Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Votre centre de documentation fermera de 12h30 à 13h ce vendredi 28 juin et fermera à 14h30.
Dès ce lundi 1er juillet jusqu'au mercredi 10 juillet l'horaire du centre de documentation sera adapté :
Lundi 1er juillet : de 8h à 12h et de 12h30 à 16h
Mardi 2 juillet : de 8h à 12h15
Mercredi 3 juillet : de 9h à 12h et de 12h30 à 15h15
Jeudi 4 juillet : de 8h à 12h30 et de 13h à 18h30
Lundi 8 juillet : de 8h à 12h et de 12h30 à 16h
Mardi 9 juillet : de 8h à 12h15
Mercredi 10 juillet : de 9h à 11h
Réouverture dès ce lundi 19 août.
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Dès ce lundi 1er juillet jusqu'au mercredi 10 juillet l'horaire du centre de documentation sera adapté :
Lundi 1er juillet : de 8h à 12h et de 12h30 à 16h
Mardi 2 juillet : de 8h à 12h15
Mercredi 3 juillet : de 9h à 12h et de 12h30 à 15h15
Jeudi 4 juillet : de 8h à 12h30 et de 13h à 18h30
Lundi 8 juillet : de 8h à 12h et de 12h30 à 16h
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Développement de techniques nécessaires à la transformation génétique du rotifère bdelloïde Adineta vaga / LUDOVIC HERTER
Titre : Développement de techniques nécessaires à la transformation génétique du rotifère bdelloïde Adineta vaga Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : LUDOVIC HERTER, Auteur Année de publication : 2016 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Biologie médicale Unité de Recherche en Biologie Environnementale et Evolutive URBE rotifères adineta vaga écologie souches plasmides additifs culture ADN ARN électrophorèse sur gel agarose purification ADN feeding transformation bactérienne transfection DAPI Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................ 11
Introduction générale ............................................................................................ 13
1. Contexte général ........................................................................................... 15
1.1 Les rotifères… ........................................................................................ 15
1.2 …un embranchement très diversifié ..................................................... 15
1.3 Notre rotifère bdelloïde modèle, Adineta vaga .................................... 17
1.3.1 Ecologie .............................................................................................. 17
1.3.2 Anatomie/physiologie ........................................................................ 17
1.3.3 Un organisme eutélique ..................................................................... 21
1.4 « Un Scandale de l’évolution» ............................................................... 21
1.5 De nombreux gènes étrangers .............................................................. 23
1.6 Un organisme extraordinairement résistant ......................................... 23
1.7 Les transferts horizontaux, source de variabilité ? ............................... 25
2. Objectifs et stratégies ................................................................................... 27
3. Matériel et méthodes ................................................................................... 29
3.1 Souches et plasmides ............................................................................ 29
3.1.1 Rotifère bdelloïde .............................................................................. 29
3.1.2 Souche bactérienne ........................................................................... 29
3.1.3 Plasmides ........................................................................................... 29
3.2 Milieux, tampons et solutions ............................................................... 30
3.2.1 Milieux de culture .............................................................................. 30
3.2.2 Additifs aux milieux de culture .......................................................... 30
3.2.3 Tampons et solutions ......................................................................... 31
3.3 Maintien des cultures de rotifères ........................................................ 31
3.3.1 Conditions de culture ......................................................................... 31
3.3.2 Récolte d’un grand nombre d’individus ............................................ 32
3.4 Techniques relatives aux acides nucléiques .......................................... 32
3.4.1 Techniques relatives à l’ADN ............................................................. 32
3.4.2 Techniques relatives à l’ARN .............................................................. 38
3.4.3 Electrophorèse sur gel d’agarose ...................................................... 39
3.4.4 Purification d’ADN sur gel d’agarose ................................................. 39
3.5 Techniques relatives à l’utilisation de bactéries ................................... 40
3.5.1 Feeding des rotifères aux bactéries fluorescentes ............................ 40
3.5.2 Transformation de bactéries.............................................................. 40
3.6 Transfection de A. vaga ........................................................................ 42
3.7 Dessiccation du rotifère bdelloïde A.vaga ............................................ 42
3.8 Microscopie ........................................................................................... 43
3.8.1 Technique de fixation ........................................................................ 43
3.8.2 Marquage au DAPI et montage au Mowiol ....................................... 43
4. Résultats et discussion ................................................................................. 45
4.1 Processus d’internalisation d’acides nucléiques ................................... 45
4.1.1 Synthèse des acides nucléiques marqués ......................................... 45
4.1.2 Transfection des acides nucléiques marqués chez A.vaga ................ 52
4.1.3 Nourrissage d’A.vaga aux bactéries fluorescentes : est-ce que la
localisation du signal est identique ? ...................................................................... 54
4.1.4 La dessiccation, origine probable des transferts horizontaux .......... 55
4.2 La fluorescence est-elle altérée par la fixation ? .................................. 58
4.2.1 Fixation au paraformaldéhyde .......................................................... 58
4.2.2 « Le monde est stone » ..................................................................... 59
4.2.3 Observation d’A.vaga in vivo ............................................................. 60
4.2.4 Transfection sur des oeufs, plus efficace ? ........................................ 60
4.3 Transgenèse transitoire ........................................................................ 61
4.3.1 Purification et validation des plasmides pCS2+ et pCS2+eGFP ......... 61
4.3.2 Construction du plasmide mCherry ................................................... 62
4.4 Etude de la résistance/sensibilité d’A.vaga aux antibiotiques ............. 68
Conclusion générale et perspectives ..................................................................... 73
Liste des illustrations ............................................................................................. 77
