Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation fermera de 12h à 12h30 et à 14h30 ce vendredi 19/04.
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation fermera de 12h à 12h30 et à 14h30 ce vendredi 19/04.
Bienvenue sur le catalogue du centre de documentation du campus de Montignies.
Résultat de la recherche
5 résultat(s) recherche sur le mot-clé 'Marie Curie'
Ajouter le résultat dans votre panier Affiner la recherche Générer le flux rss de la recherche
Partager le résultat de cette recherche Faire une suggestion
Anticorps anti-CCP : Apports diagnostiques et validation de méthode / Doygu Sanak
Titre : Anticorps anti-CCP : Apports diagnostiques et validation de méthode Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Doygu Sanak, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU Charleroi Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La polyarthrite rhumatoïde est une maladie auto-immune fréquente qui touche entre 0,5 et 1% de la population mondiale. Elle se caractérise par une inflammation de la membrane synoviale et touche principalement les poignets ainsi que les articulations interphalangiennes. Il est primordial de dépister rapidement la maladie afin d’éviter une destruction articulaire irréversible et des complications pouvant mener jusqu’à la mort du patient. Dans cette optique, les anticorps anti-CCP sont des marqueurs de dosage très précoces, présents même avant le début des premiers signes cliniques de la pathologie. Au laboratoire de biochimie de l’Hôpital Civil Marie Curie, ces anticorps étaient initialement dosés au moyen d’une technique immuno-enzymatique semi-automatisée (Inova, Werfen). Aujourd'hui, le dosage des anti-CCP est réalisé via une méthode entièrement automatisée basée sur une détection par chimiluminescence (Architect, Abbott).
Ce travail a pour objectifs d’une part de faire le point sur les anti-CCP en tant que marqueur biologique de la polyarthrite rhumatoïde et d’autre part d’évaluer les performances analytiques du dosage des anti-CCP avec détection par chimiluminescence. Une comparaison des résultats issus des deux méthodes de dosage et portant sur 68 patients a notamment été réalisée. En conclusion, le dosage des anti-CCP sur Architect présente des performances analytiques satisfaisantes et démontre une plus grande spécificité clinique que la méthode
semi-automatisée.Note de contenu : Introduction ............................................................................................................................................. 7
Partie théorique ...................................................................................................................................... 8
1. Auto-immunité ................................................................................................................................ 9
1.1 Introduction ............................................................................................................................. 9
1.2 Anticorps ................................................................................................................................. 9
1.3 Auto-anticorps ....................................................................................................................... 10
1.3.1 Les auto-anticorps naturels ........................................................................................... 11
1.3.2 Les auto-anticorps pathologiques ................................................................................. 11
1.4 Les maladies auto immunes (MAI) ........................................................................................ 11
1.4.1 Les maladies auto-immunes non spécifiques d’organe ................................................ 11
1.4.2 Les maladies auto-immunes spécifiques d’organes ...................................................... 13
2. La polyarthrite rhumatoïde ........................................................................................................... 14
2.1 Introduction ........................................................................................................................... 14
2.2 Facteurs de risques : .............................................................................................................. 14
2.2.1 Facteurs génétiques ...................................................................................................... 14
2.2.2 Facteurs environnementaux ......................................................................................... 15
2.2.3 Facteurs infectieux ........................................................................................................ 15
2.3 Physiopathologie ................................................................................................................... 15
2.4 Signes cliniques :.................................................................................................................... 16
2.5 Signes biologiques ................................................................................................................. 16
2.6 Critères diagnostiques de l’American College of Rheumatology (ACR) ................................ 17
2.7 Marqueurs sérologiques : ...................................................................................................... 18
2.8 Traitement ............................................................................................................................. 18
2.8.1 Traitement de la douleur, de l’inflammation et du désordre immunitaire .................. 18
2.8.2 Traitements ciblés ......................................................................................................... 18
3. Anticorps anti-peptides cycliques citrullinés (anti-CCP) ................................................................ 19
3.1 Introduction ........................................................................................................................... 19
3.2 Historique .............................................................................................................................. 19
3.3 Intérêts .................................................................................................................................. 20
3.4 Dosage ................................................................................................................................... 20
4. PhD lx ............................................................................................................................................. 21
4.1 Appareillage ........................................................................................................................... 21
4.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 22
5. Architect I2000 .............................................................................................................................. 23
5.1 Appareillage : ......................................................................................................................... 23
5
5.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 24
6. Méthode de validation .................................................................................................................. 26
Objectifs et stratégie du travail ............................................................................................................. 27
Partie pratique ...................................................................................................................................... 28
1. Matériels et méthodes .................................................................................................................. 29
1.1 Dosage des anticorps anti-CCP sur le PhD lx ......................................................................... 29
1.1.1 Réactifs .......................................................................................................................... 29
1.1.2 Échantillons ................................................................................................................... 29
1.1.3 Méthode ........................................................................................................................ 29
1.1.4 Contrôle qualité ............................................................................................................. 30
1.1.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 30
1.1.6 Limite du test et interférence ........................................................................................ 30
1.2 Dosage des anti-CCP sur l’Architect ...................................................................................... 31
1.2.1 Réactifs .......................................................................................................................... 31
1.2.2 Échantillons ................................................................................................................... 31
1.2.3 Méthode ........................................................................................................................ 32
1.2.4 Limite et interférence du test ........................................................................................ 32
1.2.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 32
2. Résultats ........................................................................................................................................ 33
2.1 La calibration ......................................................................................................................... 33
2.2 Répétabilité ........................................................................................................................... 33
2.3 Reproductibilité ..................................................................................................................... 34
2.4 Linéarité ................................................................................................................................. 35
3.Comparaison ...................................................................................................................................... 37
3.1 Comparaison des résultats patients ...................................................................................... 37
3.2 Comparaison des automates ................................................................................................. 40
3.3 Discussion .............................................................................................................................. 40
Conclusion ............................................................................................................................................. 42
Liste des figures et abréviations ............................................................................................................ 44
Bibliographie.......................................................................................................................................... 46Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=80000 Anticorps anti-CCP : Apports diagnostiques et validation de méthode [TFE / Mémoire] / Doygu Sanak, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU Charleroi Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La polyarthrite rhumatoïde est une maladie auto-immune fréquente qui touche entre 0,5 et 1% de la population mondiale. Elle se caractérise par une inflammation de la membrane synoviale et touche principalement les poignets ainsi que les articulations interphalangiennes. Il est primordial de dépister rapidement la maladie afin d’éviter une destruction articulaire irréversible et des complications pouvant mener jusqu’à la mort du patient. Dans cette optique, les anticorps anti-CCP sont des marqueurs de dosage très précoces, présents même avant le début des premiers signes cliniques de la pathologie. Au laboratoire de biochimie de l’Hôpital Civil Marie Curie, ces anticorps étaient initialement dosés au moyen d’une technique immuno-enzymatique semi-automatisée (Inova, Werfen). Aujourd'hui, le dosage des anti-CCP est réalisé via une méthode entièrement automatisée basée sur une détection par chimiluminescence (Architect, Abbott).
Ce travail a pour objectifs d’une part de faire le point sur les anti-CCP en tant que marqueur biologique de la polyarthrite rhumatoïde et d’autre part d’évaluer les performances analytiques du dosage des anti-CCP avec détection par chimiluminescence. Une comparaison des résultats issus des deux méthodes de dosage et portant sur 68 patients a notamment été réalisée. En conclusion, le dosage des anti-CCP sur Architect présente des performances analytiques satisfaisantes et démontre une plus grande spécificité clinique que la méthode
semi-automatisée.Note de contenu : Introduction ............................................................................................................................................. 7
Partie théorique ...................................................................................................................................... 8
1. Auto-immunité ................................................................................................................................ 9
1.1 Introduction ............................................................................................................................. 9
1.2 Anticorps ................................................................................................................................. 9
1.3 Auto-anticorps ....................................................................................................................... 10
1.3.1 Les auto-anticorps naturels ........................................................................................... 11
1.3.2 Les auto-anticorps pathologiques ................................................................................. 11
1.4 Les maladies auto immunes (MAI) ........................................................................................ 11
1.4.1 Les maladies auto-immunes non spécifiques d’organe ................................................ 11
1.4.2 Les maladies auto-immunes spécifiques d’organes ...................................................... 13
2. La polyarthrite rhumatoïde ........................................................................................................... 14
2.1 Introduction ........................................................................................................................... 14
2.2 Facteurs de risques : .............................................................................................................. 14
2.2.1 Facteurs génétiques ...................................................................................................... 14
2.2.2 Facteurs environnementaux ......................................................................................... 15
2.2.3 Facteurs infectieux ........................................................................................................ 15
2.3 Physiopathologie ................................................................................................................... 15
2.4 Signes cliniques :.................................................................................................................... 16
2.5 Signes biologiques ................................................................................................................. 16
2.6 Critères diagnostiques de l’American College of Rheumatology (ACR) ................................ 17
2.7 Marqueurs sérologiques : ...................................................................................................... 18
2.8 Traitement ............................................................................................................................. 18
2.8.1 Traitement de la douleur, de l’inflammation et du désordre immunitaire .................. 18
2.8.2 Traitements ciblés ......................................................................................................... 18
3. Anticorps anti-peptides cycliques citrullinés (anti-CCP) ................................................................ 19
3.1 Introduction ........................................................................................................................... 19
3.2 Historique .............................................................................................................................. 19
3.3 Intérêts .................................................................................................................................. 20
3.4 Dosage ................................................................................................................................... 20
4. PhD lx ............................................................................................................................................. 21
4.1 Appareillage ........................................................................................................................... 21
4.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 22
5. Architect I2000 .............................................................................................................................. 23
5.1 Appareillage : ......................................................................................................................... 23
5
5.2 Principe de l’appareil ............................................................................................................. 24
6. Méthode de validation .................................................................................................................. 26
Objectifs et stratégie du travail ............................................................................................................. 27
Partie pratique ...................................................................................................................................... 28
1. Matériels et méthodes .................................................................................................................. 29
1.1 Dosage des anticorps anti-CCP sur le PhD lx ......................................................................... 29
1.1.1 Réactifs .......................................................................................................................... 29
1.1.2 Échantillons ................................................................................................................... 29
1.1.3 Méthode ........................................................................................................................ 29
1.1.4 Contrôle qualité ............................................................................................................. 30
1.1.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 30
1.1.6 Limite du test et interférence ........................................................................................ 30
1.2 Dosage des anti-CCP sur l’Architect ...................................................................................... 31
1.2.1 Réactifs .......................................................................................................................... 31
1.2.2 Échantillons ................................................................................................................... 31
1.2.3 Méthode ........................................................................................................................ 32
1.2.4 Limite et interférence du test ........................................................................................ 32
1.2.5 Interprétation des résultats .......................................................................................... 32
2. Résultats ........................................................................................................................................ 33
2.1 La calibration ......................................................................................................................... 33
2.2 Répétabilité ........................................................................................................................... 33
2.3 Reproductibilité ..................................................................................................................... 34
2.4 Linéarité ................................................................................................................................. 35
3.Comparaison ...................................................................................................................................... 37
3.1 Comparaison des résultats patients ...................................................................................... 37
3.2 Comparaison des automates ................................................................................................. 40
3.3 Discussion .............................................................................................................................. 40
Conclusion ............................................................................................................................................. 42
Liste des figures et abréviations ............................................................................................................ 44
Bibliographie.......................................................................................................................................... 46Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=80000 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Comparaison de méthodes pour la détection des anticorps IgM et IgG dirigés contre les borrelia dans le sérum et le LCR / Gaëlle Molle
Titre : Comparaison de méthodes pour la détection des anticorps IgM et IgG dirigés contre les borrelia dans le sérum et le LCR Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Gaëlle Molle, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie bactérie anticorps IgG IgM borrelia tique immunologie chimiluminescence ELISA western blot liaison XL ETI-MAX gemini Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ------------------------------------------------------------------------------- 11
Introduction générale ----------------------------------------------------------------------------------------- 13
Partie théorique ------------------------------------------------------------------------------------------------ 15
1. Introduction ----------------------------------------------------------------------------------------------- 15
2. La bactérie à l’origine de cette pathologie. --------------------------------------------------------- 15
3. L’hôte vecteur de la bactérie : la tique -------------------------------------------------------------- 16
3.1. La morphologie ------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.2. La fixation -------------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.3. Le milieu de vie ------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.4. La nutrition ------------------------------------------------------------------------------------------ 18
3.5. Le cycle de vie --------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.6. Les relations entre tiques, Borrelia et l’hôte ------------------------------------------------- 19
4. La pathologie ---------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.1. Généralités ------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.2. Le diagnostic ----------------------------------------------------------------------------------------- 23
4.3. Le(s) traitement(s) --------------------------------------------------------------------------------- 24
4.4. Pronostic --------------------------------------------------------------------------------------------- 24
4.5. Le risque d’infection ------------------------------------------------------------------------------- 25
4.6. Physiologie des anticorps ------------------------------------------------------------------------- 25
4.7. L’incidence de la pathologie et population concernée ------------------------------------ 26
