38
5.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 38
5.2 Méthode .................................................................................................................... 38
6 FACS ................................................................................................................................... 39
6.1 Point théorique .......................................................................................................... 39
6.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 41
6.3 Méthode .................................................................................................................... 41
7 RT-PCR ............................................................................................................................... 42
7.1 Point théorique .......................................................................................................... 42
7.2 Matériels et réactifs ................................................................................................... 45
7.3 Méthode .................................................................................................................... 46
7.3.1 Extraction d'ARN ................................................................................................. 46
7.3.2 Préparation des cDNA : ...................................................................................... 47
7.3.3 RT-PCR : .............................................................................................................. 47
8 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 48
8.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 48
8.2 Méthode .................................................................................................................... 49
8.3 Enrobage, réalisation de coupes histologiques et colorations : ................................ 49
9 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 50
9.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 50
9.2 Méthode .................................................................................................................... 51
9.3 Marquage panNeuroFilament : ................................................................................. 51
10 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 51
10.1 Matériels et réactifs ................................................................................................... 51
10.2 Méthode .................................................................................................................... 52
10.3 Marquage Alizarin Red : ............................................................................................. 52
Résultats..................................................................................................................................54
1 Recueil et congélation des DPSCs et SCAPs ...................................................................... 54
2 Réalisation des pools de cellules ....................................................................................... 54
2.1 DPSCs ......................................................................................................................... 54
2.2 SCAPs .......................................................................................................................... 54
3 Congélation des pools à P3 ............................................................................................... 55
3.1 DPSCs ......................................................................................................................... 55
3.2 SCAPs .......................................................................................................................... 55
4 FACS ................................................................................................................................... 56
4.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 56
4.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 56
4.3 DPSCs à P10 ................................................................................................................ 56
4.4 SCAPs à P10 ................................................................................................................ 56
4.5 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
4.6 Comparaison du pool DPSC à P5 et P10 .................................................................... 57
5 RT-PCR ............................................................................................................................... 57
6 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 59
6.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 59
6.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 59
7 Neurodifférenciation des DPSCs et SCAPs à P5 ................................................................ 59
8 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 60
8.1 DPSCs à P5 .................................................................................................................. 60
8.2 SCAPs à P5 .................................................................................................................. 61
Discussion................................................................................................................................62
1 FACS ................................................................................................................................... 62
2 RT-PCR ............................................................................................................................... 62
3 Différenciation en chondroblastes .................................................................................... 63
4 Neurodifférenciation ......................................................................................................... 63
5 Différenciation en ostéoblastes ........................................................................................ 64
Conclusion................................................................................................................................66
Liste des abréviations...............................................................................................................68
Bibliographie............................................................................................................................70
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65680 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’inhibiteurs potentiels du récepteur C-Kit / REZKIA BENKECHIDA
