Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation fermera à 17h30 ce mardi 4 juin.
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation fermera à 17h30 ce mardi 4 juin.
Bienvenue sur le catalogue du centre de documentation du campus de Montignies.
TFE Technologue de laboratoire médical
Ajouter le résultat dans votre panier Affiner la recherche
Evaluation des performances du MALDI-TOF MS pour le typage de souches bactériennes dans un contexte d’épidémie hospitalière / Karim PEETERS
Titre : Evaluation des performances du MALDI-TOF MS pour le typage de souches bactériennes dans un contexte d’épidémie hospitalière Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Karim PEETERS, Auteur ; Alexia VERROKEN, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Cliniques Universitaires St Luc Laboratoire de microbiologie. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS ..................................................................................................................................
PRÉSENTATION DU LIEU DE STAGE ........................................................................................................
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
A. PARTIE THÉORIQUE .................................................................................................................. 13
1. SPECTROMÉTRIE DE MASSE ................................................................................................................ 13
2. MATRIX-ASSISTED LASER DESORPTION IONIZATION – TIME OF FLIGHT MASS SPECTROMETRY (MALDI-TOF MS) 15
2.1. MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization) ...................................................... 15
2.2. TOF (Time Of Flight) .......................................................................................................... 16
2.3. Détecteur .......................................................................................................................... 17
2.4. Applications en microbiologie ........................................................................................... 18
2.4.1. En routine ...................................................................................................................................18
2.4.2. Typage ........................................................................................................................................19
3. LES ENTÉROBACTÉRIES PRODUCTRICES DE CARBAPÉNÉMASES (CPE) .......................................................... 21
3.1. Entérobactéries ................................................................................................................. 21
3.2. β-lactamines et carbapénèmes ......................................................................................... 22
3.3. β-lactamases et carbapénémases .................................................................................... 22
4. PSEUDOMONAS AERUGINOSA VIM ..................................................................................................... 25
4.1. Pseudomonas aeruginosa ................................................................................................. 25
4.2. VIM ................................................................................................................................... 26
B. PARTIE PRATIQUE .................................................................................................................... 29
1. BUT ET PRINCIPE ............................................................................................................................. 29
2. MATÉRIEL ...................................................................................................................................... 29
2.1. Réactifs ............................................................................................................................. 29
2.2. Logistique .......................................................................................................................... 30
3. MÉTHODE...................................................................................................................................... 31
4. RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION .......................................................................................................... 33
4.1. Projets CPE ........................................................................................................................ 33
4.1.1. Sélection des spectres ................................................................................................................34
4.1.1.1. Projet CPE 1 ......................................................................................................................34
4.1.1.2. Projet CPE 2 ......................................................................................................................36
4.1.1.3. Projet CPE 3 ......................................................................................................................38
4.1.2. Calibration interne et comparaison des souches ........................................................................39
6
4.1.3. Confirmation ...............................................................................................................................42
4.1.4. Dendrogrammes .........................................................................................................................43
4.1.4.1. Projet CPE 1 ......................................................................................................................44
4.1.4.2. Projet CPE 2 ......................................................................................................................45
4.1.4.3. Projet CPE 3 ......................................................................................................................46
4.2. Projets VIM ....................................................................................................................... 47
4.2.1. Sélection des spectres ................................................................................................................47
4.2.1.1. Projet VIM 1 .....................................................................................................................48
4.2.1.2. Projet VIM 2 .....................................................................................................................50
4.2.1.3. Projet VIM 3 .....................................................................................................................52
4.2.2. Calibration interne et comparaison des spectres .......................................................................53
4.2.3. Dendrogrammes .........................................................................................................................57
4.2.3.1. Projet VIM 1 .....................................................................................................................58
4.2.3.2. Projet VIM 2 .....................................................................................................................60
4.2.3.3. Projet VIM 3 .....................................................................................................................62
5. DISCUSSION ................................................................................................................................... 65
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65847 Evaluation des performances du MALDI-TOF MS pour le typage de souches bactériennes dans un contexte d’épidémie hospitalière [TFE / Mémoire] / Karim PEETERS, Auteur ; Alexia VERROKEN, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Cliniques Universitaires St Luc Laboratoire de microbiologie. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
REMERCIEMENTS ..................................................................................................................................
PRÉSENTATION DU LIEU DE STAGE ........................................................................................................
INTRODUCTION ................................................................................................................................... 8
A. PARTIE THÉORIQUE .................................................................................................................. 13
1. SPECTROMÉTRIE DE MASSE ................................................................................................................ 13
2. MATRIX-ASSISTED LASER DESORPTION IONIZATION – TIME OF FLIGHT MASS SPECTROMETRY (MALDI-TOF MS) 15
2.1. MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization) ...................................................... 15
2.2. TOF (Time Of Flight) .......................................................................................................... 16
2.3. Détecteur .......................................................................................................................... 17
2.4. Applications en microbiologie ........................................................................................... 18
2.4.1. En routine ...................................................................................................................................18
2.4.2. Typage ........................................................................................................................................19
3. LES ENTÉROBACTÉRIES PRODUCTRICES DE CARBAPÉNÉMASES (CPE) .......................................................... 21
3.1. Entérobactéries ................................................................................................................. 21
3.2. β-lactamines et carbapénèmes ......................................................................................... 22
3.3. β-lactamases et carbapénémases .................................................................................... 22
4. PSEUDOMONAS AERUGINOSA VIM ..................................................................................................... 25
4.1. Pseudomonas aeruginosa ................................................................................................. 25
4.2. VIM ................................................................................................................................... 26
B. PARTIE PRATIQUE .................................................................................................................... 29
1. BUT ET PRINCIPE ............................................................................................................................. 29
2. MATÉRIEL ...................................................................................................................................... 29
2.1. Réactifs ............................................................................................................................. 29
2.2. Logistique .......................................................................................................................... 30
3. MÉTHODE...................................................................................................................................... 31
4. RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION .......................................................................................................... 33
4.1. Projets CPE ........................................................................................................................ 33
4.1.1. Sélection des spectres ................................................................................................................34
4.1.1.1. Projet CPE 1 ......................................................................................................................34
4.1.1.2. Projet CPE 2 ......................................................................................................................36
4.1.1.3. Projet CPE 3 ......................................................................................................................38
4.1.2. Calibration interne et comparaison des souches ........................................................................39
6
4.1.3. Confirmation ...............................................................................................................................42
4.1.4. Dendrogrammes .........................................................................................................................43
4.1.4.1. Projet CPE 1 ......................................................................................................................44
4.1.4.2. Projet CPE 2 ......................................................................................................................45
4.1.4.3. Projet CPE 3 ......................................................................................................................46
4.2. Projets VIM ....................................................................................................................... 47
4.2.1. Sélection des spectres ................................................................................................................47
4.2.1.1. Projet VIM 1 .....................................................................................................................48
4.2.1.2. Projet VIM 2 .....................................................................................................................50
4.2.1.3. Projet VIM 3 .....................................................................................................................52
4.2.2. Calibration interne et comparaison des spectres .......................................................................53
4.2.3. Dendrogrammes .........................................................................................................................57
4.2.3.1. Projet VIM 1 .....................................................................................................................58
4.2.3.2. Projet VIM 2 .....................................................................................................................60
4.2.3.3. Projet VIM 3 .....................................................................................................................62
5. DISCUSSION ................................................................................................................................... 65
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65847 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation des performances du MBT STAR-Carba IVD kit pour la détection de l'activité des carbapénèmases chez les entérobactéries et les non-fermentants / Corentin Bombecke
Titre : Evaluation des performances du MBT STAR-Carba IVD kit pour la détection de l'activité des carbapénèmases chez les entérobactéries et les non-fermentants Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Corentin Bombecke, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’utilisation intempestive des antibiotiques a progressivement mené à l’émergence de résistances bactériennes. Parmi ces résistances, la production de carbapénèmases constitue actuellement un enjeu majeur de santé publique. Ces β-lactamases limitent considérablement les options thérapeutiques et leur diffusion mondiale suscite de vives inquiétudes quant au contrôle des infections nosocomiales et des traitements antibiotiques.
Dès lors, il est urgent de mettre en place des méthodes rapides et efficaces permettant la détection des souches productrices de carbapénèmases.
Ce travail de fin d’étude aborde l’évaluation des performances d’un test phénotypique, le MBT STAR-Carba IVD Kit (Bruker Daltonics), basé sur le principe MALDI-TOF. Parallèlement, un autre test, le β-Carba Test (Bio-Rad) a également été évalué. Afin d’y parvenir, les analyses se sont portées sur un recueil prospectif de 118 souches d’entérobactéries et non-fermentants. Chaque souche a d’abord été identifiée par spectrométrie de masse et ensuite soumise à une expertise dans le but de statuer son niveau de sensibilité aux antibiotiques. Pour cela, différents tests phénotypiques et génotypiques ont été utilisés afin d’établir un statut référentiel. Une fois que leur statut de référence a été défini quant à la production -ou non- de carbapénèmases, l’interprétation et la comparaison des performances du MBT STAR-Carba IVD Assay et du β-Carba Test fut possible. Il est apparu que sur les 118 souches, 52 étaient productrices de carbapénèmases et 66 non-productrices de ces enzymes.
Les performances se sont avérées excellentes pour le MBT STAR-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 95%) ainsi que pour le β-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 100%). Une comparaison globale des deux méthodes a par la suite été menée dans l’objectif de déterminer l’intérêt plausible d’une implantation du MBT STAR-Carba au sein d’un laboratoire de routine.
Le bilan de cette étude comparative a permis de constater que la praticabilité technique du MBT STAR-Carba s’avère peu convaincante et qu’une mise en place en laboratoire de routine semble peu compatible avec la demande actuelle.
Un développement futur de cette méthode permettant d’identifier directement le type de carbapénèmase produite par la bactérie serait néanmoins une plus-value conséquente.Note de contenu : Table des matières
Liste des abréviations ................................................................................................................. 5
Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11
Introduction .............................................................................................................................. 13
1. Contexte général .............................................................................................................. 15
1.1 Les antibiotiques ........................................................................................................ 15
1.1.1 Les antibiotiques inhibant la synthèse protéique .............................................. 16
1.1.2 Les antibiotiques qui agissent sur les acides nucléiques et leurs précurseurs .. 17
1.1.3 Antibiotiques agissant sur la synthèse de la paroi bactérienne ........................ 19
1.2 Résistance aux antibiotiques ..................................................................................... 23
1.2.1 La diminution de la perméabilité membranaire ................................................ 23
1.2.2 Les pompes à efflux ............................................................................................ 24
1.2.3 Modification de la cible des antibiotiques ......................................................... 24
1.2.4 Inactivation enzymatique de l'antibiotique ....................................................... 24
1.3 Les β-lactamases ........................................................................................................ 25
1.3.1 La classe A........................................................................................................... 26
1.3.2 La classe C : les céphalosporinases .................................................................... 27
1.3.3 La classe D : les oxacillinases .............................................................................. 28
1.4 Les carbapénèmases .................................................................................................. 28
1.4.1 Carbapénèmases de classe A ............................................................................. 29
1.4.2 Carbapénèmases de classe B ............................................................................. 29
1.4.3 Les carbapénèmases de classe D ....................................................................... 30
1.5 Epidémiologie des différentes carbapénèmases ...................................................... 30
1.6 Méthodes de détection des carbapénèmases en laboratoire .................................. 33
1.6.1 Méthodes phénotypiques .................................................................................. 34
1.6.2 Tests génotypiques ............................................................................................. 37
2. Objectifs et Stratégie ........................................................................................................ 39
2.1 Objectifs ..................................................................................................................... 39
2.2 Stratégie ..................................................................................................................... 39
3. Matériel et Méthodes ...................................................................................................... 41
3.1 Matériel ..................................................................................................................... 41
3.2 Méthodes ................................................................................................................... 42
3.2.1 Souches bactériennes ........................................................................................ 42
3.2.2 Identifications bactériennes ............................................................................... 42
3.2.3 Sensibilité aux antibiotiques .............................................................................. 43
3.2.4 Tests complémentaires destinés à la détection des bactéries productrices de carbapénèmases. ............................................................................................................. 44
3.2.5 Recherche de mécanismes de résistance par méthodes génotypiques ............ 46
3.2.6 Protocole du MBT STAR-Carba IVD Assay .......................................................... 47
4. Résultats et discussion ..................................................................................................... 53
4.1 Résultats .................................................................................................................... 53
4.1.1 Résultats du MBT STAR-Carba et du β-Carba par rapport à la référence .......... 53
4.1.2 Performances du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................................. 55
4.1.3 Evaluation de la reproductibilité du test MBT STAR-Carba ............................... 56
4.2 Discussion .................................................................................................................. 56
4.2.1 Discordances entre les résultats des tests et la référence ................................ 56
4.2.2 Comparaison des performances du MBT STAR-Carba et β-Carba ..................... 57
4.2.3 Limitations de l’étude......................................................................................... 58
4.2.4 Problèmes rencontrés ........................................................................................ 58
4.2.5 Comparaison des caractéristiques générales du MBT STAR-Carba et β-Carba . 61
4.2.6 Appréciation qualitative du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................ 63
Conclusion ................................................................................................................................ 65
Liste des figures et des tableaux .............................................................................................. 67
Bibliographie ............................................................................................................................ 68
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79794 Evaluation des performances du MBT STAR-Carba IVD kit pour la détection de l'activité des carbapénèmases chez les entérobactéries et les non-fermentants [TFE / Mémoire] / Corentin Bombecke, Auteur ; Nicolas Kesteman, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale CHU UCL Namur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : L’utilisation intempestive des antibiotiques a progressivement mené à l’émergence de résistances bactériennes. Parmi ces résistances, la production de carbapénèmases constitue actuellement un enjeu majeur de santé publique. Ces β-lactamases limitent considérablement les options thérapeutiques et leur diffusion mondiale suscite de vives inquiétudes quant au contrôle des infections nosocomiales et des traitements antibiotiques.
Dès lors, il est urgent de mettre en place des méthodes rapides et efficaces permettant la détection des souches productrices de carbapénèmases.
Ce travail de fin d’étude aborde l’évaluation des performances d’un test phénotypique, le MBT STAR-Carba IVD Kit (Bruker Daltonics), basé sur le principe MALDI-TOF. Parallèlement, un autre test, le β-Carba Test (Bio-Rad) a également été évalué. Afin d’y parvenir, les analyses se sont portées sur un recueil prospectif de 118 souches d’entérobactéries et non-fermentants. Chaque souche a d’abord été identifiée par spectrométrie de masse et ensuite soumise à une expertise dans le but de statuer son niveau de sensibilité aux antibiotiques. Pour cela, différents tests phénotypiques et génotypiques ont été utilisés afin d’établir un statut référentiel. Une fois que leur statut de référence a été défini quant à la production -ou non- de carbapénèmases, l’interprétation et la comparaison des performances du MBT STAR-Carba IVD Assay et du β-Carba Test fut possible. Il est apparu que sur les 118 souches, 52 étaient productrices de carbapénèmases et 66 non-productrices de ces enzymes.
Les performances se sont avérées excellentes pour le MBT STAR-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 95%) ainsi que pour le β-Carba (sensibilité de 98% et spécificité de 100%). Une comparaison globale des deux méthodes a par la suite été menée dans l’objectif de déterminer l’intérêt plausible d’une implantation du MBT STAR-Carba au sein d’un laboratoire de routine.
Le bilan de cette étude comparative a permis de constater que la praticabilité technique du MBT STAR-Carba s’avère peu convaincante et qu’une mise en place en laboratoire de routine semble peu compatible avec la demande actuelle.
Un développement futur de cette méthode permettant d’identifier directement le type de carbapénèmase produite par la bactérie serait néanmoins une plus-value conséquente.Note de contenu : Table des matières
Liste des abréviations ................................................................................................................. 5
Présentation du lieu de stage................................................................................................... 11
Introduction .............................................................................................................................. 13
1. Contexte général .............................................................................................................. 15
1.1 Les antibiotiques ........................................................................................................ 15
1.1.1 Les antibiotiques inhibant la synthèse protéique .............................................. 16
1.1.2 Les antibiotiques qui agissent sur les acides nucléiques et leurs précurseurs .. 17
1.1.3 Antibiotiques agissant sur la synthèse de la paroi bactérienne ........................ 19
1.2 Résistance aux antibiotiques ..................................................................................... 23
1.2.1 La diminution de la perméabilité membranaire ................................................ 23
1.2.2 Les pompes à efflux ............................................................................................ 24
1.2.3 Modification de la cible des antibiotiques ......................................................... 24
1.2.4 Inactivation enzymatique de l'antibiotique ....................................................... 24
1.3 Les β-lactamases ........................................................................................................ 25
1.3.1 La classe A........................................................................................................... 26
1.3.2 La classe C : les céphalosporinases .................................................................... 27
1.3.3 La classe D : les oxacillinases .............................................................................. 28
1.4 Les carbapénèmases .................................................................................................. 28
1.4.1 Carbapénèmases de classe A ............................................................................. 29
1.4.2 Carbapénèmases de classe B ............................................................................. 29
1.4.3 Les carbapénèmases de classe D ....................................................................... 30
1.5 Epidémiologie des différentes carbapénèmases ...................................................... 30
1.6 Méthodes de détection des carbapénèmases en laboratoire .................................. 33
1.6.1 Méthodes phénotypiques .................................................................................. 34
1.6.2 Tests génotypiques ............................................................................................. 37
2. Objectifs et Stratégie ........................................................................................................ 39
2.1 Objectifs ..................................................................................................................... 39
2.2 Stratégie ..................................................................................................................... 39
3. Matériel et Méthodes ...................................................................................................... 41
3.1 Matériel ..................................................................................................................... 41
3.2 Méthodes ................................................................................................................... 42
3.2.1 Souches bactériennes ........................................................................................ 42
3.2.2 Identifications bactériennes ............................................................................... 42
3.2.3 Sensibilité aux antibiotiques .............................................................................. 43
