Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs / Klára Kara

Public ISBD Titre : Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Klára Kara, Auteur ; Mélanie Dekeyser, Directeur de la recherche ; Quentin Delefortrie, Directeur de la recherche ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ces dernières décennies, au laboratoire d’hématologie, la cytométrie en flux est devenue une technique indispensable pour le diagnostic et suivi de nombreuses hémopathies et lymphomes, en complément à la numération et à la cytologie. Elle permet d’obtenir des informations au niveau des cellules individuelles en termes de taille, complexité cellulaire et marqueurs de surface. Si au début, les possibilités étaient limitées avec des appareils à un seul laser, désormais le potentiel est de plus en plus élargi grâce aux cytomètres multi-laser. La découverte des «Clusters of Differentiation» et l’étoffement des connaissances quant à leur rôle et présence ou absence dans les diverses pathologies a permis le développement d’anticorps monoclonaux se liant à ces épitopes. Les anticorps peuvent désormais être conjugués à un panel de fluorochromes particulièrement varié – permettant d’obtenir des signaux fluorescents sur une gamme de longueurs d’onde plus étendue. Le laboratoire d’hématologie de la Clinique Notre-Dame de Grâce de Gosselies vient d’acquérir un cytomètre Beckman Coulter Navios EX, trois lasers, permettant l’exploration simultanée de douze paramètres. Les panels de marqueurs doivent être adaptés: de cinq anticorps exploités à ce jour, désormais, dix peuvent être utilisés lors d’une même analyse. Le présent travail propose des nouveaux panels en tenant compte des contraintes imposées et en se basant sur des propositions de publications scientifiques récentes. Note de contenu : Table des matières Clinique Notre-Dame de Grâce, Gosselies ......................................................................................... 7 Introduction générale ........................................................................................................................ 8 1 Cytofluorométrie en flux ............................................................................................................. 10 1.1 Principe de fonctionnement ................................................................................................... 11 Composant fluidique / hydrodynamique ........................................................................ 12 Composant optique ......................................................................................................... 13 Composant numérique .................................................................................................... 22 Tri des cellules ................................................................................................................. 24 1.2 Chevauchement spectral et compensation ............................................................................ 25 2 Beckman Coulter Navios EX ........................................................................................................ 27 3 Pathologies .................................................................................................................................. 29 3.1 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) .................................................................................... 29 3.2 Lymphocytose B monoclonale (MBL) ..................................................................................... 33 3.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ........................................................................................ 33 4 Marqueurs utiles dans le cadre des syndromes lymphoprolifératifs B chroniques ................... 35 4.1 Altération du phénotypage à la suite d’un traitement .......................................................... 36 5 Objectif du travail de fin d’études et stratégie ........................................................................... 38 6 Matériel, méthode et hypothèses de travail .............................................................................. 40 6.1 Matériel nécessaire à l’immunophénotypage........................................................................ 40 6.2 Méthode d’immunophénotypage .......................................................................................... 41 6.3 Marqueurs de «Cluster of Differentiation» utilisés ............................................................... 43 6.4 Critères à prendre en compte lors de la création d’un panel de marqueurs......................... 51 Contrôle des résultats ..................................................................................................... 51 Le choix des anticorps ..................................................................................................... 52 Attribution des fluorochromes aux marqueurs .............................................................. 52 Densité d’expression des antigènes ................................................................................ 53 7 Résultats et discussion ................................................................................................................ 55 7.1 Proposition de panels pour l’appareil Navios EX ................................................................... 55 Proposition A, élaborée à partir de celle de Beckman Coulter ....................................... 55 Proposition B, élaborée sur base de celle du consortium EuroFlow .............................. 57 Proposition C, basée sur celle du Groupe d’Etude Immunologique des Leucémies....... 60 Proposition D: révision des panels actuels de la CNDG de cinq en dix couleurs ............ 63 Avantages globaux des propositions ............................................................................... 66 Inconvénients globaux des propositions ......................................................................... 66 Perspectives ..................................................................................................................................... 67 Glossaire ........................................................................................................................................... 69 Liste des figures ................................................................................................................................ 71 Abréviations ..................................................................................................................................... 72 Bibliographie .................................................................................................................................... 73 Annexe ............................................................................................................................................. 80 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89137 Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs [TFE / Mémoire] / Klára Kara, Auteur ; Mélanie Dekeyser, Directeur de la recherche ; Quentin Delefortrie, Directeur de la recherche ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2020. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ces dernières décennies, au laboratoire d’hématologie, la cytométrie en flux est devenue une technique indispensable pour le diagnostic et suivi de nombreuses hémopathies et lymphomes, en complément à la numération et à la cytologie. Elle permet d’obtenir des informations au niveau des cellules individuelles en termes de taille, complexité cellulaire et marqueurs de surface. Si au début, les possibilités étaient limitées avec des appareils à un seul laser, désormais le potentiel est de plus en plus élargi grâce aux cytomètres multi-laser. La découverte des «Clusters of Differentiation» et l’étoffement des connaissances quant à leur rôle et présence ou absence dans les diverses pathologies a permis le développement d’anticorps monoclonaux se liant à ces épitopes. Les anticorps peuvent désormais être conjugués à un panel de fluorochromes particulièrement varié – permettant d’obtenir des signaux fluorescents sur une gamme de longueurs d’onde plus étendue. Le laboratoire d’hématologie de la Clinique Notre-Dame de Grâce de Gosselies vient d’acquérir un cytomètre Beckman Coulter Navios EX, trois lasers, permettant l’exploration simultanée de douze paramètres. Les panels de marqueurs doivent être adaptés: de cinq anticorps exploités à ce jour, désormais, dix peuvent être utilisés lors d’une même analyse. Le présent travail propose des nouveaux panels en tenant compte des contraintes imposées et en se basant sur des propositions de publications scientifiques récentes. Note de contenu : Table des matières Clinique Notre-Dame de Grâce, Gosselies ......................................................................................... 7 Introduction générale ........................................................................................................................ 8 1 Cytofluorométrie en flux ............................................................................................................. 10 1.1 Principe de fonctionnement ................................................................................................... 11 Composant fluidique / hydrodynamique ........................................................................ 12 Composant optique ......................................................................................................... 13 Composant numérique .................................................................................................... 22 Tri des cellules ................................................................................................................. 24 1.2 Chevauchement spectral et compensation ............................................................................ 25 2 Beckman Coulter Navios EX ........................................................................................................ 27 3 Pathologies .................................................................................................................................. 29 3.1 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) .................................................................................... 29 3.2 Lymphocytose B monoclonale (MBL) ..................................................................................... 33 3.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ........................................................................................ 33 4 Marqueurs utiles dans le cadre des syndromes lymphoprolifératifs B chroniques ................... 35 4.1 Altération du phénotypage à la suite d’un traitement .......................................................... 36 5 Objectif du travail de fin d’études et stratégie ........................................................................... 38 6 Matériel, méthode et hypothèses de travail .............................................................................. 40 6.1 Matériel nécessaire à l’immunophénotypage........................................................................ 40 6.2 Méthode d’immunophénotypage .......................................................................................... 41 6.3 Marqueurs de «Cluster of Differentiation» utilisés ............................................................... 43 6.4 Critères à prendre en compte lors de la création d’un panel de marqueurs......................... 51 Contrôle des résultats ..................................................................................................... 51 Le choix des anticorps ..................................................................................................... 52 Attribution des fluorochromes aux marqueurs .............................................................. 52 Densité d’expression des antigènes ................................................................................ 53 7 Résultats et discussion ................................................................................................................ 55 7.1 Proposition de panels pour l’appareil Navios EX ................................................................... 55 Proposition A, élaborée à partir de celle de Beckman Coulter ....................................... 55 Proposition B, élaborée sur base de celle du consortium EuroFlow .............................. 57 Proposition C, basée sur celle du Groupe d’Etude Immunologique des Leucémies....... 60 Proposition D: révision des panels actuels de la CNDG de cinq en dix couleurs ............ 63 Avantages globaux des propositions ............................................................................... 66 Inconvénients globaux des propositions ......................................................................... 66 Perspectives ..................................................................................................................................... 67 Glossaire ........................................................................................................................................... 69 Liste des figures ................................................................................................................................ 71 Abréviations ..................................................................................................................................... 72 Bibliographie .................................................................................................................................... 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Validation d'une nouvelle génération de cytomètre en flux : DxFlex (Beckman Coulter) / Morena Genovese

Public ISBD Titre : Validation d'une nouvelle génération de cytomètre en flux : DxFlex (Beckman Coulter) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Morena Genovese, Auteur ; Mélanie Dekeyser, Promoteur du mémoire Editeur : Montignies-sur-Sambre : Haute Ecole Louvain en Hainaut Année de publication : 2024 Importance : 106p. Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur . Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La cytométrie en flux existe depuis de nombreux temps et encore de nos jours. Le système utilisé a connu une grande évolution et certaines révolutions dans le domaine. Mais le principe reste identique. En effet, en décomposant le mot « cytométrie en flux » on obtient « cyto » signifiant la cellule, « métrie » représente la mesure et « en flux » correspond à dans un flux. La cytométrie en flux se définit donc comme étant la mesure des différents paramètres de la cellule lors de son passage dans un flux. Grâce à l’ajout supplémentaires d’anticorps marqués, le recueil de multiples informations cellulaires est possible. Ainsi, cette technique permet diverses indications cliniques comme : détermination du type de cellule immature ou précurseurs dans la moelle à la suite d’une cytopénie non expliquée sur l’hémogramme ou de blaste visibles sur un frottis sanguin, détection de l’expression aberrante d’un ou plusieurs populations cellulaires, déterminer de quelle lignée provient la cellule immature ; myéloïde ou lymphoïde ou suivre l’évolution d’un traitement à la suite de la détermination du taux de marqueurs spécifiques aux cellules immatures. Afin d’être exploité dans le domaine clinique, un cytomètre de dernière génération de Beckman Coulter a été inventé. Il se nomme DxFlex et remplace donc son ancêtre le Navios de Beckman Coulter, pour le valider un protocole de validation sera respecté. La distinction entre les deux automates repose sur la taille, le nombres de canaux de fluorescences supplémentaires, le réglage des compensations automatique et l’utilisation d’un détecteur plus sensible (détecteur à photodiode à avalanche) mais aussi d’un seul type de filtre nommé passe-bande réfléchissantes. Ces changements permettent d’obtenir un système plus sensible et spécifique. Lors de sa validation, les majeurs résultats qui en ressort démontrent que lors de la routine, le DxFlex peut remplacer le Navios par sa capacité fournir des résultats fiables. Le but de ce travail de fin d’étude, qui consistait à vérifier la validation de ces automates en analysant plusieurs paramètres est donc effectué. L’appareil est validé et a démontré ses capacités autonomes à être exploités en routine. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage 5 Introduction générale 7 1.Partie théorique 8 1.1. Historique de la cytométrie en flux 8 1.2. La cytométrie en flux 9 1.2.1. L’optique 9 1.2.1.1. La source lumineuse 9 1.2.1.2. Le système de collection 13 1.2.2. La focalisation hydrodynamique 15 1.2.3. L’électronique 16 1.3. L’importance du préanalytique 18 2. La comparaison du Navios et du DxFLEX 20 2.1.1. La taille des automates 21 2.1.2. Les lasers et les canaux de fluorescences 21 2.1.3. Le détecteur et les filtres utilisés 22 2.1.3.1. Les filtres 22 2.1.3.2. Les détecteurs 24 2.1.4. Réglage automatique des compensations 27 3. Pathologies diagnostiquées par la cytométrie en flux 30 3.1. Suivi d’un patient VIH 30 3.2. Hémopathies malignes 31 3.3. Le lavage bronchoalvéolaire 33 4. Leucémie lymphoïde chronique (LLC) 34 4.1. Définitions 34 4.2. Épidémiologie 34 4.3. Signes cliniques 34 4.4. Méthode de diagnostique 34 4.5. Traitement 36 5. Objectifs et stratégie 37 5.1. L’objectif 37 5.2. La stratégie 37 2.Partie pratique 38 2.1. Matériel 38 2.2. Méthodes 38 2.2.1. La répétabilité 39 2.2.2. La reproductibilité 40 2.2.3. La contamination 40 2.2.4. La stabilité 40 2.2.5. Les valeurs de références 41 2.2.6. La comparaison 41 2.3. Résultats et discussions 42 2.3.1. La répétabilité 42 2.3.2. La reproductibilité 45 2.3.3. La contamination 46 2.3.4. La stabilité 47 2.3.5. Les valeurs de références 54 2.3.6. La comparaison 56 Conclusion 59 Abréviations 61 Listes des graphiques 61 Listes des tableaux 61 Listes des figures 62 Bibliographie 64 Listes des annexes 68 Annexes 70 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=121702 Validation d'une nouvelle génération de cytomètre en flux : DxFlex (Beckman Coulter) [TFE / Mémoire] / Morena Genovese, Auteur ; Mélanie Dekeyser, Promoteur du mémoire . - Montignies-sur-Sambre : Haute Ecole Louvain en Hainaut, 2024 . - 106p. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez-vous connecter pour accéder à votre compte lecteur . Langues : Français (fre) Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : La cytométrie en flux existe depuis de nombreux temps et encore de nos jours. Le système utilisé a connu une grande évolution et certaines révolutions dans le domaine. Mais le principe reste identique. En effet, en décomposant le mot « cytométrie en flux » on obtient « cyto » signifiant la cellule, « métrie » représente la mesure et « en flux » correspond à dans un flux. La cytométrie en flux se définit donc comme étant la mesure des différents paramètres de la cellule lors de son passage dans un flux. Grâce à l’ajout supplémentaires d’anticorps marqués, le recueil de multiples informations cellulaires est possible. Ainsi, cette technique permet diverses indications cliniques comme : détermination du type de cellule immature ou précurseurs dans la moelle à la suite d’une cytopénie non expliquée sur l’hémogramme ou de blaste visibles sur un frottis sanguin, détection de l’expression aberrante d’un ou plusieurs populations cellulaires, déterminer de quelle lignée provient la cellule immature ; myéloïde ou lymphoïde ou suivre l’évolution d’un traitement à la suite de la détermination du taux de marqueurs spécifiques aux cellules immatures. Afin d’être exploité dans le domaine clinique, un cytomètre de dernière génération de Beckman Coulter a été inventé. Il se nomme DxFlex et remplace donc son ancêtre le Navios de Beckman Coulter, pour le valider un protocole de validation sera respecté. La distinction entre les deux automates repose sur la taille, le nombres de canaux de fluorescences supplémentaires, le réglage des compensations automatique et l’utilisation d’un détecteur plus sensible (détecteur à photodiode à avalanche) mais aussi d’un seul type de filtre nommé passe-bande réfléchissantes. Ces changements permettent d’obtenir un système plus sensible et spécifique. Lors de sa validation, les majeurs résultats qui en ressort démontrent que lors de la routine, le DxFlex peut remplacer le Navios par sa capacité fournir des résultats fiables. Le but de ce travail de fin d’étude, qui consistait à vérifier la validation de ces automates en analysant plusieurs paramètres est donc effectué. L’appareil est validé et a démontré ses capacités autonomes à être exploités en routine. Note de contenu : Table des matières Présentation du lieu de stage 5 Introduction générale 7 1.Partie théorique 8 1.1. Historique de la cytométrie en flux 8 1.2. La cytométrie en flux 9 1.2.1. L’optique 9 1.2.1.1. La source lumineuse 9 1.2.1.2. Le système de collection 13 1.2.2. La focalisation hydrodynamique 15 1.2.3. L’électronique 16 1.3. L’importance du préanalytique 18 2. La comparaison du Navios et du DxFLEX 20 2.1.1. La taille des automates 21 2.1.2. Les lasers et les canaux de fluorescences 21 2.1.3. Le détecteur et les filtres utilisés 22 2.1.3.1. Les filtres 22 2.1.3.2. Les détecteurs 24 2.1.4. Réglage automatique des compensations 27 3. Pathologies diagnostiquées par la cytométrie en flux 30 3.1. Suivi d’un patient VIH 30 3.2. Hémopathies malignes 31 3.3. Le lavage bronchoalvéolaire 33 4. Leucémie lymphoïde chronique (LLC) 34 4.1. Définitions 34 4.2. Épidémiologie 34 4.3. Signes cliniques 34 4.4. Méthode de diagnostique 34 4.5. Traitement 36 5. Objectifs et stratégie 37 5.1. L’objectif 37 5.2. La stratégie 37 2.Partie pratique 38 2.1. Matériel 38 2.2. Méthodes 38 2.2.1. La répétabilité 39 2.2.2. La reproductibilité 40 2.2.3. La contamination 40 2.2.4. La stabilité 40 2.2.5. Les valeurs de références 41 2.2.6. La comparaison 41 2.3. Résultats et discussions 42 2.3.1. La répétabilité 42 2.3.2. La reproductibilité 45 2.3.3. La contamination 46 2.3.4. La stabilité 47 2.3.5. Les valeurs de références 54 2.3.6. La comparaison 56 Conclusion 59 Abréviations 61 Listes des graphiques 61 Listes des tableaux 61 Listes des figures 62 Bibliographie 64 Listes des annexes 68 Annexes 70 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=121702

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