Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Attention, votre centre de documentation sera fermι du 27/04 au 12/05 inclus.
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Auteur Jιrιmy SAFFRE |
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VALIDATION ET ΙTUDE COMPARATIVE DE TROIS MΙTHODES DE DOSAGE DUN MARQUEUR INFLAMMATOIRE DE LINTESTIN : LA CALPROTECTINE. / Jιrιmy SAFFRE
Titre : VALIDATION ET ΙTUDE COMPARATIVE DE TROIS MΙTHODES DE DOSAGE DUN MARQUEUR INFLAMMATOIRE DE LINTESTIN : LA CALPROTECTINE. Type de document : TFE / Mιmoire Auteurs : Jιrιmy SAFFRE, Auteur Annιe de publication : 2015 Note gιnιrale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Franηais (fre) Mots-clιs : biologie mιdicale Index. dιcimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Rιsumι : Rιsumι
Protιine inflammatoire, la calprotectine doit son nom au fait quelle peut se lier au calcium et au zinc. Elle est aussi connue sous le nom de protιine leucocyte L1 et S100A8/S100A9. Elle est synthιtisιe par les monocytes et les macrophages et est localisιe principalement dans la membrane cytoplasmique. On la retrouve ιgalement au niveau du cytosol des polynuclιaires neutrophiles. Une fois libιrιe dans le milieu extracellulaire, on peut la retrouver dans le plasma, lurine, la salive, les sιcrιtions intestinales et les selles. Une calprotectine fιcale ιlevιe constitue une indication pour la rιalisation d'une endoscopie digestive ΰ la recherche d'une maladie inflammatoire ou d'une autre affection organique.
ΐ ce jour, la calprotectine fιcale est reconnue comme un marqueur stable, non invasif et spιcifique de linflammation intestinale. Cette protιine possθde une bonne sensibilitι diagnostique pour sιparer les maladies inflammatoires chroniques des maladies fonctionnelles de l'intestin. De plus, celle-ci est bien corrιlιe au degrι de la maladie et peut κtre utilisι dans le suivi de la pathologie. Afin de doser cette protιine, une sιrie de kits commerciaux sont proposιs par diffιrentes firmes.
Ce travail de fin dιtude consiste ΰ comparer et ΰ valider une mιthode de dosage de la calprotectine parmi trois kits danalyse proposιs par deux firmes diffιrentes : une mιthode ELISA ΰ substrat fluorogθne proposιe par THERMOFISHER, une mιthode ELISA ΰ substrat chromogθne proposιe par BMD et une mιthode immunochromatographique proposιe ιgalement par BMD. Le contenu de ce travail a pour objectif dιvaluer les diffιrents kits en testant diffιrents paramθtres chacun ΰ savoir : la reproductibilitι et la rιpιtabilitι, la corrιlation entre les diffιrentes mιthodes et entre les diffιrentes techniques dextraction proposιes par les firmes, les risques de contamination entre ιchantillon, linterfιrence due ΰ la prιsence de sang dans les ιchantillons et la praticabilitι des kits.
Les rιsultats obtenus nous ont permis de dιmontrer que quelle que soit la technique, il ny a pas de contamination dans les mesures dun ιchantillon ΰ lautre et que la prιsence de sang dans les ιchantillons entraine une augmentation du taux de calprotectine qui peut dans certains cas donner un « faux positif ». Par contre, exceptι pour le test de la reproductibilitι, les mesures effectuιes pour la rιpιtabilitι, les corrιlations et la prιcision des extractions prι analytiques, cest la mιthode THERMOFISHER qui lemporte. Cette mιthode est une technique ELISA par mιthode fluorogθne et qui propose deux mιthodes dextraction. Quelle que soit cette mιthode, il existe une bonne corrιlation entre les rιsultats obtenus.
Grβce ΰ cette ιtude, nous avons pu dιfinir un choix pour une mιthode de dosage de la calprotectine fiable et pour lequel le rapport qualitι/prix est largement acceptable.Note de contenu : Table des matiθres
Remerciements
Liste des abrιviations
Lieu de stage . 8 Description du projet .. 9 Introduction . .. 10 I. Contexte gιnιral .. .. .. 12 1. La Calprotectine . 12 1.1. Structure et origine .. 12 1.2. Principe et intιrκt du dosage 13 1.3. Etapes prι analytiques .. . 14 1.4. Limite des techniques 14 2. Maladies associιes 16 2.1. IBS ou SCI 16 2.2. IBD ou MICI 17 2.2.1. Maladie de Crohn . 17 2.2.2. Rectocolite ulcιro hιmorragique . ... 18 3. Mιthode de dosage de la calprotectine . . 19 3.1. Mιthode ELISA 19 3.2. Mιthode immunochromatographie 20 4. Outils statistique . 21 4.1. Coefficient de variation . 21 4.2. La corrιlation 22 II. Matιriels et mιthodes .. 23 1. Extraction prι-analytique . 23 2. Principe des mιthodes de dosage 26 2.1. ELISA par substrats fluorogθne 26 2.2. ELISA par substrats chromogθne 27 2.3. Immunochromatographie par substrats chromogθne . 28
III. Rιsultats et discussion 29 1. Condition et choix des ιchantillons de selles 29 2. Test des extractions . 30 2.1. ELiA Calprotectine 2 30 2.1.1. Extraction de Roche 30 2.1.2. Extraction rapide en tube 31 2.2. Calprest 31 2.3. Conclusion du test des extractions 32 3. Test de reproductibilitι . 33 3.1. ELiA Calprotectine 2 .. 33 3.2. Calprest . 34 3.3. Conclusion de la reproductibilitι . 34 4. Test de rιpιtabilitι . 35 4.1. ELiA Calprotectine 2 .. . 35 4.1.1. Extraction de Roche .... 35 4.1.2. Extraction rapide en tube 36 4.2. Calprest 36 4.3. Conclusion de la rιpιtabilitι .. 37 5. Test de corrιlation . ..38 5.1. THERMOFISHER . .39 5.1.1. ELiA Calprotectine vs ELiA Calprotectine 2 39 5.1.2. Extraction de « Roche » VS extraction rapide en tube 40 5.2. BMD 41 5.2.1. CalFast vs Calprest . 41 5.3. Conclusion de la corrιlation ..41 6. Test de contamination 42 6.1. ELiA Calprotectine 2 .42 6.2. Calprest 43 6.3. Conclusion du test de contamination 43 7. Test du sang occulte 44 7.1. ELiA Calprotectine 2 . 45 7.1.1. Extraction de Roche 45 7.1.2. Extraction rapide en tube 45 7.2. Calprest 46 7.3. Conclusion du test du sang occulte .. 46 8. Praticabilitι des kits 47 Tableau rιcapitulatif des rιsultats . 48 Conclusion gιnιrale .. 49 Liste des figures 50 Bibliographie . 51Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65063 VALIDATION ET ΙTUDE COMPARATIVE DE TROIS MΙTHODES DE DOSAGE DUN MARQUEUR INFLAMMATOIRE DE LINTESTIN : LA CALPROTECTINE. [TFE / Mιmoire] / Jιrιmy SAFFRE, Auteur . - 2015.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Franηais (fre)
Mots-clιs : biologie mιdicale Index. dιcimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Rιsumι : Rιsumι
Protιine inflammatoire, la calprotectine doit son nom au fait quelle peut se lier au calcium et au zinc. Elle est aussi connue sous le nom de protιine leucocyte L1 et S100A8/S100A9. Elle est synthιtisιe par les monocytes et les macrophages et est localisιe principalement dans la membrane cytoplasmique. On la retrouve ιgalement au niveau du cytosol des polynuclιaires neutrophiles. Une fois libιrιe dans le milieu extracellulaire, on peut la retrouver dans le plasma, lurine, la salive, les sιcrιtions intestinales et les selles. Une calprotectine fιcale ιlevιe constitue une indication pour la rιalisation d'une endoscopie digestive ΰ la recherche d'une maladie inflammatoire ou d'une autre affection organique.
ΐ ce jour, la calprotectine fιcale est reconnue comme un marqueur stable, non invasif et spιcifique de linflammation intestinale. Cette protιine possθde une bonne sensibilitι diagnostique pour sιparer les maladies inflammatoires chroniques des maladies fonctionnelles de l'intestin. De plus, celle-ci est bien corrιlιe au degrι de la maladie et peut κtre utilisι dans le suivi de la pathologie. Afin de doser cette protιine, une sιrie de kits commerciaux sont proposιs par diffιrentes firmes.
Ce travail de fin dιtude consiste ΰ comparer et ΰ valider une mιthode de dosage de la calprotectine parmi trois kits danalyse proposιs par deux firmes diffιrentes : une mιthode ELISA ΰ substrat fluorogθne proposιe par THERMOFISHER, une mιthode ELISA ΰ substrat chromogθne proposιe par BMD et une mιthode immunochromatographique proposιe ιgalement par BMD. Le contenu de ce travail a pour objectif dιvaluer les diffιrents kits en testant diffιrents paramθtres chacun ΰ savoir : la reproductibilitι et la rιpιtabilitι, la corrιlation entre les diffιrentes mιthodes et entre les diffιrentes techniques dextraction proposιes par les firmes, les risques de contamination entre ιchantillon, linterfιrence due ΰ la prιsence de sang dans les ιchantillons et la praticabilitι des kits.
Les rιsultats obtenus nous ont permis de dιmontrer que quelle que soit la technique, il ny a pas de contamination dans les mesures dun ιchantillon ΰ lautre et que la prιsence de sang dans les ιchantillons entraine une augmentation du taux de calprotectine qui peut dans certains cas donner un « faux positif ». Par contre, exceptι pour le test de la reproductibilitι, les mesures effectuιes pour la rιpιtabilitι, les corrιlations et la prιcision des extractions prι analytiques, cest la mιthode THERMOFISHER qui lemporte. Cette mιthode est une technique ELISA par mιthode fluorogθne et qui propose deux mιthodes dextraction. Quelle que soit cette mιthode, il existe une bonne corrιlation entre les rιsultats obtenus.
Grβce ΰ cette ιtude, nous avons pu dιfinir un choix pour une mιthode de dosage de la calprotectine fiable et pour lequel le rapport qualitι/prix est largement acceptable.Note de contenu : Table des matiθres
Remerciements
Liste des abrιviations
Lieu de stage . 8 Description du projet .. 9 Introduction . .. 10 I. Contexte gιnιral .. .. .. 12 1. La Calprotectine . 12 1.1. Structure et origine .. 12 1.2. Principe et intιrκt du dosage 13 1.3. Etapes prι analytiques .. . 14 1.4. Limite des techniques 14 2. Maladies associιes 16 2.1. IBS ou SCI 16 2.2. IBD ou MICI 17 2.2.1. Maladie de Crohn . 17 2.2.2. Rectocolite ulcιro hιmorragique . ... 18 3. Mιthode de dosage de la calprotectine . . 19 3.1. Mιthode ELISA 19 3.2. Mιthode immunochromatographie 20 4. Outils statistique . 21 4.1. Coefficient de variation . 21 4.2. La corrιlation 22 II. Matιriels et mιthodes .. 23 1. Extraction prι-analytique . 23 2. Principe des mιthodes de dosage 26 2.1. ELISA par substrats fluorogθne 26 2.2. ELISA par substrats chromogθne 27 2.3. Immunochromatographie par substrats chromogθne . 28
III. Rιsultats et discussion 29 1. Condition et choix des ιchantillons de selles 29 2. Test des extractions . 30 2.1. ELiA Calprotectine 2 30 2.1.1. Extraction de Roche 30 2.1.2. Extraction rapide en tube 31 2.2. Calprest 31 2.3. Conclusion du test des extractions 32 3. Test de reproductibilitι . 33 3.1. ELiA Calprotectine 2 .. 33 3.2. Calprest . 34 3.3. Conclusion de la reproductibilitι . 34 4. Test de rιpιtabilitι . 35 4.1. ELiA Calprotectine 2 .. . 35 4.1.1. Extraction de Roche .... 35 4.1.2. Extraction rapide en tube 36 4.2. Calprest 36 4.3. Conclusion de la rιpιtabilitι .. 37 5. Test de corrιlation . ..38 5.1. THERMOFISHER . .39 5.1.1. ELiA Calprotectine vs ELiA Calprotectine 2 39 5.1.2. Extraction de « Roche » VS extraction rapide en tube 40 5.2. BMD 41 5.2.1. CalFast vs Calprest . 41 5.3. Conclusion de la corrιlation ..41 6. Test de contamination 42 6.1. ELiA Calprotectine 2 .42 6.2. Calprest 43 6.3. Conclusion du test de contamination 43 7. Test du sang occulte 44 7.1. ELiA Calprotectine 2 . 45 7.1.1. Extraction de Roche 45 7.1.2. Extraction rapide en tube 45 7.2. Calprest 46 7.3. Conclusion du test du sang occulte .. 46 8. Praticabilitι des kits 47 Tableau rιcapitulatif des rιsultats . 48 Conclusion gιnιrale .. 49 Liste des figures 50 Bibliographie . 51Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65063 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilitι aucun exemplaire