Centre de Documentation Campus Montignies
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Etude par hybridation in situ de l’expression du microARN miR-210 dans les cancers du sein triple négatifs / SARA SOLLENNITA
Titre : Etude par hybridation in situ de l’expression du microARN miR-210 dans les cancers du sein triple négatifs Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : SARA SOLLENNITA, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Institut de Pathologie et de Génétique IPG Gosselies microARN miR-210 cancer du sein hypoxie anticorps hybridation in situ immunomarquages Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction générale ................................................................................................................. 13
PARTIE 1 : Introduction théorique ............................................................................................. 17
1. Le cancer du sein ............................................................................................................. 17
1.1. Description et impact du cancer du sein ................................................................. 17
1.2. Structure histologique du sein normal .................................................................... 18
1.3. Les différents types de cancers du sein ...................................................................... 19
1.3.1. Classification histologique ............................................................................... 19
1.3.2. Classification Scarff Bloom & Richardson SBR ................................................ 20
1.3.3. Classification moléculaire................................................................................ 20
1.3.3.1. Type luminal ................................................................................................ 20
1.3.3.2. Type HER2 ................................................................................................... 21
1.3.3.3. Les cancers de type « triple négatifs » ........................................................ 22
2. Problématique ................................................................................................................. 22
3. Les microARN .................................................................................................................. 23
3.1. Généralités .............................................................................................................. 23
3.2. Les microARN dans les cancers ............................................................................... 24
4. Contexte de la recherche ................................................................................................ 26
5. Le micro ARN miR-210 .................................................................................................... 27
5.1. Généralités .............................................................................................................. 27
5.2. Le miR-210 et l’hypoxie ........................................................................................... 28
5.2.1. Définition et mécanismes de l’hypoxie ........................................................... 28
5.2.2. Les marqueurs de l’hypoxie ............................................................................ 29
5.2.2.1. Hypoxia Inductible Factor 1 alpha .............................................................. 29
5.2.2.2. Carbonic Anhydrase IX ................................................................................ 30
5.2.2.3. Iron-Sulfur Cluster 1/2 ................................................................................ 30
5.2.2.4. Monocarboxylate Transporter 4 ................................................................. 30
5.2.3. L’effet Warburg et l’effet Warburg inverse ........................................................ 31
6. Technique de détection des microARN ........................................................................... 32
6.1. Principe général de l’hybridation in situ selon le kit Exiqon ................................... 32
6.2. Les conditions d’hybridation ................................................................................... 33
6.3. Les sondes LNA ........................................................................................................ 33
7. Technique de détection des protéines ........................................................................... 34
7.1. Principe général de l’immunohistochimie .............................................................. 34
7.2. Les anticorps ........................................................................................................... 35
7.3. Critères d’optimisation............................................................................................ 35
7.4. La détection du signal ............................................................................................. 36
8. Objectifs et stratégies ..................................................................................................... 39
PARTIE 2 : Matériel et méthode................................................................................................. 43
1. Préparation des échantillons .............................................................................................. 43
2. Mise au point des anticorps ................................................................................................ 43
2.1. Choix des anticorps ..................................................................................................... 44
2.2. Choix du tissu de mise au point .................................................................................. 45
2.3. Optimisation de l’immunohistochimie ....................................................................... 45
2.3.1. Le démasquage ................................................................................................... 45
2.3.2. La dilution de l’anticorps ..................................................................................... 46
2.4. Matériel ....................................................................................................................... 47
2.5. Procédure .................................................................................................................... 47
3. Optimisation de l’hybridation in situ .................................................................................. 49
3.1. Optimisation de la digestion enzymatique et de la concentration en sonde ............. 50
3.1.1. Digestion du tissu ................................................................................................ 50
3.1.2. Les sondes ........................................................................................................... 51
3.2. Matériel ....................................................................................................................... 52
3.3. Procédure .................................................................................................................... 53
4. Analyse des lames ............................................................................................................... 54
5. Echantillons tumoraux ........................................................................................................ 55
PARTIE 3 : Résultats .................................................................................................................... 59
1. Optimisation de l’hybridation in situ .............................................................................. 59
1.1. Traitement à la protéinase K ................................................................................... 59
1.2. La concentration des sondes ................................................................................... 61
1.3. Synthèse .................................................................................................................. 62
2. Etude de l’expression du miR-210 .................................................................................. 63
2.1. Comparaison aux données de qRT-PCR .................................................................. 64
2.2. Identification des cellules qui expriment miR-210.................................................. 64
3. Optimisation des immunomarquages ............................................................................. 68
3.1. Anti - Carbonic Anhydrase IX................................................................................... 68
3.2. Anti - Monocarboxylate Transporter 4 ................................................................... 70
3.3. Anti - Iron-Suflur Cluster 1/2 ................................................................................... 71
3.4. Anti - Hypoxia Inductible Factor 1α ........................................................................ 72
3.5. Synthèse .................................................................................................................. 72
4. Etude de l’expression des marqueurs de l’hypoxie ........................................................ 73
4.1. Carbonic Anhydrase IX ................................................................................................. 73
4.2. Monocarboxylate Transporter 4 .................................................................................. 75
4.3. Iron-Sulfur Cluster 1/2.................................................................................................. 77
4.4. Hypoxia inductible factor 1 alpha ................................................................................ 79
5. miR-210 et le métabolisme tumoral ............................................................................... 81
Conclusion ................................................................................................................................... 85
Liste des figures et abréviations.................................................................................................. 87
Bibliographie ............................................................................................................................... 92