3.2.4 Tests complémentaires destinés à la détection des bactéries productrices de carbapénèmases. ............................................................................................................. 44
3.2.5 Recherche de mécanismes de résistance par méthodes génotypiques ............ 46
3.2.6 Protocole du MBT STAR-Carba IVD Assay .......................................................... 47
4. Résultats et discussion ..................................................................................................... 53
4.1 Résultats .................................................................................................................... 53
4.1.1 Résultats du MBT STAR-Carba et du β-Carba par rapport à la référence .......... 53
4.1.2 Performances du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................................. 55
4.1.3 Evaluation de la reproductibilité du test MBT STAR-Carba ............................... 56
4.2 Discussion .................................................................................................................. 56
4.2.1 Discordances entre les résultats des tests et la référence ................................ 56
4.2.2 Comparaison des performances du MBT STAR-Carba et β-Carba ..................... 57
4.2.3 Limitations de l’étude......................................................................................... 58
4.2.4 Problèmes rencontrés ........................................................................................ 58
4.2.5 Comparaison des caractéristiques générales du MBT STAR-Carba et β-Carba . 61
4.2.6 Appréciation qualitative du MBT STAR-Carba et du β-Carba ............................ 63
Conclusion ................................................................................................................................ 65
Liste des figures et des tableaux .............................................................................................. 67
Bibliographie ............................................................................................................................ 68
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79794 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation des performances d'une nouvelle thromboplastine, la STA-NeoPTimal®, pour la détermination du Temps de Quick et validation d'un nouvel automate, le STA Compact Max 3® / Kenny Moulin
Titre : Evaluation des performances d'une nouvelle thromboplastine, la STA-NeoPTimal®, pour la détermination du Temps de Quick et validation d'un nouvel automate, le STA Compact Max 3® Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Kenny Moulin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Année de publication : 2018 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=66088 Evaluation des performances d'une nouvelle thromboplastine, la STA-NeoPTimal®, pour la détermination du Temps de Quick et validation d'un nouvel automate, le STA Compact Max 3® [TFE / Mémoire] / Kenny Moulin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - 2018.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=66088 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation du potentiel trypanolytique de différents mutants d'apolipoprotéine L1. / SCORNEAU Gauthier
Titre : Evaluation du potentiel trypanolytique de différents mutants d'apolipoprotéine L1. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : SCORNEAU Gauthier, Année de publication : 2008 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Mots-clés : MALADIE DU SOMMEIL TRYPANOSOME PROTEINE VSG APOLIPOPROTEINE Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64443 Evaluation du potentiel trypanolytique de différents mutants d'apolipoprotéine L1. [TFE / Mémoire] / SCORNEAU Gauthier, . - 2008.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Mots-clés : MALADIE DU SOMMEIL TRYPANOSOME PROTEINE VSG APOLIPOPROTEINE Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64443 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation pré-clinique in vitro de candidats médicaments en vue d’un traitement du gliome infiltrant du tronc cérébral et mise à l’essai de nouveaux tests de quantification de l’apoptose et de la nécrose in vitro. / Mélanie Debroux
Titre : Evaluation pré-clinique in vitro de candidats médicaments en vue d’un traitement du gliome infiltrant du tronc cérébral et mise à l’essai de nouveaux tests de quantification de l’apoptose et de la nécrose in vitro. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Mélanie Debroux, Auteur ; Yves Collette, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les cellules tumorales présentent plusieurs caractéristiques communes dont certaines seront étudiées dans ce travail : elles acquièrent la caractéristique d’immortalité, une résistance au processus de mort cellulaire programmée, développent l’angiogenèse, échappent au contrôle des suppresseurs de tumeurs, présentent un maintien de la signalisation proliférative, et enfin ont la capacité d’envahir d’autres tissus.
Le premier objectif de ce travail est d’étudier l’effet de drogues ayant différentes cibles sur des cellules de DIPG. Il s’agit du gliome infiltrant du tronc cérébral, sorte de cancer touchant surtout les enfants. Cette tumeur présente une localisation particulièrement difficile à atteindre, rendant toute ablation chirurgicale impossible. En plus de cela, la barrière hémato-encéphalique semble empêcher l’accession à la cible des traitements chimiothérapeutiques habituels. Il est donc indispensable de trouver de potentiels candidats médicaments pouvant détruire ces cellules. Cela se fait en testant ces cellules sur un panel de 81 drogues afin de mettre en évidence des sensibilités et/ou résistances par la méthode de chemogramme. Ces drogues peuvent démontrer d’éventuelles cibles thérapeutiques pour ce gliome et suggérer des candidats médicaments pouvant enrayer la prolifération de cette tumeur.