5. Le dosage et les techniques utilisées ---------------------------------------------------------------- 27
5.1. Les différentes matrices de dosage ------------------------------------------------------------ 27
5.2. Le principe de base du dosage : une réaction antigène - anticorps -------------------- 27
5.3. Principe du dosage utilisant la chimiluminescence ----------------------------------------- 28
5.4. Principe de l’ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay) (figure n°10) ------------ 29
5.5. Principe du test de confirmation : le Western blot ----------------------------------------- 30
6. Objectifs et stratégies ----------------------------------------------------------------------------------- 31
Partie pratique -------------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1. Le LIAISON XL ---------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 33
1.2. Matériel ------------------------------------------------------------------------------------------------- 35
1.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 35
1.4. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 36
1.5. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 36
1.6. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 36
1.7. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 37
2. L’ETI-MAX -------------------------------------------------------------------------------------------------- 38
2.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 38
2.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 38
2.3. Réactifs -------------------------------------------------------------------------------------------------- 39
2.4. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.5. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.6. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 39
2.7. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 39
2.8. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 40
3. Le Gemini --------------------------------------------------------------------------------------------------- 41
3.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 41
3.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 41
3.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 41
3.4. Méthode, calibration et contrôles ----------------------------------------------------------------- 41
6
3.5. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 41
4. Tableau comparatif ----------------------------------------------------------------------------------- 43
5. Le Western blot ---------------------------------------------------------------------------------------- 45
6. Les échantillons : la sélection, la préparation et la conservation -------------------------- 47
7. Résultats et interprétations ---------------------------------------------------------------------------- 47
7.1. Résultats ---------------------------------------------------------------------------------------------- 47
7.1.1. Sérum IgM ------------------------------------------------------------------------------------- 48
7.1.2. Sérum IgG -------------------------------------------------------------------------------------- 50
7.1.3. Association sérum – LCR : analyse de la population (IgG/IgM) -------------------- 52
Conclusion générale et perspectives ---------------------------------------------------------------------- 53
Lexique ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- 54
Bibliographie ---------------------------------------------------------------------------------------------------- 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65682 Comparaison de méthodes pour la détection des anticorps IgM et IgG dirigés contre les borrelia dans le sérum et le LCR [TFE / Mémoire] / Gaëlle Molle, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie bactérie anticorps IgG IgM borrelia tique immunologie chimiluminescence ELISA western blot liaison XL ETI-MAX gemini Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ------------------------------------------------------------------------------- 11
Introduction générale ----------------------------------------------------------------------------------------- 13
Partie théorique ------------------------------------------------------------------------------------------------ 15
1. Introduction ----------------------------------------------------------------------------------------------- 15
2. La bactérie à l’origine de cette pathologie. --------------------------------------------------------- 15
3. L’hôte vecteur de la bactérie : la tique -------------------------------------------------------------- 16
3.1. La morphologie ------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.2. La fixation -------------------------------------------------------------------------------------------- 17
3.3. Le milieu de vie ------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.4. La nutrition ------------------------------------------------------------------------------------------ 18
3.5. Le cycle de vie --------------------------------------------------------------------------------------- 18
3.6. Les relations entre tiques, Borrelia et l’hôte ------------------------------------------------- 19
4. La pathologie ---------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.1. Généralités ------------------------------------------------------------------------------------------- 21
4.2. Le diagnostic ----------------------------------------------------------------------------------------- 23
4.3. Le(s) traitement(s) --------------------------------------------------------------------------------- 24
4.4. Pronostic --------------------------------------------------------------------------------------------- 24
4.5. Le risque d’infection ------------------------------------------------------------------------------- 25
4.6. Physiologie des anticorps ------------------------------------------------------------------------- 25
4.7. L’incidence de la pathologie et population concernée ------------------------------------ 26
5. Le dosage et les techniques utilisées ---------------------------------------------------------------- 27
5.1. Les différentes matrices de dosage ------------------------------------------------------------ 27
5.2. Le principe de base du dosage : une réaction antigène - anticorps -------------------- 27
5.3. Principe du dosage utilisant la chimiluminescence ----------------------------------------- 28
5.4. Principe de l’ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay) (figure n°10) ------------ 29
5.5. Principe du test de confirmation : le Western blot ----------------------------------------- 30
6. Objectifs et stratégies ----------------------------------------------------------------------------------- 31
Partie pratique -------------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1. Le LIAISON XL ---------------------------------------------------------------------------------------------- 33
1.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 33
1.2. Matériel ------------------------------------------------------------------------------------------------- 35
1.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 35
1.4. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 36
1.5. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 36
1.6. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 36
1.7. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 37
2. L’ETI-MAX -------------------------------------------------------------------------------------------------- 38
2.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 38
2.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 38
2.3. Réactifs -------------------------------------------------------------------------------------------------- 39
2.4. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.5. Conservation des kits --------------------------------------------------------------------------------- 39
2.6. Méthode ------------------------------------------------------------------------------------------------ 39
2.7. Calibration et contrôles ------------------------------------------------------------------------------ 39
2.8. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 40
3. Le Gemini --------------------------------------------------------------------------------------------------- 41
3.1. Présentation de l’automate ------------------------------------------------------------------------- 41
3.2. Matériels ------------------------------------------------------------------------------------------------ 41
3.3. Composition des kits --------------------------------------------------------------------------------- 41
3.4. Méthode, calibration et contrôles ----------------------------------------------------------------- 41
6
3.5. Interprétation des résultats ------------------------------------------------------------------------- 41
4. Tableau comparatif ----------------------------------------------------------------------------------- 43
5. Le Western blot ---------------------------------------------------------------------------------------- 45
6. Les échantillons : la sélection, la préparation et la conservation -------------------------- 47
7. Résultats et interprétations ---------------------------------------------------------------------------- 47
7.1. Résultats ---------------------------------------------------------------------------------------------- 47
7.1.1. Sérum IgM ------------------------------------------------------------------------------------- 48
7.1.2. Sérum IgG -------------------------------------------------------------------------------------- 50
7.1.3. Association sérum – LCR : analyse de la population (IgG/IgM) -------------------- 52
Conclusion générale et perspectives ---------------------------------------------------------------------- 53
Lexique ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- 54
Bibliographie ---------------------------------------------------------------------------------------------------- 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65682 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’inhibiteurs potentiels du récepteur C-Kit / REZKIA BENKECHIDA
Titre : Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’inhibiteurs potentiels du récepteur C-Kit Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : REZKIA BENKECHIDA, Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie Charleroi LDRI Louvain Drug Research Institute Université Catholique de Louvain Woluwe-Saint-Lambert protéines kinase RTKs récepteur C-Kit mécanisme d'activation structure cancer site actif de C-Kit inhibiteur de C-Kit synthèse organique bromation du 4-nitro-2-bromotoluène chromatographie sur couche mince CCM résonance magnétique nucléaire RMN spectrométrie de masse haute résolution HRMS Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Tables des matières
Présentation du laboratoire ................................ ................................ ................................ ............... 7
Introduction générale ................................ ................................ ................................ ........................ 9
1. Contexte Général................................ ................................ ................................ ...................... 11
1.1. Le cancer ................................ ................................ ................................ ............................. 11
1.2. Les protéines de type kinase ................................ ................................ ............................. 12
1.2.1. Généralités sur les protéines kinase ................................ ................................ ........... 12
1.2.2. Les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTKs) ................................ ....................... 13
1.3. Le récepteur C-Kit ................................ ................................ ................................ ............... 14
1.3.1. Structure de C-Kit ................................ ................................ ................................ ....... 14
1.3.2. Mécanisme d’activation de C-Kit................................ ................................ ................ 15
1.3.3. Distribution de C-Kit ................................ ................................ ................................ ... 16
1.3.4. C-Kit et cancer ................................ ................................ ................................ ............. 16
1.4. Les inhibiteurs de l‟activité tyrosine kinase du récepteur C-Kit ................................ ......... 17
1.4.1. Domaine kinase et site actif de C-Kit ................................ ................................ ......... 17
1.4.2. Inhibiteurs de C-Kit................................ ................................ ................................ ..... 19
2. Conception d’inhibiteurs potentiels de C-Kit ................................ ................................ ........ 23
2.1. Travaux antérieurs ................................ ................................ ................................ ............... 23
2.2. Objectifs ................................ ................................ ................................ .............................. 24
3. Résultats et discussion ................................ ................................ ................................ ............. 27
3.1. Synthèse organique ................................ ................................ ................................ .............. 27
3.1.1. Voie de synthèse générale ................................ ................................ ............................ 27
3.1.2. Bromation du 4-nitro-2-bromotoluène ................................ ................................ ....... 27
3.1.3. Substitution nucléophile ................................ ................................ ............................. 29
3.1.4. Réduction du motif nitro 1 ................................ ................................ .......................... 31
3.1.5. Formation du motif urée par condensation ................................ ............................... 31
3.1.6. Réduction du motif nitro 2 ................................ ................................ .......................... 32
3.1.7. Substitution nucléophile aromatique ................................ ................................ ......... 33
3.2. Partie analytique ................................ ................................ ................................ .................. 33
3.2.1. La chromatographie sur couche mince (CCM) ................................ ......................... 33
3.2.2. La résonance magnétique nucléaire (RMN) ................................ .............................. 34
3.2.3. La spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) ................................ ............... 36
4. Conclusions & perspectives ................................ ................................ ................................ ..... 39
Bibliographie ................................ ................................ ................................ ................................ .... 41
Liste des figures, tableaux et schémas ................................ ................................ ............................ 45
Liste des abréviations................................ ................................ ................................ ....................... 47
Annexes ................................ ................................ ................................ ................................ ............. 49
Annexe 1 : Synthèse du bromure de 2-bromo-4-nitrobenzyle (BR-001) et du bromure de 2,2-dibromo-4-nitrobenzyle (BR-001-PS) ................................ ................................ ........................... 50
Annexe 2 : Synthèse de la 1(-2-bromo-4-nitrobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR-003), et de la 4-(2-bromo-4-nitrobenzyle)-1-(3-bromo-4-nitrobenzyl)-1-méthylpipérazin-1-ium (BR-003-PS) ... 51
Annexe 3 : Synthèse de la 1-(2-bromo-4-aminobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR004) ............... 52
Annexe 4 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-nitro-phényl)urée (BR-005) et de la N-(4-nitrophényl)- N‟-(4-nitrophényl)urée (BR-005-PS) ............. 53
Annexe 5 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-amino-phényl)urée (BR006) ................................ ................................ ................................ .......... 54Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65661 Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’inhibiteurs potentiels du récepteur C-Kit [TFE / Mémoire] / REZKIA BENKECHIDA, . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale Hôpital Civil Marie Curie Charleroi LDRI Louvain Drug Research Institute Université Catholique de Louvain Woluwe-Saint-Lambert protéines kinase RTKs récepteur C-Kit mécanisme d'activation structure cancer site actif de C-Kit inhibiteur de C-Kit synthèse organique bromation du 4-nitro-2-bromotoluène chromatographie sur couche mince CCM résonance magnétique nucléaire RMN spectrométrie de masse haute résolution HRMS Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Tables des matières
Présentation du laboratoire ................................ ................................ ................................ ............... 7
Introduction générale ................................ ................................ ................................ ........................ 9
1. Contexte Général................................ ................................ ................................ ...................... 11
1.1. Le cancer ................................ ................................ ................................ ............................. 11
1.2. Les protéines de type kinase ................................ ................................ ............................. 12
1.2.1. Généralités sur les protéines kinase ................................ ................................ ........... 12
1.2.2. Les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTKs) ................................ ....................... 13
1.3. Le récepteur C-Kit ................................ ................................ ................................ ............... 14
1.3.1. Structure de C-Kit ................................ ................................ ................................ ....... 14
1.3.2. Mécanisme d’activation de C-Kit................................ ................................ ................ 15
1.3.3. Distribution de C-Kit ................................ ................................ ................................ ... 16
1.3.4. C-Kit et cancer ................................ ................................ ................................ ............. 16
1.4. Les inhibiteurs de l‟activité tyrosine kinase du récepteur C-Kit ................................ ......... 17
1.4.1. Domaine kinase et site actif de C-Kit ................................ ................................ ......... 17
1.4.2. Inhibiteurs de C-Kit................................ ................................ ................................ ..... 19
2. Conception d’inhibiteurs potentiels de C-Kit ................................ ................................ ........ 23
2.1. Travaux antérieurs ................................ ................................ ................................ ............... 23
2.2. Objectifs ................................ ................................ ................................ .............................. 24
3. Résultats et discussion ................................ ................................ ................................ ............. 27
3.1. Synthèse organique ................................ ................................ ................................ .............. 27
3.1.1. Voie de synthèse générale ................................ ................................ ............................ 27
3.1.2. Bromation du 4-nitro-2-bromotoluène ................................ ................................ ....... 27
3.1.3. Substitution nucléophile ................................ ................................ ............................. 29
3.1.4. Réduction du motif nitro 1 ................................ ................................ .......................... 31
3.1.5. Formation du motif urée par condensation ................................ ............................... 31
3.1.6. Réduction du motif nitro 2 ................................ ................................ .......................... 32
3.1.7. Substitution nucléophile aromatique ................................ ................................ ......... 33
3.2. Partie analytique ................................ ................................ ................................ .................. 33
3.2.1. La chromatographie sur couche mince (CCM) ................................ ......................... 33
3.2.2. La résonance magnétique nucléaire (RMN) ................................ .............................. 34
3.2.3. La spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) ................................ ............... 36
4. Conclusions & perspectives ................................ ................................ ................................ ..... 39
Bibliographie ................................ ................................ ................................ ................................ .... 41
Liste des figures, tableaux et schémas ................................ ................................ ............................ 45
Liste des abréviations................................ ................................ ................................ ....................... 47
Annexes ................................ ................................ ................................ ................................ ............. 49
Annexe 1 : Synthèse du bromure de 2-bromo-4-nitrobenzyle (BR-001) et du bromure de 2,2-dibromo-4-nitrobenzyle (BR-001-PS) ................................ ................................ ........................... 50
Annexe 2 : Synthèse de la 1(-2-bromo-4-nitrobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR-003), et de la 4-(2-bromo-4-nitrobenzyle)-1-(3-bromo-4-nitrobenzyl)-1-méthylpipérazin-1-ium (BR-003-PS) ... 51
Annexe 3 : Synthèse de la 1-(2-bromo-4-aminobenzyle)-4-méthylpipérazine (BR004) ............... 52
Annexe 4 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-nitro-phényl)urée (BR-005) et de la N-(4-nitrophényl)- N‟-(4-nitrophényl)urée (BR-005-PS) ............. 53
Annexe 5 : Synthèse de la N-(3-bromo-4-((4-méthylpipérazine-1-yl)méthyl)phényl)-N‟-(4-amino-phényl)urée (BR006) ................................ ................................ ................................ .......... 54Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65661 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire EVALUATION D'UNE METHODE D'ANTIBIOGRAMME RAPIDE A PARTIR DES FLACONS D'HEMOCULTURE POSITIVE SELON LES RECOMMANDATIONS DE L'EUCAST / Blandine Ngongang Nana
Titre : EVALUATION D'UNE METHODE D'ANTIBIOGRAMME RAPIDE A PARTIR DES FLACONS D'HEMOCULTURE POSITIVE SELON LES RECOMMANDATIONS DE L'EUCAST Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Blandine Ngongang Nana, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’étude réalisée porte sur l’évaluation d’une méthode d’antibiogramme rapide à partir des flacons d’hémocultures selon les recommandations du comité européen de l’antibiogramme (EUCAST - European Committee on Antimicrobial Susceptibility). Cette méthode appelée RAST (Rapid Antimicrobial Susceptibilité Testing) a été expérimentée sur une population de 33 hémocultures monomicrobiennes. Cette population était constituée de 18 souches d'Escherichia coli, 9 souches de Staphylococcus aureus, 5 souches de Klebsiella pneumoniae et 1 souche de Pseudomonas aeruginosa.
