Centre de Documentation Campus Montignies
Horaires :
Lundi : 8h-18h30
Mardi : 8h-18h30
Mercredi 9h-16h30
Jeudi : 8h-18h30
Vendredi : 8h-16h30
Bienvenue sur le catalogue du centre de documentation du campus de Montignies.
| Titre : |
L’expression de gènes comme biomarqueur des effets des radiations dans les cellules immunitaires humaines |
| Type de document : |
TFE / Mémoire |
| Auteurs : |
JULIE BROOS, Auteur ; Ellina Macaeva, Directeur de la recherche ; Arlette Michaux, Directeur de la recherche |
| Année de publication : |
2015 |
| Note générale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
| Langues : |
Français (fre) |
| Mots-clés : |
biologie médicale SCK . CEN Centre d'étude de l'énergie nucléaire Mol radioactivité radiations ionisantes // immunité rayonnement ionisant rayonnements ionisants // ADN : effets protéinie p53 |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Résumé : |
Ce travail réalisé au sein du Centre d’étude de l’énergie nucléaire de Mol aborde l’étude de
l’expression de gènes comme biomarqueur des effets des radiations sur les cellules
immunitaires humaines. Un des facteurs important dans la réponse cellulaire aux
rayonnements ionisants étant la protéine p53, le biomarqueur choisi pour cette étude a été
l’expression de gènes cibles de cette protéine.
Dans la première partie, ce travail a permis l’étude de divers aspects pratiques de l’utilisation
des biomarqueurs de l’expression des gènes en dosimétrie biologique. Cette étude a
également permis de déterminer deux gènes ; VWCE et NDUFAF6 comme étant de bons
biomarqueurs prédictifs de l’exposition des rayonnements.
Dans la seconde partie, ce travail s’est consacré à l’étude de deux lignées cellulaires
possédant un statu p53 différent ; TK6 (p53+/+) et NH32 (p53-/-). Les résultats obtenus ont
permis de faire le lien entre la surexpression de certains gènes en réponse aux radiations et la
présence de cette protéine. Notamment, il a été démontré que les gènes VWCE et NDUFAF6
sont des gènes cibles de cette protéine.
D’une manière générale, ce travail a permis d’apporter un nouvel éclairage sur les études de
dosimétrie biologique utilisant l'expression génétique comme biomarqueur de l'exposition
aux rayonnements ionisants. |
| Note de contenu : |
Tables des Matières
Introduction .............................................................................................................................. 6
1. Partie théorique ................................................................................................................ 8
1.1 Présentation du SCK•CEN ..................................................................................................... 8
1.2 Les rayonnements ionisants ................................................................................................... 8
1.2.1 Introduction ........................................................................................................................ 8
1.2.2 Différentes notions ........................................................................................................... 11
1.3 Les effets biologiques des rayonnements ionisants: les dommages de l'ADN ................. 12
1.4 Les réponses cellulaires aux rayons ionisants: la voie de la protéine p53 ........................ 14
1.4.1 La protéine p53 : " gardien du génome cellulaire" ........................................................... 14
1.4.2 Les différentes étapes dans la réparation des cassures double brins ................................ 15
1.5 La dosimétrie biologique ...................................................................................................... 17
1.6 Les changements dans l'expression génique comme biomarqueur de l'exposition ........ 18
1.7 Objectif du travail ................................................................................................................. 19
2. Matériels et méthodes ..................................................................................................... 20
2.1 Les modèles biologiques ....................................................................................................... 20
2.1.1 Le sang total et les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMCs) .................. 20
2.1.2 Les cultures cellulaires ..................................................................................................... 20
2.2 Irradiation in vitro ................................................................................................................. 21
2.3 Extraction de l’ARN au départ de sang total humain ....................................................... 23
2.3.1 Extraction de l’ARN à partir du kit « PAXgene Blood RNA System » .......................... 23
2.3.2 Extraction d’ARN à partir du kit Qiagen « QIAamp® RNA Blood kit» ......................... 25
2.4 Quantification de l'ARN ....................................................................................................... 26
2.4.1 Principe et appareillage .................................................................................................... 26
2.4.2 Protocole ........................................................................................................................... 26
2.5 Analyse qualitative de l’ARN ............................................................................................... 27
2.5.1 Principe et appareillage .................................................................................................... 27
2.5.2 Analyse des résultats ........................................................................................................ 27
2.6 La PCR quantitative en temps réel ..................................................................................... 28
2.6.1 La transcription inverse .................................................................................................... 28
2.6.2 La PCR quantitative en temps réel ................................................................................... 29
2.6.3 Essai d’un nouveau couple d’amorces ............................................................................. 31
2.6.4 Quantification relative ...................................................................................................... 33
2.6.5 Utilisation de Housekeeping gene (gène de référence) .................................................... 34
2.6.6 Analyse qPCR de gènes radio-induits .............................................................................. 34
2.7 Extraction protéique ............................................................................................................. 35
2.8 Coloration par immunofluorescence ................................................................................... 35
2.9 Western blot .......................................................................................................................... 36
2.9.1 Principe et appareillage .................................................................................................... 36
2.9.2 Réactifs ............................................................................................................................. 38
2.9.3 Protocole ........................................................................................................................... 39
3. Résultats et discussion .................................................................................................... 42
3.1 Coloration des γH2AX ......................................................................................................... 42
3.2 Comparaison de deux kits d’extraction de l’ARN ............................................................. 43
3.3 Effets de la température de conservation des tubes sanguins dans l’expression des
gènes ...................................................................................................................................... 49
3.4 Corrélation entre l’expression des gènes et l’exposition aux rayons X ............................ 51
3.5 Radiosensibilité individuelle ................................................................................................ 56
3.6 Western blot de la protéine p53 .......................................................................................... 57
3.7 Western blot de la p53 phosphorylée .................................................................................. 60
3.8 Western blot de la protéine VWCE ..................................................................................... 64
3.9 L’expression des gènes VWCE et NDUFAF6 dans les cellules TK6 et NH32 .................. 67
4. Conclusion générale et perspectives .............................................................................. 71
4.1 Conclusion générale .............................................................................................................. 71
4.2 Perspectives ........................................................................................................................... 71
5. Abréviation ...................................................................................................................... 72
6. Lexique ............................................................................................................................ 72
7. Bibliographie ................................................................................................................... 73
8. Annexes ............................................................................................................................ 79 |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=64598 |
L’expression de gènes comme biomarqueur des effets des radiations dans les cellules immunitaires humaines [TFE / Mémoire] / JULIE BROOS, Auteur ; Ellina Macaeva, Directeur de la recherche ; Arlette Michaux, Directeur de la recherche . - 2015. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français ( fre)
| Mots-clés : |
biologie médicale SCK . CEN Centre d'étude de l'énergie nucléaire Mol radioactivité radiations ionisantes // immunité rayonnement ionisant rayonnements ionisants // ADN : effets protéinie p53 |
| Index. décimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
| Résumé : |
Ce travail réalisé au sein du Centre d’étude de l’énergie nucléaire de Mol aborde l’étude de
l’expression de gènes comme biomarqueur des effets des radiations sur les cellules
immunitaires humaines. Un des facteurs important dans la réponse cellulaire aux
rayonnements ionisants étant la protéine p53, le biomarqueur choisi pour cette étude a été
l’expression de gènes cibles de cette protéine.
Dans la première partie, ce travail a permis l’étude de divers aspects pratiques de l’utilisation
des biomarqueurs de l’expression des gènes en dosimétrie biologique. Cette étude a
également permis de déterminer deux gènes ; VWCE et NDUFAF6 comme étant de bons
biomarqueurs prédictifs de l’exposition des rayonnements.
Dans la seconde partie, ce travail s’est consacré à l’étude de deux lignées cellulaires
possédant un statu p53 différent ; TK6 (p53+/+) et NH32 (p53-/-). Les résultats obtenus ont
permis de faire le lien entre la surexpression de certains gènes en réponse aux radiations et la
présence de cette protéine. Notamment, il a été démontré que les gènes VWCE et NDUFAF6
sont des gènes cibles de cette protéine.
