Etude des effets du miel sur les mécanismes autophagiques des macrophages / Robin Varsebroucq

Public ISBD Titre : Etude des effets du miel sur les mécanismes autophagiques des macrophages Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Robin Varsebroucq, Auteur ; Véronique Vallery, Directeur de la recherche Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale  UNamur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le miel est utilisé depuis des milliers d’années dans de nombreuses cultures et est connu pour ses propriétés antibactériennes, anti-inflammatoires et immunomodulatrices. Une recherche précédente a permis de mettre en évidence l’effet du miel Revamil sur l’abondance de protéines autophagiques des macrophages. En effet, les résultats ont montré une augmentation des protéines LC3-II et p62 en présence de Revamil ainsi qu’une phosphorylation du complexe mTOR. L’autophagie désigne le mécanisme par lequel la cellule est capable de dégrader ses éléments cytoplasmiques n’étant plus nécessaire pour produire de nouvelles protéines. Ceci se réalise par l’intermédiaire de ses autophagosomes et lysosomes. L’objectif de ce travail est de caractériser les mécanismes par lesquels le miel Revamil module la phosphorylation de mTOR et le flux autophagique et de comparer les effets du Revamil aux effets potentiels d’autres miels tels que des miels artisanaux fabriqués à différentes périodes (printemps et été) et du miel Manuka. Cette comparaison, des effets de différents miels a, dans un premier temps, été réalisée par analyse d’abondance protéique des marqueurs de l’autophagie et de kinases/enzymes clés de sa régulation. Cet objectif est mené en parallèle avec une étude portant sur la recherche du (ou des) composant(s) présent(s) dans le miel potentiellement responsable(s) des effets observés sur l’autophagie. Cette recherche a permis de montrer une différence de l’augmentation de l’abondance des protéines LC3-II et p62 en fonction du miel utilisé. La composition ainsi que la période de récolte du miel influenceraient cet effet. Deux miels artisanaux ont montré des profils complétement différents et les miels médicaux alors que le Revamil et le Manuka montrent des effets relativement similaires. Les résultats montrent une augmentation de l’abondance des protéines LC3-II et p62 pour les conditions Revamil, Manuka et miel d’été par rapport à la condition « Sugar Mix » contrairement au miel de printemps qui se comporte comme la condition « Sugar Mix ». Ceci pourrait être expliqué par deux hypothèses. En effet, soit il pourrait s’agir d’une stimulation de l’initiation de l’autophagie et donc une accumulation de la production d’autophagosomes, soit il pourrait s’agir d’une inhibition de l’exécution de l’autophagie, c’est-à-dire l’étape de fusion de l’autophagosome avec le lysosome. Cette inhibition empêcherait ainsi la dégradation des autophagosomes, entrainant leur accumulation, ce qui expliquerait pourquoi les protéines LC3-II et p62 voient augmenter leurs abondances. Ces résultats montrent également que la composition du miel ainsi que la période de récolte influencent les effets de ce dernier sur l’abondance des protéines LC3-II et p62. Une recherche postérieure devrait permettre de mettre en évidence par quelle voie, cette augmentation protéique est-elle induite et de continuer la recherche du (ou des) composant(s) présent(s) dans le miel potentiellement responsable(s) des effets observés sur l’autophagie. Note de contenu : Table des matières Introduction générale ....................................................................................................................................... 7 I. Contexte général ........................................................................................................................................... 9 1. Le miel .................................................................................................................................................................. 10 1.1 Composition du miel....................................................................................................................................... 10 1.2 Propriétés du miel ........................................................................................................................................... 11 2. Autophagie ............................................................................................................................................................ 16 2.1 Définition autophagie ..................................................................................................................................... 16 2.2 Mécanismes cellulaires et moléculaires conduisant à la formation de l’autophagosome ............................... 17 2.3 Régulation de la réponse autophagique .......................................................................................................... 19 II. Objectifs et stratégie .................................................................................................................................. 26 III. Matériel et méthodes ................................................................................................................................ 28 1.Matériel .................................................................................................................................................................. 29 1.1 Cellules RAW 264.7 ....................................................................................................................................... 29 1.2 Cultures des RAW264.7 ................................................................................................................................. 29 1.3 Miel Revamil .................................................................................................................................................. 29 1.4 Miel Manuka ................................................................................................................................................... 30 1.5 Miels artisanaux .............................................................................................................................................. 30 2. Méthodes .............................................................................................................................................................. 31 2.1 Lysats cellulaires ............................................................................................................................................ 31 2.2 Dosage protéique par la méthode de Pierce 660 ............................................................................................. 33 2.3 Western blot en immunofluorescence............................................................................................................. 34 2.4 Quantification ................................................................................................................................................. 38 2.5 Analyse Statistique ......................................................................................................................................... 38 2.6 Analyse d’expression de gènes au niveau du transcrit-RT-qPCR .................................................................. 38 IV. Résultats et Discussion ............................................................................................................................ 41 1.Comparaison des effets de différents miels sur l’abondance de LC3-II et de p62 ................................................ 42 1.1 Etude de LC3-II ............................................................................................................................................. 44 1.2 Etude de p62 ................................................................................................................................................... 46 1.3 Etude de la voie de régulation de l’autophagie mTOR dépendante ................................................................ 48 2. Etude des effets du tréhalose sur l’abondance de protéines autophagiques LC3-II et p62. .................................. 50 2.1 Etude de LC3-II .............................................................................................................................................. 52 2.2 Etude de p62 ................................................................................................................................................... 52 Conclusion ..................................................................................................................................................... 53 Liste des abréviations .................................................................................................................................... 57 Table des figures ............................................................................................................................................ 60 Bibliographie ................................................................................................................................................. 