Caractérisation de kératinocytes knock-out pour la filaggrine dans des épidermes humains reconstruits et optimisation de méthode / Emeric Plasschaert

Public ISBD Titre : Caractérisation de kératinocytes knock-out pour la filaggrine dans des épidermes humains reconstruits et optimisation de méthode Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Emeric Plasschaert ; Yves Poumay, Directeur de la recherche ; Véronique Vallery, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2024 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le groupe McLean, dans le cadre de l’ichtyose vulgaire et de la dermatite atopique, s’est rendu compte que la protéine filaggrine était mutée ou absente. De plus, pour remplacer les modèles vivants et par l’ingénierie de CRISP/Cas9, le Dr. Smits ainsi que son équipe ont réalisé des clones de kératinocytes n’exprimant plus la filaggrine (filaggrine KO) mais également un clone revertant réexprimant la filaggrine (filaggrine reverse). Après avoir obtenu ces clones, une mise en culture a été effectuée afin de reconstituer des épidermes humains reconstruits (RHE). Une fois ces RHE obtenus, des tests ont été réalisés tels que des immunohistochimies, des q-PCR ainsi que des tests de perméabilités. De ces différentes expériences, il ressort que plusieurs protéines réagissent anormalement, notamment l’hornérine. Comme il doutait de sa méthode de cultures, il a confié au LabCeTi de Namur un exemplaire de chacun de ses clones afin de réaliser ces dernières avec une autre méthode, qui est la nôtre. Pour obtenir nos propres résultats, nous avons réalisé diverses séries de RHE ainsi que plusieurs tests similaires à ceux présentés ci-dessus. A la suite de ces manipulations et en comparaison des résultats du Dr. Smits, nous constatons que nos résultats ne sont pas ceux attendus... Note de contenu : Table des ma0ères : Remerciements .................................................................................................................. 4 Table des matières : ........................................................................................................... 5 Présentation lieu de stage : ................................................................................................ 5 Introduction générale : ....................................................................................................... 6 1 Contexte général ........................................................................................................ 7 1.1 La peau ........................................................................................................................... 7 1.2 La structure de la peau.................................................................................................... 8 1.3 Kératinisation ............................................................................................................... 12 1.4 La Filaggrine (FLG) ......................................................................................................... 13 1.5 L’hornérine (HRNR) et la filaggrine 2 (FLG2) .................................................................. 15 2 Objectif et stratégie .................................................................................................. 16 3 Matériels et méthodes .............................................................................................. 20 3.1 Matériels et méthodes « culture cellulaire » ................................................................. 20 3.2 Matériels et méthodes « Immunohistochimie (IHC) » ................................................... 24 3.3 Matériels et méthodes « q-PCR» ................................................................................... 25 4 Résultats et interprétations ...................................................................................... 26 4.1 Culture cellulaire........................................................................................................... 26 4.2 Test TEER ...................................................................................................................... 29 4.3 Immunohistochimie ...................................................................................................... 33 4.4 RT et q-PCR ................................................................................................................... 45 Conclusion et perspectives ................................................................................................ 49 Liste des abréviations ....................................................................................................... 51 Liste des figures ................................................................................................................ 52 Liste des tableaux ............................................................................................................. 53 Bibliographie .................................................................................................................... 55 Liste des annexes.............................................................................................................. 59 Annexes ............................................................................................................................... Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119421 Caractérisation de kératinocytes knock-out pour la filaggrine dans des épidermes humains reconstruits et optimisation de méthode [TFE / Mémoire] / Emeric Plasschaert ; Yves Poumay, Directeur de la recherche ; Véronique Vallery, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2024. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le groupe McLean, dans le cadre de l’ichtyose vulgaire et de la dermatite atopique, s’est rendu compte que la protéine filaggrine était mutée ou absente. De plus, pour remplacer les modèles vivants et par l’ingénierie de CRISP/Cas9, le Dr. Smits ainsi que son équipe ont réalisé des clones de kératinocytes n’exprimant plus la filaggrine (filaggrine KO) mais également un clone revertant réexprimant la filaggrine (filaggrine reverse). Après avoir obtenu ces clones, une mise en culture a été effectuée afin de reconstituer des épidermes humains reconstruits (RHE). Une fois ces RHE obtenus, des tests ont été réalisés tels que des immunohistochimies, des q-PCR ainsi que des tests de perméabilités. De ces différentes expériences, il ressort que plusieurs protéines réagissent anormalement, notamment l’hornérine. Comme il doutait de sa méthode de cultures, il a confié au LabCeTi de Namur un exemplaire de chacun de ses clones afin de réaliser ces dernières avec une autre méthode, qui est la nôtre. Pour obtenir nos propres résultats, nous avons réalisé diverses séries de RHE ainsi que plusieurs tests similaires à ceux présentés ci-dessus. A la suite de ces manipulations et en comparaison des résultats du Dr. Smits, nous constatons que nos résultats ne sont pas ceux attendus... Note de contenu : Table des ma0ères : Remerciements .................................................................................................................. 4 Table des matières : ........................................................................................................... 5 Présentation lieu de stage : ................................................................................................ 5 Introduction générale : ....................................................................................................... 6 1 Contexte général ........................................................................................................ 7 1.1 La peau ........................................................................................................................... 7 1.2 La structure de la peau.................................................................................................... 8 1.3 Kératinisation ............................................................................................................... 12 1.4 La Filaggrine (FLG) ......................................................................................................... 13 1.5 L’hornérine (HRNR) et la filaggrine 2 (FLG2) .................................................................. 15 2 Objectif et stratégie .................................................................................................. 16 3 Matériels et méthodes .............................................................................................. 20 3.1 Matériels et méthodes « culture cellulaire » ................................................................. 20 3.2 Matériels et méthodes « Immunohistochimie (IHC) » ................................................... 24 3.3 Matériels et méthodes « q-PCR» ................................................................................... 25 4 Résultats et interprétations ...................................................................................... 26 4.1 Culture cellulaire........................................................................................................... 26 4.2 Test TEER ...................................................................................................................... 29 4.3 Immunohistochimie ...................................................................................................... 33 4.4 RT et q-PCR ................................................................................................................... 45 Conclusion et perspectives ................................................................................................ 49 Liste des abréviations ....................................................................................................... 51 Liste des figures ................................................................................................................ 52 Liste des tableaux ............................................................................................................. 53 Bibliographie .................................................................................................................... 55 Liste des annexes.............................................................................................................. 59 Annexes ............................................................................................................................... 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