Caractérisation antivirale par test MTS de surfaces produites par pulvérisation cathodique magnétron / Mathilde Borgnet

Public ISBD Titre : Caractérisation antivirale par test MTS de surfaces produites par pulvérisation cathodique magnétron Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Mathilde Borgnet ; Françoise Motte, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2024 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les infections nosocomiales, qu’elles soient bactériennes ou virales, sont un large problème au sein de tous les hôpitaux et centres de soins. Une solution afin de contrer ce type d’infections à donc été investiguée. Une des solutions possibles serait de pouvoir créer des surfaces qui auraient les propriétés d’être antimicrobiennes. Des tests ont été réalisés et l’élaboration de ce genre de surfaces a vu le jour. Les surfaces créées ici à l’Université de Namur, par monsieur Valentin Job, sont produites par un procédé physique en phase vapeur, prénommé la pulvérisation cathodique magnétron. Ce procédé consiste en un dépôt d’un film mince, ayant des propriétés antimicrobiennes, sur des matériaux présents dans les hôpitaux, telles que des poignées de portes, des barres de lit,… Pour pouvoir réaliser et quantifier l’efficacité de ces revêtements, plusieurs tests ont été réalisés envers des bactéries, donnant des résultats prometteurs. Suite à cela, il est important de réaliser d’autres tests afin d’également tester leur efficacité, mais cette fois-ci envers des virus. Le type de virus choisi pour réaliser nos expériences s’est porté sur le PRCV, qui est le Coronavirus respiratoire porcin. Pour travailler avec des virus, l’utilisation de cellules est requise. Travaillant avec un virus porcin, ayant un tropisme pour les cellules de porc, ce sont les cellules ST qui ont été choisies. Les cellules ST sont des cellules de type fibroblastes de testicules de porc. Le test de référence afin de calculer un titre viral est appelé le test aux dilutions limites. Ce test est cependant assez complexe et fastidieux dans sa réalisation. Un nouveau test a donc été mis en place et optimisé ; le test MTS. Suite à cette optimisation, mon travail consistait à quantifier l’effet antiviral de différentes compositions de revêtements. Pour ce faire, une solution virale de concentration connue est déposée sur ces derniers, et est ensuite reprise après un certain temps. Le but réside ensuite dans la quantification de cette concentration virale restante de nos échantillons afin de pouvoir comparer l’efficacité de nos revêtements. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 6 Introduction générale ................................................................................................................ 7 1. Contexte : ........................................................................................................................... 9 1.1. Les Microorganismes ................................................................................................. 9 2. Problématique .................................................................................................................. 10 2.1. Les infections nosocomiales .................................................................................... 10 2.2. Modes de transmission : .......................................................................................... 12 2.3. Traitement de ces infections ................................................................................... 14 2.4. Les infections nosocomiales liées aux virus ............................................................. 15 3. Solution ............................................................................................................................. 17 3.1. Élaboration de surfaces antimicrobiennes .............................................................. 17 3.2. Mécanisme d’action des films antimicrobiens ........................................................ 17 3.3. Composition de la surface ....................................................................................... 18 3.4. Mécanismes d’action des nanoparticules ............................................................... 20 3.4.1. Mécanisme antibactérien ................................................................................ 20 3.4.2. Mécanisme antiviral......................................................................................... 21 4. Technique ......................................................................................................................... 22 4.1. Pulvérisation cathodique magnétron ...................................................................... 22 5. Objectifs et stratégie ........................................................................................................ 24 6. Matériels et méthodes ..................................................................................................... 25 6.1. Le virus : coronavirus respiratoire porcin ................................................................ 25 6.2. Production de virus .................................................................................................. 26 6.3. Type de cellules ........................................................................................................ 27 6.4. La décomplémentation du FBS ................................................................................ 29 6 6.5. La décongélation des cellules .................................................................................. 29 6.6. Le passage des cellules ............................................................................................ 30 6.7. Méthodes pour déterminer un titre viral ................................................................ 32 6.7.1. L’effet cytopathique ......................................................................................... 33 6.7.2. Titration par méthode aux dilutions limites .................................................... 33 6.7.3. Le Test MTS ...................................................................................................... 36 6.8. Optimisation du test MTS ........................................................................................ 40 6.9. Exemple d’un plan de plaque idéal .......................................................................... 43 7. Résultats ........................................................................................................................... 45 7.1. Production de surfaces ............................................................................................ 45 7.2. Production de virus .................................................................................................. 45 7.3. Détermination de la courbe de la charge virale ...................................................... 47 7.4. Tests sur surfaces de carbone (N=1) ........................................................................ 48 7.5. Tests sur surfaces de carbone (N=2 et 3) ................................................................ 51 7.5.1. 2e série : ........................................................................................................... 51 7.5.2. Calibration : ...................................................................................................... 52 7.5.3. 3e série : ........................................................................................................... 54 7.5.4. Calibration : ...................................................................................................... 54 7.6. Tests sur Contrôles................................................................................................... 56 8. Conclusion et perspectives .................................................................................................. 