Optimisation et mise en place de méthodes de caractérisation génétique d'Apis mellifera (Abeille mellifère) / Benjamin Wagner

Public ISBD Titre : Optimisation et mise en place de méthodes de caractérisation génétique d'Apis mellifera (Abeille mellifère) Type de document : TFE / Mémoire Auteurs : Benjamin Wagner, Auteur Editeur : Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie Année de publication : 2019 Note générale : Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie  AIBT  CRA-W  d'Apis mellifera  Abeille mellifère Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Le 1er Janvier 2017, le Centre Wallon de Recherches Agronomiques de Gembloux (CRA-W) se lance dans le projet PolBEES, une des sections de ce projet se consacre à la caractérisation génétique du matériel biologique d’abeilles. La différenciation phénotypique des abeilles étant fort difficile, la possibilité de caractériser l’ADN maternel et nucléaire est de grande importance pour les apiculteurs d’Europe. Ce travail a été réalisé au sein du laboratoire de biologie moléculaire de l’unité traçabilité et authentification du Département valorisation des productions agricoles. Il a pour objectif d’optimiser les méthodes d’analyse actuellement employées et de mettre en place une nouvelle méthode de caractérisation d’ADN nucléaire. Ceci implique de tester et comparer plusieurs kits d’extraction d’ADN et d’optimiser toutes les manipulations nécessaires à l’analyse de l’ADN mitochondrial des abeilles. Le but final de cette analyse est de déterminer la lignée d’une ruche (tant la lignée maternelle que paternelle). Pour ce faire, il est nécessaire de mettre en place une méthode caractérisant non plus uniquement l’ADN mitochondrial, mais également l’ADN nucléaire des abeilles. Cette méthode se base sur l’amplification de séquence contenant des marqueurs génétiques appelés microsatellites par la PCR, permettant ainsi de différencier les abeilles par leur ADN nucléaire. Note de contenu : PRÉSENTATION DU LIEU DE STAGE ...................................................................................................... 5 INTRODUCTION ............................................................................................................................... 7 1. ÉTAT DE L’ART ........................................................................................................................ 9 1.1. Les abeilles ................................................................................................................... 9 1.2. L’ADN mitochondrial (ADNmt) .................................................................................... 11 1.3. Les marqueurs génétiques ........................................................................................ 12 1.4. Les microsatellites. .................................................................................................... 12 2. OBJECTIFS DE L’ÉTUDE ............................................................................................................ 15 3. MATÉRIEL ET MÉTHODES ........................................................................................................ 16 3.1. Nettoyage et décontamination ................................................................................. 16 3.2. Réception et préparation des échantillons ............................................................... 16 3.3. Techniques d’extraction ............................................................................................ 18 3.4. Mesure de la quantité et de la qualité de l’ADN ....................................................... 21 3.5. Analyse PCR ............................................................................................................... 21 3.6. Digestion enzymatique .............................................................................................. 30 3.7. L’électrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................... 31 3.8. QIAxcel ....................................................................................................................... 32 4. RÉSULTATS ET DISCUSSION ...................................................................................................... 33 4.1. Comparaison de kits d’extraction .............................................................................. 33 4.2. ADN mitochondrial .................................................................................................... 39 4.3. Microsatellites ........................................................................................................... 44 CONCLUSION GÉNÉRALE ET PERSPECTIVES .......................................................................................... 48 5. TABLE DES ILLUSTRATIONS ...................................................................................................... 50 6. TABLE DES TABLEAUX ............................................................................................................. 51 BIBLIOGRAPHIE ............................................................................................................................. 52 ANNEXES ..................................................................................................................................... 55 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79732 Optimisation et mise en place de méthodes de caractérisation génétique d'Apis mellifera (Abeille mellifère) [TFE / Mémoire] / Benjamin Wagner, Auteur . - Montignies-sur-Sambre : Helha. Agronomie, 2019. Le fichier numérique de ce document est disponible uniquement pour les membres de la Haute Ecole Louvain-en-Hainaut ainsi que ses étudiants. Veuillez vous connecter pour accéder à votre compte lecteur. Langues : Français (fre) Mots-clés : Agronomie  AIBT  CRA-W  d'Apis mellifera  Abeille mellifère Index. décimale : TFE AIBT TFE Agro-industries et biotechnologies Résumé : Le 1er Janvier 2017, le Centre Wallon de Recherches Agronomiques de Gembloux (CRA-W) se lance dans le projet PolBEES, une des sections de ce projet se consacre à la caractérisation génétique du matériel biologique d’abeilles. La différenciation phénotypique des abeilles étant fort difficile, la possibilité de caractériser l’ADN maternel et nucléaire est de grande importance pour les apiculteurs d’Europe. Ce travail a été réalisé au sein du laboratoire de biologie moléculaire de l’unité traçabilité et authentification du Département valorisation des productions agricoles. Il a pour objectif d’optimiser les méthodes d’analyse actuellement employées et de mettre en place une nouvelle méthode de caractérisation d’ADN nucléaire. Ceci implique de tester et comparer plusieurs kits d’extraction d’ADN et d’optimiser toutes les manipulations nécessaires à l’analyse de l’ADN mitochondrial des abeilles. Le but final de cette analyse est de déterminer la lignée d’une ruche (tant la lignée maternelle que paternelle). Pour ce faire, il est nécessaire de mettre en place une méthode caractérisant non plus uniquement l’ADN mitochondrial, mais également l’ADN nucléaire des abeilles. Cette méthode se base sur l’amplification de séquence contenant des marqueurs génétiques appelés microsatellites par la PCR, permettant ainsi de différencier les abeilles par leur ADN nucléaire. Note de contenu : PRÉSENTATION DU LIEU DE STAGE ...................................................................................................... 5 INTRODUCTION ............................................................................................................................... 7 1. ÉTAT DE L’ART ........................................................................................................................ 9 1.1. Les abeilles ................................................................................................................... 9 1.2. L’ADN mitochondrial (ADNmt) .................................................................................... 11 1.3. Les marqueurs génétiques ........................................................................................ 12 1.4. Les microsatellites. .................................................................................................... 12 2. OBJECTIFS DE L’ÉTUDE ............................................................................................................ 15 3. MATÉRIEL ET MÉTHODES ........................................................................................................ 16 3.1. Nettoyage et décontamination ................................................................................. 16 3.2. Réception et préparation des échantillons ............................................................... 16 3.3. Techniques d’extraction ............................................................................................ 18 3.4. Mesure de la quantité et de la qualité de l’ADN ....................................................... 21 3.5. Analyse PCR ............................................................................................................... 21 3.6. Digestion enzymatique .............................................................................................. 30 3.7. L’électrophorèse sur gel d’agarose ........................................................................... 31 3.8. QIAxcel ....................................................................................................................... 32 4. RÉSULTATS ET DISCUSSION ...................................................................................................... 33 4.1. Comparaison de kits d’extraction .............................................................................. 33 4.2. ADN mitochondrial .................................................................................................... 39 4.3. Microsatellites ........................................................................................................... 44 CONCLUSION GÉNÉRALE ET PERSPECTIVES .......................................................................................... 48 5. TABLE DES ILLUSTRATIONS ...................................................................................................... 50 6. TABLE DES TABLEAUX ............................................................................................................. 51 BIBLIOGRAPHIE ............................................................................................................................. 52 ANNEXES ..................................................................................................................................... 55 Permalink : ./index.php?lvl=notice_display&id=79732

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