Pour chaque flacon d'hémoculture positive, un antibiogramme a été réalisé à partir du liquide contenu du flacon. Une lecture des zones d'inhibition a été faite après 4 heures d'incubation puis une autre après 6 heures. Le germe pouvait être soit résistant, sensible ou alors de sensibilité non interprétable. Trois types de résultats ont été distingués après la lecture des antibiogrammes. Les résultats se sont donc catégorisés en « sensible ou résistant », « non interprétables » ou « illisibles ». Par la suite, une comparaison entre la méthode RAST et la méthode de référence a permis d’évaluer la concordance des résultats qui étaient sensibles ou résistants ; les autres résultats étant exclus.
Les résultats des antibiogrammes des Staphylococcus aureus ont présenté 100% de concordance entre les deux méthodes.
Concernant les antibiogrammes des bacilles Gram négatif étudiés, les deux méthodes ont été plus concordantes à la 6e heure qu’à la 4e heure d’incubation de la méthode RAST.
Quelques cas de discordances majeures ont cependant été observés pour les antibiotiques Piperacillin-Tazobactam, Cefotaxime, Ceftazidime, Ciprofloxacin, Gentamicin et Tobramycin. La source probable de cette discordance serait le raccourcissement de la durée d’incubation. Une prolongation de la durée d’incubation à 8 heures tel que recommandé par l’EUCAST pourrait peut-être contribuer à limiter les cas de discordances observés.
Note de contenu : Table des matières
Remerciements 1
Présentation du lieu de stage 6
Introduction 8
I. CONTEXTE GENERAL 9
I.1. Bactériémie 9
I.1.1. Définition 9
I.1.2. Physiopathologie 9
I.1.3. Signes cliniques 11
I.1.4. Germes rencontrés 11
I.1.5. Epidémiologie 12
I.2. Hémoculture 13
I.2.1. Principe 13
I.2.2. Incubation des flacons 14
I.2.3. Prise en charge actuelle des flacons positifs 16
I.2.3.1. Examen direct et ensemencement 16
I.2.3.2. Identification des germes 16
I.2.3.3. Réalisation de l’antibiogramme conventionnel 18
II. OBJECTIFS ET STRATEGIES 20
II.1. Objectif du travail 20
II.2. Stratégie Méthode RAST 20
II.3. Revue de la littérature 21
III. MATERIELS ET METHODES 23
III.1. Matériels et appareillages 23
III.1.1. Matériels 23
III.1.2. Appareillages 25
III.2. Aspects pré-analytiques 25
III.2.1. Vérification de la stérilité de la poche de sang 25
III.2.2. Délai de la positivité des Contrôles de Qualité (CQ) 26
III.2.3. Germes exclus de l’étude 27
III.2.4. Vérification de la conformité des flacons d’hémoculture 27
III.3. Mode opératoire 28
III.3.1. Gestion des flacons d’hémoculture des patients 28
III.3.1.1. Prise en charge des flacons positifs 28
III.3.1.2. Réalisation de l’antibiogramme selon la méthode Kirby Bauer 28
III.3.1.3. Choix des disques antibiotiques 28
III.3.1.4. Lecture des antibiogrammes rapides 29
III.3.1.5. Identification des germes sur culture jeune 29
III.3.1.6. Réalisation des antibiogrammes conventionnels 30
III.3.2. Mise au point de contrôles de qualité interne 31
III.3.2.1. Préparation des contrôles de qualité internes 31
III.3.2.2. Introduction du sang de la poche transfusionnelle dans les flacons d’hémoculture de chaque souche ATCC 32
III.3.2.3. Prise en charge des flacons positifs des contrôles qualité (CQ) 32
IV. RESULTATS ET DISCUSSION 32
IV.1. Résultats 32
IV.1.1. Aspects pré-analytiques 32
IV.1.1.1. Vérification de la stérilité de la poche de sang 32
IV.1.1.2. Délai de la positivité des contrôles de qualité 33
IV.1.1.3. Vérification de la conformité des flacons d’hémoculture 34
IV.1.2. Méthode RAST 34
IV.1.2.1. Prise en charge des flacons positifs 34
IV.1.2.2. Réalisation de l’antibiogramme par la méthode du Kirby Bauer 34
IV.1.2.3. Choix des disques antibiotiques 34
IV.1.2.4. Lecture des antibiogrammes des Contrôles de qualité interne 35
IV.1.2.4.1. Staphylococcus aureus ATCC 25213 35
IV.1.2.4.2. Escherichia coli ATCC 25922 37
IV.1.2.5. Identification des germes sur culture jeune 40
IV.1.2.6. Lecture des antibiogrammes rapides (RAST) des flacons d’hémoculture des patients et comparaison avec la méthode conventionnelle 42
IV.1.2.6.1. Cocci Gram Positif en amas 42
IV.1.2.6.1.1. Lecture des antibiogrammes rapides des Cocci Gram Positif en amas 42
IV.1.2.6.1.2. Comparaison des antibiogrammes RAST et les antibiogrammes conventionnels des Cocci Gram Positif en amas 44
IV.1.2.6.2. Bacilles Gram Négatif 45
IV.1.2.6.2.1. Lecture des antibiogrammes RAST des Bacilles Gram Négatif 45
IV.1.2.6.2.2. Comparaison des antibiogrammes RAST avec les antibiogrammes conventionnels des Bacilles Gram Négatif 47
IV.2. Discussion 48
Conclusion et perspectives 50
Liste des abréviations 51
Bibliographie 53
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79996 EVALUATION D'UNE METHODE D'ANTIBIOGRAMME RAPIDE A PARTIR DES FLACONS D'HEMOCULTURE POSITIVE SELON LES RECOMMANDATIONS DE L'EUCAST [TFE / Mémoire] / Blandine Ngongang Nana, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’étude réalisée porte sur l’évaluation d’une méthode d’antibiogramme rapide à partir des flacons d’hémocultures selon les recommandations du comité européen de l’antibiogramme (EUCAST - European Committee on Antimicrobial Susceptibility). Cette méthode appelée RAST (Rapid Antimicrobial Susceptibilité Testing) a été expérimentée sur une population de 33 hémocultures monomicrobiennes. Cette population était constituée de 18 souches d'Escherichia coli, 9 souches de Staphylococcus aureus, 5 souches de Klebsiella pneumoniae et 1 souche de Pseudomonas aeruginosa.