Le second objectif de ce stage est d’évaluer l’intérêt de différents kits permettant de détecter la mort cellulaire. Ce phénomène survient généralement par apoptose, lorsque les cellules normales subissent des variations venant de l’environnement et induisent leur mort pour éviter d’acquérir des mutations. Les cellules cancéreuses, quant à elles, présentent une inhibition de cette apoptose « normale » et se multiplient de manière incontrôlée. Afin d’étudier les voies de mort cellulaire (qui sont principalement l’apoptose et la nécrose), les cellules sont mises en présence de drogues connues pour les détruire. Par l’intermédiaire de kits commerciaux, il est possible de détecter la cytotoxicité, l’apoptose et/ou la nécrose. La cytotoxicité sera donc évaluée par luminescence par libération de LDH, l’apoptose sera mesurée également par luminescence grâce au mouvement de flip-flop de phospholipides membranaires, et enfin la nécrose sera évaluée par fluorescence lors de la libération de l’ADN par dégradations membranaires.Note de contenu : Table des matières
Remerciements .......................................................................................................................... 4
Présentation du lieu de stage ..................................................................................................... 7
1. Introduction générale ......................................................................................................... 8
1.1. Le cancer ...................................................................................................................... 8
1.1.1 Description ................................................................................................................. 8
1.1.2 Traitements ................................................................................................................ 8
1.1.3 Essais cliniques ........................................................................................................... 9
1.2. Caractéristiques des cellules tumorales .................................................................... 10
1.3. Etude du cas du gliome infiltrant du tronc cérébral.................................................. 12
1.3.1 Description de la pathologie .................................................................................... 12
1.3.2 Cas particulier de la mutation H3.3 K27M ............................................................... 13
1.3.3 Chemogramme ........................................................................................................ 15
1.4. Tests de quantification de la nécrose et de l’apoptose ............................................ 16
1.4.1 Description du processus apoptotique .................................................................... 16
1.4.2 Description du processus nécrotique ...................................................................... 17
1.4.3 Cellules utilisées et pathologie associée .................................................................. 17
2. Objectifs et stratégies ....................................................................................................... 18
2.1. Recherche de thérapies efficaces pour le DIPG ........................................................ 18
2.2. Mise au point de tests de mesure de la mort cellulaire ............................................ 19
2.2.1 LDH ........................................................................................................................... 19
2.2.2 CellTox Green ........................................................................................................... 19
2.2.3 Annexin .................................................................................................................... 19
3. Matériel et méthode ......................................................................................................... 20
3.1. Lignées cellulaires ...................................................................................................... 20
3.2. Procédure de congélation ......................................................................................... 20
3.3. Procédure de décongélation ..................................................................................... 21
3.4. Entretien des cultures ................................................................................................ 21
3.4.1 MOLM 14 ................................................................................................................. 21
3.4.2 RES259 ...................................................................................................................... 22
3.5. Dilutions des drogues et traitement des cellules ...................................................... 22
3.6. CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay ........................................................ 24
3.6.1 Principe du kit .......................................................................................................... 24
3.6.2 Calcul de l’EC50 par logiciel GraphPad Prism .......................................................... 25
3.7. Temps de doublement RES259 .................................................................................. 26
3.8. MycoAlert .................................................................................................................. 27
3.9. Chemogramme RES259 ............................................................................................. 30
3.10 LDH-GloTM Cytotoxicity Assay .................................................................................... 33
3.11 CellTox Green Cytotoxicity Assay .............................................................................. 35
3.12 RealTime-Glo Annexin-V Apoptosis and Necrosis Assay ........................................... 36
4. Résultats et discussion ...................................................................................................... 38
4.1. Recherche de cibles thérapeutiques du DIPG ........................................................... 38
4.1.1 Evaluation du nombre de cellules à ensemencer pour chaque lignée de RES259 en vue d’un chemogramme ................................................................................................... 39
4.1.2 Chemogramme RES259 WT, RES259 H3, RES259 H3K27M et évaluation des EC50 pour les 81 drogues testées .............................................................................................. 40
4.2. Mise à l’essai de kits évaluant la cytotoxicité d’une drogue sur les MOLM14 ......... 45
4.2.1 LDH-Glo Cytotoxicity Assay : détection de la cytotoxicité par luminescence ......... 46
4.2.2 CellTox Green Cytotoxicity Assay : mesure de la nécrose par détection en fluorescence ...................................................................................................................... 48
4.2.3 RealTime-Glo Cytotoxicity Assay : détection de l’apoptose par mesure de la luminescence et détection de la nécrose par mesure de la fluorescence ....................... 51
4.2.4 Perspectives de ces différents kits ........................................................................... 54
Conclusions ............................................................................................................................... 56
Recherche de candidats médicaments en vue du traitement du DIPG ............................... 56
Mise à l’essai de tests évaluant la cytotoxicité et le processus de mort cellulaire d’une drogue sur une culture cellulaire ......................................................................................... 56
Bibliographie ............................................................................................................................ 57
Annexes .................................................................................................................................... 61
Résumé ..................................................................................................................................... 64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89143 Evaluation pré-clinique in vitro de candidats médicaments en vue d’un traitement du gliome infiltrant du tronc cérébral et mise à l’essai de nouveaux tests de quantification de l’apoptose et de la nécrose in vitro. [TFE / Mémoire] / Mélanie Debroux, Auteur ; Yves Collette, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2020.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les cellules tumorales présentent plusieurs caractéristiques communes dont certaines seront étudiées dans ce travail : elles acquièrent la caractéristique d’immortalité, une résistance au processus de mort cellulaire programmée, développent l’angiogenèse, échappent au contrôle des suppresseurs de tumeurs, présentent un maintien de la signalisation proliférative, et enfin ont la capacité d’envahir d’autres tissus.
