Centre de Documentation Campus Montignies
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Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h30-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
Votre centre de documentation sera exceptionnellement fermé de 12h30 à 13h ce lundi 18 novembre.
Egalement, il sera fermé de 12h30 à 13h30 ce mercredi 20 novembre.
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Titre : ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche Année de publication : 2015 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65561 ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE [TFE / Mémoire] / Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche . - 2015.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65561 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : Accélérer le diagnostic des carbapénémases en milieu hospitalier : évaluation du kit BD MAX Check- Points CPO (Becton, Dickinson and Company) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Ghalia Nedjai ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2024 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les entérobactéries productrices de carbapénémases sont devenues une menace croissante pour la santé publique en raison de leur résistance aux carbapénèmes, les antibiotiques de dernier recours. Dans cette étude, les performances du kit BD MAX Check-Points CPO sont évaluées pour la détection rapide des CPE en milieu hospitalier.
Les performances du kit BD MAX Check-Points CPO dans la détection des bactéries entérobactéries productrices de carbapénémases (CPE) sont évaluées dans cette étude. Deux méthodes sont comparées : celle de routine au laboratoire du CNDG et celle réalisée par biologie moléculaire grâce à l'automate BD-MAX. L'objectif est d'assurer une détection rapide des CPE et d'évaluer l'impact clinique et financier de l'utilisation du kit BD MAX CPC.
L'efficacité du kit a été testée sur des cultures de bactéries CPE, des souches en croissance sur un milieu chromogène spécifique (OXA/CARB), ainsi que sur des échantillons primaires prélevés. Une analyse financière a ensuite été réalisée pour évaluer la viabilité de son intégration dans les pratiques de routine. Les résultats indiquent que l'utilisation du BD MAX en complément de la méthode de routine représente des coûts comparables à ceux de la méthode de routine seule, tout en permettant un gain de 24 heures.
L'utilisation de cette technologie permettrait une détection spécifique, rapide et efficace des résistances bactériennes, améliorant ainsi significativement le diagnostic et la gestion des infections nosocomiales. En perspective, le développement d'une technique de PCR capable d'identifier simultanément les BLSE, CPE et VRE pourrait encore améliorer la détection de ces résistances bactériennes.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 7
Introduction ............................................................................................................................... 9
1 Partie théorique ............................................................................................................... 10
1.1 Les bactéries résistantes .......................................................................................... 10
1.1.1 Les entérobactéries.......................................................................................... 10
1.2 Les antibiotiques ...................................................................................................... 11
1.2.1 Les β-lactamines .............................................................................................. 11
1.2.2 Mécanismes d’action des antibiotiques .......................................................... 13
1.2.3 Mécanismes de résistance aux antibiotiques .................................................. 14
1.3 Les β-lactamases ...................................................................................................... 15
1.3.1 Les carbapénémases ........................................................................................ 15
1.4 Les implications cliniques des infections dues aux CPE ........................................... 17
1.4.1 Epidémiologie des carbapénémases en Belgique............................................ 17
1.4.2 Transmission .................................................................................................... 20
1.4.3 Surveillance et dépistage des CPE ................................................................... 21
1.4.4 Traitement des infections dues aux CPE.......................................................... 23
1.5 Diagnostic des carbapénémases .............................................................................. 23
1.5.1 L’antibiogramme par disque de diffusion sur gélose ...................................... 23
1.5.2 Test immunochromatographique .................................................................... 25
1.5.3 La PCR en temps réel ....................................................................................... 25
1.6 Objectifs et stratégie................................................................................................ 27
2 Partie Pratique ................................................................................................................. 28
2.1 Matériel.................................................................................................................... 28
2.2 Méthodes ................................................................................................................. 28
2.2.1 Dépistage des CPE par la méthode de routine ................................................ 28
2.2.2 Dépistage des CPE à l’aide de l’automate BD MAX ......................................... 31
2.2.3 Evaluation des performances du kit BD MAX CPC ........................................... 38
2.2.4 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAX sur
colonies 39
2.2.5 Evaluation des performances du kit sur frottis rectal ..................................... 40
2.2.6 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 40
2.2.7 Analyse financière ............................................................................................ 41
2.3 Résultats et discussion ............................................................................................. 42
2.3.1 Evaluation des performances du kit BD MAXTM CPC ....................................... 42
2.3.2 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAXTM sur
colonies 46
2.3.3 Evaluation des performances du kit BD MAXTM sur frottis rectal ................... 51
2.3.4 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 52
2.3.5 Comparaison des coûts .................................................................................... 52
Conclusion générale ................................................................................................................. 55
Liste des figures ....................................................................................................................... 57
Liste des tableaux..................................................................................................................... 58
Abréviations ............................................................................................................................. 59
Bibliographie ............................................................................................................................ 60
Table des annexes .................................................................................................................... 64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119415 Accélérer le diagnostic des carbapénémases en milieu hospitalier : évaluation du kit BD MAX Check- Points CPO (Becton, Dickinson and Company) [TFE / Mémoire] / Ghalia Nedjai ; Caroline Charlier, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2024.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Langues : Français (fre)
Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les entérobactéries productrices de carbapénémases sont devenues une menace croissante pour la santé publique en raison de leur résistance aux carbapénèmes, les antibiotiques de dernier recours. Dans cette étude, les performances du kit BD MAX Check-Points CPO sont évaluées pour la détection rapide des CPE en milieu hospitalier.
Les performances du kit BD MAX Check-Points CPO dans la détection des bactéries entérobactéries productrices de carbapénémases (CPE) sont évaluées dans cette étude. Deux méthodes sont comparées : celle de routine au laboratoire du CNDG et celle réalisée par biologie moléculaire grâce à l'automate BD-MAX. L'objectif est d'assurer une détection rapide des CPE et d'évaluer l'impact clinique et financier de l'utilisation du kit BD MAX CPC.
L'efficacité du kit a été testée sur des cultures de bactéries CPE, des souches en croissance sur un milieu chromogène spécifique (OXA/CARB), ainsi que sur des échantillons primaires prélevés. Une analyse financière a ensuite été réalisée pour évaluer la viabilité de son intégration dans les pratiques de routine. Les résultats indiquent que l'utilisation du BD MAX en complément de la méthode de routine représente des coûts comparables à ceux de la méthode de routine seule, tout en permettant un gain de 24 heures.
L'utilisation de cette technologie permettrait une détection spécifique, rapide et efficace des résistances bactériennes, améliorant ainsi significativement le diagnostic et la gestion des infections nosocomiales. En perspective, le développement d'une technique de PCR capable d'identifier simultanément les BLSE, CPE et VRE pourrait encore améliorer la détection de ces résistances bactériennes.Note de contenu : Table des matières
Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 7
Introduction ............................................................................................................................... 9
1 Partie théorique ............................................................................................................... 10
1.1 Les bactéries résistantes .......................................................................................... 10
1.1.1 Les entérobactéries.......................................................................................... 10
1.2 Les antibiotiques ...................................................................................................... 11
1.2.1 Les β-lactamines .............................................................................................. 11
1.2.2 Mécanismes d’action des antibiotiques .......................................................... 13
1.2.3 Mécanismes de résistance aux antibiotiques .................................................. 14
1.3 Les β-lactamases ...................................................................................................... 15
1.3.1 Les carbapénémases ........................................................................................ 15
1.4 Les implications cliniques des infections dues aux CPE ........................................... 17
1.4.1 Epidémiologie des carbapénémases en Belgique............................................ 17
1.4.2 Transmission .................................................................................................... 20
1.4.3 Surveillance et dépistage des CPE ................................................................... 21
1.4.4 Traitement des infections dues aux CPE.......................................................... 23
1.5 Diagnostic des carbapénémases .............................................................................. 23
1.5.1 L’antibiogramme par disque de diffusion sur gélose ...................................... 23
1.5.2 Test immunochromatographique .................................................................... 25
1.5.3 La PCR en temps réel ....................................................................................... 25
1.6 Objectifs et stratégie................................................................................................ 27
2 Partie Pratique ................................................................................................................. 28
2.1 Matériel.................................................................................................................... 28
2.2 Méthodes ................................................................................................................. 28
2.2.1 Dépistage des CPE par la méthode de routine ................................................ 28
2.2.2 Dépistage des CPE à l’aide de l’automate BD MAX ......................................... 31
2.2.3 Evaluation des performances du kit BD MAX CPC ........................................... 38
2.2.4 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAX sur
colonies 39
2.2.5 Evaluation des performances du kit sur frottis rectal ..................................... 40
2.2.6 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 40
2.2.7 Analyse financière ............................................................................................ 41
2.3 Résultats et discussion ............................................................................................. 42
2.3.1 Evaluation des performances du kit BD MAXTM CPC ....................................... 42
2.3.2 Comparaison de la méthode de routine avec l’utilisation du kit BD MAXTM sur
colonies 46
2.3.3 Evaluation des performances du kit BD MAXTM sur frottis rectal ................... 51
2.3.4 Evaluation du gain de TAT ............................................................................... 52
2.3.5 Comparaison des coûts .................................................................................... 52
Conclusion générale ................................................................................................................. 55
Liste des figures ....................................................................................................................... 57
Liste des tableaux..................................................................................................................... 58
Abréviations ............................................................................................................................. 59