60 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119417 Caractérisation antivirale par test MTS de surfaces produites par pulvérisation cathodique magnétron [TFE / Mémoire] / Mathilde Borgnet ; Françoise Motte, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2024. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les infections nosocomiales, qu’elles soient bactériennes ou virales, sont un large problème au sein de tous les hôpitaux et centres de soins. Une solution afin de contrer ce type d’infections à donc été investiguée. Une des solutions possibles serait de pouvoir créer des surfaces qui auraient les propriétés d’être antimicrobiennes. Des tests ont été réalisés et l’élaboration de ce genre de surfaces a vu le jour. Les surfaces créées ici à l’Université de Namur, par monsieur Valentin Job, sont produites par un procédé physique en phase vapeur, prénommé la pulvérisation cathodique magnétron. Ce procédé consiste en un dépôt d’un film mince, ayant des propriétés antimicrobiennes, sur des matériaux présents dans les hôpitaux, telles que des poignées de portes, des barres de lit,… Pour pouvoir réaliser et quantifier l’efficacité de ces revêtements, plusieurs tests ont été réalisés envers des bactéries, donnant des résultats prometteurs. Suite à cela, il est important de réaliser d’autres tests afin d’également tester leur efficacité, mais cette fois-ci envers des virus. Le type de virus choisi pour réaliser nos expériences s’est porté sur le PRCV, qui est le Coronavirus respiratoire porcin. Pour travailler avec des virus, l’utilisation de cellules est requise. Travaillant avec un virus porcin, ayant un tropisme pour les cellules de porc, ce sont les cellules ST qui ont été choisies. Les cellules ST sont des cellules de type fibroblastes de testicules de porc. Le test de référence afin de calculer un titre viral est appelé le test aux dilutions limites. Ce test est cependant assez complexe et fastidieux dans sa réalisation. Un nouveau test a donc été mis en place et optimisé ; le test MTS. Suite à cette optimisation, mon travail consistait à quantifier l’effet antiviral de différentes compositions de revêtements. Pour ce faire, une solution virale de concentration connue est déposée sur ces derniers, et est ensuite reprise après un certain temps. Le but réside ensuite dans la quantification de cette concentration virale restante de nos échantillons afin de pouvoir comparer l’efficacité de nos revêtements. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage .................................................................................................... 6 Introduction générale ................................................................................................................ 7 1. Contexte : ........................................................................................................................... 9 1.1. Les Microorganismes ................................................................................................. 9 2. Problématique .................................................................................................................. 10 2.1. Les infections nosocomiales .................................................................................... 10 2.2. Modes de transmission : .......................................................................................... 12 2.3. Traitement de ces infections ................................................................................... 14 2.4. Les infections nosocomiales liées aux virus ............................................................. 15 3. Solution ............................................................................................................................. 17 3.1. Élaboration de surfaces antimicrobiennes .............................................................. 17 3.2. Mécanisme d’action des films antimicrobiens ........................................................ 17 3.3. Composition de la surface ....................................................................................... 18 3.4. Mécanismes d’action des nanoparticules ............................................................... 20 3.4.1. Mécanisme antibactérien ................................................................................ 20 3.4.2. Mécanisme antiviral......................................................................................... 21 4. Technique ......................................................................................................................... 22 4.1. Pulvérisation cathodique magnétron ...................................................................... 22 5. Objectifs et stratégie ........................................................................................................ 24 6. Matériels et méthodes ..................................................................................................... 25 6.1. Le virus : coronavirus respiratoire porcin ................................................................ 25 6.2. Production de virus .................................................................................................. 26 6.3. Type de cellules ........................................................................................................ 27 6.4. La décomplémentation du FBS ................................................................................ 29 6 6.5. La décongélation des cellules .................................................................................. 29 6.6. Le passage des cellules ............................................................................................ 30 6.7. Méthodes pour déterminer un titre viral ................................................................ 32 6.7.1. L’effet cytopathique ......................................................................................... 33 6.7.2. Titration par méthode aux dilutions limites .................................................... 33 6.7.3. Le Test MTS ...................................................................................................... 36 6.8. Optimisation du test MTS ........................................................................................ 40 6.9. Exemple d’un plan de plaque idéal .......................................................................... 43 7. Résultats ........................................................................................................................... 45 7.1. Production de surfaces ............................................................................................ 45 7.2. Production de virus .................................................................................................. 45 7.3. Détermination de la courbe de la charge virale ...................................................... 47 7.4. Tests sur surfaces de carbone (N=1) ........................................................................ 48 7.5. Tests sur surfaces de carbone (N=2 et 3) ................................................................ 51 7.5.1. 2e série : ........................................................................................................... 51 7.5.2. Calibration : ...................................................................................................... 52 7.5.3. 3e série : ........................................................................................................... 54 7.5.4. Calibration : ...................................................................................................... 54 7.6. Tests sur Contrôles................................................................................................... 56 8. Conclusion et perspectives .................................................................................................. 60 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=119417

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