Recherche de cellules néoplasiques dans les liquides de ponction par cytométrie en flux / Fanny Watrin

Public ISBD Titre : Recherche de cellules néoplasiques dans les liquides de ponction par cytométrie en flux Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Fanny Watrin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2022 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Laboratoire de biologie clinique  Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les liquides de ponctions sont des échantillons communément traités dans les laboratoires de biologie clinique. Se sont des matrices de choix pour la recherche de cellules néoplasiques et donc pour la détection et le diagnostic de cancers. Les cancers agressifs possèdent une tendance à métastaser, c’est-à-dire à a disséminer dans le corps. C’est lorsque ces cellules passeront dans les liquides qu’elle pourront être détectées et caractérisées. La méthode de référence consiste en une analyse cytologique et anatomopathologie du liquide. Celle-ci prend un certain temps et nécessite des techniciens expérimentés. Elle est aussi sujette à l’interprétation du technologue ce qui peut être délicat dans certains cas de figures. La méthode de recherche par cytométrie en flux permet notamment d’accélérer la remise des résultats mais aussi de confirmer ou infirmer le diagnostic rendu en cytologie. L’immunophénotypage des cellules tumorales permet également un traitement plus ciblé et donc plus efficace pour les patients. La simplicité de la procédure mise en place représente une méthode de choix pour les laboratoires de biologie clinique Note de contenu : Table des matières Introduction générale ............................................................................................................ 6 1. Partie théorique ............................................................................................................. 8 1.1. Les liquides de ponction ............................................................................................. 8 1.1.1. Généralités .............................................................................................................. 8 1.1.2. Composition .......................................................................................................... 11 1.1.3. Types de liquides................................................................................................... 13 1.1.3.1. Le liquide céphalo-rachidien ............................................................................. 13 1.1.3.2. Le liquide péricardique ...................................................................................... 15 1.1.3.3. Le liquide pleural ............................................................................................... 16 1.1.3.4. Le liquide péritonéal.......................................................................................... 17 1.1.3.5. Le liquide synovial ............................................................................................. 18 1.1.3.6. Le lavage broncho-alvéolaire ............................................................................ 19 1.1.4. Cellules retrouvées dans les liquides de ponctions .............................................. 20 1.1.4.1. Les leucocytes matures ..................................................................................... 21 1.1.4.1.1. Les polynucléaires ......................................................................................... 21 1.1.4.1.1.1. Les polynucléaires neutrophiles .................................................................... 21 1.1.4.1.1.2. Les polynucléaires éosinophiles .................................................................... 22 1.1.4.1.1.3. Les polynucléaires basophiles ....................................................................... 22 1.1.4.1.2. Les mononucléaires ....................................................................................... 22 1.1.4.1.2.1. Les lymphocytes ............................................................................................ 22 1.1.4.1.2.2. Les monocytes/macrophages ........................................................................ 23 1.1.4.2. Les cellules mésothéliales ................................................................................. 24 1.1.4.3. Les cellules ciliées .............................................................................................. 25 1.1.4.4. Les cellules néoplasiques .................................................................................. 25 1.2. La cytométrie en flux ................................................................................................ 27 1.2.1. Principe général .................................................................................................... 27 1.2.2. Focalisation hydrodynamique .............................................................................. 28 1.2.3. Excitation lumineuse ............................................................................................. 29 1.2.4. Principe optique .................................................................................................... 31 1.2.5. Détecteur et principe électronique ...................................................................... 33 1.2.6. Données récoltées ................................................................................................ 35 1.2.7. Marquage .............................................................................................................. 36 1.2.7.1. Les colorants fluorescents ................................................................................. 36 1.2.7.2. Les fluorochromes couplés à des anticorps ...................................................... 36 2. Partie pratique : ........................................................................................................... 37 2.2.1. Introduction .......................................................................................................... 37 2.2.2. Matériel et méthodes ........................................................................................... 37 2.2.2.1. Divers ................................................................................................................. 37 2.2.2.2. Appareillage ...................................................................................................... 37 2.2.2.3. Echantillons ....................................................................................................... 37 2.2.2.4. Réactifs : ............................................................................................................ 38 2.2.2.5. Préparation des réactifs .................................................................................... 39 2.2.2.6. Conservation des réactifs .................................................................................. 39 2.2.2.7. Préparation des échantillons ............................................................................ 39 2.2.2.8. Marquage .......................................................................................................... 41 2.2.2.9. Technique Lyse-Wash........................................................................................ 43 2.2.2.10. Réglages du cytomètre ...................................................................................... 43 2.2.2.10.1. Threshold ....................................................................................................... 43 2.2.2.10.2. Compensations .............................................................................................. 43 2.2.2.10.3. PMT (voltage) ................................................................................................ 44 2.2.2.11. Stratégie de « gating » ...................................................................................... 44 2.2.3. Résultats................................................................................................................ 45 2.2.3.1. Analyse d’un échantillon non pathologique ..................................................... 46 2.2.3.1.1. Sélection des singulets .................................................................................. 46 2.2.3.1.2. Exclusion des débris....................................................................................... 46 2.2.3.1.3. Sélection des cellules viables......................................................................... 46 2.2.3.1.4. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 47 2.2.3.1.5. Analyse des sous populations leucocytaires ................................................. 48 2.2.3.1.6. Analyse des sous population lymphocytaires ............................................... 49 2.2.3.1.7. Analyse des cellules extra-hématologiques .................................................. 49 2.2.3.1.8. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .............................. 50 2.2.3.1.9. Evaluation de la stabilité du flux lors de la phase d’acquisition des données........................ ......................................................................................................... 50 2.2.3.1.10. Hiérarchie des gates et pourcentages ........................................................... 50 2.2.3.2. Analyse d’un échantillon pathologique............................................................. 51 2.2.3.2.1. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 51 2.2.3.2.2. Analyse des sous populations leucocytaires et lymphocytaires ................... 51 2.2.3.3. Analyse des cellules extra-hématologiques ...................................................... 52 2.2.3.4. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .................................. 52 2.2.3.5. Hiérarchie des gates et pourcentages............................................................... 53 2.2.3.6. Cas particuliers .................................................................................................. 53 2.2.3.6.1. Neutrophilie ................................................................................................... 54 2.2.3.6.2. Hyper lymphocytose ...................................................................................... 54 2.2.3.6.3. Hyper monocytose ........................................................................................ 54 2.2.3.6.4. Mortalité importante..................................................................................... 55 2.2.3.6.5. Présence de cellules mésothéliales ............................................................... 55 2.2.4. Discussion ............................................................................................................. 56 2.2.5. Conclusion ............................................................................................................. 58 Bibliographie ........................................................................................................................ 59 Liste des figures ................................................................................................................... 64 Liste des tableaux ................................................................................................................ 66 Abréviations......................................................................................................................... 67 Table des annexes ............................................................................................................... 68 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105749 Recherche de cellules néoplasiques dans les liquides de ponction par cytométrie en flux [TFE / Mémoire] / Fanny Watrin, Auteur ; Patrick Vankerkhoven, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2022. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur Langues : Français (fre) Mots-clés : Laboratoire de biologie clinique  Marie Curie Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Les liquides de ponctions sont des échantillons communément traités dans les laboratoires de biologie clinique. Se sont des matrices de choix pour la recherche de cellules néoplasiques et donc pour la détection et le diagnostic de cancers. Les cancers agressifs possèdent une tendance à métastaser, c’est-à-dire à a disséminer dans le corps. C’est lorsque ces cellules passeront dans les liquides qu’elle pourront être détectées et caractérisées. La méthode de référence consiste en une analyse cytologique et anatomopathologie du liquide. Celle-ci prend un certain temps et nécessite des techniciens expérimentés. Elle est aussi sujette à l’interprétation du technologue ce qui peut être délicat dans certains cas de figures. La méthode de recherche par cytométrie en flux permet notamment d’accélérer la remise des résultats mais aussi de confirmer ou infirmer le diagnostic rendu en cytologie. L’immunophénotypage des cellules tumorales permet également un traitement plus ciblé et donc plus efficace pour les patients. La simplicité de la procédure mise en place représente une méthode de choix pour les laboratoires de biologie clinique Note de contenu : Table des matières Introduction générale ............................................................................................................ 6 1. Partie théorique ............................................................................................................. 8 1.1. Les liquides de ponction ............................................................................................. 8 1.1.1. Généralités .............................................................................................................. 8 1.1.2. Composition .......................................................................................................... 11 1.1.3. Types de liquides................................................................................................... 13 1.1.3.1. Le liquide céphalo-rachidien ............................................................................. 13 1.1.3.2. Le liquide péricardique ...................................................................................... 15 1.1.3.3. Le liquide pleural ............................................................................................... 16 1.1.3.4. Le liquide péritonéal.......................................................................................... 17 1.1.3.5. Le liquide synovial ............................................................................................. 18 1.1.3.6. Le lavage broncho-alvéolaire ............................................................................ 19 1.1.4. Cellules retrouvées dans les liquides de ponctions .............................................. 20 1.1.4.1. Les leucocytes matures ..................................................................................... 21 1.1.4.1.1. Les polynucléaires ......................................................................................... 21 1.1.4.1.1.1. Les polynucléaires neutrophiles .................................................................... 21 1.1.4.1.1.2. Les polynucléaires éosinophiles .................................................................... 22 1.1.4.1.1.3. Les polynucléaires basophiles ....................................................................... 22 1.1.4.1.2. Les mononucléaires ....................................................................................... 22 1.1.4.1.2.1. Les lymphocytes ............................................................................................ 22 1.1.4.1.2.2. Les monocytes/macrophages ........................................................................ 23 1.1.4.2. Les cellules mésothéliales ................................................................................. 24 1.1.4.3. Les cellules ciliées .............................................................................................. 25 1.1.4.4. Les cellules néoplasiques .................................................................................. 25 1.2. La cytométrie en flux ................................................................................................ 27 1.2.1. Principe général .................................................................................................... 27 1.2.2. Focalisation hydrodynamique .............................................................................. 28 1.2.3. Excitation lumineuse ............................................................................................. 29 1.2.4. Principe optique .................................................................................................... 31 1.2.5. Détecteur et principe électronique ...................................................................... 33 1.2.6. Données récoltées ................................................................................................ 35 1.2.7. Marquage .............................................................................................................. 36 1.2.7.1. Les colorants fluorescents ................................................................................. 36 1.2.7.2. Les fluorochromes couplés à des anticorps ...................................................... 36 2. Partie pratique : ........................................................................................................... 37 2.2.1. Introduction .......................................................................................................... 37 2.2.2. Matériel et méthodes ........................................................................................... 37 2.2.2.1. Divers ................................................................................................................. 37 2.2.2.2. Appareillage ...................................................................................................... 37 2.2.2.3. Echantillons ....................................................................................................... 37 2.2.2.4. Réactifs : ............................................................................................................ 38 2.2.2.5. Préparation des réactifs .................................................................................... 39 2.2.2.6. Conservation des réactifs .................................................................................. 39 2.2.2.7. Préparation des échantillons ............................................................................ 39 2.2.2.8. Marquage .......................................................................................................... 41 2.2.2.9. Technique Lyse-Wash........................................................................................ 43 2.2.2.10. Réglages du cytomètre ...................................................................................... 43 2.2.2.10.1. Threshold ....................................................................................................... 43 2.2.2.10.2. Compensations .............................................................................................. 43 2.2.2.10.3. PMT (voltage) ................................................................................................ 44 2.2.2.11. Stratégie de « gating » ...................................................................................... 44 2.2.3. Résultats................................................................................................................ 45 2.2.3.1. Analyse d’un échantillon non pathologique ..................................................... 46 2.2.3.1.1. Sélection des singulets .................................................................................. 46 2.2.3.1.2. Exclusion des débris....................................................................................... 46 2.2.3.1.3. Sélection des cellules viables......................................................................... 46 2.2.3.1.4. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 47 2.2.3.1.5. Analyse des sous populations leucocytaires ................................................. 48 2.2.3.1.6. Analyse des sous population lymphocytaires ............................................... 49 2.2.3.1.7. Analyse des cellules extra-hématologiques .................................................. 49 2.2.3.1.8. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .............................. 50 2.2.3.1.9. Evaluation de la stabilité du flux lors de la phase d’acquisition des données........................ ......................................................................................................... 50 2.2.3.1.10. Hiérarchie des gates et pourcentages ........................................................... 50 2.2.3.2. Analyse d’un échantillon pathologique............................................................. 51 2.2.3.2.1. Sélection des populations CD45- et CD45+ ................................................... 51 2.2.3.2.2. Analyse des sous populations leucocytaires et lymphocytaires ................... 51 2.2.3.3. Analyse des cellules extra-hématologiques ...................................................... 52 2.2.3.4. Evaluation du phénotype de la population néoplasique .................................. 52 2.2.3.5. Hiérarchie des gates et pourcentages............................................................... 53 2.2.3.6. Cas particuliers .................................................................................................. 53 2.2.3.6.1. Neutrophilie ................................................................................................... 54 2.2.3.6.2. Hyper lymphocytose ...................................................................................... 54 2.2.3.6.3. Hyper monocytose ........................................................................................ 54 2.2.3.6.4. Mortalité importante..................................................................................... 55 2.2.3.6.5. Présence de cellules mésothéliales ............................................................... 55 2.2.4. Discussion ............................................................................................................. 56 2.2.5. Conclusion ............................................................................................................. 58 Bibliographie ........................................................................................................................ 59 Liste des figures ................................................................................................................... 64 Liste des tableaux ................................................................................................................ 66 Abréviations......................................................................................................................... 67 Table des annexes ............................................................................................................... 68 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=105749

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