Bibliographie ............................................................................................................................ 60
Table des annexes .................................................................................................................... 64Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119415 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : Actualisation des méthodes de dépistage de la sphérocytose héréditaire. Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Nicolas Bailly, Année de publication : 2008 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Mots-clés : HEMATOLOGIE ANOMALIE GLOBULES ROUGES SPHEROCYTOSE HEREDITAIRE MALADIE MINKOWSKI CHAUFFARD HEMOGRAMME FROTTIS SANGUIN CRYOHEMOLYSE RESISTANCE OSMOTIQUE CYTOMETRIE DE FLUX Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64419 Actualisation des méthodes de dépistage de la sphérocytose héréditaire. [TFE / Mémoire] / Nicolas Bailly, . - 2008.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur
Mots-clés : HEMATOLOGIE ANOMALIE GLOBULES ROUGES SPHEROCYTOSE HEREDITAIRE MALADIE MINKOWSKI CHAUFFARD HEMOGRAMME FROTTIS SANGUIN CRYOHEMOLYSE RESISTANCE OSMOTIQUE CYTOMETRIE DE FLUX Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=64419 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : Adaptation du kit Innovance® VWF:Ac (Siemens) sur STAR-MAX (Stago) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Sevgi Yoldas, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2021 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : CHU Charleroi maladie Willebrand dosage fonctionnel VWF:Ac diagnostic biologique protocole Stago et GRAF validation méthode Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La maladie de Von Willebrand est la maladie héréditaire hémorragique la plus fréquente de l’hémostase primaire avec une prévalence de l’ordre de 1 %. Elle est due soit à une anomalie qualitative (type 2) ou quantitative (type 1 ou type 3) du VWF. Le diagnostic de la maladie de Von Willebrand reste complexe du fait de la très grande hétérogénéité clinique et biologique. La détermination de l’activité de liaison au GP1b reste un point important dans le diagnostic de la maladie. Pendant de longues années, le VWF:Rco c’est-à-dire la liaison du VWF au GP1b plaquettaire en présence de ristocétine a été utilisé. Cependant, cette méthode présente de nombreux désavantages : défaut de reproductibilité, sensibilité, polymorphisme du domaine A1 ne répondant pas à la ristocétine. Tous ces défauts ont conduit à l’apparition de nouveaux tests sur le marché, notamment le coffret Innovance® VWF:Ac de la firme Siemens. Dans cette méthode, une GP1b possédant deux mutations-de-gains se lie spontanément au VWF en
absence de ristocétine. Elle offre même une meilleure reproductibilité et une limite de détection plus basse d’après l’insert. Le laboratoire du CHU de Charleroi utilise l’Innovance® sur l’automate BCS-XP de la firme Siemens pour la détermination de l’activité du VWF (méthode de référence). Mais, cet automate n’est utilisé qu'une fois par semaine et donc est incompatible avec des dosages en urgence. De plus, effectuer un dosage en urgence sur BCS-XP coûte cher, c’est un appareil avec un système d’allumage spécifique qui nécessite la reconstitution de contrôles coûteux. La société Diagnostica Stago et GRAF L. ont proposé deux protocoles différents pour adapter ce dosage sur STAR-MAX, l’automate de routine d’hémostase. L’objectif de ce travail est d’adapter le coffret Innovance sur STAR-MAX selon les deux méthodes, effectuer une
validation en évaluant différents critères (répétabilité, reproductibilité, calibration, courbe dose-réponse, sensibilité, stabilité et les interférences liées à l’hémoglobine) et enfin, de comparer à la méthode de référence pour savoir si les deux méthodes offrent des résultats similaires et peuvent être échangées sans altération du diagnostic du patient. La méthode de GRAF a rapidement été abandonnée due à une mauvaise réponse. Malgré que des résultats satisfaisants ont été obtenus pour la plupart des critères dans méthode de Stago, elle n’a pas été mise au point dû à un défaut de sensibilité.Note de contenu : Table des matières
Remerciements...........................................................................................................................1
Table des matières......................................................................................................................2
Contexte général ........................................................................................................................1
1. L’hémostase ...................................................................................................................1
1.1 L’hémostase primaire ...................................................................................................1
1.2 La coagulation ..............................................................................................................1
1.3 La fibrinolyse................................................................................................................2
1.4 La régulation de l’hémostase........................................................................................2
1.5 Troubles de l’hémostase ...............................................................................................3
2. Le facteur Von Willebrand ............................................................................................3
2.1 Biosynthèse : du gène à la protéine ..............................................................................4
2.2 Les domaines fonctionnels du VWF ............................................................................5
2.3 ADAMTS13 .................................................................................................................6
2.4 Rôles physiologiques....................................................................................................7
2.4.1 Hémostase primaire : adhésion et agrégation plaquettaire ...................................7
2.4.2 Coagulation : transport et protection du FVIII .....................................................7
2.4.3 Participation à la thrombopoïèse...........................................................................7
2.5 Les valeurs normales et les variations physiologiques .................................................8
3. La maladie de Von Willebrand ......................................................................................9
3.1 Classification ................................................................................................................9
3.1.1 Maladie de Von Willebrand de type 1 ..................................................................9
3.1.2 Maladie de Von Willebrand de type 2 ................................................................10
3.1.3 Maladie de Von Willebrand de type 3 ................................................................11
3.2 Diagnostic biologique de la maladie de Von Willebrand...........................................12
3.2.2 Diagnostic difficile..............................................................................................12