Le premier objectif de ce travail est d’étudier l’effet de drogues ayant différentes cibles sur des cellules de DIPG. Il s’agit du gliome infiltrant du tronc cérébral, sorte de cancer touchant surtout les enfants. Cette tumeur présente une localisation particulièrement difficile à atteindre, rendant toute ablation chirurgicale impossible. En plus de cela, la barrière hémato-encéphalique semble empêcher l’accession à la cible des traitements chimiothérapeutiques habituels. Il est donc indispensable de trouver de potentiels candidats médicaments pouvant détruire ces cellules. Cela se fait en testant ces cellules sur un panel de 81 drogues afin de mettre en évidence des sensibilités et/ou résistances par la méthode de chemogramme. Ces drogues peuvent démontrer d’éventuelles cibles thérapeutiques pour ce gliome et suggérer des candidats médicaments pouvant enrayer la prolifération de cette tumeur.
Le second objectif de ce stage est d’évaluer l’intérêt de différents kits permettant de détecter la mort cellulaire. Ce phénomène survient généralement par apoptose, lorsque les cellules normales subissent des variations venant de l’environnement et induisent leur mort pour éviter d’acquérir des mutations. Les cellules cancéreuses, quant à elles, présentent une inhibition de cette apoptose « normale » et se multiplient de manière incontrôlée. Afin d’étudier les voies de mort cellulaire (qui sont principalement l’apoptose et la nécrose), les cellules sont mises en présence de drogues connues pour les détruire. Par l’intermédiaire de kits commerciaux, il est possible de détecter la cytotoxicité, l’apoptose et/ou la nécrose. La cytotoxicité sera donc évaluée par luminescence par libération de LDH, l’apoptose sera mesurée également par luminescence grâce au mouvement de flip-flop de phospholipides membranaires, et enfin la nécrose sera évaluée par fluorescence lors de la libération de l’ADN par dégradations membranaires.Note de contenu : Table des matières
Remerciements .......................................................................................................................... 4
Présentation du lieu de stage ..................................................................................................... 7
1. Introduction générale ......................................................................................................... 8
1.1. Le cancer ...................................................................................................................... 8
1.1.1 Description ................................................................................................................. 8
1.1.2 Traitements ................................................................................................................ 8
1.1.3 Essais cliniques ........................................................................................................... 9
1.2. Caractéristiques des cellules tumorales .................................................................... 10
1.3. Etude du cas du gliome infiltrant du tronc cérébral.................................................. 12
1.3.1 Description de la pathologie .................................................................................... 12
1.3.2 Cas particulier de la mutation H3.3 K27M ............................................................... 13
1.3.3 Chemogramme ........................................................................................................ 15
1.4. Tests de quantification de la nécrose et de l’apoptose ............................................ 16
1.4.1 Description du processus apoptotique .................................................................... 16
1.4.2 Description du processus nécrotique ...................................................................... 17
1.4.3 Cellules utilisées et pathologie associée .................................................................. 17
2. Objectifs et stratégies ....................................................................................................... 18
2.1. Recherche de thérapies efficaces pour le DIPG ........................................................ 18
2.2. Mise au point de tests de mesure de la mort cellulaire ............................................ 19
2.2.1 LDH ........................................................................................................................... 19
2.2.2 CellTox Green ........................................................................................................... 19
2.2.3 Annexin .................................................................................................................... 19
3. Matériel et méthode ......................................................................................................... 20
3.1. Lignées cellulaires ...................................................................................................... 20
3.2. Procédure de congélation ......................................................................................... 20
3.3. Procédure de décongélation ..................................................................................... 21
3.4. Entretien des cultures ................................................................................................ 21
3.4.1 MOLM 14 ................................................................................................................. 21
3.4.2 RES259 ...................................................................................................................... 22
3.5. Dilutions des drogues et traitement des cellules ...................................................... 22
3.6. CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay ........................................................ 24
3.6.1 Principe du kit .......................................................................................................... 24