Pour chaque flacon d'hémoculture positive, un antibiogramme a été réalisé à partir du liquide contenu du flacon. Une lecture des zones d'inhibition a été faite après 4 heures d'incubation puis une autre après 6 heures. Le germe pouvait être soit résistant, sensible ou alors de sensibilité non interprétable. Trois types de résultats ont été distingués après la lecture des antibiogrammes. Les résultats se sont donc catégorisés en « sensible ou résistant », « non interprétables » ou « illisibles ». Par la suite, une comparaison entre la méthode RAST et la méthode de référence a permis d’évaluer la concordance des résultats qui étaient sensibles ou résistants ; les autres résultats étant exclus.
Les résultats des antibiogrammes des Staphylococcus aureus ont présenté 100% de concordance entre les deux méthodes.
Concernant les antibiogrammes des bacilles Gram négatif étudiés, les deux méthodes ont été plus concordantes à la 6e heure qu’à la 4e heure d’incubation de la méthode RAST.
Quelques cas de discordances majeures ont cependant été observés pour les antibiotiques Piperacillin-Tazobactam, Cefotaxime, Ceftazidime, Ciprofloxacin, Gentamicin et Tobramycin. La source probable de cette discordance serait le raccourcissement de la durée d’incubation. Une prolongation de la durée d’incubation à 8 heures tel que recommandé par l’EUCAST pourrait peut-être contribuer à limiter les cas de discordances observés.
Note de contenu : Table des matières
Remerciements 1
Présentation du lieu de stage 6
Introduction 8
I. CONTEXTE GENERAL 9
I.1. Bactériémie 9
I.1.1. Définition 9
I.1.2. Physiopathologie 9
I.1.3. Signes cliniques 11
I.1.4. Germes rencontrés 11
I.1.5. Epidémiologie 12
I.2. Hémoculture 13
I.2.1. Principe 13
I.2.2. Incubation des flacons 14
I.2.3. Prise en charge actuelle des flacons positifs 16
I.2.3.1. Examen direct et ensemencement 16
I.2.3.2. Identification des germes 16
I.2.3.3. Réalisation de l’antibiogramme conventionnel 18
II. OBJECTIFS ET STRATEGIES 20
II.1. Objectif du travail 20
II.2. Stratégie Méthode RAST 20
II.3. Revue de la littérature 21
III. MATERIELS ET METHODES 23
III.1. Matériels et appareillages 23
III.1.1. Matériels 23
III.1.2. Appareillages 25
III.2. Aspects pré-analytiques 25
III.2.1. Vérification de la stérilité de la poche de sang 25
III.2.2. Délai de la positivité des Contrôles de Qualité (CQ) 26
III.2.3. Germes exclus de l’étude 27
III.2.4. Vérification de la conformité des flacons d’hémoculture 27
III.3. Mode opératoire 28
III.3.1. Gestion des flacons d’hémoculture des patients 28
III.3.1.1. Prise en charge des flacons positifs 28
III.3.1.2. Réalisation de l’antibiogramme selon la méthode Kirby Bauer 28
III.3.1.3. Choix des disques antibiotiques 28
III.3.1.4. Lecture des antibiogrammes rapides 29
III.3.1.5. Identification des germes sur culture jeune 29
III.3.1.6. Réalisation des antibiogrammes conventionnels 30
III.3.2. Mise au point de contrôles de qualité interne 31
III.3.2.1. Préparation des contrôles de qualité internes 31
III.3.2.2. Introduction du sang de la poche transfusionnelle dans les flacons d’hémoculture de chaque souche ATCC 32
III.3.2.3. Prise en charge des flacons positifs des contrôles qualité (CQ) 32
IV. RESULTATS ET DISCUSSION 32
IV.1. Résultats 32
IV.1.1. Aspects pré-analytiques 32
IV.1.1.1. Vérification de la stérilité de la poche de sang 32
IV.1.1.2. Délai de la positivité des contrôles de qualité 33
IV.1.1.3. Vérification de la conformité des flacons d’hémoculture 34
IV.1.2. Méthode RAST 34
IV.1.2.1. Prise en charge des flacons positifs 34
IV.1.2.2. Réalisation de l’antibiogramme par la méthode du Kirby Bauer 34
IV.1.2.3. Choix des disques antibiotiques 34
IV.1.2.4. Lecture des antibiogrammes des Contrôles de qualité interne 35
IV.1.2.4.1. Staphylococcus aureus ATCC 25213 35
IV.1.2.4.2. Escherichia coli ATCC 25922 37
IV.1.2.5. Identification des germes sur culture jeune 40
IV.1.2.6. Lecture des antibiogrammes rapides (RAST) des flacons d’hémoculture des patients et comparaison avec la méthode conventionnelle 42
IV.1.2.6.1. Cocci Gram Positif en amas 42
IV.1.2.6.1.1. Lecture des antibiogrammes rapides des Cocci Gram Positif en amas 42
IV.1.2.6.1.2. Comparaison des antibiogrammes RAST et les antibiogrammes conventionnels des Cocci Gram Positif en amas 44
IV.1.2.6.2. Bacilles Gram Négatif 45
IV.1.2.6.2.1. Lecture des antibiogrammes RAST des Bacilles Gram Négatif 45
IV.1.2.6.2.2. Comparaison des antibiogrammes RAST avec les antibiogrammes conventionnels des Bacilles Gram Négatif 47
IV.2. Discussion 48
Conclusion et perspectives 50
Liste des abréviations 51
Bibliographie 53
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79996 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Recherche de cellules néoplasiques dans les liquides de ponction par cytométrie en flux / Fanny Watrin
Titre : Recherche de cellules néoplasiques dans les liquides de ponction par cytométrie en flux Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Fanny Watrin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Laboratoire de biologie clinique Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les liquides de ponctions sont des échantillons communément traités dans les laboratoires de biologie clinique. Se sont des matrices de choix pour la recherche de cellules néoplasiques et donc pour la détection et le diagnostic de cancers. Les cancers agressifs possèdent une tendance à métastaser, c’est-à-dire à a disséminer dans le corps. C’est lorsque ces cellules passeront dans les liquides qu’elle pourront être détectées et caractérisées. La méthode de référence consiste en une analyse cytologique et anatomopathologie du liquide. Celle-ci prend un certain temps et nécessite des techniciens expérimentés. Elle est aussi sujette à l’interprétation du technologue ce qui peut être délicat dans certains cas de figures. La méthode de recherche par cytométrie en flux permet notamment d’accélérer la remise des résultats mais aussi de confirmer ou infirmer le diagnostic rendu en cytologie. L’immunophénotypage des cellules tumorales permet également un traitement plus ciblé et donc plus efficace pour les patients.