D’une manière générale, ce travail a permis d’apporter un nouvel éclairage sur les études de
dosimétrie biologique utilisant l'expression génétique comme biomarqueur de l'exposition
aux rayonnements ionisants. |
| Note de contenu : |
Tables des Matières
Introduction .............................................................................................................................. 6
1. Partie théorique ................................................................................................................ 8
1.1 Présentation du SCK•CEN ..................................................................................................... 8
1.2 Les rayonnements ionisants ................................................................................................... 8
1.2.1 Introduction ........................................................................................................................ 8
1.2.2 Différentes notions ........................................................................................................... 11
1.3 Les effets biologiques des rayonnements ionisants: les dommages de l'ADN ................. 12
1.4 Les réponses cellulaires aux rayons ionisants: la voie de la protéine p53 ........................ 14
1.4.1 La protéine p53 : " gardien du génome cellulaire" ........................................................... 14
1.4.2 Les différentes étapes dans la réparation des cassures double brins ................................ 15
1.5 La dosimétrie biologique ...................................................................................................... 17
1.6 Les changements dans l'expression génique comme biomarqueur de l'exposition ........ 18
1.7 Objectif du travail ................................................................................................................. 19
2. Matériels et méthodes ..................................................................................................... 20
2.1 Les modèles biologiques ....................................................................................................... 20
2.1.1 Le sang total et les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMCs) .................. 20
2.1.2 Les cultures cellulaires ..................................................................................................... 20
2.2 Irradiation in vitro ................................................................................................................. 21
2.3 Extraction de l’ARN au départ de sang total humain ....................................................... 23
2.3.1 Extraction de l’ARN à partir du kit « PAXgene Blood RNA System » .......................... 23
2.3.2 Extraction d’ARN à partir du kit Qiagen « QIAamp® RNA Blood kit» ......................... 25
2.4 Quantification de l'ARN ....................................................................................................... 26
2.4.1 Principe et appareillage .................................................................................................... 26
2.4.2 Protocole ........................................................................................................................... 26
2.5 Analyse qualitative de l’ARN ............................................................................................... 27
2.5.1 Principe et appareillage .................................................................................................... 27
2.5.2 Analyse des résultats ........................................................................................................ 27
2.6 La PCR quantitative en temps réel ..................................................................................... 28
2.6.1 La transcription inverse .................................................................................................... 28
2.6.2 La PCR quantitative en temps réel ................................................................................... 29
2.6.3 Essai d’un nouveau couple d’amorces ............................................................................. 31
2.6.4 Quantification relative ...................................................................................................... 33
2.6.5 Utilisation de Housekeeping gene (gène de référence) .................................................... 34
2.6.6 Analyse qPCR de gènes radio-induits .............................................................................. 34
2.7 Extraction protéique ............................................................................................................. 35
2.8 Coloration par immunofluorescence ................................................................................... 35
2.9 Western blot .......................................................................................................................... 36
2.9.1 Principe et appareillage .................................................................................................... 36
2.9.2 Réactifs ............................................................................................................................. 38
2.9.3 Protocole ........................................................................................................................... 39
3. Résultats et discussion .................................................................................................... 42
3.1 Coloration des γH2AX ......................................................................................................... 42
3.2 Comparaison de deux kits d’extraction de l’ARN ............................................................. 43
3.3 Effets de la température de conservation des tubes sanguins dans l’expression des
gènes ...................................................................................................................................... 49
3.4 Corrélation entre l’expression des gènes et l’exposition aux rayons X ............................ 51
3.5 Radiosensibilité individuelle ................................................................................................ 56
3.6 Western blot de la protéine p53 .......................................................................................... 57
3.7 Western blot de la p53 phosphorylée .................................................................................. 60
3.8 Western blot de la protéine VWCE ..................................................................................... 64
3.9 L’expression des gènes VWCE et NDUFAF6 dans les cellules TK6 et NH32 .................. 67
4. Conclusion générale et perspectives .............................................................................. 71
4.1 Conclusion générale .............................................................................................................. 71
4.2 Perspectives ........................................................................................................................... 71
5. Abréviation ...................................................................................................................... 72
6. Lexique ............................................................................................................................ 72
7. Bibliographie ................................................................................................................... 73
8. Annexes ............................................................................................................................ 79 |
| Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=64598 |
|
Exemplaires
