Titre : |
NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS : Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction) |
Type de document : |
TFE / Mιmoire |
Auteurs : |
Pierre ROLLIN, Auteur ; Lιonidas Banyihishako, Directeur de la recherche |
Annιe de publication : |
2015 |
Note gιnιrale : |
Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. |
Langues : |
Franηais (fre) |
Mots-clιs : |
biologie mιdicale GHDC Hτpital Saint Joseph anticoagulants |
Index. dιcimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Rιsumι : |
NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS
Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction)
Prιsentι par ROLLIN Pierre
Avant de pouvoir doser une molιcule, il faut prιparer et dιvelopper une mιthode de dosage ainsi que la valider.
Pour ce travail, les molιcules choisies pour κtre dosιes sont les nouveaux anticoagulants oraux, Dabigatran, Rivaroxaban et Apixaban.
En effet, le dosage danticoagulants devient indispensable pour une certaine fraction de la population. Si le traitement nest pas assez dosι, celui-ci sera inefficace. Tandis quun surdosage peut faciliter lapparition dhιmorragies.
Le dosage, ΰ proprement parlι, se rιalise sur chromatographie liquide couplιe ΰ un spectromθtre de masse en tandem (LC-MS/MS).
Il faut donc prιparer chaque compartiment ΰ pouvoir dιtecter et quantifier les molιcules anticoagulantes.
Pour la chromatographie liquide, les paramθtres de la colonne, la prιparation des phases mobiles ainsi que celle du gradient de concentration sont indispensables.
Pour le spectromθtre de masse, il faut dιterminer les fractions des ions parents et fils et la tension au cτne et lιnergie de collision.
Mais ce nest pas tout. Il faut aussi mettre en place des mιthodes de traitement et de prιparation des ιchantillons.
Pour ce travail, deux mιthodes ont ιtι dιveloppιes. Une par extraction sur un automate nommι Extrahera qui rιalise une extraction liquide/liquide sur support solide, ou SLE, rιalisιe sur plaques de 96 puits, et une autre mιthode par prιcipitation.
Enfin, une mιthode de validation peut κtre mise en place. Elle permet de dιmontrer qu'elle correspond ΰ l'usage pour lequel elle est prιvue. Elle inclut un ensemble dopιrations nιcessaires pour prouver que le protocole est suffisamment exact et fiable pour avoir confiance dans les rιsultats fournis.
On travaille sur la linιaritι ιtendue, la rιpιtabilitι, la reproductibilitι, la limite de dιtection, la limite de quantification et la suppression ou laugmentation dions.
Avec tout ceci, une mιthode valide et prιcise est prκte ΰ lemploi.
|
Note de contenu : |
Table des matiθres
Remerciements
Prιsentation du lieu de stage
Introduction
..8
Partie thιorique
10
1. Les anticoagulants
10
1.1 Un anticoagulant
..10
1.2 Les nouveaux anticoagulants oraux
.10
2. Le prιanalytique
14
2.1 La prιcipitation des protιines (Protein Crash)
....14
2.2 La SLE
.15
2.3 Lιvaporation
16
2.4 La reconstitution
.17
2.5 La chromatographie liquide
..17
2.6 Le spectromθtre de masse
17
3. La validation de mιthode
.21
3.1 La linιaritι ιtendue
.21
3.2 La rιpιtabilitι
..21
3.3 La reproductibilitι
22
3.4 LOD (Limit Of Detection)
.22
3.5 LOQ (Limit Of Quantification)
22
3.6 La suppression ou laugmentation dions
.22
Partie pratique
.23
1. Le matιriel et les mιthodes
23
1.1 Paramθtres de rιglage du spectromθtre de masse
..23
1.1.1 La dιtermination des transitions
23
1.2 Paramθtres de la chromatographie liquide
.25
1.2.1 Les paramθtres de la colonne
.25
1.2.2 Les phases mobiles
.26
1.2.3 Le gradient de concentration
.26
1.3 Les standards internes
28
1.4 La prιparation et le traitement des ιchantillons
..29
1.4.1 Prιcipitation : mode opιratoire
29
1.4.2 SLE (Extrahera) : mode opιratoire
.29
1.5 Evaluation de linιaritι
..30
1.5.1 La linιaritι en solution........................................................
...30
1.5.2 La linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι)
.
.30
1.5.3 La linιaritι par rapport ΰ SLE (Extrahera)
.31
Kits commerciaux (Hyphen BioMed)
..33
1.6 Les calibrateurs
33
1.7 Les contrτles
34
1.8 La rιpιtabilitι
35
1.9 La reproductibilitι
35
1.10 La limite de dιtection
36
1.11 La limite de quantification
36
Rιsultats
.37
1. Rιsultats de la linιaritι en phase liquide (sans plasma)
.
..37
2. Rιsultats de la linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι)
38
3. Rιsultats de la linιaritι sur plasma lyophilisι par SLE
.
.40
3.1 DCM/IPA 95/5
.40
3.2 Acιtate dιthyle
.41
3.3 TBME
42
3.4 DCM/IPA 90/10
..43
4. La limite de linιaritι
.44
5. Passage des calibrateurs et des contrτles
46
6. La rιpιtabilitι de la mιthode pour la molιcule dApixaban
..49
7. La reproductibilitι de la mιthode
.50
8. La limite de dιtection
.51
9. La limite de quantification
.51
10. La suppression ou laugmentation dions
53
Conclusion
54
Glossaire
..55
Bibliographie
56
Annexes
|
Permalink : |
./index.php?lvl=notice_display&id=64051 |
NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS : Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction) [TFE / Mιmoire] / Pierre ROLLIN, Auteur ; Lιonidas Banyihishako, Directeur de la recherche . - 2015. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Franηais ( fre)
Mots-clιs : |
biologie mιdicale GHDC Hτpital Saint Joseph anticoagulants |
Index. dιcimale : |
TFE Bio Med TFE Biologie médicale |
Rιsumι : |
NOUVEAUX ANTICOAGULANTS ORAUX PAR LC-MS/MS
Prιcipitation des protιines et/ou SLE (Supported Liquid Extraction)
Prιsentι par ROLLIN Pierre
Avant de pouvoir doser une molιcule, il faut prιparer et dιvelopper une mιthode de dosage ainsi que la valider.
Pour ce travail, les molιcules choisies pour κtre dosιes sont les nouveaux anticoagulants oraux, Dabigatran, Rivaroxaban et Apixaban.
En effet, le dosage danticoagulants devient indispensable pour une certaine fraction de la population. Si le traitement nest pas assez dosι, celui-ci sera inefficace. Tandis quun surdosage peut faciliter lapparition dhιmorragies.
Le dosage, ΰ proprement parlι, se rιalise sur chromatographie liquide couplιe ΰ un spectromθtre de masse en tandem (LC-MS/MS).
Il faut donc prιparer chaque compartiment ΰ pouvoir dιtecter et quantifier les molιcules anticoagulantes.
Pour la chromatographie liquide, les paramθtres de la colonne, la prιparation des phases mobiles ainsi que celle du gradient de concentration sont indispensables.
Pour le spectromθtre de masse, il faut dιterminer les fractions des ions parents et fils et la tension au cτne et lιnergie de collision.
Mais ce nest pas tout. Il faut aussi mettre en place des mιthodes de traitement et de prιparation des ιchantillons.
Pour ce travail, deux mιthodes ont ιtι dιveloppιes. Une par extraction sur un automate nommι Extrahera qui rιalise une extraction liquide/liquide sur support solide, ou SLE, rιalisιe sur plaques de 96 puits, et une autre mιthode par prιcipitation.
Enfin, une mιthode de validation peut κtre mise en place. Elle permet de dιmontrer qu'elle correspond ΰ l'usage pour lequel elle est prιvue. Elle inclut un ensemble dopιrations nιcessaires pour prouver que le protocole est suffisamment exact et fiable pour avoir confiance dans les rιsultats fournis.
On travaille sur la linιaritι ιtendue, la rιpιtabilitι, la reproductibilitι, la limite de dιtection, la limite de quantification et la suppression ou laugmentation dions.
Avec tout ceci, une mιthode valide et prιcise est prκte ΰ lemploi.
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Note de contenu : |
Table des matiθres
Remerciements
Prιsentation du lieu de stage
Introduction
..8
Partie thιorique
10
1. Les anticoagulants
10
1.1 Un anticoagulant
..10
1.2 Les nouveaux anticoagulants oraux
.10
2. Le prιanalytique
14
2.1 La prιcipitation des protιines (Protein Crash)
....14
2.2 La SLE
.15
2.3 Lιvaporation
16
2.4 La reconstitution
.17
2.5 La chromatographie liquide
..17
2.6 Le spectromθtre de masse
17
3. La validation de mιthode
.21
3.1 La linιaritι ιtendue
.21
3.2 La rιpιtabilitι
..21
3.3 La reproductibilitι
22
3.4 LOD (Limit Of Detection)
.22
3.5 LOQ (Limit Of Quantification)
22
3.6 La suppression ou laugmentation dions
.22
Partie pratique
.23
1. Le matιriel et les mιthodes
23
1.1 Paramθtres de rιglage du spectromθtre de masse
..23
1.1.1 La dιtermination des transitions
23
1.2 Paramθtres de la chromatographie liquide
.25
1.2.1 Les paramθtres de la colonne
.25
1.2.2 Les phases mobiles
.26
1.2.3 Le gradient de concentration
.26
1.3 Les standards internes
28
1.4 La prιparation et le traitement des ιchantillons
..29
1.4.1 Prιcipitation : mode opιratoire
29
1.4.2 SLE (Extrahera) : mode opιratoire
.29
1.5 Evaluation de linιaritι
..30
1.5.1 La linιaritι en solution........................................................
...30
1.5.2 La linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι)
.
.30
1.5.3 La linιaritι par rapport ΰ SLE (Extrahera)
.31
Kits commerciaux (Hyphen BioMed)
..33
1.6 Les calibrateurs
33
1.7 Les contrτles
34
1.8 La rιpιtabilitι
35
1.9 La reproductibilitι
35
1.10 La limite de dιtection
36
1.11 La limite de quantification
36
Rιsultats
.37
1. Rιsultats de la linιaritι en phase liquide (sans plasma)
.
..37
2. Rιsultats de la linιaritι sur plasma reconstituι (lyophilisι)
38
3. Rιsultats de la linιaritι sur plasma lyophilisι par SLE
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.40
3.1 DCM/IPA 95/5
.40
3.2 Acιtate dιthyle
.41
3.3 TBME
42
3.4 DCM/IPA 90/10
..43
4. La limite de linιaritι
.44
5. Passage des calibrateurs et des contrτles
46
6. La rιpιtabilitι de la mιthode pour la molιcule dApixaban
..49
7. La reproductibilitι de la mιthode
.50
8. La limite de dιtection
.51
9. La limite de quantification
.51
10. La suppression ou laugmentation dions
53
Conclusion
54
Glossaire
..55
Bibliographie
56
Annexes
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