La simplicité de la procédure mise en place représente une méthode de choix pour les laboratoires de biologie cliniqueNote de contenu : Table des matières
Introduction générale ............................................................................................................ 6
1. Partie théorique ............................................................................................................. 8
1.1. Les liquides de ponction ............................................................................................. 8
1.1.1. Généralités .............................................................................................................. 8
1.1.2. Composition .......................................................................................................... 11
1.1.3. Types de liquides................................................................................................... 13
1.1.3.1. Le liquide céphalo-rachidien ............................................................................. 13
1.1.3.2. Le liquide péricardique ...................................................................................... 15
1.1.3.3. Le liquide pleural ............................................................................................... 16
1.1.3.4. Le liquide péritonéal.......................................................................................... 17
1.1.3.5. Le liquide synovial ............................................................................................. 18
1.1.3.6. Le lavage broncho-alvéolaire ............................................................................ 19
1.1.4. Cellules retrouvées dans les liquides de ponctions .............................................. 20
1.1.4.1. Les leucocytes matures ..................................................................................... 21
1.1.4.1.1. Les polynucléaires ......................................................................................... 21
1.1.4.1.1.1. Les polynucléaires neutrophiles .................................................................... 21
1.1.4.1.1.2. Les polynucléaires éosinophiles .................................................................... 22
1.1.4.1.1.3. Les polynucléaires basophiles ....................................................................... 22
1.1.4.1.2. Les mononucléaires ....................................................................................... 22
1.1.4.1.2.1. Les lymphocytes ............................................................................................ 22
1.1.4.1.2.2. Les monocytes/macrophages ........................................................................ 23
1.1.4.2. Les cellules mésothéliales ................................................................................. 24
1.1.4.3. Les cellules ciliées .............................................................................................. 25
1.1.4.4. Les cellules néoplasiques .................................................................................. 25
1.2. La cytométrie en flux ................................................................................................ 27
1.2.1. Principe général .................................................................................................... 27
1.2.2. Focalisation hydrodynamique .............................................................................. 28
1.2.3. Excitation lumineuse ............................................................................................. 29
1.2.4. Principe optique .................................................................................................... 31
1.2.5. Détecteur et principe électronique ...................................................................... 33
1.2.6. Données récoltées ................................................................................................ 35
1.2.7. Marquage .............................................................................................................. 36
1.2.7.1. Les colorants fluorescents ................................................................................. 36
1.2.7.2. Les fluorochromes couplés à des anticorps ...................................................... 36
2. Partie pratique : ........................................................................................................... 37
2.2.1. Introduction .......................................................................................................... 37
2.2.2. Matériel et méthodes ........................................................................................... 37
2.2.2.1. Divers ................................................................................................................. 37
2.2.2.2. Appareillage ...................................................................................................... 37
2.2.2.3. Echantillons ....................................................................................................... 37
2.2.2.4. Réactifs : ............................................................................................................ 38
2.2.2.5. Préparation des réactifs .................................................................................... 39
2.2.2.6. Conservation des réactifs .................................................................................. 39
2.2.2.7. Préparation des échantillons ............................................................................ 39
2.2.2.8. Marquage .......................................................................................................... 41
2.2.2.9. Technique Lyse-Wash........................................................................................ 43
2.2.2.10. Réglages du cytomètre ...................................................................................... 43
2.2.2.10.1. Threshold ....................................................................................................... 43
2.2.2.10.2. Compensations .............................................................................................. 43
2.2.2.10.3. PMT (voltage) ................................................................................................ 44
2.2.2.11. Stratégie de « gating » ...................................................................................... 44
2.2.3. Résultats................................................................................................................ 45
2.2.3.1. Analyse d’un échantillon non pathologique ..................................................... 46
2.2.3.1.1. Sélection des singulets .................................................................................. 46
2.2.3.1.2. Exclusion des débris....................................................................................... 46
2.2.3.1.3. Sélection des cellules viables......................................................................... 46
2.2.3.1.4. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 47
2.2.3.1.5. Analyse des sous populations leucocytaires ................................................. 48
2.2.3.1.6. Analyse des sous population lymphocytaires ............................................... 49
2.2.3.1.7. Analyse des cellules extra-hématologiques .................................................. 49
2.2.3.1.8. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .............................. 50
2.2.3.1.9. Evaluation de la stabilité du flux lors de la phase d’acquisition des
données........................ ......................................................................................................... 50
2.2.3.1.10. Hiérarchie des gates et pourcentages ........................................................... 50
2.2.3.2. Analyse d’un échantillon pathologique............................................................. 51
2.2.3.2.1. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 51
2.2.3.2.2. Analyse des sous populations leucocytaires et lymphocytaires ................... 51
2.2.3.3. Analyse des cellules extra-hématologiques ...................................................... 52
2.2.3.4. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .................................. 52
2.2.3.5. Hiérarchie des gates et pourcentages............................................................... 53
2.2.3.6. Cas particuliers .................................................................................................. 53
2.2.3.6.1. Neutrophilie ................................................................................................... 54
2.2.3.6.2. Hyper lymphocytose ...................................................................................... 54
2.2.3.6.3. Hyper monocytose ........................................................................................ 54
2.2.3.6.4. Mortalité importante..................................................................................... 55
2.2.3.6.5. Présence de cellules mésothéliales ............................................................... 55
2.2.4. Discussion ............................................................................................................. 56
2.2.5. Conclusion ............................................................................................................. 58
Bibliographie ........................................................................................................................ 59
Liste des figures ................................................................................................................... 64
Liste des tableaux ................................................................................................................ 66
Abréviations......................................................................................................................... 67
Table des annexes ............................................................................................................... 68
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105749 Recherche de cellules néoplasiques dans les liquides de ponction par cytométrie en flux [TFE / Mémoire] / Fanny Watrin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Laboratoire de biologie clinique Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les liquides de ponctions sont des échantillons communément traités dans les laboratoires de biologie clinique. Se sont des matrices de choix pour la recherche de cellules néoplasiques et donc pour la détection et le diagnostic de cancers. Les cancers agressifs possèdent une tendance à métastaser, c’est-à-dire à a disséminer dans le corps. C’est lorsque ces cellules passeront dans les liquides qu’elle pourront être détectées et caractérisées. La méthode de référence consiste en une analyse cytologique et anatomopathologie du liquide. Celle-ci prend un certain temps et nécessite des techniciens expérimentés. Elle est aussi sujette à l’interprétation du technologue ce qui peut être délicat dans certains cas de figures. La méthode de recherche par cytométrie en flux permet notamment d’accélérer la remise des résultats mais aussi de confirmer ou infirmer le diagnostic rendu en cytologie. L’immunophénotypage des cellules tumorales permet également un traitement plus ciblé et donc plus efficace pour les patients.