3.2.3 Diagnostic différentiel ........................................................................................12
3.2.4 Différents tests réalisés dans un laboratoire médical ..........................................13
A. Test de routine................................................................................................13
B. Test spécifique réalisé lors d’une suspicion de la maladie de Willebrand.....13
C. Tests discriminatifs et spécialisés ..................................................................16
3.3 Traitement...................................................................................................................19
3.3.1 La DDAVP.....................................................................................................19
3.3.2 Les concentrés du VWF .................................................................................19
Objectif et stratégie ..................................................................................................................20
Matériels et méthode................................................................................................................21
1. Réactifs ........................................................................................................................21
1.1 Le coffret Innovance® VWF Ac ................................................................................21
1.2 Autres réactifs, contrôles et calibrateurs.....................................................................23
2. Matériels et appareils ...................................................................................................23
2.1 Matériels .....................................................................................................................23
2.2 Appareils.....................................................................................................................24
2.2.1 STAR®-Max.......................................................................................................24
2.2.2 BCS-XP® ...........................................................................................................25
3. Échantillons..................................................................................................................26
4. Mise au point de la méthode ........................................................................................27
4.1 Le facteur de dilution de l’automate...........................................................................27
4.2 Les volumes des réactifs 1, 2 et 3...............................................................................28
4.3 Le volume d’échantillon.............................................................................................28
Validation de la méthode .........................................................................................................30
1. La fidélité .....................................................................................................................30
1.1 La répétabilité ........................................................................................................31
1.2 La reproductibilité .................................................................................................31
2. La calibration ...............................................................................................................32
3. La courbe dose-réponse ...............................................................................................32
3.1 La sensibilité...............................................................................................................33
4. La stabilité....................................................................................................................34
4.1 La stabilité des QC-Routine Stago .............................................................................34
4.2 La stabilité du réactif 1 ...............................................................................................34
5. La corrélation ...............................................................................................................36
5.1 Passing-Bablok ...........................................................................................................36
5.2 Bland-Altman .............................................................................................................36
6. Les interférences ..........................................................................................................37
Résultats...................................................................................................................................39
1. Évaluation de la répétabilité.........................................................................................39
2. Évaluation de la reproductibilité..................................................................................41
3. La calibration ...............................................................................................................43
4. La courbe dose-réponse ...............................................................................................44
4.1 La sensibilité...............................................................................................................45
5. La stabilité....................................................................................................................46
5.1 Du réactif 1 .................................................................................................................46
5.2 Des QC-routine...........................................................................................................49
6. La corrélation ...............................................................................................................50
7. Les interférences liées à l’Hb.......................................................................................52
Discussion ................................................................................................................................53
Comparaison des automates.....................................................................................................54
1. Nombre de tests............................................................................................................54
2. Prix...............................................................................................................................54
Conclusion ...............................................................................................................................56
Liste des figures .........................................................................................................................1
Liste des tables...........................................................................................................................2
Liste des abréviations.................................................................................................................4
Bibliographie..............................................................................................................................5