Titre : Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’inhibiteurs potentiels du récepteur C-Kit Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : REZKIA BENKECHIDA, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie Charleroi LDRI Louvain Drug Research Institute Université Catholique de Louvain Woluwe-Saint-Lambert protéines kinase RTKs récepteur C-Kit mécanisme d'activation structure cancer site actif de C-Kit inhibiteur de C-Kit synthèse organique bromation du 4-nitro-2-bromotoluène chromatographie sur couche mince CCM résonance magnétique nucléaire RMN spectrométrie de masse haute résolution HRMS Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Tables des matières
Présentation du laboratoire ................................ ................................ ................................ ............... 7
Introduction générale ................................ ................................ ................................ ........................ 9
1. Contexte Général................................ ................................ ................................ ...................... 11
1.1. Le cancer ................................ ................................ ................................ ............................. 11
1.2. Les protéines de type kinase ................................ ................................ ............................. 12
1.2.1. Généralités sur les protéines kinase ................................ ................................ ........... 12
1.2.2. Les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTKs) ................................ ....................... 13
1.3. Le récepteur C-Kit ................................ ................................ ................................ ............... 14
1.3.1. Structure de C-Kit ................................ ................................ ................................ ....... 14
1.3.2. Mécanisme d’activation de C-Kit................................ ................................ ................ 15
1.3.3. Distribution de C-Kit ................................ ................................ ................................ ... 16
1.3.4. C-Kit et cancer ................................ ................................ ................................ ............. 16
1.4. Les inhibiteurs de l‟activité tyrosine kinase du récepteur C-Kit ................................ ......... 17
1.4.1. Domaine kinase et site actif de C-Kit ................................ ................................ ......... 17
1.4.2. Inhibiteurs de C-Kit................................ ................................ ................................ ..... 19
2. Conception d’inhibiteurs potentiels de C-Kit ................................ ................................ ........ 23
2.1. Travaux antérieurs ................................ ................................ ................................ ............... 23
2.2. Objectifs ................................ ................................ ................................ .............................. 24
3. Résultats et discussion ................................ ................................ ................................ ............. 27
3.1. Synthèse organique ................................ ................................ ................................ .............. 27
3.1.1. Voie de synthèse générale ................................ ................................ ............................ 27
3.1.2. Bromation du 4-nitro-2-bromotoluène ................................ ................................ ....... 27
3.1.3. Substitution nucléophile ................................ ................................ ............................. 29
3.1.4. Réduction du motif nitro 1 ................................ ................................ .......................... 31
3.1.5. Formation du motif urée par condensation ................................ ............................... 31
3.1.6. Réduction du motif nitro 2 ................................ ................................ .......................... 32
3.1.7. Substitution nucléophile aromatique ................................ ................................ ......... 33
3.2. Partie analytique ................................ ................................ ................................ .................. 33
3.2.1. La chromatographie sur couche mince (CCM) ................................ ......................... 33
3.2.2. La résonance magnétique nucléaire (RMN) ................................ .............................. 34
3.2.3. La spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) ................................ ............... 36
4. Conclusions & perspectives ................................ ................................ ................................ ..... 39
Bibliographie ................................ ................................ ................................ ................................ .... 41
Liste des figures, tableaux et schémas ................................ ................................ ............................ 45
Liste des abréviations................................ ................................ ................................ ....................... 47
Annexes ................................ ................................ ................................ ................................ ............. 49
Annexe 1 : Synthèse du bromure de 2-bromo-4-nitrobenzyle (BR-001) et du bromure de 2,2-dibromo-4-nitrobenzyle (BR-001-PS) ................................ ................................ ........................... 50
Annexe 2 : Synthèse de la 1(-2-bromo-4-nitrobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR-003), et de la 4-(2-bromo-4-nitrobenzyle)-1-(3-bromo-4-nitrobenzyl)-1-méthylpipérazin-1-ium (BR-003-PS) ... 51
Annexe 3 : Synthèse de la 1-(2-bromo-4-aminobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR004) ............... 52
Annexe 4 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-nitro-phényl)urée (BR-005) et de la N-(4-nitrophényl)- N‟-(4-nitrophényl)urée (BR-005-PS) ............. 53
Annexe 5 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-amino-phényl)urée (BR006) ................................ ................................ ................................ .......... 54Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65661 Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’inhibiteurs potentiels du récepteur C-Kit [TFE / Mémoire] / REZKIA BENKECHIDA, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie Charleroi LDRI Louvain Drug Research Institute Université Catholique de Louvain Woluwe-Saint-Lambert protéines kinase RTKs récepteur C-Kit mécanisme d'activation structure cancer site actif de C-Kit inhibiteur de C-Kit synthèse organique bromation du 4-nitro-2-bromotoluène chromatographie sur couche mince CCM résonance magnétique nucléaire RMN spectrométrie de masse haute résolution HRMS Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Tables des matières
Présentation du laboratoire ................................ ................................ ................................ ............... 7
Introduction générale ................................ ................................ ................................ ........................ 9
1. Contexte Général................................ ................................ ................................ ...................... 11
1.1. Le cancer ................................ ................................ ................................ ............................. 11
1.2. Les protéines de type kinase ................................ ................................ ............................. 12
1.2.1. Généralités sur les protéines kinase ................................ ................................ ........... 12
1.2.2. Les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTKs) ................................ ....................... 13
1.3. Le récepteur C-Kit ................................ ................................ ................................ ............... 14
1.3.1. Structure de C-Kit ................................ ................................ ................................ ....... 14
1.3.2. Mécanisme d’activation de C-Kit................................ ................................ ................ 15
1.3.3. Distribution de C-Kit ................................ ................................ ................................ ... 16
1.3.4. C-Kit et cancer ................................ ................................ ................................ ............. 16
1.4. Les inhibiteurs de l‟activité tyrosine kinase du récepteur C-Kit ................................ ......... 17
1.4.1. Domaine kinase et site actif de C-Kit ................................ ................................ ......... 17
1.4.2. Inhibiteurs de C-Kit................................ ................................ ................................ ..... 19
2. Conception d’inhibiteurs potentiels de C-Kit ................................ ................................ ........ 23
2.1. Travaux antérieurs ................................ ................................ ................................ ............... 23
2.2. Objectifs ................................ ................................ ................................ .............................. 24
3. Résultats et discussion ................................ ................................ ................................ ............. 27
3.1. Synthèse organique ................................ ................................ ................................ .............. 27
3.1.1. Voie de synthèse générale ................................ ................................ ............................ 27
3.1.2. Bromation du 4-nitro-2-bromotoluène ................................ ................................ ....... 27
3.1.3. Substitution nucléophile ................................ ................................ ............................. 29
3.1.4. Réduction du motif nitro 1 ................................ ................................ .......................... 31
3.1.5. Formation du motif urée par condensation ................................ ............................... 31
3.1.6. Réduction du motif nitro 2 ................................ ................................ .......................... 32
3.1.7. Substitution nucléophile aromatique ................................ ................................ ......... 33
3.2. Partie analytique ................................ ................................ ................................ .................. 33
3.2.1. La chromatographie sur couche mince (CCM) ................................ ......................... 33
3.2.2. La résonance magnétique nucléaire (RMN) ................................ .............................. 34
3.2.3. La spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) ................................ ............... 36
4. Conclusions & perspectives ................................ ................................ ................................ ..... 39
Bibliographie ................................ ................................ ................................ ................................ .... 41
Liste des figures, tableaux et schémas ................................ ................................ ............................ 45
Liste des abréviations................................ ................................ ................................ ....................... 47
Annexes ................................ ................................ ................................ ................................ ............. 49
Annexe 1 : Synthèse du bromure de 2-bromo-4-nitrobenzyle (BR-001) et du bromure de 2,2-dibromo-4-nitrobenzyle (BR-001-PS) ................................ ................................ ........................... 50
Annexe 2 : Synthèse de la 1(-2-bromo-4-nitrobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR-003), et de la 4-(2-bromo-4-nitrobenzyle)-1-(3-bromo-4-nitrobenzyl)-1-méthylpipérazin-1-ium (BR-003-PS) ... 51
Annexe 3 : Synthèse de la 1-(2-bromo-4-aminobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR004) ............... 52
Annexe 4 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-nitro-phényl)urée (BR-005) et de la N-(4-nitrophényl)- N‟-(4-nitrophényl)urée (BR-005-PS) ............. 53
Annexe 5 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-amino-phényl)urée (BR006) ................................ ................................ ................................ .......... 54Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65661 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Synthèse de dérivés 5-bromothiazole-2-amines comme inhibiteurs de l’arginase 1, une cible de choix dans le traitement de cancer / Ernestas KLEIZA
Titre : Synthèse de dérivés 5-bromothiazole-2-amines comme inhibiteurs de l’arginase 1, une cible de choix dans le traitement de cancer Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Ernestas KLEIZA, Auteur Année de publication : 2014 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : BIOLOGIE MÉDICALE UCL LDRI 5-BROMOTHIAZOLE-2-AMINE INHIBITEUR ARGINASE 1 TRAITEMENT CANCER ARGINASE ORNITHINE UREE THIOUREES CHROMATOGRAPHIE RESONNANCE MAGNETIQUE NUCLEAIRE LC-MS Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65396 Synthèse de dérivés 5-bromothiazole-2-amines comme inhibiteurs de l’arginase 1, une cible de choix dans le traitement de cancer [TFE / Mémoire] / Ernestas KLEIZA, Auteur . - 2014.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
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Mots-clés : BIOLOGIE MÉDICALE UCL LDRI 5-BROMOTHIAZOLE-2-AMINE INHIBITEUR ARGINASE 1 TRAITEMENT CANCER ARGINASE ORNITHINE UREE THIOUREES CHROMATOGRAPHIE RESONNANCE MAGNETIQUE NUCLEAIRE LC-MS Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65396 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire