Centre de Documentation Campus Montignies
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Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation fermera à 17h30 ce mardi 4 juin.
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Auteur Manuel Constant |
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Les infections virales respiratoires en début de vie : Suivi de l'infection et de la vaccination et impact de la supplémentation maternelle en probiotiques / Zoé Leloup
Titre : Les infections virales respiratoires en début de vie : Suivi de l'infection et de la vaccination et impact de la supplémentation maternelle en probiotiques Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Zoé Leloup ; Véronique Flamand, Promoteur du mémoire ; Manuel Constant, Promoteur du mémoire Editeur : Montignies-sur-Sambre : Haute Ecole Louvain en Hainaut Année de publication : 2023 Importance : 67p. Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur . Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Au cours des premiers stades de la vie d'un nouveau-né, son système immunitaire est en plein développement. Les protections fournies par la mère, que ce soit à travers le placenta ou l'allaitement, commencent à diminuer, et la capacité de défense du nouveau-né n'est pas encore pleinement développée. Le premier objectif de ce travail de fin d'études est de mettre au point un modèle d'infection des nouveau-nés murins par le Pneumovirus et d'étudier les effets de la supplémentation maternelle en probiotiques (Lactobacillus rhamnosus et Bifidobacterium lactis) sur les nouveau-nés infectés. Pour ce faire, nous mesurons la charge virale dans les poumons des nouveau-nés prélevés à l'aide de la technique de RT-qPCR. Cependant, les résultats obtenus ne sont pas conformes à nos attentes. En effet, les deux souches de probiotiques ont des effets opposés : l'une augmente la charge virale dans les poumons, tandis que l'autre la diminue. Pour de futures expériences, il serait intéressant d'adapter le modèle afin de mesurer la charge virale dans le nez des nouveau-nés infectés plutôt que dans les poumons.
Le deuxième objectif de notre étude est de développer un vaccin à partir d'une protéine de l'Influenza virus A, connue sous le nom d'hémagglutinine. Nous souhaitons comparer la réponse humorale induite par ce vaccin "maison" avec celle obtenue par la vaccination avec le vaccin commercial VaxigripTetra®. Afin de réaliser cette comparaison, nous avons mis au point un test ELISA pour doser les immunoglobulines (IgG1 et Ig totales) présentes dans le sérum des souris vaccinées avec l'un des deux vaccins. Cependant, la comparaison s'avère complexe. En raison des difficultés liées à l'établissement d'un standard commun pour les deux types d'immunoglobulines, seules les IgG1 ont été dosées pour le vaccin "maison", tandis que les Ig totales ont été mesurées pour VaxigripTetra®. Dans de futures expériences, la mise en place d'un standard adéquat permettra de doser les Ig totales dans le sérum des souris vaccinées avec le vaccin "maison". Ces résultats initiaux soulignent l'importance de poursuivre les recherches pour améliorer notre compréhension des mécanismes d'infection et de protection immunitaire chez les nouveau-nés. Les ajustements et les nouvelles stratégies développées dans le cadre de ce travail offrent des perspectives passionnantes pour la prévention et le traitement des infections respiratoires chez les nourrissonsPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=114754 Les infections virales respiratoires en début de vie : Suivi de l'infection et de la vaccination et impact de la supplémentation maternelle en probiotiques [TFE / Mémoire] / Zoé Leloup ; Véronique Flamand, Promoteur du mémoire ; Manuel Constant, Promoteur du mémoire . - Montignies-sur-Sambre : Haute Ecole Louvain en Hainaut, 2023 . - 67p.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur .
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Au cours des premiers stades de la vie d'un nouveau-né, son système immunitaire est en plein développement. Les protections fournies par la mère, que ce soit à travers le placenta ou l'allaitement, commencent à diminuer, et la capacité de défense du nouveau-né n'est pas encore pleinement développée. Le premier objectif de ce travail de fin d'études est de mettre au point un modèle d'infection des nouveau-nés murins par le Pneumovirus et d'étudier les effets de la supplémentation maternelle en probiotiques (Lactobacillus rhamnosus et Bifidobacterium lactis) sur les nouveau-nés infectés. Pour ce faire, nous mesurons la charge virale dans les poumons des nouveau-nés prélevés à l'aide de la technique de RT-qPCR. Cependant, les résultats obtenus ne sont pas conformes à nos attentes. En effet, les deux souches de probiotiques ont des effets opposés : l'une augmente la charge virale dans les poumons, tandis que l'autre la diminue. Pour de futures expériences, il serait intéressant d'adapter le modèle afin de mesurer la charge virale dans le nez des nouveau-nés infectés plutôt que dans les poumons.
Le deuxième objectif de notre étude est de développer un vaccin à partir d'une protéine de l'Influenza virus A, connue sous le nom d'hémagglutinine. Nous souhaitons comparer la réponse humorale induite par ce vaccin "maison" avec celle obtenue par la vaccination avec le vaccin commercial VaxigripTetra®. Afin de réaliser cette comparaison, nous avons mis au point un test ELISA pour doser les immunoglobulines (IgG1 et Ig totales) présentes dans le sérum des souris vaccinées avec l'un des deux vaccins. Cependant, la comparaison s'avère complexe. En raison des difficultés liées à l'établissement d'un standard commun pour les deux types d'immunoglobulines, seules les IgG1 ont été dosées pour le vaccin "maison", tandis que les Ig totales ont été mesurées pour VaxigripTetra®. Dans de futures expériences, la mise en place d'un standard adéquat permettra de doser les Ig totales dans le sérum des souris vaccinées avec le vaccin "maison". Ces résultats initiaux soulignent l'importance de poursuivre les recherches pour améliorer notre compréhension des mécanismes d'infection et de protection immunitaire chez les nouveau-nés. Les ajustements et les nouvelles stratégies développées dans le cadre de ce travail offrent des perspectives passionnantes pour la prévention et le traitement des infections respiratoires chez les nourrissonsPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=114754 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Séquençage et qPCR : comparaison de deux méthodes pour le développement et l’optimisation de tests génétiques / Maxime Kerff
Titre : Séquençage et qPCR : comparaison de deux méthodes pour le développement et l’optimisation de tests génétiques Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Maxime Kerff, Auteur ; Manuel Constant, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie Année de publication : 2023 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Progenus Index. décimale : TFE Technologie animalière TFE Technologie animalière Résumé : Le séquençage capillaire et la PCR quantitative (qPCR) sont deux méthodes utilisées au sein du laboratoire Progenus de Gembloux pour dépister des mutations génétiques. Dans le cadre de ce TFE, ces deux méthodes sont comparées à travers le développement d’un test par séquençage et l’optimisation d’un autre test par qPCR. Le premier test vise à dépister une mutation chez le Maine Coon causant des troubles de la coagulation. De nombreuses étapes sont nécessaires pour parvenir à développer un test efficace avec la méthode du séquençage. Chacune d’entre elles est importante pour vérifier la bonne amplification du gène concerné, sa purification et enfin son séquençage afin d’analyser la séquence obtenue et rendre un verdict quant à l’état génétique de l’animal : sain, porteur ou atteint par la pathologie causée. Les réactifs nécessaires étant utilisés pour d’autres tests, la mise en place d’un développement par cette méthode représente un coût moindre pour l’entreprise.
L’optimisation d’un test au moyen de la qPCR est, quant à elle, beaucoup plus rapide. Le gène pour lequel un test est optimisé est ICHGR, un gène présent chez le Golden Retriever qui, lorsqu’il est défectueux, peut occasionner des problèmes d’ordre cutané. La qPCR apportant des résultats interprétables en moins de deux heures, elle semble idéale pour le dépistage d’échantillons. Le point noir de cette méthode réside dans le coût élevé de ses réactifs, principalement les sondes nécessaires à la récupération d’un signal faisant office de résultats.
Entre un temps d’attente plus long, mais un faible coût et une rapidité contrebalancée par un coût élevé, il peut être difficile de choisir. Il est donc important d’adapter le choix de la méthode à la réalité du terrain. Un séquençage peut s’effectuer sur des petites quantités d’échantillons demandant la même analyse puisque cette méthode, paraissant longue, possède de nombreux temps d’attente pouvant être utilisé pour réaliser des tâches annexes.
De plus, son faible coût est un argument de poids pour l’entreprise. La seconde méthode d’analyse, elle, est plutôt réservée aux analyses reprenant un
nombre conséquent d’échantillons pouvant aller jusqu’à plusieurs centaines. Ainsi, le coût important des réactifs sera équilibré par un nombre de résultats également élevé. La somme récupérée auprès des clients rapidement satisfaits remboursera ainsi les frais occasionnés.
Ainsi, ce TFE présente en détails le déroulé des tests développés et optimisés à l’aide de ces méthodes ainsi que leurs caractéristiques, avantages et inconvénients respectifs.Note de contenu : Table des matières
Introduction ...........................................................................................................................7
Contexte .............................................................................................................................7
Notions théoriques .............................................................................................................8
Composition de l’ADN .....................................................................................................8
Modifications de l’ADN .................................................................................................10
Polymer Chain Reaction « PCR » ...................................................................................11
PCR en temps réel « qPCR » ..........................................................................................13
Séquençage par la méthode de Sanger sur capillaire ....................................................16
Electrophorèse sur gel d’agarose ..................................................................................18
Matériel et méthodes ...........................................................................................................20
Extraction de l’ADN d’un échantillon ................................................................................20
Matériel ........................................................................................................................20
Protocole pour les échantillons sanguins ......................................................................20
Protocole pour les écouvillons salivaires .......................................................................21
Préparation de l’échantillon pour la PCR ...........................................................................21
Matériel ........................................................................................................................21
Protocole ......................................................................................................................22
Polymer Chain Reaction (PCR) ..........................................................................................22
Matériel ........................................................................................................................22
Protocole ......................................................................................................................22
Préparation d’un gel d’agarose .........................................................................................22
Matériel ........................................................................................................................22
Protocole ......................................................................................................................23
Purification de bandes de gel d’agarose ............................................................................24
Matériel ........................................................................................................................24
Protocole ......................................................................................................................24
Quantification d’ADN présent dans les échantillons ..........................................................24
Matériel ........................................................................................................................25
Protocole ......................................................................................................................25
Séquençage ......................................................................................................................25
Résultats et discussion..........................................................................................................26
Développement du test F11 par PCR et séquençage sur capillaire ....................................26
6
Optimisation du test ICHGR par la qPCR ...........................................................................34
Comparaison des méthodes .............................................................................................42
Réactifs .........................................................................................................................42
Méthode d’analyse .......................................................................................................42
Spécificités ....................................................................................................................43
Sensibilité .....................................................................................................................43
Temps ...........................................................................................................................44
Coût financier ...............................................................................................................44
Applications ..................................................................................................................44
Conclusion ............................................................................................................................45
Bibliographie ........................................................................................................................47
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=112610 Séquençage et qPCR : comparaison de deux méthodes pour le développement et l’optimisation de tests génétiques [TFE / Mémoire] / Maxime Kerff, Auteur ; Manuel Constant, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2023.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : Progenus Index. décimale : TFE Technologie animalière TFE Technologie animalière Résumé : Le séquençage capillaire et la PCR quantitative (qPCR) sont deux méthodes utilisées au sein du laboratoire Progenus de Gembloux pour dépister des mutations génétiques. Dans le cadre de ce TFE, ces deux méthodes sont comparées à travers le développement d’un test par séquençage et l’optimisation d’un autre test par qPCR. Le premier test vise à dépister une mutation chez le Maine Coon causant des troubles de la coagulation. De nombreuses étapes sont nécessaires pour parvenir à développer un test efficace avec la méthode du séquençage. Chacune d’entre elles est importante pour vérifier la bonne amplification du gène concerné, sa purification et enfin son séquençage afin d’analyser la séquence obtenue et rendre un verdict quant à l’état génétique de l’animal : sain, porteur ou atteint par la pathologie causée. Les réactifs nécessaires étant utilisés pour d’autres tests, la mise en place d’un développement par cette méthode représente un coût moindre pour l’entreprise.