Annexes......................................................................................................................................9
Résumé.....................................................................................................................................16
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100374 Adaptation du kit Innovance® VWF:Ac (Siemens) sur STAR-MAX (Stago) [TFE / Mémoire] / Sevgi Yoldas, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2021.
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Langues : Français (fre)
Mots-clés : CHU Charleroi maladie Willebrand dosage fonctionnel VWF:Ac diagnostic biologique protocole Stago et GRAF validation méthode Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La maladie de Von Willebrand est la maladie héréditaire hémorragique la plus fréquente de l’hémostase primaire avec une prévalence de l’ordre de 1 %. Elle est due soit à une anomalie qualitative (type 2) ou quantitative (type 1 ou type 3) du VWF. Le diagnostic de la maladie de Von Willebrand reste complexe du fait de la très grande hétérogénéité clinique et biologique. La détermination de l’activité de liaison au GP1b reste un point important dans le diagnostic de la maladie. Pendant de longues années, le VWF:Rco c’est-à-dire la liaison du VWF au GP1b plaquettaire en présence de ristocétine a été utilisé. Cependant, cette méthode présente de nombreux désavantages : défaut de reproductibilité, sensibilité, polymorphisme du domaine A1 ne répondant pas à la ristocétine. Tous ces défauts ont conduit à l’apparition de nouveaux tests sur le marché, notamment le coffret Innovance® VWF:Ac de la firme Siemens. Dans cette méthode, une GP1b possédant deux mutations-de-gains se lie spontanément au VWF en
absence de ristocétine. Elle offre même une meilleure reproductibilité et une limite de détection plus basse d’après l’insert. Le laboratoire du CHU de Charleroi utilise l’Innovance® sur l’automate BCS-XP de la firme Siemens pour la détermination de l’activité du VWF (méthode de référence). Mais, cet automate n’est utilisé qu'une fois par semaine et donc est incompatible avec des dosages en urgence. De plus, effectuer un dosage en urgence sur BCS-XP coûte cher, c’est un appareil avec un système d’allumage spécifique qui nécessite la reconstitution de contrôles coûteux. La société Diagnostica Stago et GRAF L. ont proposé deux protocoles différents pour adapter ce dosage sur STAR-MAX, l’automate de routine d’hémostase. L’objectif de ce travail est d’adapter le coffret Innovance sur STAR-MAX selon les deux méthodes, effectuer une
validation en évaluant différents critères (répétabilité, reproductibilité, calibration, courbe dose-réponse, sensibilité, stabilité et les interférences liées à l’hémoglobine) et enfin, de comparer à la méthode de référence pour savoir si les deux méthodes offrent des résultats similaires et peuvent être échangées sans altération du diagnostic du patient. La méthode de GRAF a rapidement été abandonnée due à une mauvaise réponse. Malgré que des résultats satisfaisants ont été obtenus pour la plupart des critères dans méthode de Stago, elle n’a pas été mise au point dû à un défaut de sensibilité.Note de contenu : Table des matières
Remerciements...........................................................................................................................1
Table des matières......................................................................................................................2
Contexte général ........................................................................................................................1
1. L’hémostase ...................................................................................................................1
1.1 L’hémostase primaire ...................................................................................................1
1.2 La coagulation ..............................................................................................................1
1.3 La fibrinolyse................................................................................................................2
1.4 La régulation de l’hémostase........................................................................................2
1.5 Troubles de l’hémostase ...............................................................................................3
2. Le facteur Von Willebrand ............................................................................................3
2.1 Biosynthèse : du gène à la protéine ..............................................................................4
2.2 Les domaines fonctionnels du VWF ............................................................................5
2.3 ADAMTS13 .................................................................................................................6
2.4 Rôles physiologiques....................................................................................................7
2.4.1 Hémostase primaire : adhésion et agrégation plaquettaire ...................................7
2.4.2 Coagulation : transport et protection du FVIII .....................................................7
2.4.3 Participation à la thrombopoïèse...........................................................................7
2.5 Les valeurs normales et les variations physiologiques .................................................8
3. La maladie de Von Willebrand ......................................................................................9
3.1 Classification ................................................................................................................9
3.1.1 Maladie de Von Willebrand de type 1 ..................................................................9
3.1.2 Maladie de Von Willebrand de type 2 ................................................................10
3.1.3 Maladie de Von Willebrand de type 3 ................................................................11
3.2 Diagnostic biologique de la maladie de Von Willebrand...........................................12
3.2.2 Diagnostic difficile..............................................................................................12
3.2.3 Diagnostic différentiel ........................................................................................12
3.2.4 Différents tests réalisés dans un laboratoire médical ..........................................13
A. Test de routine................................................................................................13
B. Test spécifique réalisé lors d’une suspicion de la maladie de Willebrand.....13
C. Tests discriminatifs et spécialisés ..................................................................16
3.3 Traitement...................................................................................................................19
3.3.1 La DDAVP.....................................................................................................19
3.3.2 Les concentrés du VWF .................................................................................19
Objectif et stratégie ..................................................................................................................20
Matériels et méthode................................................................................................................21
1. Réactifs ........................................................................................................................21
1.1 Le coffret Innovance® VWF Ac ................................................................................21
1.2 Autres réactifs, contrôles et calibrateurs.....................................................................23
2. Matériels et appareils ...................................................................................................23
2.1 Matériels .....................................................................................................................23
2.2 Appareils.....................................................................................................................24
2.2.1 STAR®-Max.......................................................................................................24
2.2.2 BCS-XP® ...........................................................................................................25
3. Échantillons..................................................................................................................26
4. Mise au point de la méthode ........................................................................................27
4.1 Le facteur de dilution de l’automate...........................................................................27
4.2 Les volumes des réactifs 1, 2 et 3...............................................................................28
4.3 Le volume d’échantillon.............................................................................................28
Validation de la méthode .........................................................................................................30
1. La fidélité .....................................................................................................................30
1.1 La répétabilité ........................................................................................................31
1.2 La reproductibilité .................................................................................................31
2. La calibration ...............................................................................................................32
3. La courbe dose-réponse ...............................................................................................32
3.1 La sensibilité...............................................................................................................33
4. La stabilité....................................................................................................................34
4.1 La stabilité des QC-Routine Stago .............................................................................34
4.2 La stabilité du réactif 1 ...............................................................................................34
5. La corrélation ...............................................................................................................36
5.1 Passing-Bablok ...........................................................................................................36
5.2 Bland-Altman .............................................................................................................36
6. Les interférences ..........................................................................................................37
Résultats...................................................................................................................................39
1. Évaluation de la répétabilité.........................................................................................39
2. Évaluation de la reproductibilité..................................................................................41
3. La calibration ...............................................................................................................43
4. La courbe dose-réponse ...............................................................................................44
4.1 La sensibilité...............................................................................................................45
5. La stabilité....................................................................................................................46
5.1 Du réactif 1 .................................................................................................................46
5.2 Des QC-routine...........................................................................................................49
6. La corrélation ...............................................................................................................50
7. Les interférences liées à l’Hb.......................................................................................52
Discussion ................................................................................................................................53
Comparaison des automates.....................................................................................................54
1. Nombre de tests............................................................................................................54
2. Prix...............................................................................................................................54
Conclusion ...............................................................................................................................56
Liste des figures .........................................................................................................................1
Liste des tables...........................................................................................................................2
Liste des abréviations.................................................................................................................4
Bibliographie..............................................................................................................................5
Annexes......................................................................................................................................9
Résumé.....................................................................................................................................16
Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=100374 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
Titre : Adaptation de la méthodologie de dépistage du MRSA dans un laboratoire accrédité ISO 15189 Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Franz DEBRUXELLES, Auteur ; Eddine LALI SALAH, Directeur de la recherche Année de publication : 2017 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Centre Hospitalier Marie Curie Département de Bactériologie. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction
Partie théorique ...................................................................................................................................... 1
1. Le Staphylococcus aureus ................................................................................................................ 1
1.1 Généralités ................................................................................................................................ 1
1.2 Infections ................................................................................................................................... 1
1.3 Virulence .................................................................................................................................... 1
1.4 Traitement ................................................................................................................................. 2
2. Le MRSA ........................................................................................................................................... 2
2.1 Origine de la résistance à la méticilline ..................................................................................... 2
2.2 Historique de la détection de la résistance à la méticilline ....................................................... 2
2.3 Le MRSA dans le monde ............................................................................................................ 3
2.4 Méthodes mises en place pour contrer le MRSA ...................................................................... 3
3. L’étude ............................................................................................................................................. 4
Partie pratique ......................................................................................................................................... 9
1. But ................................................................................................................................................... 9
2. Principe ............................................................................................................................................ 9
3. Matériel et réactifs .......................................................................................................................... 9
4. Méthode .......................................................................................................................................... 9
4.1 Validation de la méthode ........................................................................................................ 10
4.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 10
4.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 11
4.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 11
5. Résultats ........................................................................................................................................ 12
5.1 Validation des résultats obtenus ............................................................................................. 12
5.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 13
5.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 15
5.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 18Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65830 Adaptation de la méthodologie de dépistage du MRSA dans un laboratoire accrédité ISO 15189 [TFE / Mémoire] / Franz DEBRUXELLES, Auteur ; Eddine LALI SALAH, Directeur de la recherche . - 2017.
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues : Français (fre)
Mots-clés : biologie médicale Centre Hospitalier Marie Curie Département de Bactériologie. Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Note de contenu : Table des matières
Remerciements
Présentation du lieu de stage
Introduction
Partie théorique ...................................................................................................................................... 1
1. Le Staphylococcus aureus ................................................................................................................ 1
1.1 Généralités ................................................................................................................................ 1
1.2 Infections ................................................................................................................................... 1
1.3 Virulence .................................................................................................................................... 1
1.4 Traitement ................................................................................................................................. 2
2. Le MRSA ........................................................................................................................................... 2
2.1 Origine de la résistance à la méticilline ..................................................................................... 2
2.2 Historique de la détection de la résistance à la méticilline ....................................................... 2
2.3 Le MRSA dans le monde ............................................................................................................ 3
2.4 Méthodes mises en place pour contrer le MRSA ...................................................................... 3
3. L’étude ............................................................................................................................................. 4
Partie pratique ......................................................................................................................................... 9
1. But ................................................................................................................................................... 9
2. Principe ............................................................................................................................................ 9
3. Matériel et réactifs .......................................................................................................................... 9
4. Méthode .......................................................................................................................................... 9
4.1 Validation de la méthode ........................................................................................................ 10
4.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 10
4.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 11
4.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 11
5. Résultats ........................................................................................................................................ 12
5.1 Validation des résultats obtenus ............................................................................................. 12
5.2 Une colonie typique est-elle un S.aureus ? ............................................................................. 13
5.3 Est-ce que le temps d’incubation est compris entre 18 et 24h ? ............................................ 15
5.4 Quelle est la température optimale entre 35 et 37°C ? .......................................................... 18Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=65830 Exemplaires
Cote Support Localisation Section Disponibilité aucun exemplaire
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