Titre :	Qualification d’un kit ELISA commercial de dosage de la protéine A
Type de document :	TFE / Mémoire
Auteurs :	Marie Léonard, Auteur ; Françoise Motte, Directeur de la recherche
Editeur :	Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale
Année de publication :	2019
Note générale :	Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues :	Français (fre)
Mots-clés :	biologie médicale  Univercells
Index. décimale :	TFE Bio Med TFE Biologie médicale
Résumé :	Le but de l’entreprise Univercells est de rendre disponible géographiquement et économiquement des molécules biothérapteutiques et des vaccins. Univercells en a d’ailleurs fait son slogan : « Biologics available to all » Afin d’atteindre cet objectif, les équipes d’Univercells travaillent sur un processus de production et de purification d’un anticorps monoclonal, un biosimilaire de l’adalimumab (commercialisé sous le nom de HUMIRA® par AbbVie). Du fait de son affinité pour TNFα (un facteur pro-inflammatoire), l’adalimumab est une molécule de choix pour le traitement des maladies inflammatoires telle que la polyarthrite rhumatoïde. La production de l’adalimimab se passe en plusieurs étapes : la première est une étape culture cellulaire et la seconde une étape de purification. Au cours de la purification, une colonne de chromatographie d’affinité à la protéine A est utilisée. Cette protéine possède une grande affinité pour les IgG et par conséquent pour le biosimilaire produit. Lors de l’élution de l’anticorps, de la protéine A peut se détacher de la colonne et se retrouver dans le produit fini. Cependant, elle ne peut pas être injectée au patient, du fait des effets toxicologiques qu’elle induit. La présence de cette protéine doit donc impérativement être dosée afin de s’assurer l’innocuité du produit fini. C’est grâce à la technique ELISA, du fait de sa grande spécificité, et du kit Repligen® (9000-1), que cette protéine sera dosée. Cependant, avant d’être utilisée en routine, toute méthode analytique doit être qualifiée et validée. La qualification de cette méthode se base sur les règles de l’ICH Q2 R1, et a pour but l’évaluation de plusieurs paramètres comme : les effets matrice, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la précision intermédiaire, l’exactitude et l’intervalle de validité. La qualification de cette méthode est le sujet de ce travail de fin d’étude. Au terme de celui-ci, les performances de la méthode auront été décrites et les conditions d’utilisation de celle-ci auront été définies et décrites dans une SOP (Standard Operating Procedur).
Note de contenu :	Présentation lieu de stage ..................................................................................................................... 10 Introduction ........................................................................................................................................... 12 1. Contexte général ........................................................................................................................... 13 La production de l’anticorps .................................................................................................. 15 La purification de l’anticorps ................................................................................................. 16 Le rôle de l’analytique ........................................................................................................... 18 La technique ELISA ................................................................................................................ 19 1.4.1 L’ELISA protéine A Repligen® ......................................................................................... 19 1.4.2 L’interprétation des ELISA ............................................................................................. 21 La validation .......................................................................................................................... 22 1.5.1 La limite de quantification ............................................................................................. 24 1.5.2 La linéarité ..................................................................................................................... 24 1.5.3 L’intervalle de validité ................................................................................................... 24 1.5.4 La précision : .................................................................................................................. 25 1.5.4.1 La précision intermédiaire ............................................................................................. 25 1.5.4.2 La répétabilité ................................................................................................................ 25 1.5.5 L’exactitude ................................................................................................................... 25 1.5.6 La spécificité .................................................................................................................. 26 2. Objectifs et stratégie ..................................................................................................................... 27 3. Matériel et méthodes .................................................................................................................... 28 Matériel ................................................................................................................................. 28 3.1.1 Réactifs .......................................................................................................................... 28 3.1.2 Equipements .................................................................................................................. 29 Méthode ................................................................................................................................ 29 3.2.1 Préparation des réactifs ................................................................................................ 29 3.2.2 Préparation des standards ............................................................................................ 30 3.2.3 Préparation des contrôles positifs ................................................................................. 31 3.2.4 Préparation des échantillons ......................................................................................... 31 3.2.4.1 Echantillons pour effet matrice ..................................................................................... 31 3.2.4.2 Echantillons pour la limite de quantification ................................................................ 33 3.2.4.3 Echantillons pour la linéarité ......................................................................................... 33 3.2.4.4 Echantillons pour la répétabilité et précision intermédiaire ........................................ 34 3.2.5 Principe de la méthode ................................................................................................. 36 4. Résultats et discussion .................................................................................................................. 37 Evaluation de l’effet matrice ................................................................................................. 37 La limite de quantification ..................................................................................................... 41 La linéarité ............................................................................................................................. 44 La répétabilité ........................................................................................................................ 46 La précision intermédiaire ..................................................................................................... 48 L’exactitude ........................................................................................................................... 49 Les paramètres étudiés lors de la qualification ..................................................................... 52 Les critères de validité ........................................................................................................... 53 Conclusion ............................................................................................................................................. 56 Liste des figures et tableaux .................................................................................................................. 57 Bibliographie.......................................................................................................................................... 59 Annexes ................................................................................................................................................. 61
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Qualification d’un kit ELISA commercial de dosage de la protéine A [TFE / Mémoire] / Marie Léonard, Auteur ; Françoise Motte, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019.
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Mots-clés :	biologie médicale  Univercells
Index. décimale :	TFE Bio Med TFE Biologie médicale
Résumé :	Le but de l’entreprise Univercells est de rendre disponible géographiquement et économiquement des molécules biothérapteutiques et des vaccins. Univercells en a d’ailleurs fait son slogan : « Biologics available to all » Afin d’atteindre cet objectif, les équipes d’Univercells travaillent sur un processus de production et de purification d’un anticorps monoclonal, un biosimilaire de l’adalimumab (commercialisé sous le nom de HUMIRA® par AbbVie). Du fait de son affinité pour TNFα (un facteur pro-inflammatoire), l’adalimumab est une molécule de choix pour le traitement des maladies inflammatoires telle que la polyarthrite rhumatoïde. La production de l’adalimimab se passe en plusieurs étapes : la première est une étape culture cellulaire et la seconde une étape de purification. Au cours de la purification, une colonne de chromatographie d’affinité à la protéine A est utilisée. Cette protéine possède une grande affinité pour les IgG et par conséquent pour le biosimilaire produit. Lors de l’élution de l’anticorps, de la protéine A peut se détacher de la colonne et se retrouver dans le produit fini. Cependant, elle ne peut pas être injectée au patient, du fait des effets toxicologiques qu’elle induit. La présence de cette protéine doit donc impérativement être dosée afin de s’assurer l’innocuité du produit fini. C’est grâce à la technique ELISA, du fait de sa grande spécificité, et du kit Repligen® (9000-1), que cette protéine sera dosée. Cependant, avant d’être utilisée en routine, toute méthode analytique doit être qualifiée et validée. La qualification de cette méthode se base sur les règles de l’ICH Q2 R1, et a pour but l’évaluation de plusieurs paramètres comme : les effets matrice, la limite de quantification, la linéarité, la répétabilité, la précision intermédiaire, l’exactitude et l’intervalle de validité. La qualification de cette méthode est le sujet de ce travail de fin d’étude. Au terme de celui-ci, les performances de la méthode auront été décrites et les conditions d’utilisation de celle-ci auront été définies et décrites dans une SOP (Standard Operating Procedur).
Note de contenu :	Présentation lieu de stage ..................................................................................................................... 10 Introduction ........................................................................................................................................... 12 1. Contexte général ........................................................................................................................... 13 La production de l’anticorps .................................................................................................. 15 La purification de l’anticorps ................................................................................................. 16 Le rôle de l’analytique ........................................................................................................... 18 La technique ELISA ................................................................................................................ 19 1.4.1 L’ELISA protéine A Repligen® ......................................................................................... 19 1.4.2 L’interprétation des ELISA ............................................................................................. 21 La validation .......................................................................................................................... 22 1.5.1 La limite de quantification ............................................................................................. 24 1.5.2 La linéarité ..................................................................................................................... 24 1.5.3 L’intervalle de validité ................................................................................................... 24 1.5.4 La précision : .................................................................................................................. 25 1.5.4.1 La précision intermédiaire ............................................................................................. 25 1.5.4.2 La répétabilité ................................................................................................................ 25 1.5.5 L’exactitude ................................................................................................................... 25 1.5.6 La spécificité .................................................................................................................. 26 2. Objectifs et stratégie ..................................................................................................................... 27 3. Matériel et méthodes .................................................................................................................... 28 Matériel ................................................................................................................................. 28 3.1.1 Réactifs .......................................................................................................................... 28 3.1.2 Equipements .................................................................................................................. 29 Méthode ................................................................................................................................ 29 3.2.1 Préparation des réactifs ................................................................................................ 29 3.2.2 Préparation des standards ............................................................................................ 30 3.2.3 Préparation des contrôles positifs ................................................................................. 31 3.2.4 Préparation des échantillons ......................................................................................... 31 3.2.4.1 Echantillons pour effet matrice ..................................................................................... 31 3.2.4.2 Echantillons pour la limite de quantification ................................................................ 33 3.2.4.3 Echantillons pour la linéarité ......................................................................................... 33 3.2.4.4 Echantillons pour la répétabilité et précision intermédiaire ........................................ 34 3.2.5 Principe de la méthode ................................................................................................. 36 4. Résultats et discussion .................................................................................................................. 37 Evaluation de l’effet matrice ................................................................................................. 37 La limite de quantification ..................................................................................................... 41 La linéarité ............................................................................................................................. 44 La répétabilité ........................................................................................................................ 46 La précision intermédiaire ..................................................................................................... 48 L’exactitude ........................................................................................................................... 49 Les paramètres étudiés lors de la qualification ..................................................................... 52 Les critères de validité ........................................................................................................... 53 Conclusion ............................................................................................................................................. 56 Liste des figures et tableaux .................................................................................................................. 57 Bibliographie.......................................................................................................................................... 59 Annexes ................................................................................................................................................. 61
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