L’optimisation d’un test au moyen de la qPCR est, quant à elle, beaucoup plus rapide. Le gène pour lequel un test est optimisé est ICHGR, un gène présent chez le Golden Retriever qui, lorsqu’il est défectueux, peut occasionner des problèmes d’ordre cutané. La qPCR apportant des résultats interprétables en moins de deux heures, elle semble idéale pour le dépistage d’échantillons. Le point noir de cette méthode réside dans le coût élevé de ses réactifs, principalement les sondes nécessaires à la récupération d’un signal faisant office de résultats.
Entre un temps d’attente plus long, mais un faible coût et une rapidité contrebalancée par un coût élevé, il peut être difficile de choisir. Il est donc important d’adapter le choix de la méthode à la réalité du terrain. Un séquençage peut s’effectuer sur des petites quantités d’échantillons demandant la même analyse puisque cette méthode, paraissant longue, possède de nombreux temps d’attente pouvant être utilisé pour réaliser des tâches annexes.
De plus, son faible coût est un argument de poids pour l’entreprise. La seconde méthode d’analyse, elle, est plutôt réservée aux analyses reprenant un
nombre conséquent d’échantillons pouvant aller jusqu’à plusieurs centaines. Ainsi, le coût important des réactifs sera équilibré par un nombre de résultats également élevé. La somme récupérée auprès des clients rapidement satisfaits remboursera ainsi les frais occasionnés.
Ainsi, ce TFE présente en détails le déroulé des tests développés et optimisés à l’aide de ces méthodes ainsi que leurs caractéristiques, avantages et inconvénients respectifs.Note de contenu : Table des matières
Introduction ...........................................................................................................................7
Contexte .............................................................................................................................7
Notions théoriques .............................................................................................................8
Composition de l’ADN .....................................................................................................8
Modifications de l’ADN .................................................................................................10
Polymer Chain Reaction « PCR » ...................................................................................11
PCR en temps réel « qPCR » ..........................................................................................13
Séquençage par la méthode de Sanger sur capillaire ....................................................16
Electrophorèse sur gel d’agarose ..................................................................................18
Matériel et méthodes ...........................................................................................................20
Extraction de l’ADN d’un échantillon ................................................................................20
Matériel ........................................................................................................................20
Protocole pour les échantillons sanguins ......................................................................20
Protocole pour les écouvillons salivaires .......................................................................21
Préparation de l’échantillon pour la PCR ...........................................................................21
Matériel ........................................................................................................................21
Protocole ......................................................................................................................22
Polymer Chain Reaction (PCR) ..........................................................................................22
Matériel ........................................................................................................................22
Protocole ......................................................................................................................22
Préparation d’un gel d’agarose .........................................................................................22
Matériel ........................................................................................................................22
Protocole ......................................................................................................................23
Purification de bandes de gel d’agarose ............................................................................24
Matériel ........................................................................................................................24
Protocole ......................................................................................................................24
Quantification d’ADN présent dans les échantillons ..........................................................24
Matériel ........................................................................................................................25
Protocole ......................................................................................................................25
Séquençage ......................................................................................................................25
Résultats et discussion..........................................................................................................26
Développement du test F11 par PCR et séquençage sur capillaire ....................................26
6
Optimisation du test ICHGR par la qPCR ...........................................................................34
Comparaison des méthodes .............................................................................................42
Réactifs .........................................................................................................................42
Méthode d’analyse .......................................................................................................42
Spécificités ....................................................................................................................43
Sensibilité .....................................................................................................................43
Temps ...........................................................................................................................44
Coût financier ...............................................................................................................44
Applications ..................................................................................................................44
Conclusion ............................................................................................................................45
Bibliographie ........................................................................................................................47
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=112610 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire