Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs / Klára Kara

Public ISBD Titre : Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Klára Kara, Auteur ; Mélanie DEKEYSER, Directeur de la recherche ; Quentin Delefortrie, Directeur de la recherche ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2020 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ces dernières décennies, au laboratoire d’hématologie, la cytométrie en flux est devenue une technique indispensable pour le diagnostic et suivi de nombreuses hémopathies et lymphomes, en complément à la numération et à la cytologie. Elle permet d’obtenir des informations au niveau des cellules individuelles en termes de taille, complexité cellulaire et marqueurs de surface. Si au début, les possibilités étaient limitées avec des appareils à un seul laser, désormais le potentiel est de plus en plus élargi grâce aux cytomètres multi-laser. La découverte des «Clusters of Differentiation» et l’étoffement des connaissances quant à leur rôle et présence ou absence dans les diverses pathologies a permis le développement d’anticorps monoclonaux se liant à ces épitopes. Les anticorps peuvent désormais être conjugués à un panel de fluorochromes particulièrement varié – permettant d’obtenir des signaux fluorescents sur une gamme de longueurs d’onde plus étendue. Le laboratoire d’hématologie de la Clinique Notre-Dame de Grâce de Gosselies vient d’acquérir un cytomètre Beckman Coulter Navios EX, trois lasers, permettant l’exploration simultanée de douze paramètres. Les panels de marqueurs doivent être adaptés: de cinq anticorps exploités à ce jour, désormais, dix peuvent être utilisés lors d’une même analyse. Le présent travail propose des nouveaux panels en tenant compte des contraintes imposées et en se basant sur des propositions de publications scientifiques récentes. Note de contenu : Table des matières Clinique Notre-Dame de Grâce, Gosselies ......................................................................................... 7 Introduction générale ........................................................................................................................ 8 1 Cytofluorométrie en flux ............................................................................................................. 10 1.1 Principe de fonctionnement ................................................................................................... 11 Composant fluidique / hydrodynamique ........................................................................ 12 Composant optique ......................................................................................................... 13 Composant numérique .................................................................................................... 22 Tri des cellules ................................................................................................................. 24 1.2 Chevauchement spectral et compensation ............................................................................ 25 2 Beckman Coulter Navios EX ........................................................................................................ 27 3 Pathologies .................................................................................................................................. 29 3.1 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) .................................................................................... 29 3.2 Lymphocytose B monoclonale (MBL) ..................................................................................... 33 3.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ........................................................................................ 33 4 Marqueurs utiles dans le cadre des syndromes lymphoprolifératifs B chroniques ................... 35 4.1 Altération du phénotypage à la suite d’un traitement .......................................................... 36 5 Objectif du travail de fin d’études et stratégie ........................................................................... 38 6 Matériel, méthode et hypothèses de travail .............................................................................. 40 6.1 Matériel nécessaire à l’immunophénotypage........................................................................ 40 6.2 Méthode d’immunophénotypage .......................................................................................... 41 6.3 Marqueurs de «Cluster of Differentiation» utilisés ............................................................... 43 6.4 Critères à prendre en compte lors de la création d’un panel de marqueurs......................... 51 Contrôle des résultats ..................................................................................................... 51 Le choix des anticorps ..................................................................................................... 52 Attribution des fluorochromes aux marqueurs .............................................................. 52 Densité d’expression des antigènes ................................................................................ 53 7 Résultats et discussion ................................................................................................................ 55 7.1 Proposition de panels pour l’appareil Navios EX ................................................................... 55 Proposition A, élaborée à partir de celle de Beckman Coulter ....................................... 55 Proposition B, élaborée sur base de celle du consortium EuroFlow .............................. 57 Proposition C, basée sur celle du Groupe d’Etude Immunologique des Leucémies....... 60 Proposition D: révision des panels actuels de la CNDG de cinq en dix couleurs ............ 63 Avantages globaux des propositions ............................................................................... 66 Inconvénients globaux des propositions ......................................................................... 66 Perspectives ..................................................................................................................................... 67 Glossaire ........................................................................................................................................... 69 Liste des figures ................................................................................................................................ 71 Abréviations ..................................................................................................................................... 72 Bibliographie .................................................................................................................................... 73 Annexe ............................................................................................................................................. 80 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89137 Composition de panels d’immunophénotypage pour un cytomètre dix couleurs [TFE / Mémoire] / Klára Kara, Auteur ; Mélanie DEKEYSER, Directeur de la recherche ; Quentin Delefortrie, Directeur de la recherche ; Jenny Pouyez, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2020. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Ces dernières décennies, au laboratoire d’hématologie, la cytométrie en flux est devenue une technique indispensable pour le diagnostic et suivi de nombreuses hémopathies et lymphomes, en complément à la numération et à la cytologie. Elle permet d’obtenir des informations au niveau des cellules individuelles en termes de taille, complexité cellulaire et marqueurs de surface. Si au début, les possibilités étaient limitées avec des appareils à un seul laser, désormais le potentiel est de plus en plus élargi grâce aux cytomètres multi-laser. La découverte des «Clusters of Differentiation» et l’étoffement des connaissances quant à leur rôle et présence ou absence dans les diverses pathologies a permis le développement d’anticorps monoclonaux se liant à ces épitopes. Les anticorps peuvent désormais être conjugués à un panel de fluorochromes particulièrement varié – permettant d’obtenir des signaux fluorescents sur une gamme de longueurs d’onde plus étendue. Le laboratoire d’hématologie de la Clinique Notre-Dame de Grâce de Gosselies vient d’acquérir un cytomètre Beckman Coulter Navios EX, trois lasers, permettant l’exploration simultanée de douze paramètres. Les panels de marqueurs doivent être adaptés: de cinq anticorps exploités à ce jour, désormais, dix peuvent être utilisés lors d’une même analyse. Le présent travail propose des nouveaux panels en tenant compte des contraintes imposées et en se basant sur des propositions de publications scientifiques récentes. Note de contenu : Table des matières Clinique Notre-Dame de Grâce, Gosselies ......................................................................................... 7 Introduction générale ........................................................................................................................ 8 1 Cytofluorométrie en flux ............................................................................................................. 10 1.1 Principe de fonctionnement ................................................................................................... 11 Composant fluidique / hydrodynamique ........................................................................ 12 Composant optique ......................................................................................................... 13 Composant numérique .................................................................................................... 22 Tri des cellules ................................................................................................................. 24 1.2 Chevauchement spectral et compensation ............................................................................ 25 2 Beckman Coulter Navios EX ........................................................................................................ 27 3 Pathologies .................................................................................................................................. 29 3.1 Leucémie lymphoïde chronique (LLC) .................................................................................... 29 3.2 Lymphocytose B monoclonale (MBL) ..................................................................................... 33 3.3 Leucémie à tricholeucocytes (HCL) ........................................................................................ 33 4 Marqueurs utiles dans le cadre des syndromes lymphoprolifératifs B chroniques ................... 35 4.1 Altération du phénotypage à la suite d’un traitement .......................................................... 36 5 Objectif du travail de fin d’études et stratégie ........................................................................... 38 6 Matériel, méthode et hypothèses de travail .............................................................................. 40 6.1 Matériel nécessaire à l’immunophénotypage........................................................................ 40 6.2 Méthode d’immunophénotypage .......................................................................................... 41 6.3 Marqueurs de «Cluster of Differentiation» utilisés ............................................................... 43 6.4 Critères à prendre en compte lors de la création d’un panel de marqueurs......................... 51 Contrôle des résultats ..................................................................................................... 51 Le choix des anticorps ..................................................................................................... 52 Attribution des fluorochromes aux marqueurs .............................................................. 52 Densité d’expression des antigènes ................................................................................ 53 7 Résultats et discussion ................................................................................................................ 55 7.1 Proposition de panels pour l’appareil Navios EX ................................................................... 55 Proposition A, élaborée à partir de celle de Beckman Coulter ....................................... 55 Proposition B, élaborée sur base de celle du consortium EuroFlow .............................. 57 Proposition C, basée sur celle du Groupe d’Etude Immunologique des Leucémies....... 60 Proposition D: révision des panels actuels de la CNDG de cinq en dix couleurs ............ 63 Avantages globaux des propositions ............................................................................... 66 Inconvénients globaux des propositions ......................................................................... 66 Perspectives ..................................................................................................................................... 67 Glossaire ........................................................................................................................................... 69 Liste des figures ................................................................................................................................ 71 Abréviations ..................................................................................................................................... 72 Bibliographie .................................................................................................................................... 73 Annexe ............................................................................................................................................. 80 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=89137

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