62 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=80004 Etude des effets du miel sur les mécanismes autophagiques des macrophages [TFE / Mémoire] / Robin Varsebroucq, Auteur ; Véronique Vallery, Directeur de la recherche . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Paramédical - Biologie médicale, 2019. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : biologie médicale  UNamur Index. décimale : TFE Bio Med TFE Biologie médicale Résumé : Le miel est utilisé depuis des milliers d’années dans de nombreuses cultures et est connu pour ses propriétés antibactériennes, anti-inflammatoires et immunomodulatrices. Une recherche précédente a permis de mettre en évidence l’effet du miel Revamil sur l’abondance de protéines autophagiques des macrophages. En effet, les résultats ont montré une augmentation des protéines LC3-II et p62 en présence de Revamil ainsi qu’une phosphorylation du complexe mTOR. L’autophagie désigne le mécanisme par lequel la cellule est capable de dégrader ses éléments cytoplasmiques n’étant plus nécessaire pour produire de nouvelles protéines. Ceci se réalise par l’intermédiaire de ses autophagosomes et lysosomes. L’objectif de ce travail est de caractériser les mécanismes par lesquels le miel Revamil module la phosphorylation de mTOR et le flux autophagique et de comparer les effets du Revamil aux effets potentiels d’autres miels tels que des miels artisanaux fabriqués à différentes périodes (printemps et été) et du miel Manuka. Cette comparaison, des effets de différents miels a, dans un premier temps, été réalisée par analyse d’abondance protéique des marqueurs de l’autophagie et de kinases/enzymes clés de sa régulation. Cet objectif est mené en parallèle avec une étude portant sur la recherche du (ou des) composant(s) présent(s) dans le miel potentiellement responsable(s) des effets observés sur l’autophagie. Cette recherche a permis de montrer une différence de l’augmentation de l’abondance des protéines LC3-II et p62 en fonction du miel utilisé. La composition ainsi que la période de récolte du miel influenceraient cet effet. Deux miels artisanaux ont montré des profils complétement différents et les miels médicaux alors que le Revamil et le Manuka montrent des effets relativement similaires. Les résultats montrent une augmentation de l’abondance des protéines LC3-II et p62 pour les conditions Revamil, Manuka et miel d’été par rapport à la condition « Sugar Mix » contrairement au miel de printemps qui se comporte comme la condition « Sugar Mix ». Ceci pourrait être expliqué par deux hypothèses. En effet, soit il pourrait s’agir d’une stimulation de l’initiation de l’autophagie et donc une accumulation de la production d’autophagosomes, soit il pourrait s’agir d’une inhibition de l’exécution de l’autophagie, c’est-à-dire l’étape de fusion de l’autophagosome avec le lysosome. Cette inhibition empêcherait ainsi la dégradation des autophagosomes, entrainant leur accumulation, ce qui expliquerait pourquoi les protéines LC3-II et p62 voient augmenter leurs abondances. Ces résultats montrent également que la composition du miel ainsi que la période de récolte influencent les effets de ce dernier sur l’abondance des protéines LC3-II et p62. Une recherche postérieure devrait permettre de mettre en évidence par quelle voie, cette augmentation protéique est-elle induite et de continuer la recherche du (ou des) composant(s) présent(s) dans le miel potentiellement responsable(s) des effets observés sur l’autophagie. Note de contenu : Table des matières Introduction générale ....................................................................................................................................... 7 I. Contexte général ........................................................................................................................................... 9 1. Le miel .................................................................................................................................................................. 10 1.1 Composition du miel....................................................................................................................................... 10 1.2 Propriétés du miel ........................................................................................................................................... 11 2. Autophagie ............................................................................................................................................................ 16 2.1 Définition autophagie ..................................................................................................................................... 16 2.2 Mécanismes cellulaires et moléculaires conduisant à la formation de l’autophagosome ............................... 17 2.3 Régulation de la réponse autophagique .......................................................................................................... 19 II. Objectifs et stratégie .................................................................................................................................. 26 III. Matériel et méthodes ................................................................................................................................ 28 1.Matériel .................................................................................................................................................................. 29 1.1 Cellules RAW 264.7 ....................................................................................................................................... 29 1.2 Cultures des RAW264.7 ................................................................................................................................. 29 1.3 Miel Revamil .................................................................................................................................................. 29 1.4 Miel Manuka ................................................................................................................................................... 30 1.5 Miels artisanaux .............................................................................................................................................. 30 2. Méthodes .............................................................................................................................................................. 31 2.1 Lysats cellulaires ............................................................................................................................................ 31 2.2 Dosage protéique par la méthode de Pierce 660 ............................................................................................. 33 2.3 Western blot en immunofluorescence............................................................................................................. 34 2.4 Quantification ................................................................................................................................................. 38 2.5 Analyse Statistique ......................................................................................................................................... 38 2.6 Analyse d’expression de gènes au niveau du transcrit-RT-qPCR .................................................................. 38 IV. Résultats et Discussion ............................................................................................................................ 41 1.Comparaison des effets de différents miels sur l’abondance de LC3-II et de p62 ................................................ 42 1.1 Etude de LC3-II ............................................................................................................................................. 44 1.2 Etude de p62 ................................................................................................................................................... 46 1.3 Etude de la voie de régulation de l’autophagie mTOR dépendante ................................................................ 48 2. Etude des effets du tréhalose sur l’abondance de protéines autophagiques LC3-II et p62. .................................. 50 2.1 Etude de LC3-II .............................................................................................................................................. 52 2.2 Etude de p62 ................................................................................................................................................... 52 Conclusion ..................................................................................................................................................... 53 Liste des abréviations .................................................................................................................................... 57 Table des figures ............................................................................................................................................ 60 Bibliographie ................................................................................................................................................. 62 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=80004

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