Lexique .................................................................................................................. 78
Bibliographie .......................................................................................................... 79
Annexes ................................................................................................................. 81
Résumé .................................................................................................................. 94Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65674 Développement de techniques nécessaires à la transformation génétique du rotifère bdelloïde Adineta vaga [TFE / Mémoire] / LUDOVIC HERTER, Auteur . - 2016.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : Biologie médicale Unité de Recherche en Biologie Environnementale et Evolutive URBE rotifères adineta vaga écologie souches plasmides additifs culture ADN ARN électrophorèse sur gel agarose purification ADN feeding transformation bactérienne transfection DAPI Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ................................................................................ 11
Introduction générale ............................................................................................ 13
1. Contexte général ........................................................................................... 15
1.1 Les rotifères… ........................................................................................ 15
1.2 …un embranchement très diversifié ..................................................... 15
1.3 Notre rotifère bdelloïde modèle, Adineta vaga .................................... 17
1.3.1 Ecologie .............................................................................................. 17
1.3.2 Anatomie/physiologie ........................................................................ 17
1.3.3 Un organisme eutélique ..................................................................... 21
1.4 « Un Scandale de l’évolution» ............................................................... 21
1.5 De nombreux gènes étrangers .............................................................. 23
1.6 Un organisme extraordinairement résistant ......................................... 23
1.7 Les transferts horizontaux, source de variabilité ? ............................... 25
2. Objectifs et stratégies ................................................................................... 27
3. Matériel et méthodes ................................................................................... 29
3.1 Souches et plasmides ............................................................................ 29
3.1.1 Rotifère bdelloïde .............................................................................. 29
3.1.2 Souche bactérienne ........................................................................... 29
3.1.3 Plasmides ........................................................................................... 29
3.2 Milieux, tampons et solutions ............................................................... 30
3.2.1 Milieux de culture .............................................................................. 30
3.2.2 Additifs aux milieux de culture .......................................................... 30
3.2.3 Tampons et solutions ......................................................................... 31
3.3 Maintien des cultures de rotifères ........................................................ 31
3.3.1 Conditions de culture ......................................................................... 31
3.3.2 Récolte d’un grand nombre d’individus ............................................ 32
3.4 Techniques relatives aux acides nucléiques .......................................... 32
3.4.1 Techniques relatives à l’ADN ............................................................. 32
3.4.2 Techniques relatives à l’ARN .............................................................. 38
3.4.3 Electrophorèse sur gel d’agarose ...................................................... 39
3.4.4 Purification d’ADN sur gel d’agarose ................................................. 39
3.5 Techniques relatives à l’utilisation de bactéries ................................... 40
3.5.1 Feeding des rotifères aux bactéries fluorescentes ............................ 40
3.5.2 Transformation de bactéries.............................................................. 40
3.6 Transfection de A. vaga ........................................................................ 42
3.7 Dessiccation du rotifère bdelloïde A.vaga ............................................ 42
3.8 Microscopie ........................................................................................... 43
3.8.1 Technique de fixation ........................................................................ 43
3.8.2 Marquage au DAPI et montage au Mowiol ....................................... 43
4. Résultats et discussion ................................................................................. 45
4.1 Processus d’internalisation d’acides nucléiques ................................... 45
4.1.1 Synthèse des acides nucléiques marqués ......................................... 45
4.1.2 Transfection des acides nucléiques marqués chez A.vaga ................ 52
4.1.3 Nourrissage d’A.vaga aux bactéries fluorescentes : est-ce que la
localisation du signal est identique ? ...................................................................... 54
4.1.4 La dessiccation, origine probable des transferts horizontaux .......... 55
4.2 La fluorescence est-elle altérée par la fixation ? .................................. 58
4.2.1 Fixation au paraformaldéhyde .......................................................... 58
4.2.2 « Le monde est stone » ..................................................................... 59
4.2.3 Observation d’A.vaga in vivo ............................................................. 60
4.2.4 Transfection sur des oeufs, plus efficace ? ........................................ 60
4.3 Transgenèse transitoire ........................................................................ 61
4.3.1 Purification et validation des plasmides pCS2+ et pCS2+eGFP ......... 61
4.3.2 Construction du plasmide mCherry ................................................... 62
4.4 Etude de la résistance/sensibilité d’A.vaga aux antibiotiques ............. 68
Conclusion générale et perspectives ..................................................................... 73
Liste des illustrations ............................................................................................. 77
Lexique .................................................................................................................. 78
Bibliographie .......................................................................................................... 79
Annexes ................................................................................................................. 81
Résumé .................................................................................................................. 94Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65674 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire