Titre :	Détermination de la bioactivité du lysozyme immobilisé dans un assemblage en couche par couche par couche à travers une complexation protéine-polyélectrolyte
Type de document :	TFE / Mémoire
Auteurs :	Timothy BUCHET, Auteur ; Christine Dupont, Directeur de la recherche
Année de publication :	2017
Note générale :	Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur.
Langues :	Français (fre)
Mots-clés :	biologie médicale  UCL Lavoisier  Institute of condensed matter and nanosciences.
Index. décimale :	TFE Bio Med TFE Biologie médicale
Note de contenu :	Table des matières Remerciements .......................................................................................................................... 2 Présentation du lieu de stage..................................................................................................... 5 Introduction ................................................................................................................................ 6 Partie théorique ......................................................................................................................... 8 1. Les enzymes..................................................................................................................... 8 1.1. Définition ..................................................................................................................... 8 1.2. Les acides aminés ........................................................................................................ 8 1.2.1. Structure des acides aminés .................................................................................... 8 1.2.2. Classification des acides aminés selon la polarité ................................................... 9 1.3. Réaction enzymatique ............................................................................................... 10 1.4. Classification des enzymes ........................................................................................ 10 1.4.1. Sur base de la réaction catalysée ........................................................................... 11 1.5. Le Lysozyme ............................................................................................................... 11 1.5.1. Caractéristiques ..................................................................................................... 11 1.5.2. Propriétés du Lysozyme ......................................................................................... 12 1.6. Dosage de l’activité enzymatique .............................................................................. 14 1.6.1. Technique fluorimétrique ...................................................................................... 14 1.6.2. Cinétique enzymatique .......................................................................................... 16 1.6.2.1. Principe ............................................................................................................... 16 1.6.2.2. Energie d’activation ............................................................................................ 17 2. Technique Layer By Layer .............................................................................................. 18 2.1. Signification et avantages .......................................................................................... 18 2.2. Polyélectrolyte ........................................................................................................... 19 2.2.1. Interaction entre polyélectrolytes ......................................................................... 20 2.2.2. Polyélectrolytes en solution diluée ........................................................................ 21 2.2.3. Polyélectrolytes adsorbés ...................................................................................... 23 2.2.3.1. Couches en deux dimensions ............................................................................. 23 2.2.3.1.1. Solution diluée ................................................................................................ 23 2.2.3.2. Couches en trois dimensions auto adsorbées ................................................... 23 2.3. Mécanismes de formation du LBL ............................................................................. 24 2.3.1. Forces électrostatiques .......................................................................................... 25 2.3.2. Interactions hydrophobes ...................................................................................... 25 2.3.3. Ponts hydrogène .................................................................................................... 26 2.3.4. Liaisons ioniques .................................................................................................... 26 2.3.5. Ligand-récepteur .................................................................................................... 27 2.3.6. Assemblage par des liaisons chimiques coordonnées ........................................... 28 2.3.7. Liaison covalente .................................................................................................... 28 2.3.8. Stéréocomplexation ............................................................................................... 29 2.4. Rôle de la Force ionique et pH pour le LBL et les complexes .................................... 30 2.5. Types de surfaces pour fixation du LBL ..................................................................... 31 3. Objectifs et stratégie ..................................................................................................... 32 Partie pratique ......................................................................................................................... 34 1. Dosage de l’activité enzymatique ................................................................................. 34 1.1. Matériel ..................................................................................................................... 34 1.2. Tests cinétiques ......................................................................................................... 35 1.2.1. Méthode................................................................................................................. 35 1.2.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 36 1.3. Limite de détection .................................................................................................... 38 1.3.1. Méthode................................................................................................................. 38 1.3.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 39 2. Assemblage LBL ............................................................................................................. 41 2.1. Matériel ..................................................................................................................... 41 2.2. Création du LBL et quantification des protéines ....................................................... 42 2.2.1. Méthode................................................................................................................. 42 2.2.1.1. Coussin ............................................................................................................... 42 2.2.1.2. Technique classique ........................................................................................... 42 2.2.1.3. Technique employant les complexes (PPCs) ...................................................... 43 2.2.1.4. Quantification des protéines dans le LBL ........................................................... 44 2.2.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 45 2.2.2.1. Calibration .......................................................................................................... 45 2.2.2.2. Quantification de lysozyme immobilisé dans les assemblages.......................... 46 2.3. Dosages enzymatiques .............................................................................................. 47 2.3.1. Méthode................................................................................................................. 47 2.3.1.1. Activité enzymatique .......................................................................................... 47 2.3.1.2. Cinétique enzymatique ...................................................................................... 47 2.3.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 48 2.3.2.1. Test d’activité enzymatique ............................................................................... 48 2.3.2.2. Test de cinétique enzymatique et effet de l’agitation ....................................... 49 3. Test turbidimétrique et UV ........................................................................................... 52 3.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 52 3.2. Résultats et discussions ............................................................................................. 53 4. Analyses par diffusion dynamique de la lumière .......................................................... 57 4.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 57 4.2. Résultat et discussion ................................................................................................ 58
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Détermination de la bioactivité du lysozyme immobilisé dans un assemblage en couche par couche par couche à travers une complexation protéine-polyélectrolyte [TFE / Mémoire] / Timothy BUCHET, Auteur ; Christine Dupont, Directeur de la recherche . - 2017.
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Langues : Français (fre)

Mots-clés :	biologie médicale  UCL Lavoisier  Institute of condensed matter and nanosciences.
Index. décimale :	TFE Bio Med TFE Biologie médicale
Note de contenu :	Table des matières Remerciements .......................................................................................................................... 2 Présentation du lieu de stage..................................................................................................... 5 Introduction ................................................................................................................................ 6 Partie théorique ......................................................................................................................... 8 1. Les enzymes..................................................................................................................... 8 1.1. Définition ..................................................................................................................... 8 1.2. Les acides aminés ........................................................................................................ 8 1.2.1. Structure des acides aminés .................................................................................... 8 1.2.2. Classification des acides aminés selon la polarité ................................................... 9 1.3. Réaction enzymatique ............................................................................................... 10 1.4. Classification des enzymes ........................................................................................ 10 1.4.1. Sur base de la réaction catalysée ........................................................................... 11 1.5. Le Lysozyme ............................................................................................................... 11 1.5.1. Caractéristiques ..................................................................................................... 11 1.5.2. Propriétés du Lysozyme ......................................................................................... 12 1.6. Dosage de l’activité enzymatique .............................................................................. 14 1.6.1. Technique fluorimétrique ...................................................................................... 14 1.6.2. Cinétique enzymatique .......................................................................................... 16 1.6.2.1. Principe ............................................................................................................... 16 1.6.2.2. Energie d’activation ............................................................................................ 17 2. Technique Layer By Layer .............................................................................................. 18 2.1. Signification et avantages .......................................................................................... 18 2.2. Polyélectrolyte ........................................................................................................... 19 2.2.1. Interaction entre polyélectrolytes ......................................................................... 20 2.2.2. Polyélectrolytes en solution diluée ........................................................................ 21 2.2.3. Polyélectrolytes adsorbés ...................................................................................... 23 2.2.3.1. Couches en deux dimensions ............................................................................. 23 2.2.3.1.1. Solution diluée ................................................................................................ 23 2.2.3.2. Couches en trois dimensions auto adsorbées ................................................... 23 2.3. Mécanismes de formation du LBL ............................................................................. 24 2.3.1. Forces électrostatiques .......................................................................................... 25 2.3.2. Interactions hydrophobes ...................................................................................... 25 2.3.3. Ponts hydrogène .................................................................................................... 26 2.3.4. Liaisons ioniques .................................................................................................... 26 2.3.5. Ligand-récepteur .................................................................................................... 27 2.3.6. Assemblage par des liaisons chimiques coordonnées ........................................... 28 2.3.7. Liaison covalente .................................................................................................... 28 2.3.8. Stéréocomplexation ............................................................................................... 29 2.4. Rôle de la Force ionique et pH pour le LBL et les complexes .................................... 30 2.5. Types de surfaces pour fixation du LBL ..................................................................... 31 3. Objectifs et stratégie ..................................................................................................... 32 Partie pratique ......................................................................................................................... 34 1. Dosage de l’activité enzymatique ................................................................................. 34 1.1. Matériel ..................................................................................................................... 34 1.2. Tests cinétiques ......................................................................................................... 35 1.2.1. Méthode................................................................................................................. 35 1.2.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 36 1.3. Limite de détection .................................................................................................... 38 1.3.1. Méthode................................................................................................................. 38 1.3.2. Résultats et discussions ......................................................................................... 39 2. Assemblage LBL ............................................................................................................. 41 2.1. Matériel ..................................................................................................................... 41 2.2. Création du LBL et quantification des protéines ....................................................... 42 2.2.1. Méthode................................................................................................................. 42 2.2.1.1. Coussin ............................................................................................................... 42 2.2.1.2. Technique classique ........................................................................................... 42 2.2.1.3. Technique employant les complexes (PPCs) ...................................................... 43 2.2.1.4. Quantification des protéines dans le LBL ........................................................... 44 2.2.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 45 2.2.2.1. Calibration .......................................................................................................... 45 2.2.2.2. Quantification de lysozyme immobilisé dans les assemblages.......................... 46 2.3. Dosages enzymatiques .............................................................................................. 47 2.3.1. Méthode................................................................................................................. 47 2.3.1.1. Activité enzymatique .......................................................................................... 47 2.3.1.2. Cinétique enzymatique ...................................................................................... 47 2.3.2. Résultats et discussion ........................................................................................... 48 2.3.2.1. Test d’activité enzymatique ............................................................................... 48 2.3.2.2. Test de cinétique enzymatique et effet de l’agitation ....................................... 49 3. Test turbidimétrique et UV ........................................................................................... 52 3.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 52 3.2. Résultats et discussions ............................................................................................. 53 4. Analyses par diffusion dynamique de la lumière .......................................................... 57 4.1. Matériel et méthode ................................................................................................. 57 4.2. Résultat et discussion ................................................................................................ 58
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