Influence du sulfate de dextran sur les tests anti-Xa et le test de génération de thrombine après neutralisation de l’héparine / Antoine De Liège

Public ISBD Titre : Influence du sulfate de dextran sur les tests anti-Xa et le test de génération de thrombine après neutralisation de l’héparine Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Antoine De Liège, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Méthode : Les tests anti-Xa ont été réalisés sur le StaR Max 2 et les tests de génération de thrombine sur le ST Genesiia. Le plasma utilisé pour l’étude consiste en un pool de plasma pauvre en plaquettes issus de donneurs sains. Autrement dit, nous avons utilisé du NPP (normal npool plasma) ou « Cryocheck » congelés à -80°C jusqu’à leur utilisation. La gamme de concentration en HNF utilisée pour l’étude était la suivante : 0 ; 0 ;1 ; 0,3 ; 0,5 ; 0,7 et 1 UI/ml. Résultats : Lorsque du sulfate de dextran était ajouté, une surestimation des résultats par rapport aux valeurs en HNF spikées était constatée. De plus, plus la concentration en HNF était élevée, plus le plateau du sulfate de dextran était rapidement atteint contrairement au plancher qui a été atteint pour toutes les concentrations en HNF utilisée avec une concentration de 1μg/ml en sulfate de dextran. Ensuite, il a été déterminé que la concentration en sulfate de dextran qui annule l’effet d’un inhibiteur de l’héparine est de plus ou moins 320μg/ml pour du polybrène et 80μg/ml pour la protamine. Pour finir, dans la deuxième phase, il a été observé que le sulfate de dextran avait une influence sur les tests de génération de thrombine. Conclusion : Les résultats ont montré que le dextran permet de déplacer l’HNF liée par le PF4 ou d’autres protéines plasmatiques ce qui a pour effet d’augmenter l’activité anti-Xa apparente mais aussi que la quantité d’HNF déplacée de sa liaison aspécifique par le dextran est significative car elle est suffisante pour abolir la génération de thrombine en PPP. Note de contenu : Table des matières Remerciements ........................................................................................................................... 4 Table des matières ...................................................................................................................... 5 Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 8 Introduction ................................................................................................................................ 9 Contexte théorique ................................................................................................................... 11 1. Physiologie de l’hémostase .......................................................................................... 12 2. L’héparine .................................................................................................................... 16 2.1. Les HNF ................................................................................................................. 16 2.2. HBPM .................................................................................................................... 17 2.3. Interférences de l’héparine ..................................................................................... 17 2.4. Surveillance de l’héparine...................................................................................... 17 2.5. Comment doser l’héparine ? .................................................................................. 17 2.6. Star max 2 .............................................................................................................. 18 2.6.1. Généralités ...................................................................................................... 18 2.6.2. Test chronométrique ....................................................................................... 19 2.6.3. Test chromogénique ....................................................................................... 19 2.6.4. Test immunologique ....................................................................................... 19 3. Le sulfate de dextran .................................................................................................... 20 3.1. Le sulfate de dextran : généralités ......................................................................... 20 3.2. Dans quel kit peut-on trouver du sulfate de dextran ? ........................................... 23 4. Test de génération de thrombine .................................................................................. 23 4.1. Méthode de mesure ................................................................................................ 25 4.2. Les inhibiteurs de l’héparine .................................................................................. 26 Partie Pratique .......................................................................................................................... 27 1. Hypothèse ..................................................................................................................... 27 2. Objectifs ....................................................................................................................... 27 3. Stratégie ........................................................................................................................ 27 3.1. Test anti-Xa ............................................................................................................ 27 3.1.1. Pré-étude ......................................................................................................... 27 3.1.2. Première phase ................................................................................................ 28 3.2. Test de génération de thrombine ............................................................................ 29 3.2.1. Seconde phase................................................................................................. 29 4. Matériel et réactifs ........................................................................................................ 30 4.1. Matériel .................................................................................................................. 30 4.2. Réactifs .................................................................................................................. 30 5. Méthodologie ............................................................................................................... 33 5.1. Préparation des différentes solutions ..................................................................... 33 5.2. Préparation des différents échantillons .................................................................. 37 5.2.1. Traitement pré-analytique des échantillons de plasma ................................... 38 5.3. Méthodologie pour les tests anti-Xa ...................................................................... 38 5.4. Méthodologie pour les tests de génération de thrombine ...................................... 39 Partie résultats .......................................................................................................................... 27 1. Résultats ....................................................................................................................... 40 1.1. Calibration.............................................................................................................. 40 1.1.1. StaR Max 2 ..................................................................................................... 40 1.1.2. ST Genesiia..................................................................................................... 40 1.2. Contrôles de qualités .............................................................................................. 41 1.2.1. StaR Max 2 ..................................................................................................... 41 1.2.2. ST Genesiia..................................................................................................... 42 1.3. Tests anti-Xa .......................................................................................................... 42 1.3.1. Pré-étude ......................................................................................................... 42 1.3.1.1. Vérification de la précision et de la reproductibilité du technicien avec du NPP spiké avec de l’HNF......................................................................................... 42 1.3.1.2. Première approche sur l’effet du sulfate de dextran ................................. 44 1.3.1.3. Comparaison des résultats des tests anti-Xa avec et sans dextran ............ 44 1.3.1.4. Recherche du plateau haut et du plancher ................................................ 47 1.3.2. Première phase ................................................................................................ 49 1.3.2.1. Recherche de la concentration en sulfate de dextran qui annule l’effet d’un inhibiteur de l’héparine ............................................................................................ 49 1.4. Test de génération de thrombine ............................................................................ 51 1.4.1. Seconde phase................................................................................................. 51 1.4.1.1. NPP seul ................................................................................................... 51 1.4.1.2. TGT: sulfate de dextran + eau PPI ........................................................... 52 1.4.1.3. TGT: protamine + eau PPI........................................................................ 53 1.4.1.4. TGT: Protamine + HNF + eau PPI ........................................................... 54 1.4.1.5. TGT: Protamine + HNF + 10μg/ml de sulfate de dextran ....................... 56 1.4.1.6. TGT: Protamine + HNF + 20μg/ml de sulfate de dextran ....................... 57 1.4.1.7. TGT: Polybrène + HNF + 10μg/ml de sulfate de dextran ........................ 58 1.4.1.8. TGT: Polybrène + HNF + 20μg/ml de sulfate de dextran ........................ 59 2. Discussion .................................................................................................................... 61 2.1. Tests anti-Xa .......................................................................................................... 61 2.2. Test de génération de thrombine ............................................................................ 63 Conclusion ................................................................................................................................ 65 Perspectives .............................................................................................................................. 65 Abréviations ............................................................................................................................. 66 Glossaire ................................................................................................................................... 67 Liste des figures et des tableaux ............................................................................................... 68 Figures ...................................................................................................................................... 68 Tableaux ................................................................................................................................... 69 Bibliographie ............................................................................................................................ 71 Table des matières des annexes ............................................................................................ 75 Annexes .................................................................................................................................... 76 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105751 Influence du sulfate de dextran sur les tests anti-Xa et le test de génération de thrombine après neutralisation de l’héparine [TFE / Mémoire] / Antoine De Liège, Auteur ; Gaël Gilbert, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Méthode : Les tests anti-Xa ont été réalisés sur le StaR Max 2 et les tests de génération de thrombine sur le ST Genesiia. Le plasma utilisé pour l’étude consiste en un pool de plasma pauvre en plaquettes issus de donneurs sains. Autrement dit, nous avons utilisé du NPP (normal npool plasma) ou « Cryocheck » congelés à -80°C jusqu’à leur utilisation. La gamme de concentration en HNF utilisée pour l’étude était la suivante : 0 ; 0 ;1 ; 0,3 ; 0,5 ; 0,7 et 1 UI/ml. Résultats : Lorsque du sulfate de dextran était ajouté, une surestimation des résultats par rapport aux valeurs en HNF spikées était constatée. De plus, plus la concentration en HNF était élevée, plus le plateau du sulfate de dextran était rapidement atteint contrairement au plancher qui a été atteint pour toutes les concentrations en HNF utilisée avec une concentration de 1μg/ml en sulfate de dextran. Ensuite, il a été déterminé que la concentration en sulfate de dextran qui annule l’effet d’un inhibiteur de l’héparine est de plus ou moins 320μg/ml pour du polybrène et 80μg/ml pour la protamine. Pour finir, dans la deuxième phase, il a été observé que le sulfate de dextran avait une influence sur les tests de génération de thrombine. Conclusion : Les résultats ont montré que le dextran permet de déplacer l’HNF liée par le PF4 ou d’autres protéines plasmatiques ce qui a pour effet d’augmenter l’activité anti-Xa apparente mais aussi que la quantité d’HNF déplacée de sa liaison aspécifique par le dextran est significative car elle est suffisante pour abolir la génération de thrombine en PPP. Note de contenu : Table des matières Remerciements ........................................................................................................................... 4 Table des matières ...................................................................................................................... 5 Présentation du lieu de stage ...................................................................................................... 8 Introduction ................................................................................................................................ 9 Contexte théorique ................................................................................................................... 11 1. Physiologie de l’hémostase .......................................................................................... 12 2. L’héparine .................................................................................................................... 16 2.1. Les HNF ................................................................................................................. 16 2.2. HBPM .................................................................................................................... 17 2.3. Interférences de l’héparine ..................................................................................... 17 2.4. Surveillance de l’héparine...................................................................................... 17 2.5. Comment doser l’héparine ? .................................................................................. 17 2.6. Star max 2 .............................................................................................................. 18 2.6.1. Généralités ...................................................................................................... 18 2.6.2. Test chronométrique ....................................................................................... 19 2.6.3. Test chromogénique ....................................................................................... 19 2.6.4. Test immunologique ....................................................................................... 