Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-17h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h30-18h30
Vendredi : 8h30-12h30 et 13h-14h30
Votre centre de documentation sera exceptionnellement fermé de 12h30 à 13h ce lundi 18 novembre.
Egalement, il sera fermé de 12h30 à 13h30 ce mercredi 20 novembre.
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| Titre : |
ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche |
| Année de publication : |
2015 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55 |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=65561 |
ABONDANCE ET ACTIVITE DU FACTEUR DE TRANSCRIPTION HIF-1 DANS DIFFERENTES CONDITIONS D’HYPOXIE [TFE / Mémoire] / Wiâme BEN EL MOSTAPHA, Auteur ; Guillaume Van Beersel, Directeur de la recherche . - 2015. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
biologie médicale Université de Namur Cellules souches cancéreuses Sein : cancer |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Note de contenu : |
Table des matières
Présentation du lieu de stage ........................................................................................................7
Introduction générale ...................................................................................................................9
1. Introduction théorique ......................................................................................................... 11
1.1. Le sein .......................................................................................................................... 11
1.1.1. Structure du sein................................................................................................... 11
1.1.2. Cellules souches .................................................................................................... 13
1.1.3. Tumeur du sein .................................................................................................... 14
1.1.3.1. Généralités.................................................................................................... 14
1.1.3.2. Cellules souches cancéreuses ........................................................................ 16
1.2. Hypoxie ........................................................................................................................ 17
1.3. Facteur Inductible par l'Hypoxie (HIF) ........................................................................... 18
1.3.1. Généralités ........................................................................................................... 18
1.3.2. Rôle de HIF-1 en hypoxie....................................................................................... 19
1.3.3. HIF-1α ................................................................................................................... 20
1.3.4. Régulation du facteur HIF-1α ................................................................................ 21
1.3.4.1. Mécanisme de dégradation ........................................................................... 21
1.3.4.2. Mécanisme de stabilisation hypoxique .......................................................... 22
2. Objectifs............................................................................................................................... 23
3. Matériel et méthodes .......................................................................................................... 23
3.1. Culture cellulaire .......................................................................................................... 23
3.1.1. Lignée cellulaire utilisée ........................................................................................ 23
3.1.2. Culture cellulaire ................................................................................................... 24
3.2. Extraction de protéines et dosage................................................................................. 25
3.2.1. Extraction des protéines ....................................................................................... 25
3.2.2. Dosage protéique avec le réactif de Pierce ............................................................ 26
3.2.2.1. Principe ......................................................................................................... 26
3.2.2.2. Protocole ...................................................................................................... 27
3.3. Western blot ................................................................................................................ 28
3.3.1. Préparation des échantillons ................................................................................. 28
3.3.2. Préparation du gel polyacrylamide ........................................................................ 28
3.3.3. Chargement des protéines et électrophorèse ....................................................... 29
3.3.4. Transfert semi-humide .......................................................................................... 30
3.3.5. Incubation de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires ............... 31
3.3.5.1. Fluorescence ................................................................................................. 31
3.3.5.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 32
3.3.6. Révélation et quantification .................................................................................. 33
3.3.6.1. Fluorescence ................................................................................................. 33
3.3.6.2. Chémiluminescence ...................................................................................... 34
3.4. PCR quantitative en temps réel (RT-PCR) ...................................................................... 34
3.4.1. Principe ................................................................................................................ 34
3.4.2. Extraction d’ARN ................................................................................................... 35
3.4.3. Transcription inverse ............................................................................................ 36
3.4.4. PCR en temps réel (RT-PCR) .................................................................................. 37
3.4.5. Analyse des résultats ............................................................................................ 38
4. Résultats et discussion ......................................................................................................... 39
4.1. Détection de la protéine HIF-1α .................................................................................... 39
4.1.1. Western blot « classique » et fluorescent .............................................................. 39
4.2. Analyse de l’expression de gènes cibles de HIF-1 .......................................................... 48
4.2.1. Expression du gène SOX2 ...................................................................................... 48
4.2.2. Expression du gène NDRG1B ................................................................................. 49
Conclusions et perspectives ........................................................................................................ 51
Liste des abréviations .................................................................................................................. 53
Bibliographie ............................................................................................................................... 55 |
| Permalink : |
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Exemplaires