3.6.2 Calcul de l’EC50 par logiciel GraphPad Prism .......................................................... 25
3.7. Temps de doublement RES259 .................................................................................. 26
3.8. MycoAlert .................................................................................................................. 27
3.9. Chemogramme RES259 ............................................................................................. 30
3.10 LDH-GloTM Cytotoxicity Assay .................................................................................... 33
3.11 CellTox Green Cytotoxicity Assay .............................................................................. 35
3.12 RealTime-Glo Annexin-V Apoptosis and Necrosis Assay ........................................... 36
4. Résultats et discussion ...................................................................................................... 38
4.1. Recherche de cibles thérapeutiques du DIPG ........................................................... 38
4.1.1 Evaluation du nombre de cellules à ensemencer pour chaque lignée de RES259 en vue d’un chemogramme ................................................................................................... 39
4.1.2 Chemogramme RES259 WT, RES259 H3, RES259 H3K27M et évaluation des EC50 pour les 81 drogues testées .............................................................................................. 40
4.2. Mise à l’essai de kits évaluant la cytotoxicité d’une drogue sur les MOLM14 ......... 45
4.2.1 LDH-Glo Cytotoxicity Assay : détection de la cytotoxicité par luminescence ......... 46
4.2.2 CellTox Green Cytotoxicity Assay : mesure de la nécrose par détection en fluorescence ...................................................................................................................... 48
4.2.3 RealTime-Glo Cytotoxicity Assay : détection de l’apoptose par mesure de la luminescence et détection de la nécrose par mesure de la fluorescence ....................... 51
4.2.4 Perspectives de ces différents kits ........................................................................... 54
Conclusions ............................................................................................................................... 56
Recherche de candidats médicaments en vue du traitement du DIPG ............................... 56
Mise à l’essai de tests évaluant la cytotoxicité et le processus de mort cellulaire d’une drogue sur une culture cellulaire ......................................................................................... 56
Bibliographie ............................................................................................................................ 57
Annexes .................................................................................................................................... 61
Résumé ..................................................................................................................................... 64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89143 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire Evaluation pré-clinique in vitro du potentiel anti-leucémique de deux nouvelles molécules inhibitrices de bromodomaines / Louise Janssens
PermalinkEvaluation pré-clinique in- vitro d’un potentiel candidat thérapeutique anti- leucémique / Elyse Fievet
PermalinkEvaluation préclinique in vitro d’un nouveau composé (VAL201) comme candidat médicament dans le traitement du cancer de la prostate / PINAR GUMUS
PermalinkEvaluation préclinique de nouveaux inhibiteurs épigénétiques d’interaction protéine-protéine dans la leucémie aiguë lymphoïde / Aline HEREMANS
PermalinkÉvaluation d’un rôle cytoplasmique des protéines DUX4 et DUX4c, impliquées dans la dystrophie musculaire FSHD, par l’étude de partenaires protéiques et ARN / Maëlle Sciot
PermalinkEvaluation de la structure et de la fonction rénales dans des modèles murins de néphropathies expérimentales / Belinda VAIRA
PermalinkEvaluation du système multiplate dans diverses situations cliniques / AKOUCHE Lila
PermalinkL’évaluation d’un système de score pour le diagnostic des néoplasies myélodysplasiques en cytométrie en flux / Louise Staquet
PermalinkEvaluation d’une technique d’hybridation in situ permettant la détection des ARNm de BRCA1 dans les cancers du sein « triple négatifs » / MINETTE TCHANA Y.
PermalinkEvaluation d’un test immunochromatographique pour la détection de cinq carbapénèmases chez les Bacilles Gram Négatif / Maryse Doumont
PermalinkEvaluation et validation de méthodes bioanalytiques basées sur la technique d'échantillonage Dried Blood Spot en comparaison avec les techniques classiques de prélèvement plasmatique / HUSSIN Christophe
PermalinkExploitation des mécanismes moléculaires de résistance au cuivre chez Caulobacter crescentus / Alexandre Babarakos
PermalinkExploration de l'APTT et du fibrinogène : comparaison de techniques. / Ceyda BINICI
PermalinkL’expression de gènes comme biomarqueur des effets des radiations dans les cellules immunitaires humaines / JULIE BROOS
PermalinkExpression de LAMP 2 dans le kératinocyte humain : détermination de l’influence de la vitamine D3 / Geoffroy VAN DESSEL
PermalinkExpression des protéines E2 et C recombinantes du virus BVDV dans un système de cellules de mammifères in vitro / Yohan Kellner
PermalinkExpression, purification et cristalisation de l'enzyme SerB2 de Mycobacterium tuberculosis en vue d'études structurales / Adeline Courtoy
PermalinkExpression, purification et repliement du variant D67H du lysosyme humain impliqué dans les maladies amyloïdes / ORESTI Mélissa
PermalinkExtraction, isolation et caractérisation par microscopie électronique des pigments dans les cheveux. Etude des profils pigmentaires individuels en vue d’une application criminalistique / MATHIEU DARAN
PermalinkExtraction, purification et caractérisation de l'alliinase d'Allium sativum L. / Julien PONCHAUX
Permalink