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65694 Etude par hybridation in situ de l’expression du microARN miR-210 dans les cancers du sein triple négatifs [TFE / Mémoire] / SARA SOLLENNITA, Auteur . - 2016.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Institut de Pathologie et de Génétique IPG Gosselies microARN miR-210 cancer du sein hypoxie anticorps hybridation in situ immunomarquages Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction générale ................................................................................................................. 13
PARTIE 1 : Introduction théorique ............................................................................................. 17
1. Le cancer du sein ............................................................................................................. 17
1.1. Description et impact du cancer du sein ................................................................. 17
1.2. Structure histologique du sein normal .................................................................... 18
1.3. Les différents types de cancers du sein ...................................................................... 19
1.3.1. Classification histologique ............................................................................... 19
1.3.2. Classification Scarff Bloom & Richardson SBR ................................................ 20
1.3.3. Classification moléculaire................................................................................ 20
1.3.3.1. Type luminal ................................................................................................ 20
1.3.3.2. Type HER2 ................................................................................................... 21
1.3.3.3. Les cancers de type « triple négatifs » ........................................................ 22
2. Problématique ................................................................................................................. 22
3. Les microARN .................................................................................................................. 23
3.1. Généralités .............................................................................................................. 23
3.2. Les microARN dans les cancers ............................................................................... 24
4. Contexte de la recherche ................................................................................................ 26
5. Le micro ARN miR-210 .................................................................................................... 27
5.1. Généralités .............................................................................................................. 27
5.2. Le miR-210 et l’hypoxie ........................................................................................... 28
5.2.1. Définition et mécanismes de l’hypoxie ........................................................... 28
5.2.2. Les marqueurs de l’hypoxie ............................................................................ 29
5.2.2.1. Hypoxia Inductible Factor 1 alpha .............................................................. 29
5.2.2.2. Carbonic Anhydrase IX ................................................................................ 30
5.2.2.3. Iron-Sulfur Cluster 1/2 ................................................................................ 30
5.2.2.4. Monocarboxylate Transporter 4 ................................................................. 30
5.2.3. L’effet Warburg et l’effet Warburg inverse ........................................................ 31
6. Technique de détection des microARN ........................................................................... 32
6.1. Principe général de l’hybridation in situ selon le kit Exiqon ................................... 32
6.2. Les conditions d’hybridation ................................................................................... 33
6.3. Les sondes LNA ........................................................................................................ 33
7. Technique de détection des protéines ........................................................................... 34
7.1. Principe général de l’immunohistochimie .............................................................. 34
7.2. Les anticorps ........................................................................................................... 35
7.3. Critères d’optimisation............................................................................................ 35
7.4. La détection du signal ............................................................................................. 36
8. Objectifs et stratégies ..................................................................................................... 39
PARTIE 2 : Matériel et méthode................................................................................................. 43
1. Préparation des échantillons .............................................................................................. 43
2. Mise au point des anticorps ................................................................................................ 43
2.1. Choix des anticorps ..................................................................................................... 44
2.2. Choix du tissu de mise au point .................................................................................. 45
2.3. Optimisation de l’immunohistochimie ....................................................................... 45
2.3.1. Le démasquage ................................................................................................... 45
2.3.2. La dilution de l’anticorps ..................................................................................... 46
2.4. Matériel ....................................................................................................................... 47
2.5. Procédure .................................................................................................................... 47
3. Optimisation de l’hybridation in situ .................................................................................. 49
3.1. Optimisation de la digestion enzymatique et de la concentration en sonde ............. 50
3.1.1. Digestion du tissu ................................................................................................ 50
3.1.2. Les sondes ........................................................................................................... 51
3.2. Matériel ....................................................................................................................... 52
3.3. Procédure .................................................................................................................... 53
4. Analyse des lames ............................................................................................................... 54
5. Echantillons tumoraux ........................................................................................................ 55
PARTIE 3 : Résultats .................................................................................................................... 59
1. Optimisation de l’hybridation in situ .............................................................................. 59
1.1. Traitement à la protéinase K ................................................................................... 59
1.2. La concentration des sondes ................................................................................... 61
1.3. Synthèse .................................................................................................................. 62
2. Etude de l’expression du miR-210 .................................................................................. 63
2.1. Comparaison aux données de qRT-PCR .................................................................. 64
2.2. Identification des cellules qui expriment miR-210.................................................. 64
3. Optimisation des immunomarquages ............................................................................. 68
3.1. Anti - Carbonic Anhydrase IX................................................................................... 68
3.2. Anti - Monocarboxylate Transporter 4 ................................................................... 70
3.3. Anti - Iron-Suflur Cluster 1/2 ................................................................................... 71
3.4. Anti - Hypoxia Inductible Factor 1α ........................................................................ 72
3.5. Synthèse .................................................................................................................. 72
4. Etude de l’expression des marqueurs de l’hypoxie ........................................................ 73
4.1. Carbonic Anhydrase IX ................................................................................................. 73
4.2. Monocarboxylate Transporter 4 .................................................................................. 75
4.3. Iron-Sulfur Cluster 1/2.................................................................................................. 77
4.4. Hypoxia inductible factor 1 alpha ................................................................................ 79
5. miR-210 et le métabolisme tumoral ............................................................................... 81
Conclusion ................................................................................................................................... 85
Liste des figures et abréviations.................................................................................................. 87
Bibliographie ............................................................................................................................... 92
AnnexesPermalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65694 Exemplaires
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