19 3. Le sulfate de dextran .................................................................................................... 20 3.1. Le sulfate de dextran : généralités ......................................................................... 20 3.2. Dans quel kit peut-on trouver du sulfate de dextran ? ........................................... 23 4. Test de génération de thrombine .................................................................................. 23 4.1. Méthode de mesure ................................................................................................ 25 4.2. Les inhibiteurs de l’héparine .................................................................................. 26 Partie Pratique .......................................................................................................................... 27 1. Hypothèse ..................................................................................................................... 27 2. Objectifs ....................................................................................................................... 27 3. Stratégie ........................................................................................................................ 27 3.1. Test anti-Xa ............................................................................................................ 27 3.1.1. Pré-étude ......................................................................................................... 27 3.1.2. Première phase ................................................................................................ 28 3.2. Test de génération de thrombine ............................................................................ 29 3.2.1. Seconde phase................................................................................................. 29 4. Matériel et réactifs ........................................................................................................ 30 4.1. Matériel .................................................................................................................. 30 4.2. Réactifs .................................................................................................................. 30 5. Méthodologie ............................................................................................................... 33 5.1. Préparation des différentes solutions ..................................................................... 33 5.2. Préparation des différents échantillons .................................................................. 37 5.2.1. Traitement pré-analytique des échantillons de plasma ................................... 38 5.3. Méthodologie pour les tests anti-Xa ...................................................................... 38 5.4. Méthodologie pour les tests de génération de thrombine ...................................... 39 Partie résultats .......................................................................................................................... 27 1. Résultats ....................................................................................................................... 40 1.1. Calibration.............................................................................................................. 40 1.1.1. StaR Max 2 ..................................................................................................... 40 1.1.2. ST Genesiia..................................................................................................... 40 1.2. Contrôles de qualités .............................................................................................. 41 1.2.1. StaR Max 2 ..................................................................................................... 41 1.2.2. ST Genesiia..................................................................................................... 42 1.3. Tests anti-Xa .......................................................................................................... 42 1.3.1. Pré-étude ......................................................................................................... 42 1.3.1.1. Vérification de la précision et de la reproductibilité du technicien avec du NPP spiké avec de l’HNF......................................................................................... 42 1.3.1.2. Première approche sur l’effet du sulfate de dextran ................................. 44 1.3.1.3. Comparaison des résultats des tests anti-Xa avec et sans dextran ............ 44 1.3.1.4. Recherche du plateau haut et du plancher ................................................ 47 1.3.2. Première phase ................................................................................................ 49 1.3.2.1. Recherche de la concentration en sulfate de dextran qui annule l’effet d’un inhibiteur de l’héparine ............................................................................................ 49 1.4. Test de génération de thrombine ............................................................................ 51 1.4.1. Seconde phase................................................................................................. 51 1.4.1.1. NPP seul ................................................................................................... 51 1.4.1.2. TGT: sulfate de dextran + eau PPI ........................................................... 52 1.4.1.3. TGT: protamine + eau PPI........................................................................ 53 1.4.1.4. TGT: Protamine + HNF + eau PPI ........................................................... 54 1.4.1.5. TGT: Protamine + HNF + 10μg/ml de sulfate de dextran ....................... 56 1.4.1.6. TGT: Protamine + HNF + 20μg/ml de sulfate de dextran ....................... 57 1.4.1.7. TGT: Polybrène + HNF + 10μg/ml de sulfate de dextran ........................ 58 1.4.1.8. TGT: Polybrène + HNF + 20μg/ml de sulfate de dextran ........................ 59 2. Discussion .................................................................................................................... 61 2.1. Tests anti-Xa .......................................................................................................... 61 2.2. Test de génération de thrombine ............................................................................ 63 Conclusion ................................................................................................................................ 65 Perspectives .............................................................................................................................. 65 Abréviations ............................................................................................................................. 66 Glossaire ................................................................................................................................... 67 Liste des figures et des tableaux ............................................................................................... 68 Figures ...................................................................................................................................... 68 Tableaux ................................................................................................................................... 69 Bibliographie ............................................................................................................................ 71 Table des matières des annexes ............................................................................................ 75 Annexes .................................................................................................................................... 76 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105751

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