La simplicité de la procédure mise en place représente une méthode de choix pour les laboratoires de biologie cliniqueNote de contenu : Table des matières
Introduction générale ............................................................................................................ 6
1. Partie théorique ............................................................................................................. 8
1.1. Les liquides de ponction ............................................................................................. 8
1.1.1. Généralités .............................................................................................................. 8
1.1.2. Composition .......................................................................................................... 11
1.1.3. Types de liquides................................................................................................... 13
1.1.3.1. Le liquide céphalo-rachidien ............................................................................. 13
1.1.3.2. Le liquide péricardique ...................................................................................... 15
1.1.3.3. Le liquide pleural ............................................................................................... 16
1.1.3.4. Le liquide péritonéal.......................................................................................... 17
1.1.3.5. Le liquide synovial ............................................................................................. 18
1.1.3.6. Le lavage broncho-alvéolaire ............................................................................ 19
1.1.4. Cellules retrouvées dans les liquides de ponctions .............................................. 20
1.1.4.1. Les leucocytes matures ..................................................................................... 21
1.1.4.1.1. Les polynucléaires ......................................................................................... 21
1.1.4.1.1.1. Les polynucléaires neutrophiles .................................................................... 21
1.1.4.1.1.2. Les polynucléaires éosinophiles .................................................................... 22
1.1.4.1.1.3. Les polynucléaires basophiles ....................................................................... 22
1.1.4.1.2. Les mononucléaires ....................................................................................... 22
1.1.4.1.2.1. Les lymphocytes ............................................................................................ 22
1.1.4.1.2.2. Les monocytes/macrophages ........................................................................ 23
1.1.4.2. Les cellules mésothéliales ................................................................................. 24
1.1.4.3. Les cellules ciliées .............................................................................................. 25
1.1.4.4. Les cellules néoplasiques .................................................................................. 25
1.2. La cytométrie en flux ................................................................................................ 27
1.2.1. Principe général .................................................................................................... 27
1.2.2. Focalisation hydrodynamique .............................................................................. 28
1.2.3. Excitation lumineuse ............................................................................................. 29
1.2.4. Principe optique .................................................................................................... 31
1.2.5. Détecteur et principe électronique ...................................................................... 33
1.2.6. Données récoltées ................................................................................................ 35
1.2.7. Marquage .............................................................................................................. 36
1.2.7.1. Les colorants fluorescents ................................................................................. 36
1.2.7.2. Les fluorochromes couplés à des anticorps ...................................................... 36
2. Partie pratique : ........................................................................................................... 37
2.2.1. Introduction .......................................................................................................... 37
2.2.2. Matériel et méthodes ........................................................................................... 37
2.2.2.1. Divers ................................................................................................................. 37
2.2.2.2. Appareillage ...................................................................................................... 37
2.2.2.3. Echantillons ....................................................................................................... 37
2.2.2.4. Réactifs : ............................................................................................................ 38
2.2.2.5. Préparation des réactifs .................................................................................... 39
2.2.2.6. Conservation des réactifs .................................................................................. 39
2.2.2.7. Préparation des échantillons ............................................................................ 39
2.2.2.8. Marquage .......................................................................................................... 41
2.2.2.9. Technique Lyse-Wash........................................................................................ 43
2.2.2.10. Réglages du cytomètre ...................................................................................... 43
2.2.2.10.1. Threshold ....................................................................................................... 43
2.2.2.10.2. Compensations .............................................................................................. 43
2.2.2.10.3. PMT (voltage) ................................................................................................ 44
2.2.2.11. Stratégie de « gating » ...................................................................................... 44
2.2.3. Résultats................................................................................................................ 45
2.2.3.1. Analyse d’un échantillon non pathologique ..................................................... 46
2.2.3.1.1. Sélection des singulets .................................................................................. 46
2.2.3.1.2. Exclusion des débris....................................................................................... 46
2.2.3.1.3. Sélection des cellules viables......................................................................... 46
2.2.3.1.4. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 47
2.2.3.1.5. Analyse des sous populations leucocytaires ................................................. 48
2.2.3.1.6. Analyse des sous population lymphocytaires ............................................... 49
2.2.3.1.7. Analyse des cellules extra-hématologiques .................................................. 49
2.2.3.1.8. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .............................. 50
2.2.3.1.9. Evaluation de la stabilité du flux lors de la phase d’acquisition des
données........................ ......................................................................................................... 50
2.2.3.1.10. Hiérarchie des gates et pourcentages ........................................................... 50
2.2.3.2. Analyse d’un échantillon pathologique............................................................. 51
2.2.3.2.1. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 51
2.2.3.2.2. Analyse des sous populations leucocytaires et lymphocytaires ................... 51
2.2.3.3. Analyse des cellules extra-hématologiques ...................................................... 52
2.2.3.4. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .................................. 52
2.2.3.5. Hiérarchie des gates et pourcentages............................................................... 53
2.2.3.6. Cas particuliers .................................................................................................. 53
2.2.3.6.1. Neutrophilie ................................................................................................... 54
2.2.3.6.2. Hyper lymphocytose ...................................................................................... 54
2.2.3.6.3. Hyper monocytose ........................................................................................ 54
2.2.3.6.4. Mortalité importante..................................................................................... 55
2.2.3.6.5. Présence de cellules mésothéliales ............................................................... 55
2.2.4. Discussion ............................................................................................................. 56
2.2.5. Conclusion ............................................................................................................. 58
Bibliographie ........................................................................................................................ 59
Liste des figures ................................................................................................................... 64
Liste des tableaux ................................................................................................................ 66
Abréviations......................................................................................................................... 67
Table des annexes ............................................................................................................... 68
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105749 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire